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补肾益气方调控Bcl-2和XIAP蛋白对早孕期人滋养层细胞凋亡的拮抗作用
目的:探讨补肾益气方对正常早孕期人滋养层细胞凋亡的调节作用及机制.方法:体外培养正常早孕期人细胞滋养层细胞,分别加入空白对照组、5%含药血清组、10%含药血清组、20%含药血清组,用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪检测含药血清作用24、48、72h后细胞的增殖活性,Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞Caspase-3酶活性,Western blot检测Fas、FasL、Bcl-2和XIAP蛋白表达.结果:含药血清培养24、48、72h后,细胞在490hm波长的吸光度值增加(P<0.01);sub-G1期细胞减少(P<0.01),S期细胞增加(P<0.01),G2/M期细胞明显减少(P<0.01),Caspase-3酶活性降低;含药血清对Fas和FasL表达均有上调作用,呈剂量依赖式诱导(P<0.05);Bcl-2蛋白表达水平上升,随着浓度增加,表达量也增加,同时伴随ⅪAP水平升高(P<0.05).结论:补肾益气方通过提高凋亡抑制蛋白Bcl-2水平,从而增强XIAP表达,抑制Caspase-3活性,抑制细胞死亡.FasL表达水平的上调有利于母胎免疫耐受的维持.
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补肾益气方对正常早孕期人细胞滋养层细胞生物学行为的影响
目的探讨补肾益气方对正常早孕期人细胞滋养层细胞增殖、侵袭、分化等生物学行为的影响.方法体外培养正常早孕期人细胞滋养层细胞,分别设空白对照组、5%含药血清组、10%含药血清组、20%含药血清组,用扫描电镜、噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪、Transwell侵袭实验检测含药血清作用24h、48h、72h后细胞的形态、增殖活性及侵袭力的变化.结果含药血清培养24h、48h、72h后,细胞滋养层细胞微绒毛变丰富,伪足增多、延长;细胞在酶联免疫分析仪490nm波长的吸光度值增加(P＜0.01);sub-G1期细胞减少(P＜0.01),S期细胞增加(P＜0.01),G2/M期细胞明显减少(P＜0.01);每视野穿过PET膜的细胞数明显增多(P＜0.01).结论补肾中药促进人细胞滋养层细胞增殖及侵袭力,并可能影响其分化能力.
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基底节区绒毛膜上皮癌一例
患者 男,16岁.以头痛发热1周入院.1周前无明显诱因出现头痛,咳嗽时加重同时伴发热.近日出现恶心、呕吐.神经系统检查无阳性体征.CT示右侧基底节区类圆形高密度为主的肿块.MRI示右侧基底节类圆形异常信号,T1加权为等信号,其内见点状高信号,T2加权外周为高信号,中心为不均匀高低混杂信号.病灶周围见环状低信号影,并可见大片状指套样稍长T1长T2信号影.Gd-DTPA增强扫描,病灶呈明显不规则环状强化.行立体定向经额右基底节区占位切除术.术中见肿瘤为紫红色,质地较韧,内有陈旧出血,肿瘤内部血管丰富,但出血不多,约鸡蛋大小,与脑组织有界限,完整切除病灶.病理所见:大量纤维网及陈旧出血内见破碎的中性粒细胞及少量上皮样细胞团,细胞团由两种细胞构成,具有细胞滋养层细胞及合体细胞滋养层细胞结构.免疫组化:CD34(-)、AFP(-)、HCG(+)、CK(+).病理诊断:绒毛膜上皮癌(简称绒癌).
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丝裂原活化蛋白激酶在肿瘤坏死因子α诱导滋养层细胞MMP-9基因表达中的作用
目的探讨早孕滋养层细胞有节制地侵入机制,研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导滋养层细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因表达的调控机制.方法2004年南方医科大学南方医院将10-4g/L TNF-α分别处理滋养层细胞0、5、10、20、30min后,应用细胞ELISA法测定滋养层细胞中蛋白激酶的活性变化;预先给予丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的特异性抑制剂处理滋养层细胞30min,然后给予10-4g/L TNF-α处理滋养层细胞24h,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测滋养层细胞MMP-9基因表达的变化.结果发现10-4g/L TNF-α均能迅速激活滋养层细胞的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)、p38 MAPK激酶活性.TNF-α刺激滋养层细胞引起MMP-9 mRNA表达显著增加,其能被ERK或p38 MAPK的特异性抑制剂所抑制.结论ERK和p38 MAPK可能是TNF-α诱导滋养层细胞MMP-9基因表达增加的重要调节物质.
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减味寿胎丸及其君药菟丝子提取物对人早孕滋养层细胞影响的实验研究
目的 探讨减味寿胎丸提取物、菟丝子总提物的含药血清对正常人早孕细胞滋养层细胞(CTB)增殖及凋亡的调节作用.方法 制备减味寿胎丸提取物、菟丝子总提物的含药血清,研究其对CTB细胞增殖、分化潜能及凋亡的影响.结果 除5％菟丝子总提物高剂量组外,不同组别不同浓度的含药血清与空白对照组血清相比,吸光度值均有显著统计学差异(P＜0.05或P＜0.01).菟丝子总提物高、低剂量组5％与20％含药血清吸光度值有显著统计学差异(P＜0.05).各提取物10％含药血清分别培养细胞24h后,S期细胞百分比均较空白对照组显著增加,G2/M期细胞百分比显著减少(P＜0.05或P＜0.01);干预48 h后,变化更加明显.结论 菟丝子总提物高、低浓度的含药血清均可增加细胞的增殖活性,且呈明显的剂量依赖性.10％含药血清培养细胞24、48 h后,处于S期的细胞明显增多,阻滞在G2-M期细胞减少,表明含药血清可诱导细胞处于DNA合成期及有丝分裂期,促进细胞增殖,降低细胞凋亡的发生率.
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菟丝子提取物含药血清对人早孕滋养层细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨菟丝子提取物的含药血清对正常人早孕细胞滋养层细胞(cytotrophoblast,CTB)增殖及凋亡的调节作用.方法 雌性SD大鼠随机分为8组,每组5只,包括空白血清对照组,减味寿胎丸组,菟丝子总提物高、低剂量组,菟丝子总黄酮高、低剂量组,菟丝子总多糖高、低剂量组,各组灌胃予对应药物,2次/天,连续3d后腹主动脉采血分离血清.上述空白血清或各提取物血清以不同体积(5％、10％、20％)分别培养CTB细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞仪分析细胞周期.结果 MTT结果显示,各提取物高、低浓度含药血清培养细胞48 h后,吸光度值均一定程度增加,除5％菟丝子总提物高剂量组及5％菟丝子总多糖低剂量组外,余各组5％、10％、20％含药血清与空白对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).细胞增殖活性随含药血清浓度升高而增加,呈明显剂量依赖性.流式细胞仪分析结果显示,与空白血清组比较,各组S期细胞百分比均显著增加(P ＜0.05,P＜0.01);而G2/M期细胞百分比显著减少(P ＜0.05,P＜0.01).干预48 h后,细胞周期分布变化趋势与24 h一致,而且变化更明显.结论 菟丝子各提取物高、低剂量含药血清均可增加CTB细胞的增殖活性,降低细胞凋亡的发生.药效佳剂量分别为:菟丝子总提物低剂量、总黄酮高剂量及总多糖高剂量.
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缺氧再灌注对早孕细胞滋养层细胞生长和凋亡的影响
目的 探讨缺氧再灌注对原代培养早孕细胞滋养层细胞生长和凋亡的影响.方法 选取正常妊娠早孕(7～9周)绒毛,采用Percoll梯度离心法提取细胞滋养层细胞进行原代培养.将培养细胞随机分为20％氧浓度组(A组)、1％氧浓度组(B组)、缺氧再灌注组(将细胞放入1％氧浓度培养箱2h后,移入20％氧浓度培养箱培养6h,C组).计数细胞数目,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达,TUNEL法测定细胞凋亡,RT-PCR法检测细胞促凋亡基因Bax、抗凋亡基因Bcl-2及TNF-α基因表达.结果 ①与A组比较,B组细胞滋养层细胞数目明显增加(P＜0.05)；与A、B组相比,C组细胞滋养层细胞数目明显减少(P＜0.05)；②与A组比较,B组细胞培养液中TNF-α浓度明显增加(P＜0.05)；与B组比较,C组培养液中TNF-α浓度明显增加(P＜0.05)；③与A组比较,B组凋亡细胞核数目明显增加(P＜0.05)；与B组相比,C组细胞凋亡明显增加(P＜0.05).结论 ①低氧促进早孕细胞滋养层细胞生长并诱导其凋亡；②缺氧再灌注抑制早孕细胞滋养层细胞生长并诱导其凋亡.
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丝裂原活化蛋白激酶对佛波酯诱导滋养细胞MMP-9基因表达的影响
目的探讨佛波酯(PMA)诱导细胞滋养层细胞(CTB)MMP-9基因表达的调控机制.方法用细胞ELISA法测定CTB细胞的蛋白激酶活性变化:用反转录聚合酶链反应检测CTB中MMP-9的基因表达.结果100mol/LPMA能迅速激活CTB中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)以及p38 MAPK激酶的活性.100 nmol/LPMA刺激CTB引起MMP-9 mRNA表达显著增加,能被ERK或p38 MAPK的特异性抑制剂所抑制.结论ERK和p38 MAPK可能是PMA诱导CTB中MMP-9基因表达增加的重要调节物质.
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早孕绒毛细胞滋养层细胞分离培养的实验研究
目的改善体外分离和培养人早孕绒毛细胞滋养层细胞(cytotrophoblast,CTB)的方法,探讨CTB的一些生物学特性.方法取人工流产6～8周妊娠绒毛,机械法分离,酶消化,经Ficoll分离介质离心得到单个核细胞进行培养并鉴定,测定其生长曲线并观察其体外转化、细胞周期和激素合成.结果分离培养的CTB经免疫细胞化学染色鉴定,接种后2 h开始贴壁,第5天融合90%以上,细胞周期显示约有79%细胞处于G0/G1期,激素分泌表现出随CTB的转化而变化.结论成功分离培养了人早孕绒毛CTB,方法简便易行,获得的细胞形态单一、生长稳定、定向转化,为进一步研究CTB在生殖生理中的作用提供了实验基础.
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睾丸-混合型生殖细胞源性肿瘤1例报告
混合型生殖细胞瘤占生殖细胞瘤的32%～54%,大多由两种类型的生殖细胞肿瘤组成,由胚胎性癌和畸胎瘤混合,混有卵黄囊瘤,或有不等量的合体细胞滋养层细胞等比较常见[1].
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补肾益气方激活哺乳动物雷帕霉素靶分子(mTOR)通路影响人早孕细胞滋养层细胞生长
目的:研究补肾益气方对人早孕细胞滋养层细胞增殖和早期凋亡的影响及其可能的信号转导通路.方法:体外分离培养人早孕细胞滋养层细胞,并添加不同浓度的喂服3 d补肾益气方中药的大鼠血清,培养48 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞的增殖活力,流式细胞术检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达、Annexin V HTIC/PI双染色法检测细胞早期凋亡.结果:与体积分数20%对照血清组(B2组)比较,体积分数10%(A1组)及20%(A2组)补肾益气方含药血清作用48 h,上调细胞滋养层细胞增殖活力、促进PCNA表达、降低凋亡细胞百分率(P＜0.05),上述指标均呈剂量-效应关系.哺乳动物雷帕霉素靶分子(mTOR)通路的特异性抑制剂雷帕霉素抑制20%含药血清诱导的细胞增殖活力及PCNA蛋白表达,增加凋亡细胞百分率.结论:补肾益气方对人早孕细胞滋养层细胞的生长具有促进作用,mTOR信号通路可能是中药促进细胞滋养层细胞增殖、减少细胞凋亡的主要信号转导通路之一.
关键词： 补肾益气方 细胞滋养层细胞 增殖 凋亡 哺乳动物雷帕霉素靶分子(mTOR)
