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黄芪配伍当归对气虚血瘀模型大鼠血管内皮和肝窦内皮细胞CD54表达的影响
目的:探讨黄芪配伍当归(QG)对气虚血瘀模型大鼠心肺血管内皮和肝窦内皮细胞CD54表达的影响.方法:用饥饿+游泳制造"气虚血瘀"大鼠模型,灌胃给药15d后测定心肺血管内皮和肝窦内皮细胞CD54的表达.结果:气虚血瘀模型大鼠心肺血管内皮和肝窦内皮细胞CD54的表达明显增高,QG能显著降低其过度表达.结论:QG益气活血作用与降低心肺血管内皮和肝窦内皮细胞CD54的过度表达有关.
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胞壁酰二肽激活小鼠原代肝窦内皮细胞中NOD2信号
目的 调查小鼠原代肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSECs)中NOD2信号通路激活后产生的免疫应答效应.方法 使用胶原酶灌注方法结合percoll密度梯度离心加抗小鼠LSEC免疫磁珠分离纯化小鼠LSEC.定量PCR检测小鼠原代LSEC NOD1和NOD2 mRNA表达水平,同时给胞壁酰二肽刺激小鼠原代LSEC;定量PCR检测NOD2、RIP2、TNF-α和IL-6mRNA表达水平;定量ELISA检测细胞上清IL-6和TNF-a蛋白产量.结果 小鼠原代LSEC中NOD2基础表达水平相对于NOD1基础表达水平较低.胞壁酰二肽刺激LSEC后诱导NOD2及其下游分子RIP2表达水平上调,接着诱导产生IL-6效应分子,而没有诱导产生TNF-α等其它细胞因子和趋化因子.结论 胞壁酰二肽能够激活小鼠LSEC中NOD2介导的信号通路,并诱导产生IL-6效应分子,可能在维持肝脏内环境稳定中发挥着重要作用.
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肝窦内皮细胞与造血干细胞移植后肝静脉闭塞病的研究进展
肝静脉闭塞病(HVOD)是造血干细胞移植(HSCT)后常见的严重并发症之一,部分HVOD患者预后极差,严重影响患者移植预后.肝窦内皮细胞(SEC)损伤是HVOD发生的始动因素,修复损伤的SEC已成为防治HVOD的研究热点之一.笔者将对SEC的结构及生物学功能,以及其损伤在HVOD中的作用机理进行综述,并展望内皮祖细胞修复损伤的SEC在防治HVOD中的潜在价值.
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切应力对大鼠肝窦内皮细胞分泌功能的影响
目的了解不同切应力下肝窦内皮细胞分泌肝细胞生长因子(HGF)、白细胞介素-6(IL-6)、一氧化氮(NO)及一氧化氮合成酶(NOS)的分泌量,探讨切应力对原代培养的大鼠肝窦内皮细胞分泌功能的影响.方法构建血流动力学模型,实验分为对照组(切应力为0 dyn/cm2)和实验组2组,实验组又按切应力不同分为12、24和 48 dyn/cm2 3个亚组.每组分别在4、8、12及24 h抽取1 ml培养基,利用试剂盒检测培养基中HGF、IL-6、NO和NOS浓度.结果在不同切应力下,肝窦内皮细胞分泌HGF、IL-6、NO和NOS各不相同,在同一时相随着切应力的升高,HGF、IL-6、NO和NOS的分泌量也升高,实验组明显高于对照组(P＜0.01),且48 dyn/cm2组明显高于另两个亚组(P＜0.01); 实验组作用8、12、24 h时,HGF、IL-6、No及NOS分泌量明显高于作用4 h时.结论体外实验证实,切应力升高时肝窦内皮细胞分泌HGF、IL-6、NO和NOS的量明显增加,提示部分肝切除术后门静脉压力急剧升高能促使肝窦内皮细胞活化,分泌大量促肝细胞再生的细胞因子和介质.
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肝移植大鼠肝窦内皮细胞的损伤及PGE1对其的保护作用
目的探讨肝移植大鼠术后早期肝窦内皮细胞功能的改变及前列腺素E1(PGE1)对其的保护作用.方法用"两袖套法"建立大鼠原位肝移植模型,其中A组为正常大鼠空白对照组,B组为正常大鼠供体肝移植手术对照组,C组为休克性大鼠供体肝移植实验对照组,D组为PGE1保护的休克性大鼠供体肝移植实验组,每组各8只.肝移植各组(无特别说明均指受体)于术后6 h取血,检测其血清中的肝脏酶学(ALT、LDH)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO),以及血浆内皮素(ET)水平,并取肝组织作常规病理学检查,比较各组有无差异.结果各移植组供肝冷保存时间及无肝期均接近,分别为(2±0.5) h和(15±3) min; B、D组术后6 h全部存活,存活率100%; C组术后6 h存活5只,存活率62.5%.与C组比较,D组ALT、LDH、MDA、ET明显降低(P＜0.05),NO明显升高(P＜0.05).C组肝脏病理学检查发现有明显的组织学损害,而B、D组肝脏组织结构基本完好.结论肝移植可造成肝窦内皮细胞明显损害,血清NO和血浆ET水平可较好地反映肝窦内皮细胞的功能状态.PGE1通过稳定血流动力学和稳定肝窦内皮细胞质膜,可减轻移植肝肝窦内皮细胞的损害.
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YIGSR五肽及RGD三肽对肝窦内皮细胞窗孔的调节作用
目的探讨酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸(Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, YIGSR)五肽及精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸(Arg-Gly-Asp, RGD)三肽对肝窦内皮细胞(SEC)窗孔的影响.方法用胶原酶原位灌注、Percoll不连续密度梯度离心法分离大鼠的SEC,并加入包被有Ⅰ型胶原或层粘连蛋白(laminin, LN)基质的盖玻片上培养.采用扫描电镜技术及放免方法,分别观察YIGSR五肽及RGD三肽对SEC窗孔数目、大小,以及SEC分泌Ⅳ型胶原能力的影响.结果生长在包被LN的盖玻片上48小时的SEC,其窗孔数目及大小均比生长在Ⅰ型胶原上的SEC明显降低(P<0.05);但同时加入YIGSR五肽(50μg/ml)及RGD三肽(50μg/ml)作用48小时后,SEC窗孔数目及大小均有明显增加(P<0.05),同样地,经YIGSR五肽及RGD三肽作用后,生长在LN上的SEC分泌Ⅳ型胶原的能力亦明显下降(P<0.05).结论 YIGSR五肽及RGD三肽对SEC的形态(如窗孔)及功能(如分泌Ⅳ型胶原)均有一定调节作用.
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肝窦内皮细胞及其影响肝纤维化的研究概况
近年来在肝纤维化的研究过程中肝窦内皮细胞越来越被重视,相关研究也日渐增多,肝窦内皮细胞是肝脏主要的非实质细胞,其特殊的窗孔结构及生理特性决定其在肝纤维化形成中具有重要作用.
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抗人LSECtin单克隆抗体的制备与初步鉴定
目的: 制备抗肝脏、淋巴结窦内皮细胞C型凝集素(LSECtin)单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定.方法: 采用原核表达的LSECtin免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA法筛选分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,采用蛋白印迹、间接免疫荧光、流式细胞术和免疫组化染色法鉴定mAb的特异性.结果: 共获得8株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株.mAb的Ig亚类均为IgG,效价达1:106～1:107.这些mAb均可识别转染3T3细胞膜上的人LSECtin,6株mAb可特异识别肝脏窦内皮细胞.结论: 成功地制备8株抗LSECtin的mAb,经免疫印迹、流式细胞术和免疫组化染色检测,这些mAb的特异性良好,为研究LSECtin的功能提供了有力的试剂.
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肝纤维化肝窦内皮细胞免疫功能改变的研究进展
正常肝脏是免疫耐受大于免疫原性的器官,肝窦内皮细胞(HSEC)在参与正常肝脏免疫耐受方面的研究是热点.在肝脏疾病中,很少有关HSEC免疫方面的研究.肝纤维化过程中,HSEC结构和功能的改变,可能造成其免疫功能的转变(免疫耐受转化为免疫应答),但HSEC免疫功能的转变,也可能影响肝纤维化的进程,研究纤维化肝脏肝窦内皮细胞(FHSEC)免疫功能,对应用免疫手段治疗肝纤维化有重要意义.
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肝窦阻塞综合征 CT 表现
肝窦阻塞综合征(hepatic sinusoidal obstructive syndrome, HSOS)以往称为肝小静脉闭塞症(hepatic veno-occlusive dis-ease,HVOD),是由于肝窦内皮细胞及中央静脉等肝内小静脉内皮细胞受损导致肝窦血流阻塞,从而引起的肝内窦性门脉高压症[1]。临床表现为疼痛性肝肿大、高胆红素血症和腹水为主要症状和体征的临床综合征。本病较为少见,临床容易误诊、误治。穿刺活检虽是诊断本病的金标准,但患者往往存在凝血功能障碍而禁忌此项检查,且由于肝穿刺的局限性,穿刺时得到的肝组织中肝小静脉阻塞的典型表现并不常见[2]。临床诊断的确立需结合影像学检查。本文回顾性分析4例服用土三七后所致急性 HSOS 病例并总结其 CT 特征。
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门静脉高压症患者肝组织CD44、血清透明质酸和肝功能性血流量的变化
目的 探讨乙肝肝硬化门静脉高压症( LCPH)患者肝窦内皮细胞功能与肝功能性血流量(FLPF)变化的关系.方法 选择50例LCPH患者和10例同期手术的非肝硬化肝囊肿患者,应用免疫组化法检测肝组织CD44的表达水平,放免法检测血清透明质酸的含量,D-山梨醇清除率法检测FLPF.结果 对照组肝组织CD44表达水平很低,阳性染色面积为(3.49±0.38)μm2,LCPH组则明显上调,达(41.38±11.88)μm2.对照组血清透明质酸含量为(48.15±14.39)μ g/L,LCPH组升高,达(116.11±20.12)μg/L.对照组FLPF为(1 261.22±65.79)mL/min,LCPH组降低至(770.33±48.53)mL/min.结论 LCPH患者肝窦内皮细胞功能的变化与FLPF的降低密切相关.
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肝纤维化的作用机制研究进展
在各种因素导致肝损伤时，肝细胞、肝窦内皮细胞、Kupffer细胞、炎性细胞等通过旁分泌途径，激活的肝星状细胞(HSC)通过自分泌途径产生多种细胞因子，促进HSC激活，合成大量细胞外基质(ECM)，在Disse间隙沉积，致肝窦毛细血管化，促进肝纤维化(HF)发生发展。研究肝纤维化作用机制对于指导临床有效治疗肝纤维化具有重要的理论意义和实践价值。
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加味四逆散抗肝纤维化大鼠机理研究
目的 观察加味四逆散对肝纤维化大鼠的预防效果并探索其防治机理.方法 采用四氯化碳(CCL4)植物油溶液和酒精复制大鼠肝纤维化模型,观察加味四逆散对肝纤维化大鼠肝窦内皮细胞(SEC)窗孔大小及层黏蛋白(LN)表达的影响.结果 加味四逆散组大鼠SEC壁LN的表达明显减弱,SEC失窗孔减轻,窗孔变大,与模型组比较差异有高度统计意义(P<0.01).结论 加味四逆散抗肝纤维化的机制之一是通过阻止SEC膜上筛状窗孔变小,降低LN表达,进而抑制肝窦毛细血管化来实现的.
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肝窦内皮细胞及其与肝细胞肝癌关系的研究进展
肝窦内皮细胞是一组在形态结构和功能方面有别于血管内皮细胞的具有高度异质性的群体,在正常肝组织中表达CD4、CD14、CD32、NO合酶、内皮素-1等因子.在肝细胞肝癌的发生、发展过程中肝窦发生毛细血管化,在此过程中肝窦内皮细胞显著表达Ⅷ因子相关抗原、CD34等重要标记物.
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冷保存再灌注损伤对肝移植大鼠肝脏再生功能的影响及其调节机制
目的 探讨冷保存再灌注损伤对肝移植大鼠肝脏再生功能的影响及其调节机制.方法 雄性SD大鼠分为假手术组(6只)、UW 1 h肝移植组(48只)、UW 12 h肝移植组(48只).HE染色及透射电镜观察肝组织形态学变化;大鼠内皮细胞抗原和5-溴-2脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)双染法检测肝实质细胞及肝窦内皮细胞(SECs)的增殖状况;免疫组织化学法检测VEGF及其受体flt-1、flk-1的表达;RT-PCR法检测flt-1 mRNA的表达.计量资料采用单因素方差分析或t检验.结果 UW 12 h组肝实质细胞和SECs的BrdU标记指数均显著高于UW 1 h组(F=61.45,41.4,P<0.05).UW 1 h组和UW 12 h组大鼠肝实质细胞BrdU标记指数于48 h达高峰,而SECs的BrdU标记指数分别于术后72、96 h达高峰.UW 1 h组和UW12 h组大鼠肝移植术后VEGF表达较假手术组明显增强.UW 1 h组flt-1及flk-1表达较假手术组明显增强,阳性表达主要位于SECs,其表达高峰与SECs增殖高峰一致.UW 12 h组flt-1 mRNA表达较假手术组明显减弱(F=141.67,P<0.05).结论 flt-1表达下调是导致冷保存肝移植大鼠SECs再生高峰延迟,从而减缓移植肝脏功能恢复的重要原因.
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大鼠肝窦内皮细胞分离、培养及其生物学特性的初步研究
目的建立大鼠肝窦内皮细胞(SEC)的原代分离、培养方法,并研究其生物学特性. 方法胶原酶灌注结合Percoll密度梯度离心加选择性贴壁的方法分离SEC;用光镜、扫描电镜观察培养SEC的形态学变化及超微结构;用Ⅷ因子和CD14免疫细胞化学染色及RECA 1单抗间接免疫荧光法观察SEC表面分子的表达.结果分离培养的SEC得率为(2.06±0.35)×107/只大鼠,活力≥92%,纯度达90%;光镜下细胞形态典型,SEM下可观察到特征性的窗孔结构;Ⅷ因子染色阴性而CD14染色阳性,RECA 1单抗间接免疫荧光染色阳性.结论分离培养的SEC细胞得率、活力及纯度较高, 形态典型且具有一般细胞所没有的窗孔结构及表面标志,为其功能和作用机制的深入研究奠定了基础.
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大鼠肝脏原位低温灌注再复流对肝细胞和肝窦内皮细胞的影响
目的研究肝脏原位低温灌注再复流对肝细胞和肝窦内皮细胞的影响.方法运用大鼠肝脏原位低温灌注再复流模型,行在体原位低温灌注,观察低温灌注及再复流后血清透明质酸(HA)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)浓度和肝组织学变化.SD大鼠78只,分成4组,A、B组各24只,分别用复方乳酸钠注射液和自制灌注液灌注,C组24只仅行全肝血流阻断,D组作正常对照.结果缺血非灌注组再复流2h和6h血清HA浓度为(250.0±24.1)μg/L、(290.4±7.0)μg/L,分别高于复方乳酸钠注射液灌注组(142.9±30.1)μg/L、(200.0±17.5)μg/L,差异均有高度显著性意义(P＜0.01);自制灌注液灌注组浓度为(63.3±16.2)μg/L、(62.1±14.6)μg/L,与复方乳酸钠注射液灌注组相比浓度更低(P＜0.01).缺血非灌注组ALT、AST浓度分别高于复方乳酸钠注射液灌注组,差异均有高度显著性意义(P＜0.01);自制灌注液灌注组血清ALT、AST浓度显著低于复方乳酸钠注射液灌注组(P＜0.01).结论低温灌注对大鼠肝细胞和肝窦内皮细胞具有明显保护作用,自制灌注液优于复方乳酸钠注射液.
