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电针不同经穴对心肌缺血模型大鼠大脑皮质区神经生长因子、酪氨酸激酶A表达的影响
目的:观察电针心经原穴“神门”、小肠经络穴“支正”和背俞穴“心俞”对心肌缺血大鼠大脑皮质内神经生长因子(NGF)及其受体酪氨酸激酶A(TrkA)表达的影响,比较针刺不同经穴抗心肌缺血效应的差异,探讨针刺经穴效应的相对特异性.方法:雄性SD大鼠随机选取10只为假手术对照组,其余70只采用左冠状动脉前降支结扎法复制急性心肌缺血模型,模型复制成功的大鼠采用随机数字表分为模型组、神门组、支正组和心俞组,每组15只.各电针组电针相应穴位,每天治疗1次,每次15 min,共治疗7d.采用免疫组化法和实时荧光定量PCR技术检测各组大鼠大脑皮质中NGF及其受体TrkA的表达.结果:与假手术组比较,模型组大鼠大脑皮质NGF及其受体TrkA阳性细胞数以及NGF、TrkA mRNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05).与模型组比较,各针刺治疗组的大脑皮质NGF及其受体TrkA阳性表达细胞数目和NGF、TrkA mRNA表达均有显著增加(P＜0.01,P＜0.05).与支正组及神门组比较,心俞组大脑皮质NGF、TrkA阳性细胞数和NGF、TrkA mRNA表达增多(P＜0.01,P＜0.05).结论:电针“神门”“支正”“心俞”均能够提高心肌缺血大鼠大脑皮质中NGF及其受体TrkA的表达水平,且“心俞”穴效应佳,具有相对特异性.
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康欣胶囊及其拆方对肾虚血瘀型大鼠神经细胞的保护作用
目的 探讨康欣胶囊全方及其补肾、健脾、养血活血3组拆方对肾虚血瘀型血管性痴呆(VD)大鼠神经细胞的影响. 方法 采用双侧椎动脉永久性封闭和摘除单侧性器官建立肾虚血瘀型VD模型大鼠,分别给予康欣胶囊全方(全方组)、康欣胶囊补肾方(补肾组)、康欣胶囊健脾方(健脾组)、康欣胶囊养血活血方(养血活血组)、阳性对照药喜得镇(西药组)和蒸馏水(模型组). 结果 全方组大鼠空间探索能力显著优于其他组(P＜0.01);全方组海马神经细胞器及细胞核固缩情况轻于其他各组;全方组能增加海马乙酰胆碱含量(P＜0.01),提高VD大鼠海马酪氨酸激酶A、核转录因子、原癌基因C-fos、神经生长因子受体的表达(P＜0.01),降低胶质纤维酸性蛋白的表达(P＜0.05). 结论 康欣胶囊全方对肾虚血瘀型血管性痴呆大鼠神经细胞具有保护作用.
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大鼠全脑缺血再灌注后耳蜗组织内TrkA和NGF表达的改变
目的 探讨大鼠全脑缺血再灌注后酪氨酸激酶A(TrkA)和神经生长因子(NGF)在耳蜗Corti器的表达.方法 建立大鼠全脑缺血再灌注模型,采用免疫组织化学染色方法检测TrkA和NGF在耳蜗中的表达;用TUNEL法检测耳蜗毛细胞发生凋亡的时相和分布.结果 再灌注后6h NGF表达增强,24h达高峰后逐渐回复,再灌注24 h～7 d TrkA表达减弱甚至不表达,3～7d期间耳蜗毛细胞出现凋亡,7～14d TrkA 表达逐渐恢复.结论 TrkA 的表达 对于介导NGF促感觉神经细胞存活及损伤修复的生物效应有重要意义.
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不同年龄大鼠斜角带核水平支神经元内TrkA和ChAT的表达--免疫组织化学研究
目的了解大鼠基底前脑斜角带核水平支神经元内酪氨酸激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)、胆碱乙酰化转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)样阳性神经元的生后发育规律及两者的相互关系.方法用免疫组织化学方法结合图像分析仪检测大鼠基底前脑斜角带核水平支TrkA、ChAT样阳性神经元的数量、面积和灰度值.结果TrkA、ChAT分布于基底前脑神经元.生后1d可见TrkA表达,但生后5d才出现ChAT表达.生后20dTrkA、ChAT表达至高峰;生后30d下调,成年时维持相对较高水平.老年鼠TrkA、ChAT样阳性神经元出现萎缩、数量也分别减少39.7%、33.3%;胞体平均面积分别减少15.7%、12.8%;平均灰度值分别减少29.9%、9.9%.同时,不同年龄大鼠TrkA、ChAT样阳性神经元截面积和灰度呈弱正相关,数量呈正相关.结论大鼠基底前脑斜角带核水平支神经元TrkA表达早于ChAT表达.从生后5d起,TrkA、ChAT表达有相似的时间模式.TrkA可能参与斜角带核胆碱能神经元的发育、分化、成熟和老化.老年鼠TrkA、ChAT表达下调可能是老年动物和阿尔茨海默病人基底前脑胆碱能神经元变性的易感性增加的原因之一.
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神经生长因子对2型糖尿病小鼠骨髓基质细胞体外成骨能力的影响
目的 探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对2型糖尿病小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)增殖、成骨向分化及矿化能力的影响,为NGF的临床应用提供依据.方法 选择8周龄雄性2型糖尿病db/db小鼠3只和正常C57BL/6J小鼠2只,全骨髓贴壁法分离培养股骨BMSC.用糖尿病小鼠BMSC(糖尿病组)和正常小鼠BMSC(正常组)进行BMSC成骨能力比较实验(实验一);用糖尿病小鼠BMSC进行NGF对糖尿病小鼠BMSC成骨能力影响实验(实验二),分为糖尿病对照组、NGF组和K252a+NGF组[K252a为NGF高亲和力受体酪氨酸激酶A(tyrosinekinase,TrkA)的特异性阻断剂];K252a+NGF组加K252a 30 min后加NGF;NGF组仅加NGF,糖尿病对照组两者均不添加.甲基噻唑基四唑法检测实验一基础培养1、3、5、7d和实验二基础培养1、2、3d的细胞增殖情况;成骨诱导3、5、7d后检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)水平;成骨诱导14d后茜素红染色观察矿化结节形成情况.每项实验每组均设置5个复孔,所有实验重复3次.结果 基础培养3、5、7d,糖尿病组BMSC增殖能力均显著高于相同时间点正常组(P＜0.05);成骨诱导3、5、7d,糖尿病组ALP水平均显著低于相同时间点正常组(JP＜0.05);成骨诱导14 d,糖尿病组矿化结节数量[(23.1±6.4)个/视野]显著少于正常组[(36.9±7.9)个/视野](P＜0.05).基础培养1、2、3d,糖尿病对照组、NGF组和K252a+NGF组BMSC增殖差异无统计学意义(P＞0.05);成骨诱导3、5d,NGF组ALP水平均显著高于糖尿病对照组(P＜0.05);成骨诱导3、5、7d,K252a+NGF组ALP水平均显著低于NGF组(P＜0.05)和糖尿病对照组(P＜0.05);成骨诱导14d,NGF组矿化结节数量[(45.2±6.8)个/视野]显著多于糖尿病对照组[(23.1±6.4)个/视野](P＜0.05),K252a+NGF组矿化结节数量[(18.0±4.5)个/视野]显著少于NGF组(P＜0.05)和糖尿病对照组(P＜0.05).结论 2型糖尿病小鼠BMSC体外成骨向分化及矿化能力降低.NGF通过与TrkA受体结合促进糖尿病小鼠BMSC体外成骨向分化,增强其矿化能力.
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莱菔硫烷对Aβ处理的SH-SY5Y细胞活力、组蛋白乙酰化水平及TrkA表达的影响
目的探讨莱菔硫烷（sulforaphane，SFN）对β淀粉样肽（β-amyloid peptide，Aβ）处理的神经细胞的保护作用及其机制，为阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）的防治提供理论依据。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y），采用MTT法检测SFN（终浓度为2μmol/L）对Aβ染毒（终浓度分别为10、20、40、80μmol/L）的SH-SY5Y细胞活力的影响，并以Real time PCR、Western blot法分析SFN预处理后的Aβ染毒（终浓度为20μmol/L）细胞TrkA mRNA及其蛋白表达以及组蛋白乙酰化水平（Ace-H3K9、Ace-H4K12）的时相分布变化。结果细胞活力随着Aβ染毒剂量的增加而逐渐降低，其中40、80μmol/L Aβ染毒的细胞活力与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.01或P<0.001）；SFN预处理后的各组细胞活力未见统计学差异（P＞0.05）。与对照组比较，Aβ处理后12、24 h时，细胞TrkA mRNA水平降低，24 h时TrkA蛋白表达水平降低，6、12、24 h时Ace-H3K9、Ace-H4K12水平降低，差异均有统计学意义（P <0.01）；与Aβ染毒细胞比较，SFN预处理后的Aβ染毒细胞12、24 h时TrkA mRNA水平升高，24 h时TrkA蛋白表达水平升高，12、24 h时Ace-H3K9以及6、12、24 h时Ace-H4K12水平升高，差异均有统计学意义（P <0.01）。结论 Aβ可使细胞活力下降、TrkA mRNA及其蛋白表达水平降低以及Ace-H3K9、Ace-H4K12水平的升高，SFN对Aβ诱导的上述改变均具有抑制作用。
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雌激素对去卵巢大鼠不同脑区酪氨酸激酶A表达的影响
目的观察内源性和外源性雌激素变化对大鼠脑内不同部位酪氨酸激酶A(TrkA)表达的影响.方法 21只雌性Wistar大鼠随机分为假手术对照组、卵巢切除组(OVX组)、雌激素治疗组(E2组).免疫细胞化学法计数海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位TrkA蛋白表达阳性细胞数.放免法测量大鼠血清雌激素含量.结果与对照组比较,OVX组大鼠海马CA1区、大脑皮层区、杏仁复合体区TrkA阳性细胞数显著减少(均P＜0.01),Meynert核区无显著差异(P＞0.05),血雌激素含量明显降低(P＜0.01);E2组脑部各区TrkA表达与OVX组比较显著增多(均P＜0.01),血清雌激素含量显著增高(P＜0.01).结论内源性和外源性雌激素含量变化可影响大鼠脑内多部位TrkA的表达.
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腺病毒KLF7对大鼠脊髓损伤TrkA及TrkB表达的影响
目的 探讨腺病毒KLF7对大鼠脊髓半横断损伤后酪氨酸激酶A(Trk A)和酪氨酸激酶B(TrkB)表达、损伤灶形态及运动功能恢复的影响.方法 制作大鼠脊髓半横断损伤模型,分别将腺病毒2(AAV2)、腺病毒2-KLF7(AAV2-KLF7)用微量注射器注射到脊髓损伤灶,实验大鼠随机分为正常组、AAV2对照组及AAV2-KLF7组.术后4周,通过HE染色观察脊髓损伤灶面积,Western Blot检测KLF7、Trk A和TrkB蛋白表达,BBB行为学评价运动功能恢复.结果 与对照组比较,AAV2-KLF7组脊髓半离断损伤灶面积比显著缩小(P＜0.05),KLF7、Trk A、TrkB蛋白相对表达显著增高(P＜0.05).AAV2-KLF7组BBB评分显著高于对照组(P＜0.05).结论 KLF7通过上调神经营养因子受体Trk A和Trk B表达,改善大鼠脊髓损伤灶形态,促进运动功能的恢复.
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哮喘时豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位Trk A的表达以及神经生长因子对其影响
目的:探讨神经生长因子(NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制.方法:应用免疫组织化学方法检测豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位NGF高亲和力受体酪氨酸激酶A(TrkA),用Western blot蛋白印迹方法检测豚鼠肺、脊神经节和脊髓背角NGF和TrkA的表达.结果:(1)与对照组相比,哮喘豚鼠气道上皮、肺内炎性细胞、血管平滑肌内的神经末梢、C7～T5段脊神经节及相应节段脊髓背角内TrkA阳性反应产物的平均灰度值均明显降低;哮喘+NGF抗体组则明显高于哮喘组.(2)哮喘组豚鼠肺、C7～T5段脊神经节及相应节段脊髓样品中TrkA或NGF目标带的IDV与内参照IDV的比值均明显升高,而哮喘+NGF抗体组则明显低于哮喘组.结论:NGF可上调TrkA的表达,TrkA介导的细胞内信号传导系统可能是NGF参与哮喘发病的主要途径之一.
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脊髓型减压病大鼠脊髓组织内NGF和Trk A的蛋白表达
目的观察大鼠脊髓减压病后脊髓组织内神经生长因子(NGF)及其受体酪氨酸激酶A(Trk A)蛋白表达随疾病进程的变化过程,探讨减压病脊髓损伤后自身的神经保护机制.方法采用1.0 MPa暴露5.5 min后极快速减压的方法制备SD大鼠脊髓减压病模型,在出舱0,6,24,48,72 h应用免疫组织化学染色和半定量图象分析方法检测脊髓组织NGF及其受体Trk A的蛋白表达.结果极快速减压后6 h开始有少量NGF和Trk A蛋白表达,在24 h表达明显增强并达到高峰,此后Trk A表达逐渐减弱,NGF表达直到72 h仍比基础值明显增加.结论减压病脊髓损伤诱导了脊髓神经元和胶质细胞的NGF及其受体的合成,提示脊髓型减压病在损伤神经组织的同时也激活了自身的神经保护机制,通过Trk A受体途径NGF可能在保护受损神经细胞中起作用.
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KLF7联合脂肪源性干细胞对脊髓损伤大鼠运动功能的影响及其机制
目的 观察KLF样转录因子7(KLF7)联合脂肪源性干细胞(ADSC)对脊髓损伤大鼠运动功能的影响,并探讨其可能的机制.方法 将30只SD大鼠随机分为KLF7联合ADSC组、ADSC组及对照组,每组10只,均采用离断右半脊髓的方法制备脊髓损伤模型.KLF7联合ADSC组于脊髓损伤组织注入100 μL ADSC(ADSC均采用PKH26进行标记)及2μL AAV2-KLF7腺病毒,ADSC组仅注入100 μL ADSC,对照组仅注入100 μL PBS.术后1天及1、2、3、4周行运动功能评分(BBB评分);术后4周,应用诱发电位仪和磁刺激器经颅磁刺激运动诱发神经电生理反应,记录神经传导速度、潜伏期及波幅.术后4周处死,采用Western boltting法检测脊髓损伤组织KLF7、神经生长因子(NGF)及其受体酪氨酸激酶A(TrkA)蛋白相对表达量,计算脊髓损伤面积百分比及ADSC数量(以PKH26的光密度值表示).结果 与术后1天比较,各组术后1、2、3、4周BBB评分均升高(P均＜0.05).术后4周,KLF7联合ADSC组与ADSC组BBB评分、神经传导速度、波幅、ADSC数量及脊髓损伤组织NGF、TrkA蛋白相对表达量均高于对照组,潜伏期及脊髓损伤面积百分比均低于对照组,且KLF7联合ADSC组上述变化更明显(P均＜0.05).KLF7联合ADSC组脊髓损伤组织KLF7蛋白相对表达量均高于ADSC组及对照组(P均＜0.05).结论 KL,F7联合ADSC可减轻脊髓损伤大鼠的神经损伤,改善其运动功能;其机制可能与KLF7促进ADSC存活及提高脊髓损伤组织NGF、TrkA表达有关.
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穹窿-海马伞切断与卵巢切除对大鼠不同脑区酪氨酸激酶A表达的影响
目的 观察穹窿海马伞切断与卵巢切除对大鼠脑内酪氨酸激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)表达的影响.方法 实验于2003年03月至2003年12月在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成.成年健康雌性Wistar大鼠28只,按2×2方差分析的方法设计,随机分为穹窿-海马伞切断(FF)组、卵巢切除(OVX)组、穹窿-海马伞切断加卵巢切除(OF)组、对照组,每组7只.穹窿海马伞切断参照Klein等的方法,双侧卵巢切除参照Singh等的方法进行.对照组除不切断卵巢和穹窿-海马伞外,其余步骤同模型组.免疫细胞化学染色法观察皮质区、海马CAl区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位TrkA阳性细胞表达变化.数据分析按2×2方差分析的方法进行统计学比较.结果 双侧卵巢切除和双侧穹窿海马伞切断存在显著的主效应和交互效应(P＜0.01).OVX组、FF组和OF组大鼠大脑皮质区、海马CAl区、杏仁复合体区TrkA表达的阳性细胞数明显减少,与对照组比较差异均有显著性[如皮质区分别为:(16.63±6.12),(18.91±6.27),(23.34±6.92)vs(54.77±11.84),P＜0.01].其中OF组大鼠海马CAl区 FrkA表达的阳性细胞数较FF组和OVX组明显减少,差异有显著性[(7.97±2.00)vs(15.17±5.23),(24.09±3.79),F=1l,577,98.982,P＜0.01].结论 穹窿-海马伞切断和/或卵巢切除存在显著的主效应和交互效应,可致大鼠脑内多部位TrkA表达减少,可能与阿尔茨海默病的病理过程有关.
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三七总皂甙对局灶脑缺血再灌注海马中NGF及TrkA的影响
目的:探讨三七总皂甙对局灶性脑缺血再灌注损伤的海马神经生长因子及酪氨酸激酶A含量变化的影响.方法:120只SD大鼠体重200～220g,随机分为3组:假手术组(n=40),局灶脑缺血再灌注组(n=40)和三七总皂甙治疗组(n=40).线栓法制备大脑中动脉梗阻(MCAO)模型,药物组在脑缺血再灌注即刻和12h腹腔注射三七总皂甙,模型组和假手术组均注射等量生理盐水.分别在缺血再灌注2h、4h、6h、12h和24h处死动物,运用RT-PCR技术检测缺血侧海马组织内NGF和TrkA的mRNA的表达变化.结果:再灌注损伤后,损伤侧海马组织内NGF和TrkA的mRNA表达均增高.在三七总皂甙治疗组中NGF和TrkA的mRNA于再灌注2h上升,4h达高峰.结论:脑缺血后损伤侧海马神经元内NGF和TrkA的mRNA含量增多,可能有利于受损神经元的修复.
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β-羟基丁酸通过抑制HDAC1/3上调β样淀粉肽处理的SH-SY5Y细胞TrkA的表达
目的 探讨β-羟基丁酸(β-hydroxybutyrate,BHB)对β样淀粉肽(β-amyloidpeptide,Aβ)处理的神经细胞保护作用及其可能的机制,为防治阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)提供依据. 方法 将体外培养的SH-SY5Y细胞进行分组,单纯BHB组、BHB干预组细胞以终浓度为5 mM BHB预处理3h,再向Aβ处理组、BHB干预组细胞加入终浓度为20μM的Aβ,同时设立对照组,24h后收集细胞;采用qRT-PCR、Western Blot法检测各组细胞TrkA、HDAC1和HDAC3mRNA及其蛋白相对表达水平.以siRNA沉默HDAC 1/3,分析细胞TrkA mRNA及其蛋白相对表达水平. 结果 与对照组相比,单纯BHB组细胞的TrkA mRNA及其蛋白相对表达水平明显升高(P＜0.05)、HDAC1和HDAC3 mRNA及其蛋白相对表达水平显著降低(P＜0.05),Aβ组细胞TrkA mRNA及其蛋白相对表达水平显著降低(P＜0.01)、HDAC1和HDAC3 mRNA及其蛋白相对表达水平显著升高(P＜0.01);与Aβ组相比,BHB干预组TrkA mRNA及其蛋白相对表达水平显著升高(P＜0.01)、HDAC1和HDAC3 mRNA及其蛋白相对表达水平显著降低(P＜0.01).沉默HDAC1/3后细胞Tr-kA mRNA及其蛋白相对表达水平显著升高(P＜0.05). 结论 BHB可通过抑制HDAC1/3,上调Aβ处理的SH-SY5Y细胞TrkA的表达.
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神经生长因子受体在腺样囊性癌神经侵袭中的作用
目的 研究神经生长因子受体TrkA及p75在涎腺腺样囊性癌嗜神经性中的作用.方法 采用免疫组织化学方法(S-P法)检测40例涎腺腺样囊性癌组织中TrkA及p75的表达,并比较嗜神经组与非嗜神经组间TrkA/p75染色强度相对值的差异并进行统计分析.结果 在40例ACC组织中,神经侵袭组有19例,非神经侵袭组21例.TrkA表达阳性率90%,嗜神经组TrkA表达较非嗜神经组增强,差异有统计学意义(P<0.05).p75阳性表达率90%.嗜神经组p75表达较非嗜神经组亦增强,差异有统计学意义(P<0.05);嗜神经组TrkA/pT5染色强度相对值较非嗜神经组显著增高,差异有显著统计学意义(P<0.01).结论 TrkA与p75的表达升高与ACC的嗜神经性均有关;TrkA在腺样囊性癌神经侵袭过程中可能发挥更为重要的作用.
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酪氨酸激酶A在涎腺腺样囊性癌中的表达及与嗜神经侵袭的关系
检测酪氨酸激酶A(TrkA)在涎腺腺样囊性癌(ACC)中的表达情况,研究TrkA与ACC嗜神经侵袭的关系.方法:研究对象为33例ACC,7例正常腮腺及3例涎腺腺泡细胞癌标本,采用免疫组化法对组织切片中的TrkA进行检测.结果:以病理学表现为标准,33例ACC中的嗜神经侵袭率为45.5%(15/33),TrkA阳性率为97.0%(32/33),且发现沿神经周分布的肿瘤细胞的染色强度明显高于远离神经者.存在嗜神经现象组的TrkA表达水平明显高于未见嗜神经现象组(P＜0.01).TrkA的表达在腺泡细胞癌胞浆内均为阴性,而在正常腮腺的导管细胞为阳性.结论:TrkA可能作为ACC嗜神经侵袭的生物学标志.TrkA表达的增高可能是ACC嗜神经侵袭的机理之一.
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雌激素受体α和TrkA在基底前脑的分布与共存
基底前脑为神经营养因子和雌激素作用的靶区之一.为了在受体水平探讨这些配体是否作用于正在发育和成年大鼠的基底前脑同一神经元,本文采用免疫组织化学双重反应方法观察了雌性大鼠雌激素受体a和酪氨酸激酶A在基底前脑的分布与共存.用小鼠抗雌激素受体和兔抗酪氨酸激酶A分别孵育切片,ABC法显示前者的反应产物主要位于胞核内,蓝黑色,呈点状;后者位于胞质和突起内,呈棕色.结果表明:两者都分布于基底前脑神经元.在双重免疫组织化学反应条件下可见三种细胞:雌激素受体阳性细胞,酪氨酸激酶A阳性细胞和双重反应阳性细胞,双重反应阳性细胞所占的比例因部位而不同.雌激素受体和酪氨酸激酶A共存提示它们的配体可通过共存于基底前脑同一神经细胞上的相应受体而作用于同一神经元,协同地调节特异的基因或者基因网络的表达,从而影响神经元的存活、分化、成熟、再生和可塑性.
关键词： 雌激素受体 酪氨酸激酶A 免疫组织化学双重反应 基底前脑 大鼠 -
卵巢切除大鼠不同脑区酪氨酸激酶A表达的变化
目的观察卵巢切除大鼠脑内不同部位酪氨酸激酶A(TrkA)表达的变化.方法按Singh方法建立大鼠卵巢切除模型(OVX组),免疫细胞化学染色,观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位TrkA阳性细胞表达的变化.结果对照组大鼠各观察区有大量TrkA表达,与对照组比较,OVX组大脑海马CA1区、大脑皮质区、杏仁复合体区TrkA阳性细胞数明显减少(t=5.90～8.57,P<0.01),Meynert核区无显著性差异(t=1.65,P>0.05).结论大鼠体内雌激素下降可致脑内多部位TrkA表达减少,雌激素与生长因子受体系统可能存在相互影响的关系.
