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一氧化氮和一氧化氮合酶在宫内窒息胎鼠肝损伤中的作用及意义
一氧化氮(nitric oxide, NO)作为一种重要的细胞内信使,具有多种生理功能.一氧化氮合酶 (nitric oxide synthase, NOS ) 是合成 NO 的唯一限速酶.肝组织中存在内皮型(endothelial NOS, eNOS)和诱导型(inducible NOS,iNOS),其诱导产生的NO参与生理和病理变化.但在宫内窒息胎鼠肝脏缺血缺氧再灌注损伤过程中是否存在相应变化,尚未见报道.
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大鼠缺氧再灌注脑损伤时核因子-κB的表达
核因子κB(NF-кB)是一种广泛存在于各种细胞(包括神经元)核内的转录调节因子,在免疫、应激反应、炎症和细胞凋亡等方面具有重要作用[1].但是NF-кB的活化对神经元具有保护作用还是损伤作用并不十分清楚.本研究拟应用Western 印迹分析技术检测缺氧再灌注后大鼠脑皮质内NF-кB的表达,并通过观察其下游靶基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和锰超氧化物歧化酶 (Mn-SOD)的变化以期阐明NF-кB在缺氧再灌注脑损伤过程中的作用.
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缺氧再灌注斑马鱼胚胎脑部细胞凋亡及c-fos基因的表达
背景：国外已经有学者使用斑马鱼胚胎开始进行缺氧再灌注的研究，但还没有关于c-fos基因在斑马鱼脑缺氧再灌注过程中的表达及其作用机制的报道。
目的：观察缺氧再灌注后斑马鱼胚胎脑部细胞凋亡及脑组织中c-fos基因的表达情况。
方法：取48 hpf的斑马鱼胚胎进行缺氧实验，模拟新生儿缺氧再灌注损伤环境，通过向水中通入99.999%高纯氮气制造缺氧环境，分别经过6，12，24 h的缺氧处理后，在正常氧体积分数下进行6 h恢复。对照组为正常通气组(溶解氧浓度在7.0 mg/L左右)。采用吖啶橙染色方法，观察不同缺氧时间对斑马鱼神经细胞凋亡的影响，同时采用实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR)，对 c-fos 基因表达情况进行定量分析，比较缺氧再灌注前后c-fos基因表达水平的变化。
结果与结论：对照组脑部能检测到微量细胞凋亡，c-fos基因呈低水平表达；实验组经过6，12，24 h缺氧后，脑部凋亡细胞逐渐增多，缺氧24 h组凋亡细胞增幅大(P<0.05)，c-fos基因表达有不同程度升高(P<0.05)，尤其是缺氧6 h后，该基因的表达上调幅度高。结果表明缺氧会导致斑马鱼脑细胞内c-fos基因表达上调，可能是导致缺氧后期脑细胞凋亡激增的机制之一。 -
药物预处理对血管内皮细胞缺血再灌注损伤的保护性影响
缺血预适应(ischemic preconditioning,IPC)是指心脏遭受短暂缺血后能耐受随后较长时间的缺血损伤.目前研究表明,IPC保护作用不仅存在于器官水平,而且存在于细胞水平;不仅可以保护心肌细胞,而且可以保护血管内皮细胞、平滑肌细胞.药物预处理就是根据IPC机制,通过药物激发或模拟机体内源性物质而呈现的心脏保护作用.因而,我们通过探讨IPC潜在机制,发挥用药物代替缺血而产生预适应样保护作用,对于内皮细胞抵御缺血再灌注损伤(ischemic-reperfusion injury,I/R)具有深远意义.
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过氧化氢在大鼠心脏缺氧再灌注时的细胞化学定位
目的研究心肌缺氧再灌注时过氧化氢的产生部位.方法以大鼠为实验动物,CeCl3为捕捉剂,用细胞化学的方法进行检测,并用X-射线能谱分析的方法对沉淀颗粒进行元素分析.结果血管内皮细胞及部分心肌的线粒体肿胀.内皮细胞腔面、基底膜、肌细胞膜都有沉淀颗粒,以血管内皮细胞腔面多.结论缺氧再灌注时,不仅损伤内皮细胞,而且损伤至每一个心肌细胞.
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P38MAPK信号通路抑制剂SB203580对肝细胞缺氧再灌注影响的实验研究
目的 观察P38MAPK抑制剂SB203580在人肝癌细胞系HepG2细胞和人正常细胞系L02细胞缺氧再灌注过程中的作用.方法 实验分为正常对照组、缺氧对照组、SB203580+正常培养组、SB203580+缺氧培养组,缺氧培养24h、复氧1h后,分别应用Western Blot、MTT、划痕实验、Transwell实验、AnnexinV-FITC/PI双染实验检测细胞中P38蛋白表达情况和细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的变化.结果 与正常对照组相比,缺氧培养组HepG2细胞的凋亡率、P38MAPK磷酸化水平增加;SB203580+缺氧培养组HepG2细胞的凋亡率相对于缺氧培养组增加,P38MAPK磷酸化水平降低;划痕实验48 h后,缺氧对照组HepG2细胞明显向划痕的中央迁移,而SB203580+缺氧培养组HepG2细胞迁移受到抑制;侵袭实验24h后,SB203580+缺氧培养组HepG2细胞的侵袭能力较缺氧对照组降低(P＜0.05);AnnexinV-FITC/PI双染实验显示与缺氧对照组相比,L02细胞SB203580+缺氧培养组凋亡率降低,而HepG2细胞SB203580+缺氧培养组凋亡率则增加(P ＜0.01);MTT结果显示实验组HepG2细胞和LO2细胞增殖抑制率受到影响,并出现时间浓度依赖关系.结论 SB203580通过特异性阻断P38MAPK信号转导通路,对缺氧培养的正常肝细胞LO2细胞产生保护作用,同时对缺氧培养的肝癌细胞HepG2具有促进凋亡、抑制增殖以及抑制细胞迁移和降低侵袭能力的作用.
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缺氧再灌注对早孕细胞滋养层细胞生长和凋亡的影响
目的 探讨缺氧再灌注对原代培养早孕细胞滋养层细胞生长和凋亡的影响.方法 选取正常妊娠早孕(7～9周)绒毛,采用Percoll梯度离心法提取细胞滋养层细胞进行原代培养.将培养细胞随机分为20％氧浓度组(A组)、1％氧浓度组(B组)、缺氧再灌注组(将细胞放入1％氧浓度培养箱2h后,移入20％氧浓度培养箱培养6h,C组).计数细胞数目,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达,TUNEL法测定细胞凋亡,RT-PCR法检测细胞促凋亡基因Bax、抗凋亡基因Bcl-2及TNF-α基因表达.结果 ①与A组比较,B组细胞滋养层细胞数目明显增加(P＜0.05)；与A、B组相比,C组细胞滋养层细胞数目明显减少(P＜0.05)；②与A组比较,B组细胞培养液中TNF-α浓度明显增加(P＜0.05)；与B组比较,C组培养液中TNF-α浓度明显增加(P＜0.05)；③与A组比较,B组凋亡细胞核数目明显增加(P＜0.05)；与B组相比,C组细胞凋亡明显增加(P＜0.05).结论 ①低氧促进早孕细胞滋养层细胞生长并诱导其凋亡；②缺氧再灌注抑制早孕细胞滋养层细胞生长并诱导其凋亡.
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Sulforaphane Protects Astrocytes Against Oxidative Stress and Delayed Death Caused by Oxygen and Glucose Deprivation
氧化应激是缺血再灌注后星形胶质细胞损伤和死亡的重要分子机制之一,可能成为有效的干预靶点.下述治疗策略可减轻缺血再灌注条件下产生的多种反应性氮氧化合物损伤.这种方法可通过使用化学试剂或适当条件促进转录活化因子NRF2从细胞浆转入细胞核,并与抗氧化基因反应位点结合,来诱导缺血再灌注后损伤细胞的Ⅱ期基因反应.本研究将验证如下假说:NRF2基因表达通路激活剂sulforaphane能对体外无氧无糖环境处理的培养皮质星形胶质细胞起神经保护作用.将皮质星形胶质细胞暴露于无氧无糖环境(OGD)4 h,于干预前48 h或干预后给予5 μM sulforaphane(NRF2基因表达通路激活剂)培养48 h ,两种培育条件下细胞死亡均明显减少.免疫细胞化学结果表明干预前给予sulforaphane处理,细胞中DNA/RNA氧化标志物8-hydroxy-2-deoxyguanosine的表达在恢复给氧4 h后降低,两种培育条件下胞浆内及胞核内NRF2的免疫反应均增强且NQO1(NRF2转录活化基因产物)的表达和酶活性均增强.本研究提示sulforaphane可通过激活NRF2抗氧化基因表达通路,减少体外缺氧再灌注后星形胶质细胞的死亡.
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黄嘌呤氧化酶与缺氧再灌注损伤
对缺氧再灌注后出现的组织损伤加重，各家提出了不同的理论，但在相当长的时间里并不能提出令人信服的依据。近年来，随着实验技术的提高和临床研究不断获得新的进展，使我们对此问题的认识大大地前进了一步，以下仅就黄嘌呤氧化酶系及其抑制剂在缺氧再灌注损伤时的作用价值的研究进展作一简述。 1 对黄嘌呤氧化还原酶系统的认识黄嘌呤氧化还原酶(Xanthine oxidoreduclase)在细胞内以两种形式存在，即黄嘌呤脱氢酶(Xanthine dehydrogenase，XDH)和黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase，XO)，此酶以钼一硫黄素铁羟化酶的形式广泛存在于动物界，它催化两个连续的氧化还原反应(见图)，即从次黄嘌呤到黄嘌呤，从黄嘌呤到尿酸；然而在ATP被消耗时，次黄嘌呤可作为底物出现。此酶位于胞浆内，分子量300kd，有两个结合位点，包括两个独特的分子量为150kd的亚单位结构[1,2]。
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脑微血管内皮细胞缺氧再灌注损伤后PKC亚型的表达
目的探讨蛋白激酶C(PKC)亚型在脑微血管内皮细胞缺氧再灌注损伤中的作用.方法缺氧再灌注损伤后采用westem blot方法,检测PKC亚型表达.结果PKCβⅠ型表达明显增加,PKCα、βⅡ、ε、δ亚型无明显变化.结论PKCβⅠ型在脑微血管内皮细胞缺氧再灌注损伤过程中起着重要作用.
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当归芍药散含药血清对大鼠心肌细胞损伤的保护作用研究
目的:研究当归芍药散含药血清对大鼠心肌细胞损伤的保护作用.方法:于缺氧环境下培养SD乳鼠原代心肌细胞4h后在含氧环境下继续培养以复制心肌细胞缺氧再灌注模型.试验分为空白对照组、利多卡因含药血清组与当归芍药散高、低剂量含药血清组.分别于缺氧前,缺氧60、120、180 min时间点与缺氧120 min后再给氧30、60 min时间点采集标本检测培养液中的肌酸磷酸激酶(CPK)、碱性磷酸酶(ALP)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、血管紧张素转换酶(ACE)的活性.结果:与空白对照组比较,当归芍药散高、低剂量含药血清组在缺氧前,缺氧60、120、180 min时间点与缺氧120 min后再给氧30、60 min时间点心肌细胞内CPK、ALP活性显著减弱(P＜0.01)；当归芍药散高、低剂量含药血清组在缺氧120、180 min时间点与缺氧120min后再给氧30、60 min时间点ACE活性显著减弱(P＜0.01)；当归芍药散高剂量含药血清组在缺氧120、180 min时间点与缺氧120 min后再给氧30、60 min时间点AST、LDH活性显著减弱(P＜0.01).结论:当归芍药散含药血清可减轻心肌细胞缺氧再灌注损伤,对心肌细胞具有一定保护作用.
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卡托普利对培养鼠心室肌细胞缺氧再灌注损伤时心肌酶的影响
目的观察卡托普利对培养的原代心肌细胞缺氧再灌注损伤时心肌酶活性的影响. 方法用培养的SD乳鼠原代心室肌细胞建立缺氧再灌注模型,观察培养液中的肌酸磷酸激酶(CPK),碱性磷酸酶(ALP),谷草转氨酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH),血管紧张素转换酶(ACE)活性的变化以及卡托普利对上述指标的影响. 结果心肌细胞内CPK,ALP,AST及LDH,ACE的释放量随缺氧及再灌注时间的延长逐渐升高,缺氧早期CPK,ALP反映细胞损伤的程度较AST,ACE敏感,0.5 mg.L-1卡托普利可减少心肌细胞缺氧再灌注损伤时心肌酶的漏出. 结论卡托普利可减轻心肌细胞缺氧再灌注损伤,对心肌细胞具有直接保护作用.
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应用荧光偏振技术研究缺氧再灌注培养血管内皮细胞膜流动性
目的定量研究缺氧再灌注状态下血管内皮细胞膜流动性.方法采用荧光偏振法对缺氧再灌注动物模型的培养血管内皮细胞的荧光特征光谱进行对比实验分析,并定量观测了缺氧再灌注对培养血管内皮细胞膜流动性的影响以及FDP和CAP的保护功能.结果缺氧和再灌注不同时段内,DPH标记的血管内皮细胞的荧光光谱没有实质性改变,荧光强度的曲线斜率变化与对照组趋于一致,缺氧再灌注损伤可导致血管内皮细胞膜的荧光各向异性值降低,FDP和CAP对缺氧状态的培养血管内皮细胞有显著的保护作用.结论荧光偏振技术是一种高灵敏和稳定的定量研究血管内皮细胞膜流动性的方法.
