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鼻疽诺卡菌菌体蛋白的免疫蛋白质组学研究
目的 通过鉴别鼻疽诺卡菌菌体蛋白中具有免疫原性的蛋白,为筛选鼻疽诺卡菌特异诊断抗原提供线索.方法提取鼻疽诺卡菌菌体蛋白进行双向电泳,结合免疫印迹法筛选与抗鼻疽诺卡菌兔血清发生免疫反应的蛋白点.结果 在鼻疽诺卡菌菌体蛋白的免疫杂交膜上,共发现9个具有抗原活性的蛋白,其中8个可在考马斯蓝染色胶上找到匹配点,通过介质辅助激光解吸电离飞行时间质谱成功鉴定8个蛋白,全部定位于胞内.结论 本研究成功建立鼻疽诺卡菌免疫蛋白质组学方法,在鼻疽诺卡菌菌体蛋白中发现新的具有免疫原性的蛋白,可作为鼻疽诺卡菌特异性诊断候选抗原,用于诊断试剂的研究.
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猪链球菌分泌蛋白的免疫蛋白质组学研究
目的 寻找猪链球菌(S.suis)SC84菌株分泌蛋白中具有抗原活性的蛋白,为S.suis特异诊断抗原和新的疫苗候选抗原的筛选提供线索.方法 采用免疫蛋白质组学和介质辅助激光解吸电离飞行时问质谱(MALDI-TOF MS)技术,分析和鉴定S.suisSC84菌株分泌蛋白中能与感染病例恢复期血清发生免疫杂交的蛋白点.结果 在S.suis SC84菌株分泌蛋白的免疫杂交膜上,共发现14个具有抗原活性的蛋白点,其中11个点可以在考马斯蓝染色胶上找到匹配点.11个蛋白点经质谱鉴定,分属于8种蛋白,全部定位于胞壁或胞外.其中溶菌酶释放蛋白、溶血素、细胞外因子为S.suis 已知的抗原蛋白;5'-核苷酸酶、ribonucleases G和E、金属内肽酶等为新发现的具有抗原活性的蛋白;所有的蛋白均能在测序菌株S.suis 05ZYH33基因组中找到相应的编码基因.结论 在S.suis 分泌蛋白中发现了新的具有抗原活性的蛋白,可能作为S.suis特异诊断抗原和疫苗候选抗原,用于诊断试剂和疫苗的研究.
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嗜水气单胞菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究
目的 建立嗜水气单胞菌ATCC7966 外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法. 方法利用双向电泳技术对嗜水气单胞菌外膜蛋白进行分离,用LC-LTQ-XL质谱技术鉴定,并结合Western blot技术寻找具有免疫应答的蛋白质. 结果 LC-LTQ-XL质谱共鉴定出43个肽段,共计39个蛋白质. 这些蛋白质不仅有外膜蛋白(69%),还有内膜蛋白(12%)等,功能涉及物质运输、细胞运动和生物合成等领域. 终利用2D结合Western blot技术找到了一个疫苗候选蛋白. 结论 成功建立了嗜水气单胞菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,为将来发现更多候选疫苗提供理论基础.
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免疫组学:21世纪免疫学家的新挑战
编者按随着人类基因组计划的完成,诞生了新的免疫学前沿分支学科--免疫组学(Immunomics),为免疫学的快速发展发挥了重要作用.免疫组学重点研究免疫相关的全套分子、它们的作用靶分子及其功能.免疫组学包括了免疫基因组学(Immunogenomics)、免疫蛋白质组学(Immunoproteomics)和免疫信息学(Immunoinformatics)三方面的研究,特别强调在基因组学和蛋白质组学研究的基础上,充分利用生物信息学、生物芯片、系统生物学、结构生物学、高通量筛选等技术,大规模开展免疫系统和免疫应答分子机理研究,发现新免疫相关分子的功能,为全面系统了解免疫系统和免疫应答提供基础.作者对上述方面作了有重点的论述,我们刊登此文,希望我国免疫学工作者重视免疫组学研究,抓住机遇,发挥各自的优势,开展具有我国特色的各项研究,为免疫组学的研究与开发做出贡献.
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福氏志贺杆菌2a 2457T免疫蛋白质组学方法的建立
目的:建立福氏志贺杆菌2a 2457T的免疫蛋白质组学研究方法.方法:提取福氏志贺杆菌2a 2457T全菌蛋白进行不同pH梯度的双向电泳,结合Western Blotting技术寻找发生免疫反应的蛋白质.结果:蛋白经胶内酶切后使用基质辅助激光解析/电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱鉴定了19个免疫反应蛋白点,对应于10种蛋白质.结论:该文成功建立了福氏志贺杆菌2a2457T的免疫蛋白质组学研究方法,为寻找保护性抗原的工作打下了基础.
关键词： 福氏志贺杆菌 Western blotting 免疫蛋白质组学 双向电泳 质谱 -
免疫蛋白质组学筛查具有早期诊断价值的人胰腺癌相关膜抗原
目的 筛查具有早期诊断价值的人胰腺癌相关膜抗原. 方法 采用膜生物学技术抽提多株胰腺癌细胞的膜蛋白;双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分离膜蛋白,将其转移至PVDF膜上;利用纯化的胰腺癌患者血清IgG与分离的膜蛋白进行免疫印迹杂交,比对膜蛋白2-DE图谱,筛查胰腺癌特异的免疫杂交阳性斑点;MALDI-TOF质谱鉴定杂交阳性斑点;采用RT-PCR技术检测膜抗原基因在多株胰腺癌细胞中的表达;利用免疫组化染色技术检测膜抗原在人胰腺癌组织中的表达情况. 结果 成功提取了胰腺癌细胞株的膜蛋白;经比对膜蛋白2-DE图谱,筛查出免疫杂交阳性斑点;经MALDI-TOF质谱鉴定,免疫杂交阳性点分别为VDAC-2、VDAC-1、CHCHD3、SLP-2、TOM40;RT-PCR结果显示上述膜抗原基因在多株胰腺癌细胞中均有表达;免疫组织化学染色证实,SLP-2在胰腺癌组织中呈现显著高表达. 结论 SLP-2、VDAC-1、VDAC-2、CHCHD3、TOM40是新发现的与人胰腺癌相关的具有免疫原性的膜抗原,利用这些膜抗原检测胰腺癌高危人群外周血中的特异性自身抗体将有助于实现胰腺癌的早期诊断.
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泛素化调节膜联蛋白A 2表达异常在乳腺癌中的作用研究
目的 探讨乳腺癌组织中膜联蛋白(annexin) A2表达异常及其泛素化调节机制,annexin A2与乳腺癌TNM临床分期的关系,泛素化调节annexin A2表达异常在乳腺癌发生发展中的作用.方法 选择2008年9月至2009年9月在本院普外三科确诊为乳腺癌的10例患者手术切除的新鲜组织,包括组织病理学证实的乳腺癌组织10份及癌旁形态学相对正常组织10份(直径＞2 cm)为研究对象.组织切除后,立即液氮保存待用.采用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术,对乳腺癌组织及其癌旁正常组织的蛋白质进行分离,Western bloting法检测该蛋白质的泛素化(免疫蛋白质组学)情况,取稳定出现的差异阳性蛋白质点进行基质辅助激光解吸/电离时间飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)、质谱/质谱串联(MS-MS)及生物信息学分析.通过免疫组化染色技术,对annexin A2在乳腺癌组织及其癌旁正常组织中的表达水平,与乳腺癌TNM临床分期的关系进行观察,并对结果进行统计学分析(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,征得受试对象本人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书).结果 对4个在乳腺癌组织标本及其癌旁正常组织中明显表达差异的蛋白质点,经质谱鉴定和数据库比对的结果为小泛素相关修饰因子3前体(SMT3A)、蛋白酶体亚单位a型1(PSMA1)、annexin A2及核糖体蛋白S12(RPS12).免疫组化检测在TNM临床分期为0,Ⅰ,Ⅱ及Ⅲ期的乳腺癌组织标本中,annexin A2表达的阳性率及强阳性率分别为75.0％ (6/8)与37.5％(3/8),100.0％(14/14)与42.9％ (6/14),100.0％(10/10)与66.7％(4/6)及100.0％(6/6)与50.0％(5/10).在TNM临床分期不同的乳腺癌组织中,annexin A2表达的阳性率及强阳性率比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).annexin A2的表达水平与乳腺癌的TNM临床分期呈正相关(r=0.508,P＜0.05).结论 annexin A2在乳腺癌组织中的表达受泛素化调节,且表达增高.乳腺癌TNM临床分期越晚,annexin A2表达水平越高.泛素化调节annexin A2的高表达,可能与乳腺癌的发生发展有关.
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利用免疫蛋白质组学鉴定炭疽杆菌蛋白MetK及其免疫原性验证
目的 验证免疫蛋白质组中鉴定到的S-腺苷甲硫氨酸MetK蛋白的免疫原性.方法 免疫蛋白质组学的方法鉴定到MetK蛋白,通过PCR方法扩增metK基因全长,然后将其克隆到原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌DH5α,测序正确后提取质粒转入BL21(DE3)中进行诱导表达.再通过Ni-NTA柱纯化MetK蛋白,纯化后的蛋白免疫SPF级的BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,通过多克隆抗体与炭疽芽孢杆菌A16R全菌蛋白Western印迹检测,验证MetK蛋白的免疫原性.结果与结论成功表达了MetK蛋白,制备了其多克隆抗体,为免疫蛋白质组学鉴定到的蛋白点进行验证,也为研究MetK蛋白的生物学功能研究提供了条件.
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炭疽芽孢杆菌A16R株无菌培养滤液的蛋白质组学分析
目的:初步分析由我国炭疽疫苗株A16R所生产的无菌培养滤液中的主要成分.方法:运用免疫蛋白质组学的手段,从炭疽A16R疫苗株无菌培养滤液的二维凝胶电泳中选择与保护性抗体结合和不与该血清结合但丰度高的蛋白质点,进行质谱鉴定和信号肽分析.结果:共选择73个点,从炭疽芽孢杆菌数据库中鉴定出66个.在66个点中,有43个点与保护性血清结合;23个为高丰度蛋白,不与该血清结合.在与保护性血清结合的43个点中,13个点为不同大小的PA分子,其中相对分子质量83×103和63×103占主导,相对分子质量较小的片段仅4个.其余成分包括炭疽表面蛋白EA1、Sap、胶原黏附蛋白、伴侣分子 DnaK等.结论:我们制备的炭疽无菌培养滤液中含有PA成分,PA是炭疽疫苗的重要保护性抗原.但PA以外的其他成分在抗炭疽免疫中起何种作用,是否参与诱发机体免疫应答有待进一步研究.
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炭疽芽孢杆菌蛋白质组学的研究进展
蛋白质组学是继基因组学后的一门新兴学科,可从整体水平上探究炭疽芽孢杆菌的致病机制和早期发病的标志物,在炭疽预防、诊断和治疗中具有重要的指导作用.本文综述了近年来蛋白质组学在炭疽芽孢杆菌中的应用进展.
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鼠疫耶尔森菌EV76免疫蛋白质组学初步分析
目的 建立鼠疫耶尔森菌的免疫蛋白质组学研究方法 ,初步筛选鼠疫耶尔森菌特异性抗原.方法 利用双向电泳技术对37℃培养的鼠疫耶尔森菌EV76株全菌蛋白进行分离,结合免疫印迹技术寻找能与鼠疫耶尔森菌免疫兔血清发生免疫反应的蛋白质,并用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对阳性蛋白点进行鉴定.结果 与鼠疫耶尔森菌免疫兔血清反应的鼠疫EV76株蛋白点共472个,经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定出277个,对应于159种蛋白,其中,35种蛋白为耶尔森菌特有,5种蛋白[F1荚膜抗原(F1 capsule antigen)、鼠毒素(murine toxin)、鼠疫菌素(pesticin)、纤维蛋白溶解酶原激活因子(Pla)、F1抗原伴侣蛋白(F1 chaperone protein)]为鼠疫耶尔森菌特有.结论 初步完成鼠疫耶尔森菌EV76株的免疫蛋白质组学分析,筛选出具有抗原活性的鼠疫耶尔森菌特有蛋白,为后续特异性诊断技术的建立和疫苗研究奠定良好的基础.
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免疫蛋白质组学及其在病原生物学中的研究进展
免疫蛋白质组学是蛋白质组学与免疫学相结合而产生的一门新兴的交叉学科.该文介绍了免疫蛋白质组学的研究技术及其在病原生物学中的应用,并对其在诊断抗原及疫苗分子筛选中的应用前景及发展的局限性进行了论述.
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免疫蛋白质组学技术在血吸虫病研究中的应用
蛋白质组学技术与现代免疫学相结合形成了一门新兴交叉学科——免疫蛋白质组学(immunoproteomics).日本血吸虫和曼氏血吸虫的基因组、转录组研究积累了大量生物信息资料,使血吸虫免疫蛋白质组研究成为可能.该文对近几年来免疫蛋白组学技术在血吸虫病研究中的应用进行综述.
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用免疫蛋白质组学技术筛选烟曲霉分泌蛋白中的免疫优势抗原
目的 用免疫蛋白质组学技术筛选烟曲霉分泌蛋白中的免疫优势抗原,用于侵袭性曲霉病(IA)的诊断标志物及疗效监测.方法 YEPG培养基培养14 d的真菌分泌蛋白质进行二维电泳(2-DE)分离,用抗曲霉抗体阳性的IA确诊患者混合血清进行免疫印迹,再用质谱分析及生物信息学方法鉴定阳性反应点.结果 2-DE、免疫印迹结果显示,确诊IA患者血清与分泌蛋白质中多种抗原反应强烈.40个蛋白质点被抗体阳性IA患者血清识别.对40个蛋白质点质谱分析,成功鉴定了39个免疫反应阳性的蛋白质点,代表17种蛋白质,包括分泌型二肽基肽酶V(DppV)、NAD-依赖型苹果酸脱氢酶、硫氧还蛋白还原酶、醛脱氢酶、果糖二磷酸醛缩酶、3-羟丁酰辅酶A脱氢酶等.在鉴定出的17种蛋白质中,有2个为已知抗原,15个首次报道为免疫原性蛋白质.有7种免疫原性蛋白质显示有多个蛋白质点.且在新发现的免疫原性蛋白质中,2号蛋白质(共13个蛋白质点)免疫反应强,鉴定结果为硫氧还蛋白还原酶.结论 免疫蛋白质组学技术是筛选病原体免疫优势抗原的一种有效方法,此次鉴定的抗原可能是潜在的疾病标志物,但还需进一步地实验加以评估.
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免疫蛋白质组学技术筛选鉴定日本血吸虫雄虫诊断候选抗原
目的 应用经典的免疫蛋白质组技术筛选、鉴定日本血吸虫雄虫抗原蛋白质,以期获得敏感性高、特异性强的诊断抗原.方法 从人工感染日本血吸虫的家兔门静脉中收集血吸虫雄性成虫,提取可溶蛋白；采用双向凝胶电泳与Western印迹相结合(2-D Western印迹)筛选特异性抗原蛋白质点；MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定各抗原蛋白质；将筛选出的体被抗原、ER Calcistorin基因用PCR扩增后插入到pIVEX 1.4WG和pET-28a载体上,分别用麦胚无细胞表达体系和原核表达系统获得重组抗原,Western印迹鉴定其抗原性.结果 用2-D Western印迹共筛选到36个阳性蛋白质点,其中12个点同时也能与健康兔血清反应；24个特异性抗原蛋白质点经MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定,其中19个(79.2％)在NCBI数据库找到匹配蛋白质数据资料.体被抗原均能在麦胚无细胞体系和原核表达体系中表达；免疫印迹显示麦胚无细胞体系表达的重组蛋白有较好抗原性,检测敏感性90％,特异性100％.结论 基于凝胶电泳的免疫蛋白质组学技术用于诊断抗原筛选、鉴定切实可行；与E.coli原核表达体系相比,麦胚无细胞表达体系表达的重组蛋白具有较好的抗原性.
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应用免疫蛋白质组学方法鉴定日本血吸虫虫卵诊断抗原
目的 虫卵可溶性抗原(soluble egg antigen,SEA)是目前日本血吸虫病免疫诊断中常用的抗原.本研究联合应用双向凝胶电泳(2-DE)、Western blot和MALDI-TOF质谱等技术,鉴定SEA中诊断抗原蛋白质.方法 SEA经2-DE分离蛋白质后进行银染,或应用日本血吸虫感染兔血清Western blot筛选抗原蛋白点,用MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定每一抗原蛋白质分子.结果 虫卵可溶性蛋白分子经2-DE分离后转印PVDF膜上,与感染兔血清孵育出现29个特异性阳性反应点,与健康兔血清出现3个非特异的阳性反应点；29个特异性抗阳性反应点中,从银染2-DE胶图上找到21个匹配的抗原蛋白质点;MALDI-TOF/TOF质谱鉴定和NCBI数据库检索,13个点(61.9％)获得匹配蛋白质,4个点(19.0％)获得匹配EST,4个点(19.0％)未能从数据库中找到相匹配的信息.重组表达筛选出的SjCHGC06040和SjP40两个抗原蛋白质,Western blot结果显示reSjCHGC06040、reSjP40均能与感染兔血清抗体发生特异性反应,具有潜在的应用价值.结论 2-DE、MALDI-TOF质谱联合Western blot的免疫蛋白质组学研究方法,用于筛选、鉴定SEA中诊断抗原蛋白质,是切实可行的；但该方法存在一定的局限性,有待进一步改进.
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血清2型猪链球菌全菌体蛋白的免疫蛋白质组学研究
目的 寻找血清2型猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)全菌体蛋白中具有抗原活性的蛋白,为S.suis特异诊断抗原和新的疫苗侯选抗原的筛选提供线索.方法 采用免疫蛋白质组学技术,分析和研究血清2型S.suis SC84菌株全菌体蛋白中能与猪链球菌病人恢复期血清发生免疫杂交的蛋白点.应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对这些蛋白进行鉴定.结果 S.suis SC84全菌体蛋白与3份猪链球菌病人恢复期血清进行免疫杂交反应,发现8个与IgG抗体发生阳性反应的蛋白点.经MALDI-TOF-MS鉴定,这8个蛋白分别为溶菌酶释放蛋白(MRP)、琥珀酸脱氢酶/延胡索酸还原酶黄素蛋白亚单位(SDHFp/FRDFp)、触发因子(TF)、延长因子G(EF-G)、细菌糖磷酸转移酶系统甘露糖特异ⅡAB亚单位(PTS/MAN-IIAB)、丙酮酸激酶(PK)、6-磷酸果糖激酶(6-PFK)、色氨酸-tRNA合成酶(TrpRS).MRP定位于胞壁;TF、PTS/MAN-IIAB、PK及TrpRS定位于胞质;SDHFp/FRDFp、EF-G及6-PFK定位于胞外.并且确定了它们在S.suis 05ZYH33菌株基因组的编码基因.结论 在S.suis SC84全菌体蛋白中发现8个抗原活性蛋白,其中SDHFp/FRDFp、TF、EF-G、PTS、PK、6-PFK及TrpRS是在S.suis新发现的抗原性蛋白,它们作为特异诊断抗原和疫苗侯选抗原的前景有待进一步研究.
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免疫蛋白质组学技术在寄生虫病诊断抗原筛选中的应用
免疫蛋白质组学(immunoproteomics)是由蛋白质组学与现代免疫学相结合形成的一门新兴的交叉学科,已广泛应用于肿瘤、自身免疫性疾病以及感染病的生物标志物筛选与鉴定.本文就近5年来免疫蛋白质组学技术在寄生虫病免疫诊断抗原筛选中的应用作文献综述.
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布鲁氏菌外膜蛋白免疫蛋白质组学方法的建立
目的 建立布鲁氏菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,筛选布鲁氏菌保护性抗原.方法 利用双向电泳技术对实验条件下培养的布鲁氏菌疫苗株M5外膜蛋白进行分离,结合WB(Western blotting)技术寻找发生免疫反应的蛋白质.结果 21个免疫蛋白点经胶内酶切、肽提取后用基质辅助激光解析/电子飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定.每个蛋白点的肽质量指纹图谱用Mascot进行检索后,代表了12个开放阅读框.这些蛋白不全是外膜蛋白,还存在胞浆蛋白,其功能涉及生物合成和物质代谢等领域,还有一个功能未知的蛋白.结论 成功建立了布鲁氏菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,为寻找保护性抗原及为新型疫苗抗原候选提供新思路.
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免疫蛋白质组学技术在肿瘤相关抗原筛选中的应用
蛋白质组学研究在后基因组时代得到快速发展,免疫蛋白质组学技术为肿瘤相关抗原的发现提供了一种有效的分析方法,其筛选的肿瘤相关抗原不仪可用于肿瘤诊断和预后的检测,还可能成为新的治疗靶标.本文就免疫蛋白质组学技术的研究进展作一综述.
关键词： 免疫蛋白质组学 肿瘤相关抗原 2D-Western blotting
