克癃胶囊对H2O2诱导PC-3细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:探讨克癃胶囊对H2O2刺激前列腺癌细胞(PC-3)引起的氧化应激反应的保护作用和分子机制.方法:通过H2O2作用于PC-3细胞建立氧化应激的损伤模型;利用流式细胞仪技术、化学显色法分别检测细胞内活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量;Western Blot和RT-PCR检测细胞Nrf2通路相关因子蛋白和mRNA的表达变化.结果:克癃胶囊能降低细胞内由H2O2引起的ROS升高(P＜0.01),升高由H2O2引起的GSH降低(P＜0.01);Western Blot结果显示,加入克癃胶囊干预后Nrf2、COX-2、HO-1、NQO1蛋白表达均增强(P＜0.01);RT-PCR结果显示,克癃胶囊干预后Nrf2、COX-2、HO-1、NQO1 mRNA水平表达明显增强(P＜0.05).结论:克癃胶囊对H2O2引起PC-3细胞的氧化应激具有保护作用,其作用机制是通过调控Nrf2通路,激活体内抗炎抗氧化机制而实现的.

降香新黄酮latifolin对大鼠急性心肌缺血影响及介导Nrf2信号通路机制研究

研究降香新黄酮latifolin对垂体后叶素(Pit)及异丙肾上腺素(ISO)致大鼠急性心肌缺血保护作用及作用机制.Pit及ISO分别诱导大鼠急性心肌缺血,观察大鼠心电图变化.ISO诱导大鼠急性心肌缺血,ELISA法或比色法检测血清中心肌损伤标志物含量或活力、比色法检测心肌中SOD活力及MDA含量;HE染色进行组织病理学检查;心肌组织冰冻切片进行DCFH-DA荧光染色,检测心肌中ROS含量水平;Western blot法检测心肌中Nrf2,Keapl,HO-1及NQO1的蛋白表达水平.心电图结果显示,latifolin抑制Pit及ISO引起的ST段变化,抑制Pit引起心率减慢.机制研究结果显示,latifolin降低血清中cTnI 含量和AST及LDH活力;升高心肌中SOD活力,降低心肌中MDA含量;降低心肌组织炎细胞浸润、肌纤维断裂及坏死的程度;减弱心肌DCFH-DA荧光染色的荧光强度;抑制Keap1的蛋白表达,促进Nrf2核转移,促进HO-1及NQO1的蛋白表达.结果表明降香新黄酮latifolin对大鼠急性心肌缺血具有保护作用,主要机制可能与激活Nrf2信号通路从而发挥抗氧化作用有关.

川芎提取物通过激活Nrf2通路对抗心肌缺血大鼠氧化应激损伤

川芎是临床常用于心脑血管疾病的一味中药,现代医学证实川芎提取物具有良好的抗氧化活性.该文主要探讨川芎提取物对大鼠心肌缺血损伤氧化应激干预作用及可能的机制.采用皮下注射盐酸异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血损伤模型,记录各组大鼠心脏指数,比色法检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)的活性及血清中丙二醛(MDA)含量,同时光镜下观察心肌组织形态学变化,Western blot法检测心肌组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)和血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达的变化.结果显示,川芎提取物能显著降低心脏指数和血清心肌酶CK,LDH,AST水平,提高血清SOD和T-AOC活性并降低MDA含量,改善缺血损伤后心肌组织形态结构,增加心肌组织中Nrf2,NQO1,HO-1蛋白的相对表达.该研究表明川芎提取物对大鼠心肌缺血损伤具有保护作用,其机制可能与激活Nrf2信号通路,增加心肌组织抗氧化能力,抑制氧化应激反应有关.

HPV致癌与氧化应激的协同作用及Nrf2信号通路的研究进展

人乳头状瘤病毒(HPV)与尖锐湿疣、宫颈癌、鲍温样丘疹病、肛门生殖器癌和非黑素瘤皮肤癌等有关.HPV的主要致癌蛋白E2、E6、E7等可与氧化应激相互作用,诱导脱氧核糖核酸氧化,损伤和抑制肿瘤细胞凋亡,从而参与HPV的致癌过程.Nrf2信号通路是细胞内重要的抗氧化应激的信号通路,具有抗氧化和抗肿瘤作用,其激活剂姜黄素、白藜芦醇和茶多酚均被证实可抗HPV致癌.文章对HPV与相关皮肤病、HPV致癌与氧化应激的协同作用、Nrf2信号通路与及其激活剂在HPV致癌中的作用作一综述.

电刺激对C2C12肌管自由基代谢及Nrf2/ARE信号通路的影响

目的:探讨电刺激模拟运动对小鼠骨骼肌肌母细胞(C2C12)肌管自由基及Nrf2信号通路的影响.方法:C2C12细胞分化6天后分为对照组和电刺激组,对照组不进行电刺激,电刺激组采用45V、20ms、5 Hz的刺激强度对C2C12肌管进行电刺激,根据刺激时间为分为30 min、45 min、60 min、75 min、90 min、120 min和150 min组.测定不同刺激时间C2C12肌管内活性氧自由基(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及核因子E2相关因子2(Nrf2)核蛋白含量的变化.结果:(1)与对照组相比,C2C12肌管内ROS生成的量除30 min和150 min组外,其余各刺激时间组都明显增加(P＜0.05),其中60 min和120min组极显著增加(P＜0.01).(2)与对照组相比,C2C12肌管中GSH-Px活性在60 min、90 min、120 min组有显著性增加(P＜0.05),75 min和150 min组时有极显著增加(P＜0.01).(3)与对照组相比,C2C12肌管Nrf2核蛋白表达在60 min、90 min、120 min组有显著性增加(P＜0.05),75 min和150 min组时有极显著增加(P＜0.01).结论:在45V、20 ms、5 Hz的强度下,电刺激C2C12肌管会使肌管发生氧化应激,结合ROS产生量随电刺激时间的变化规律,发现ROS只有达到一定的量才能激活Nrf2信号系统,同时启动相关基因,使GSH-Px发挥抗氧化作用,而且随着刺激时间的增加,肌管内抗氧化能力略有降低,随后则继续保持着较高的活性.

远隔缺血后处理对大鼠深低温肺缺血再灌注损伤的保护机制研究

目的 初步探讨远隔缺血后处理对在体大鼠肺深低温缺血再灌注损伤的保护作用及Nrf2在其中的作用机制.方法 建立大鼠深低温肺缺血再灌注模型,在此模型基础上进行远隔缺血后处理干预及阻断Nrf2信号通路,检测不同处理条件下肺组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide,SOD)活性、肺湿/干重比值(W/D)、Western blot法测定Nrf2的表达情况和肺组织HE染色光镜观察.结果 远隔缺血后处理组较缺血再灌注组肺组织Nrf2表达增加(P＜0.05)肺损伤程度明显减轻,MDA含量减少(P＜0.05),SOD活性增高(JP＜0.05),W/D比值减低;而阻断Nrf2信号通路后这一变化明显减弱.结论 远隔缺血后处理能减轻大鼠深低温肺缺血再灌注损伤程度,Nrf2信号通路可能参与深低温肺缺血远隔缺血后处理的保护机制.

核转录因子Nrf2信号通路在环境毒物暴露中的作用研究进展

环境毒物种类众多,如金属和类金属、有机溶剂、杀虫剂和空气污染物等;其中,多数毒物可引起机体氧化应激.转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)是细胞氧化应激反应的关键因子,在保护细胞和组织免受活性氧自由基(ROS)中起着重要的作用.一方面,环境毒物可以诱导Nrf2信号通路的激活;另一方面,Nrf2信号通路诱导剂还被广泛证明能够进一步拮抗环境毒物对机体的损伤.笔者综述了Nrf2信号通路在多种常见环境毒物诱发的氧化损伤中的拮抗作用,并对研究Nrf2激活剂保护机体拮抗环境毒物毒性方面提出了展望.

核转录相关因子-2信号通路对重金属中毒调控作用的研究进展

重金属是当今环境污染物中关注度高的毒物类别之一,其可对人体多个系统和器官造成严重的损伤.氧化损伤是重金属中毒的发生机制之一.核转录相关因子-2(nuclear factor-erythroid 2-related factor2,Nrf2)作为一类具有抗氧化功能的转录因子,通过识别并结合抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE),进一步启动多种抗氧化酶类的转录,清除多余的自由基,在重金属中毒的防治中起到重要作用.该文对Nrf2信号通路结构与作用及其在重金属锰、汞、镉、铅中毒发生过程中的调控作用进行综述,为重金属中毒防治提供新思路.

乙酰半胱氨酸抑制脂多糖诱导的人肺NCI-H292细胞粘蛋白MUC5AC表达

目的:研究乙酰半胱氨酸(NAC)对脂多糖(LPS)诱导的气道粘蛋白MUC5AC表达的调控作用并探讨可能的机制.方法:体外培养人气道上皮细胞NCI-H292,实验分为对照组、黏液高表达组(LPS组)及乙酰半胱氨酸干预组(NAC+LPS组),分别采用Real time PCR和Western blot方法检测NCI-H292细胞MUC5AC、Nrf2的mRNA含量及蛋白表达水平.结果:LPS刺激NCI-H292细胞表达MUC5AC,MUC5AC mRNA及蛋白表达分别增加7.169±1.785及1.473±0.098(P均<0.05).NAC促进NCI-H292细胞Nrf2表达,抑制LPS诱导的MUC5AC表达(P<0.05),以30mM为显著.结论:乙酰半胱氨酸通过促进Nrf2基因表达,抑制气道上皮细胞粘蛋白MUC5AC分泌.

樱桃汁和草莓汁激活Nrf2信号通路对砷诱导的人支气管上皮细胞损伤的保护作用

目的：研究草莓汁和樱桃汁对NF-E2相关因子2（Nrf2）信号通路的影响，以及两种果汁对砷诱导的人支气管上皮（HBE）细胞损伤的保护作用。方法选择人乳腺癌MDA-MB-231细胞系，分为空白对照组、萝卜硫素组，以及樱桃（草莓）汁1∶10、1∶20、1∶40和1∶80组（果汁稀释比例分别为1∶10、1∶20、1∶40和1∶80），采用抗氧化反应原件（ARE）荧光素酶报告基因和Westerm blotting筛选并确证两种果汁对Nrf2信号通路的影响；选择HBE细胞，分为空白对照组、萝卜硫素组，以及樱桃（草莓）汁1∶10、1∶20、1∶40组（果汁稀释比例分别为1∶10、1∶20和1∶40），采用QuantiChrom谷胱甘肽（GSH）试剂盒测定两种果汁对内源性抗氧化剂GSH水平的影响；采用MTT法和细胞转染技术评价两种果汁对砷诱导的HB E细胞的保护作用。结果草莓汁和樱桃汁能够剂量依赖地增强ARE荧光强度，上调MDA-MB-231细胞中Nrf2及其下游基因NADPH苯醌氧化还原醇（NQO1）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γGCS）蛋白的表达；两种果汁能够提高HBE细胞内源性抗氧化剂GSH水平；两种果汁和砷处理HBE细胞后，果汁预处理的细胞生存率高于砷单独处理的细胞生存率，两种果汁表现出对砷诱导细胞毒性的保护作用，而这种保护作用在转染Nrf2-siRNA后消失。结论草莓汁和樱桃汁通过激活Nrf2信号通路抑制砷诱导的细胞毒性，对HBE细胞具有保护作用。

二氧化铈纳米颗粒预处理对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞Nrf2信号通路的影响

目的:探讨二氧化铈纳米颗粒(nanoceria)预处理对大鼠缺血再灌注(IR)心肌细胞中核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路表达的影响.方法:选取健康成年大鼠50只,随机均分为5组:假手术组、模型组、nanoceria预处理1~3组.模型组、nanoceria预处理1~3组制备心肌IR动物模型(心肌缺血45 min后再灌注120 min),nanoc-eria预处理1~3组分别于造模术前24 h经尾静脉注射1~10、10~25和50 nm粒径的nanoceria悬液(2 mL/kg).再灌注结束后,荧光定量PCR法检测再灌注区域心肌组织中Nrf2、醌氧化还原酶1(NQO1)及血红素氧化酶1(HO-1)mRNA表达水平,Western blot法检测胞核内Nrf2蛋白表达水平.结果:模型组心肌细胞内NQO1、HO-1 mRNA表达水平及胞核内Nrf2蛋白表达水平较假手术组增加(P<0.05),Nrf2 mRNA表达量无明显变化(P>0.05).与模型组比较,nanoceria预处理1~3组Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA及胞核内Nrf2蛋白表达水平增加(P<0.05), nanoceria预处理2组变化显著(P<0.05).结论:nanoceria预处理可能通过激活Nrf2信号通路,发挥心肌保护作用.

Nrf2信号通路在肾脏疾病的研究进展

Nrf2对锰致GSH合成障碍的调控作用

锰(manganese,Mn)是一种常见的环境和职业污染物,其主要的毒作用部位是脑.锰神经毒性的主要病变部位位于黑质、纹状体、苍白球和尾状核等,主要表现为锥体外系神经受损.其主要机制之一是由于体内氧化-抗氧化系统的失衡,产生大量的ROS(reactive oxygen species,ROS)引起氧化损伤.谷胱甘肽(glutathione,GSH)是体内重要的抗氧化物质,锰中毒时可以导致GSH合成障碍.核转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)是一类具有抗氧化特征的转录因子,具有提高内源性GSH水平的作用.本文拟从锰暴露途径和神经毒性、锰与氧化应激、锰中毒对GSH的影响、Nrf2信号通路对锰致GSH合成障碍的调控四个方面作以综述.

TNF-α单克隆抗体对糖尿病周围神经病变的作用

目的 探讨TNF-α单克隆抗体对糖尿病周围神经病变的治疗作用及其潜在机制.方法 制备大鼠糖尿病周围神经病变大鼠模型,以TNF-α单抗处理模型大鼠,观察其对大鼠摆尾阈值、神经传导速度及氧化应激水平的影响.高糖条件培养RSC96细胞及原代DRG神经元细胞,观察TNF-α单抗处理对模型细胞氧化应激及凋亡水平的影响,检测TNF-α单抗对模型细胞中Nrf2信号通路的影响.结果 TNF-α单抗处理能明显改善模型大鼠神经病变症状,降低模型大鼠血清中丙二醛( MDA)含量,增加超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,并能降低RSC96细胞中ROS水平,改善氧化应激状况,抑制RSC96细胞与DRG神经元细胞凋亡水平(P＜0.05);同时还能增高RSC96细胞中Nrf2活化水平(P＜0.05).结论 TNF-α单抗处理可促进神经细胞中Nrf2信号通路活化水平,进而改善氧化应激状况,抑制Schwann细胞与DRG神经元凋亡的发生,缓解糖尿病周围神经病变症状.

靖州茯苓三萜类成分对A549细胞中Nrf2信号通路的调控机制研究

目的 研究靖州茯苓三萜类成分体外对A549细胞增殖的影响及对核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、人醌NADH脱氢酶1(NQO1)蛋白表达的影响.方法 采用噻唑盐比色(MTT)法检测A549细胞的存活率,Western blot法测定Nrf2,GST,NQO1蛋白表达水平.结果 茯苓三萜质量浓度大于15μg/mL时,A549细胞存活率开始降低,且质量浓度与存活率呈负相关;质量浓度大于30μg/mL时,A549细胞中Nrf2,GST,NQO1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),且此时质量浓度与蛋白表达水平呈正相关.结论 靖州茯苓三萜类成分可通过下调Nrf2信号通路相关蛋白的表达抑制A549细胞的增殖.

微小RNA与氧化应激相互调控在疾病发生发展中的研究进展

氧化应激和微小RNA(miRNA)表达谱异常在肿瘤、衰老、心血管疾病、神经退行性疾病等的发生发展中均具有重要的作用.近年研究发现氧化应激与miRNA表达谱异常并不是独立的生物学过程,而是具有相互调控相互影响的特点.氧化应激可通过影响miRNA生成的相关酶类和转运蛋白,参与miRNA的加工、成熟及功能发挥,从而影miRNA调控的生物学效应;反过来,成熟的miRNA亦可通过调节Nrf2信号通路及ROS生成相关酶类的表达水平,影响氧化应激的发生发展.本文依据新研究成果,对miRNA与氧化应激相互调控的研究现状进行综述,旨在为氧化损伤及miRNA表达谱异常相关疾病的预防和治疗提供新的研究方向和思路.

莱菔硫烷对气道黏蛋白MUC5AC表达的调控作用

目的 研究莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对气道黏蛋白5AC (mucin 5AC,MUC5AC)表达的调控作用并探讨可能的机制.方法 体外培养人气道上皮细胞A549细胞,分别使用卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)和过氧化氢(H2O2)刺激A549细胞诱导黏液高分泌模型,使用核因子相关因子2(Nrf2)信号通路的强诱导剂莱菔硫烷为干预因素,实验分为空白对照组(不加任何刺激)、黏液高表达组(PMA组和H2O2组)及莱菔硫烷干预组(SFN+PMA组;SFN+H2O2组).莱菔硫烷预先处理30分钟后分别予PMA、H2O2干预24小时,分别采用Realtime PCR和Western blot方法检测A549细胞MUC5AC、Nrf2及其下游抗氧化基因血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1 (NQO1)和谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)的mRNA含量及蛋白表达水平.结果 与阴性对照组相比,PMA组和H2O2组MUC5AC mRNA和蛋白水平显著升高(P均＜0.05).给予莱菔硫烷处理后,MUC5AC的表达明显降低(P＜0.05),而Nrf2及其下游抗氧化基因HO-1表达水平较对照组和黏液高表达模型组升高(P均＜0.05).结论 莱菔硫烷明显抑制PMA及H2O2诱导的气道黏蛋白MUC5AC基因转录及蛋白合成分泌,可能通过Nrf2/HO-1信号通路参与调控气道黏液高分泌.

D-半乳糖刺激小鼠睾丸TM4支持细胞分泌功能的衰退及其机制

目的 采用D-半乳糖(D-Gal)刺激小鼠TM4睾丸支持细胞,建立衰老所致TM4细胞分泌功能衰退模型.方法 将小鼠TM4睾丸支持细胞分为正常对照组、(25、50、100、150、200、250) mmol/L D-Gal刺激组.MTT法检测TM4细胞活力、流式细胞术检测细胞周期、光镜观察细胞形态、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老细胞百分率;反转录PCR检测P21、P16、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和干细胞因子(SCF)的mRNA水平;Western blot法检测GDNF、SCF、红系2样核因子2(nuclear factor,erythroid 2 like 2,NRF2)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)的蛋白水平.结果 与正常对照组比较,D-Gal刺激组细胞活力显著下降;处于G1期的细胞比例增高、S期细胞比例降低,细胞阻滞于G0/G1期;SA-β-Gal染色阳性率明显增多,衰老基因P21 mRNA表达上调,GDNF和SCF mRNA及蛋白水平均显著下调;氧化应激相关蛋白NRF2、HO-1和NQO-1的蛋白水平显著降低.结论 成功建立D-Gal刺激的TM4睾丸支持细胞分泌功能衰退模型,衰老机制可能与下调NRF2信号通路有关.