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滋阴活血解毒超微中药方对脑缺血大鼠凝血酶原和蛋白酶激活受体-1mRNA表达的影响
目的:观察滋阴活血解毒超微中药方对大鼠局灶性脑缺血后脑组织凝血酶原mRNA和蛋白酶激活受体-1 (PAR-1) mRNA表达的影响.方法:24只大鼠随机分为假手术组、模型组、滋阴活血解毒超微中药方组和阿加曲班组,每组又分1、3d两个观察时相.用线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.采用逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)法检测脑组织中凝血酶原mRNA及PAR-1 mRNA表达水平.结果:假手术组可见凝血酶原和PAR-1 mRNA微量表达；模型组、滋阴活血解毒超微中药方组和阿加曲班组脑组织凝血酶原和PAR-1 mRNA表达明显增强,与假手术组比较有显著性差异(P＜0.01)；但与模型组比较,滋阴活血解毒超微中药方组和阿加曲班组脑组织中凝血酶原和PAR-1 mRNA表达明显下降(P＜0.01)；治疗第1天后滋阴活血解毒超微中药方组凝血酶原和PAR-1 mRNA表达明显高于阿加曲班组(P＜0.05),但第3d后PAR-1 mRNA表达两组无显著性差异.结论:滋阴活血解毒超微中药方和凝血酶抑制剂阿加曲班均能下调脑缺血模型大鼠脑内凝血酶原和PAR-1 mRNA的表达,减轻凝血酶的毒性损伤可能是滋阴活血解毒超微中药方发挥脑保护作用的机制之一.
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活血及利水中药对脑出血大鼠脑水肿及PAR-1表达的影响
目的:探讨活血、利水中药对脑出血大鼠蛋白酶激活受体-1(PAR-1)表达的影响.方法:168只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、活血组和利水组.采用自体不凝血注入尾状核法制作大鼠脑出血模型,分别于术后1、3、5d 3个时间点取材,组织干湿重法计算脑含水量,免疫组织化学法和Real-time PCR法检测脑组织PAR-1蛋白和基因的表达.结果:与假手术组相比,模型组各时间点大鼠脑组织含水量增多(P＜0.01),PAR-1蛋白和基因的表达均明显升高(P＜0.01)；活血组和利水组大鼠脑组织含水量及PAR-1的表达较模型组降低(P＜0.05),且活血方优于利水方(P＜0.05).结论:活血、利水中药均能减轻脑出血后脑水肿,其机制可能与降低PAR-1表达有关.
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滋阴活血解毒方对局灶性脑缺血大鼠凝血酶原mRNA和蛋白酶激活受体-1mRNA含量的影响
目的 观察滋阴活血解毒方对局灶性脑缺血模型大鼠脑组织凝血酶原mRNA和蛋白酶激活受体(PAR-1)mRNA表达的影响,探讨其脑保护机制.方法 将24只大鼠随机分为假手术组、模型组、滋阴活血解毒方组、阿加曲班组,每组分1、3d两个时间点.滋阴活血解毒方组灌服中药水煎剂,每日剂量32.4 g/kg;阿加曲班组为腹腔注射给药,第1、2日每日剂量为11.16 mg/kg,第3日剂量为3.72 mg/kg.假手术组和模型组均灌服等容量生理盐水,每日剂量为2 mL/100 g.均分2次给药.线栓法制备大脑中动脉闭塞模型.采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测脑组织中凝血酶原mRNA及PAR-1mRNA表达水平.结果 与假手术组比较,模型组脑组织中凝血酶原mRNA、PAR-1 mRNA表达显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.01),滋阴活血解毒方组和阿加曲班组能明显下调凝血酶原mRNA、PAR-1 mRNA表达,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 滋阴活血解毒方能抑制脑组织中凝血酶原mRNA和PAR-1 mRNA的表达,减轻凝血酶的毒性反应,这可能是其发挥脑保护作用的机制之一.
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脑脉Ⅱ号胶囊对急性脑出血大鼠PAR-1动态表达的影响
目的:探讨急性脑出血后蛋白酶激活的受体(PAR-1)的动态表达及脑脉Ⅱ号胶囊(NMCⅡ)的干预作用.方法:将72只大鼠随机分为9组(n=8),即正常组、脑出血模型6,24h,3,7 d组和NMCⅡ6,24 h,3,7 d组.用Ⅶ-S型胶原酶诱导大鼠脑出血模型.免疫组化方法测定各时间点大鼠脑出血后血肿周围水肿组织PAR-1蛋白的表达;RT-PCR检测PAR-1 mRNA的表达.结果:正常组大鼠脑出血后可见有PAR-1mRNA和PAR-1蛋白表达,模型组大鼠脑出血后6 h表达明显增多,24h进一步增多,于3 d时达到高峰,7 d时表达明显减少.在6,24 h,3,7 d各时间点,模型组、NMCⅡ组PAR-1 mRNA吸光度及PAR-1阳性细胞数升高,与正常组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01),NMCⅡ组PAR-1阳性细胞数、PAR-1 mRNA吸光度比值降低,与模型组比较各时间点均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).结论:脑出血后PAR-1受到凝血酶的持续活化,脑出血后凝血酶的作用可能是通过PAR-1介导的;NMCⅡ可抑制PAR-1的表达,这可能是其治疗学机制之一.
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蛋白酶激活受体-1在肺癌组织中表达的免疫组织化学研究
目的 研究蛋白酶激活受体-1(PAR-1)与肺癌侵袭、转移的关系.方法 应用SP法对80例手术切除的肺癌组织标本进行PAR-1免疫组织化学染色;应用形态计量学分析方法结合临床病理资料分析PAR-1表达与肺癌转移相关指标的关系.结果 80例肺癌组织中PAR-1阳性表达数为59例(73.8%).有转移组的56例中PAR-1阳表达数为48例(85.7%),无转移组的24例中PAR-1阳性表达数为11例(45.8%),二者差异有显著性意义(p＜0.01).图像分析结果表明:有转移病例(7.84±6.11)和无转移病例(4.48±2.59)组间积分光密度的差异则有显著意义(p＜0.05),肿瘤组织(6.505±3.086)与肺组织(2.91±1.97)及原发灶(6.505±3.086)与转移灶(10.827±2.20)各组之间积分光密度的差异度均有非常显著意义(p＜0.01).结论 PAR-1可能在肺癌进展的过程中发挥着重要作用;PAR-1过度表达可能与肺癌的恶性表型及侵袭和转移表型有关.
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体外循环时蛋白激酶受体在止血和炎性反应中的作用
心脏直视手术时,尽管采用各种方法来保护血液系统,但仍然避免不了在体外循环(extracorporeal circulation,ECC)过程中大量酶原及酶的产生和激活,其中蛋白酶激活受体1(PAR-1)作为凝血酶酶切位点,介导了一系列的病理生理反应,本文就PAR-1在凝血系统和炎性反应中的作用作一综述.
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急性胰腺炎患者内源性硫化氢水平的变化 及与凝血功能的关系
目的：探讨急性胰腺炎（AP）患者内源性硫化氢（H2S）水平的变化及与凝血功能的关系。方法采用前瞻性病例对照研究方法。选取2002年12月至2015年3月浙江省义乌市中心医院住院的轻症急性胰腺炎（MAP组）、重症急性胰腺炎（SAP组）患者各40例，以同期40例健康体检者作为对照（健康组）。留取空腹静脉血，测定血浆H2S、凝血因子Ⅷ（FⅧ）、血管性血友病因子（vWF）、纤溶酶原（PLG）、抗凝血酶（AT）、血小板计数（PLT）、组织因子（TF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量及单核细胞蛋白酶激活受体-1（PAR-1）表达水平，并对各指标进行相关性分析。结果3组研究对象性别、年龄、体质量及AP两组间病程比较差异均无统计学意义，具有可比性。与健康组比较，MAP组、SAP组血浆H2S、FⅧ、vWF、TF、TNF-α及单核细胞PAR-1表达均显著升高〔H2S（μmol/L）：67.42±6.34、112.47±12.69比42.57±4.18，FⅧ：（67.5±5.8）%、（82.3±4.7）%比（57.2±6.4）%，vWF：（112.6±9.7）%、（142.5±12.5）%比（76.4±8.2）%，TF（ng/L）：45.27±4.34、64.76±6.25比18.15±1.89，TNF-α（ng/L）：197.67±13.62、324.72±25.54比20.08±2.57， PAR-1（荧光强度）：32.16±4.43、56.12±7.07比12.27±2.12，均P＜0.01〕，血浆PLG、AT活性显著减低〔PLG：（52.4±4.7）%、（36.7±3.2）%比（62.1±5.6）%，AT：（43.2±6.9）%、（35.5±5.4）%比（53.6±6.1）%，均P＜0.01〕，且SAP组各指标升高或降低较MAP组更为显著（均P＜0.01）。SAP组PLT明显低于健康组和MAP组（×109/L：8.5±1.1比15.7±2.8、12.4±1.9，均P＜0.01）。H2S与FⅧ、vWF、TF、TNF-α、PAR-1呈显著正相关（r值分别为0.56、0.61、0.72、0.66、0.64，均P＜0.01），与PLG、AT呈显著负相关（r值分别为-0.64、-0.57，均P＜0.01）。结论 AP患者内源性H2S可上调TF、TNF-α、PAR-1表达水平，从而介导AP患者的凝血功能障碍。
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脑血康对脑出血蛋白酶激活受体-1表达的影响
目的:探讨脑出血后蛋白酶激活受体-1(PAR-1)的动态表达及脑血康的干预作用.方法:72只大鼠随机分为正常组、脑出血模型6 h、24 h、3 d、7 d组和脑血康治疗6 h、24 h、3 d、7 d组.用Ⅶ-S型胶原酶诱导大鼠脑出血模型.免疫组化方法测定各时间点大鼠脑出血后血肿周围水肿组织PAR-1蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PAR-1 mRNA表达.结果:正常组大鼠大脑PAR-1蛋白和PAR-1 mRNA表达轻度阳性;模型组6 h时PAR-1蛋白和PAR-1 mRNA表达强度开始增强,24 h表达进一步增加,于3 d达到高峰,然后开始下降,7 d时明显下降.在6 h、24 h、3 d、7 d各时间点,模型组和脑血康组PAR-1阳性细胞数、PAR-1 mRNA吸光度(A)比值升高,与正常组比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01);脑血康组PAR1阳性细胞数、PAR-1 mRNA A比值降低,与模型组各时间点比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01).结论:脑出血后PAR-1受到凝血酶的持续活化,脑出血后凝血酶的作用可能通过PAR-1介导;脑血康可抑制PAR-1活化,这可能是脑血康治疗脑出血的主要机制之一.
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聚酰胺—胺型树枝状高聚物纳米载体介导的组织因子反义寡脱氧核苷酸防治心肌缺血再灌注损伤机制的初步研究
目的 研究聚酰胺-胺型树枝状高聚物(PAMAM-D)纳米载体介导组织因子(TF)反义寡脱氧核苷酸防治大鼠心肌缺血再灌注损伤的分子机制.方法 分别设计合成针对大鼠TF的反义寡脱氧核苷酸(AS/TF)、正义寡脱氧核苷酸(S/TF)和错配寡脱氧核苷酸(Sc/TF),分别耦联于PAMAM-D纳米载体,构建ODN-PAMAM-D的聚合物.将100只雄性Lewis大鼠随机等分为假手术组、缺血再灌注组、AS/TF防治组、S/TF对照组和Sc/TF对照组.除假手术组和缺血再灌注组大鼠静脉分别注入生理盐水和PAMAM-D外,其余3组大鼠分别注入与PAMAM-D相耦联的相应寡核苷酸.各组大鼠于注射后10 h开胸暴露心脏,除假手术组以外的其他4组大鼠于冠状动脉左前降支中1/2处结扎造成心肌缺血.心肌缺血90 min后,解除结扎,再灌注3 h.假手术组的大鼠于冠状动脉左前降支中1/2处只穿线,不结扎,持续4 h 30 min.分别于缺血90 min和再灌注结束后取各组大鼠的血液检测肌钙蛋白T(TnT)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量.并于实验结束后取梗死区及边缘区心肌组织检测TF基因的转录、TF的促凝活性(TF∶C)和TF的抗原含量(TF∶Ag)以及活性氧簇(ROS)、蛋白酶激活受体-1(PAR-1)和p38 有丝分裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)的表达.结果 心肌缺血90 min及再灌注3 h后,缺血再灌注组大鼠血液中的TnT和LDH含量均显著高于假手术组,而AS/TF防治组均明显低于其他3个缺血再灌注组(P<0.05);梗死区及边缘区心肌组织中TF基因的转录和表达均强于假手术组,AS/TF防治组则较其他3个缺血再灌注组明显减弱(P<0.01).流式细胞学检测显示,心肌缺血再灌注3 h后,各缺血再灌注组大鼠心肌组织中ROS、PAR-1和p38 MAPK的表达均显著增多,AS/TF防治组则明显低于缺血再灌注组、S/TF对照组和Sc/TF对照组(P<0.05).结论 TF不仅介导了凝血过程,而且通过激活PAR-1和p38 MAPK诱发了炎性反应,从而加重了心肌组织损伤.TF是心肌缺血再灌注损伤的"中心分子",针对TF的反义寡脱氧核苷酸耦联G10代PAMAM-D纳米载体不仅抑制了TF的转录和表达,而且减轻了心肌缺血再灌注损伤.
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凝血酶大鼠脑内注射对细胞凋亡的影响及其机制的实验研究
目的 探讨凝血酶(Thrombin,TM)脑内注射对周围组织Caspase-3蛋白表达和细胞凋亡的影响.方法 TM、TM+组织蛋白酶G(Cathepsin G,CATG)、TM+Caspase-3抑制剂(DEVD-fmk)脑内立体定向注射制作动物模型,应用Western-blot技术检测Caspase-3蛋白表达,TUNEL法检测细胞凋亡.结果 TM脑内注射后6 hCaspase-3蛋白开始增加,与对照组比较差异具有显著性(P＜0.01),注射后24 h达高峰(P＜0.01),然后逐渐下降,96 h时恢复至正常水平;TM脑内注射后24 h凋亡细胞数目开始增加,与对照组比较差异具有显著性(P＜0.05),48 h达高峰(P＜0.01),然后逐渐下降.TM+DEVD-fmk脑内注射后凋亡细胞数目与对照组比较差异无显著性(P＞0.05).TM+CATG脑内注射后Caspase-3蛋白表达和凋亡细胞数目与对照组比较差异均无显著性(P＞0.05).结论 TM通过蛋白酶激活受体-1(protease activated receptor-1,PAR-1)激活Caspase-3,诱导细胞凋亡.
关键词： 凝血酶 Caspases-3 凋亡 蛋白酶激活受体-1 -
凝血酶对血脑屏障通透性影响的实验研究
目的探讨凝血酶(thrombin,TM)对血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性的影响及其可能机制.方法 54只SD大鼠随机分为A、B、C 3组.A组在右侧基底节立体定向注入TM;B组注入TM+组织蛋白酶G(Cathepsin G,CATG);C组注入生理盐水.A、B组又随机分为注入后6h、24h、48h、72h亚组,应用干湿重法测定脑水含量,应用Evans-blue测定BBB通透性.结果 TM脑内注射后6h同基底节区BBB通透性明显增加(P＜0.05),24h时达高峰(P＜0.01),持续至48h(P＜0.05),然后逐渐消退,脑水含量的变化规律与BBB通透性的变化类似.TM+CATG组在各个时间点BBB通透性和脑水含量与对照组比较均无明显差异(P＞0.05).结论 TM增加BBB通透性是其诱发脑水肿形成的主要机制.TM对BBB通透性的影响可能是通过激活蛋白酶激活受体-1(protease activated receptor-1,PAR-1)实现的.
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急性肺损伤大鼠蛋白酶激活受体-1表达及其机制
目的 探讨肺损伤后蛋白酶激活受体1(protease-activated receptor-1,PAR-1)的表达情况及其与炎症因子之间的关系.方法 腹腔注射内毒素的方法复制大鼠肺损伤的模型,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测PAR-Ⅰ mRNA表达,HE染色观察肺组织病理变化,酶联免疫吸附(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测炎性因子的改变.结果 内毒素肺损伤时,PAR-1 mRNA随着脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预时间的延长表达逐渐增加.肺内肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、金属基质蛋白酶-12(matrix metalloproteinase-12,MMP-12)升高与PAR-1的水平密切相关.结论 PAR-1的表达与TNF-α,MMP-12相关,PAR-1的抑制剂减少了肺组织MMP-12和TNF-α的释放,可能具有抗炎作用.
关键词： 肺损伤 蛋白酶激活受体-1 肿瘤坏死因子-α 金属基质蛋白酶-12 -
蛋白酶激活受体-1拮抗剂对兔心脏骤停后综合征中肾损伤的保护作用及机制
目的：探讨蛋白酶激活受体-1（PAR-1）拮抗剂对心脏骤停后综合征（PCAS）中肾损伤的影响及机制。方法：将日本大耳白兔随机分为假手术组（n ＝5）、PCAS 组（n＝10）、PAR-1拮抗剂组（n＝10）。采用窒息性心脏骤停法制备兔 PCAS 模型。PAR-1拮抗剂组于心肺复苏后10 min 给予静脉滴注 PAR-1拮抗剂 SCH79797（25μg／kg），其余各组给予等量生理盐水静脉滴注。72 h 后取股静脉血检测血清肌酐和胱抑素 C 水平；取肾组织制备石蜡切片后行 HE 染色；采用 TUNEL 法测定肾脏细胞凋亡情况；应用Western blot 测定肾组织半胱天冬酶（casepase）-3、细胞外调节蛋白激酶（ERK）活化情况。结果：与假手术组相比，PCAS 组血清肌酐和胱抑素 C 水平明显上升，肾组织有大量炎性细胞浸润，凋亡细胞数显著增多，有催化活性的 caspase-3裂解片段（cleaved caspase-3）表达增高，磷酸化 ERK （p-ERK）表达减少（P ＜0．05）。与 PCAS 组相比， PAR-1拮抗剂组肾组织损伤减轻，血清肌酐和胱抑素 C 水平明显下降，凋亡细胞数减少， cleaved caspase-3表达降低，而 p-ERK 表达显著增高（P ＜0．05）。结论：PAR-1拮抗剂 SCH79797能抑制 PCAS 兔肾组织的炎症反应和细胞凋亡，可能与 ERK 信号通路激活有关。
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凝血酶对原代培养海马神经元游离钙浓度的影响
目的研究凝血酶对原代培养海马神经元内游离Ca2+水平的影响.方法采用原代培养大鼠海马神经元方法,用钙离子指示剂Fura-2双波长荧光检测凝血酶对海马神经元内游离钙浓度的影响.结果(1～40)U/ml凝血酶可使海马神经元内游离Ca2+水平显著升高,且呈剂量依赖性.凝血酶受体激活肽可明显升高细胞内游离[Ca2+]i.当胞外Ca2+为1.3 mmoL/L时,40 U/ml凝血酶可使海马神经元游离[Ca2+]i明显增加;而当胞外Ca2+为0.0 mmoL/L时,40U/ml凝血酶不影响海马神经元游离[Ca2+]i.预先加入MK-801可显著降低凝血酶的升钙作用.结论凝血酶使神经细胞内游离Ca2+浓度异常升高的作用机制可能是通过激活凝血酶受体,继而激活NMDA受体门控的Ca2+通道介导胞外Ca2+大量内流.
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凝血酶对体外培养脑微血管内皮细胞的影响
目的:探讨凝血酶(thrombin,TM)增加血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的机制.方法:将脑微血管内皮细胞在体外进行培养,在细胞的培养液中加入TM或TM+组织蛋白酶G(cathepsin G,CATG),应用相差显微镜动态观察TM及其受体抑制剂对内皮细胞形态的影响,应用免疫组织细胞化学技术检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达的变化.结果:TM加入后1h内皮细胞开始收缩,细胞面积变小,细胞间隙增宽,细胞收缩程度具有时间依赖性,至12h时细胞面积仅为处理前的20%.TM使内皮细胞MMP-2的表达水平明显增加,与对照组比较,存在明显统计学差异(P＜0.01).TM+CATG加入培养液后,细胞形态、MMP-2的表达与对照组比较均无明显统计学差异(P＞0.05).结论:TM通过激活蛋白酶激活受体-1(protease activated recep-tor-1,PAR-1),使内皮细胞发生收缩,促进MMP-2表达,是TM增加BBB通透性的可能机制.
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大鼠脑缺血再灌注后脑组织PAR-1表达与MDA含量的相关性研究
目的:观察脑缺血再灌注(cerebral ischemia reperfusion, CIR)后脑组织中PAR-1的表达与MDA含量变化之间的关系.方法:40只SD大鼠随机分缺血再灌注(CIR)后3h、6h、12h、1d、2d、3d、7d及假手术组8个组每组5只大鼠.于脑缺血2h后再灌注相应时间断头取脑,免疫组化法和脑组织匀浆法观察蛋白酶激活受体-1(protease-activated receptor-1, PAR-1)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)变化情况.结果:随着CIR时间延长,PAR-1表达和MDA含量增多,呈正相关关系(r=0.844,P<0.05).结论:CIR后PAR-1表达增多可加重脑损伤.
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Wnt-1和PAR-1在胃癌中的表达及其病理特征的相关性研究
目的 探讨Wnt-1和PAR-1在胃癌的表达与临床病理学特征的关系以及2者在胃癌组织中表达的相关性.方法 用免疫组化方法检测78例胃癌及其癌旁胃组织中Wnt-1和PAR-1的表达情况,运用统计学分析Wnt-1和PAR-1在胃癌的表达与临床病理学特征的关系,以及Wnt-1和PAR -1在胃癌的表达的相关性.结果 Wnt -1和PAR-1在胃癌的表达明显高于正常胃组织(P＜0.05)；Wnt-1和PAR-1的表达阳性组具有更高的淋巴结转移率(P＜0.05)；Wnt-1和PAR-1的表达与患者的性别和年龄无关,与肿瘤的大小、肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况以及TNM分期密切相关(P＜0.05)；且Wnt-1和PAR-1在胃癌中的表达成正相关.结论 Wnt-1及PAR-1的表达可促进胃癌的侵袭和转移.2者高表达均与胃癌的浸润深度、区域淋巴结转移、TNM分期、淋巴管浸润及较高淋巴结转移率有关,可作为胃癌恶性程度的预测因子,并且2者在胃癌组织中的表达呈正相关性.
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尖锐湿疣中蛋白酶激活受体-1表达与血管增生的关系及意义
目的:探讨尖锐湿疣(CA)组织中蛋白酶激活受体(protease-activated receptor,PAR)-1的表达与血管生成的关系及意义.方法:对28例CA患者病变组织行常规组织病理切片和苏木精-伊红染色,并对其进行血管计数,应用反转录(RT)-PCR和免疫组化法检测PAR-1的表达情况.同时以17份正常包皮组织作为对照.结果:CA皮损组织的血管数比正常包皮组织明显增多t=5.192,P＜0.001);CA皮损组织中PAR-1 mRNA平均表达水平显著高于正常包皮组织(t=7.26,P＜0.001);PAR-1蛋白在CA组织中的表达较正常包皮组织显著增强(x2=16.218,P＜0.001),PAR-1在CA皮损中从基底层至角质层下方均有表达,而正常包皮仅在基底层有弱阳性表达.且PAR-1蛋白表达与血管数存在显著正相关r=0.823,P＜0.001).结论:PAR-1在CA皮损组织中的过度表达以及与血管数的正相关提示PAR-1与血管生成有关,PAR-1在CA发病中起一定的作用.
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蛋白酶激活受体-1在肺纤维化大鼠肺组织中的表达
目的 探讨在博莱霉素所致大鼠肺纤维化模型肺组织中蛋白酶激活受体-1的表达.方法 将体重180-250g的SD清洁级雄性大鼠48只,按完全随机方法分为对照组及博莱霉素(BLM)组,BLM 组大鼠气管内注入0.9-1.25ml博莱霉素A5(BLMA5,5mg/kg),对照组在同样条件下向气管内注入等量的生理盐水.两组动物于气管灌注后第7、14、28、40d分别随机处死6只.组化方法检测肺组织PAR-1的表达;Masson染色检测肺组织纤维化,按Ashcroft 评分法,评估肺纤维化的严重程度,结果 (1)对照组无明显胶原沉积,BLM组随着时间的延长,可见明显胶原沉积,BLM组/对照组两组在第7、14、28、40d肺间质纤维化Ashcroft 评分分别为24±3.72/3±0.63、46.4±4.09/4±0.63、69.3±3.78/3±1.41、64.5±5.96/3±1.67,两组有显著性差异(P﹤0.05).(2)BLM组/对照组两组在第7、14、28、40d平均每高倍镜视野肺组织PAR-1阳性细胞数分别为:9.93±1.47/2.5±1.52、16.67±2.16/1.83±1.17、17.67±2.16/2.17±0.75、16.0±2.28/2.17±1.17.BLM组各时间点肺组织PAR-1阳性细胞数较正常对照组增多,两组具有显著统计学差异(P﹤0.05).(3)肺间质纤维化程度与PAR-1阳性细胞数呈正相关(r＝0.76).结论 博莱霉素所致大鼠肺纤维化模型肺组织中蛋白酶激活受体-1的表达增强;蛋白酶激活受体-1的表达可能在博来霉素所致肺纤维化中其重要作用.
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凝血酶对大鼠脑微血管内皮细胞的影响
目的:探讨凝血酶(Thrombin,TM)对脑微血管内皮的影响.方法:将大鼠脑微血管内皮细胞进行培养，培养液中加入10 U的TM或10U的TM+0.4 mU的组织蛋白酶G(Caspethsin G,CATG)，相差显微镜动态观察内皮细胞形态的变化，免疫组织化学技术检测基质金属蛋白酶-2（Matrix Metalloproteinase-2，MMP-2）表达的改变.结果:TM使内皮细胞发生收缩，细胞收缩程度具有时间依赖性，使内皮细胞MMP-2表达水平明显增加.TM+CATG加入培养液后，细胞形态、MMP-2表达与对照组比较均无明显统计学差异(P>0.05).结论:TM通过激活蛋白酶激活受体-1（protease activated receptor-1,PAR-1），使内皮细胞发生收缩，促进MMP-2表达，是TM增加血脑屏障(Blood Brain Barrier,BBB)通透性的可能机制.
