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人α半乳糖苷酶和α1,2岩藻糖基转移酶协同抑制NIH3T3细胞与人血清的异种免疫反应
目的:研究人α半乳糖苷酶和人α1,2岩藻糖基转移酶在NIH3T3细胞上协同性地抑制Gal抗原表位的表达和相关异种反应性.方法:流式细胞术比较G抗原、H抗原和人天然抗体(IgG和IgM)的表达水平.蛋白质印迹检测G抗原糖蛋白的表达.四唑盐(MTT)比色试验检测NIH3T3细胞在人血清介导的裂解作用下的活力.结果:转染人α半乳糖苷酶和人α1,2岩藻糖基转移酶的NIH3T3细胞中G抗原的表达及其与人天然抗体(IgG和IgM)的结合能力都显著下降.其抗人血清介导的细胞裂解反应能力有效提高.结论:人α半乳糖苷酶和α1,2岩藻糖基转移酶能够相互协同抑制Gal抗原表位表达和相关异种排斥反应.
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人α-半乳糖苷酶的表达抑制NIH 3T3细胞主要异种抗原表位Galα(1,3)Gal的生成
目的:检测人α半乳糖苷酶在NIH3T3细胞系中对Gal抗原表位生成的抑制作用.方法:流式细胞术比较G抗原、H抗原和人天然抗体(IgG和IgM)的表达水平.Western blot检测G抗原糖蛋白的表达.四唑盐(M T T)比色试验检测NIH3T3细胞在人血清介导的裂解作用下的活力.结果:克隆了人α-半乳糖苷酶并在NIH3T3细胞上建立了永久细胞系.Western blot结果表明,在表达人α-半乳糖苷酶的NIH3T3细胞中,人的天然抗体与细胞表面糖蛋白的结合能力显著降低,甚至完全消失.同时凝集素Gs-IB4结合分析也进一步证明人α半乳糖苷酶的稳定表达能有效地抑制NIH3T3细胞上Gal抗原表位的生成.流式细胞检测结果则表明,由Gal抗原表位与人IgG,IgM和3C3c介导的异种反应性分别降低了73.4%,22.3%和47.9%,随后发生的细胞裂解反应也被显著抑制.结论:人α-半乳糖苷酶能够有效抑制鼠成纤维细胞NIH 3T3细胞表面Gal抗原表位的生成以及Gal抗原表位与人天然抗体共同介导的免疫排斥.
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反义猪α(1，3)半乳糖转移酶转基因小鼠的人鼠异种反应性降低
研究体内α(1，3)半乳糖转移酶α(1，3)GT反义抑制降低Galα(1，3)Gal(Gal表位)异种抗原的作用。方法：原核显微注射法产生转基因小鼠，PCR和Southern-blot鉴定转基因的整合，RT-PCR检测小鼠α(1，3)GT的表达，组织学染色检查脾脏形态，免疫荧光检测Gal表位，流式细胞仪分析人血清中异种天然抗体(IgM和IgG)和补体(C3c)对鼠源细胞的结合。结果：猪反义α(1，3)半乳糖转移酶转基因小鼠发育正常，但部分杂合体小鼠脾脏有细胞坏死特征。转基因小鼠细胞表面Gal表位数量明显减少。与野生型对照相比，转基因小鼠多种组织的细胞对人血清异种天然抗体的结合降低30％-60％，对补体的结合降低40％-50％。结论：通过反义基因抑制α(1，3)半乳糖转移酶的表达能有效降低人异种反应性。
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供体血管内皮细胞对小鼠-大鼠移植心脏存活时间的影响
目的:探讨供体血管内皮细胞对小鼠-大鼠移植心脏存活时间的影响.方法:分离小鼠血管内皮细胞并于移植前14天经大鼠阴茎背静脉注入2×106细胞/只或联合注射环磷酰胺20mg/Kg·D.异位小鼠-大鼠心脏移植后观察供心存活时间.结果:成功分离小鼠血管内皮细胞,注射小鼠血管内皮细胞14天后,移植心脏平均存活时间10±1.414min,组化染色显示供心有IgM、C3沉积,血浆IgM、IgG、C3、C4较未注射血管内皮细胞组明显增高;联合使用环磷酰胺能延长供心成活时间19.44±2.6034min(t=2.880,P＜0.01).结论:外周静脉注射供体血管内皮细胞不能诱导延迟性异种移植排斥反应(DXR)的免疫耐受,却促使发生HAR.联合环磷酰胺可延长供心存活时间.
关键词： 异种移植 血管内皮细胞 延迟性异种移植排斥反应 -
甲状旁腺移植现状
甲状旁腺(parathyroid glands,PTG)分泌的甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)在调节体内钙、磷代谢,稳定钙、磷浓度,维持神经、肌肉稳定性方面起着决定性作用.
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抑制性分子LAIR-1在异种移植物杀伤机制中的作用
目的 探讨NK细胞表面抑制性受体白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(eukocyte-associated immunoglobulin like receptor-1,LAIR-1)在异种移植免疫排斥反应中的作用.方法 采用免疫组织化学染色检测异种移植术后供肝组织的免疫细胞浸润情况,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测受体血浆中可溶性LAIR-1(sLAIR-1)的表达,转录组测序检测受体免疫细胞表面膜型LAIR-1(mLAIR-1)的表达.结果 异种移植术后供肝组织受到淋巴细胞浸润,受体淋巴细胞表面mLAIR-1和sLAIR-1呈动态平衡状态.结论 受体免疫细胞表面mLAIR-1和血浆中sLAIR-1的表达水平处于动态平衡的状态可能与受体发生免疫排斥反应相关,LAIR-1有望成为移植术后诱导免疫耐受的分子.
关键词： 白细胞相关免疫球蛋白样受体-1 异种移植 免疫排斥反应 免疫耐受 -
异种肝移植手术前后移植肝差异表达基因的筛选及验证
目的 探讨异种移植手术前后移植肝内差异表达基因的变化,并且进行筛选及验证.方法 以α-1, 3-半乳糖苷转移酶基因敲除(GTKO)小型猪为供体、藏酋猴为受体,完成4例异种脾窝辅助性肝移植手术.于供肝修整时切取适量术前标本,于移植肝开放血流后48小时以肝穿刺活检获得术后标本.对手术前后的移植肝标本进行miRNAs 和mRNAs 的高通量芯片分析,筛选出关键的差异表达miRNAs 和mRNAs,并进行实时定量PCR及Western Blot实验验证.结果 与术前相比,有165 个miRNAs在术后出现差异表达,其中上调分子112 个,下调分子53 个.筛选并验证mi-23b 等12个出现显著差异表达的miRNAs,除miR-150和miR-126-3p外,其他miRNAs 的表达变化情况与miRNAs 芯片结果基本相符.与术前相比,有2 035 个mRNAs 在术后出现显著差异表达,其中922个表达上调、1 113个表达下调,筛选IGFBP6、CDK2AP1、TNFAIP6、FⅦ、NKG2D等5个生物学功能与肝脏移植密切相关的差异表达基因进行mRNA 和蛋白水平验证.除NKG2D 外,其他4 个基因的蛋白水平表达变化与mRNA 水平变化基本一致(均P＜0.05),但CDK2AP1 的蛋白变化幅度较小,差异无统计学差异(P＝0.073).结论 异种肝移植术后移植肝的miRNAs 和mRNAs 表达出现较大变化,这些差异表达基因可能与免疫损伤及凝血功能障碍有关.
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器官移植中的适应现象
移植适应(accommodation)是指供者器官和组织在受者体内存活过程中获得抵抗供体特异性抗体(donor specific antibodies,DSAs)介导损伤的能力.20 多年前即有文献报道此现象,普遍出现在ABO 血型不相配(ABO incompatible,ABOi)的移植中[1-2],在异种移植和人类白细胞抗原(HLA)不相配的同种异体移植中也可发现.
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人源干细胞分化的肝细胞移植应用于急性肝衰竭动物模型
背景:对于急性肝脏功能衰竭患者来说,肝细胞移植是挽救生命的一种治疗方法.然而,早期供肝细胞来源不足限制了人源肝细胞移植.本研究评估了干细胞分化的肝细胞样细胞在异种移植的急性肝衰动物模型中的疗效.
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异种肝移植转基因小鼠模型的建立
目的通过显微注射法产生用于异种移植研究的表达人CD59蛋白的转基因小鼠模型.方法实验中利用OMT作为目的基因hCD59cDNA的启动子,CMV作为报告基因GFP的启动子,构建重组质粒pGOC.通过显微注射法,把CMV-GFP-OMT-CD59基因片断注射入昆明种白小鼠受精卵.结果产生出86只F0代转基因小鼠.鼠尾基因组DNA经PCR法检测,12只阳性,进一步用Southern blot法检测1只阳性.结论通过显微注射法,外源基因hCD59cDNA在小鼠基因组中得到整合,产生出了阳性转人CD59蛋白基因小鼠,可用于进一步异种移植研究.
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气管异种移植的现状
气管异种移植目前还处于动物实验阶段，尚不能应用于临床，主要原因是异种气管移植后的免疫排斥问题未能解决，社会伦理学方面还存有争议。移植气管的保存与再血管化也是当前所面临的主要问题。其中，能否解决移植后宿主对气管的免疫排斥是移植成败的关键。该文通过介绍异种气管移植的概况，了解其研究进展及所面临的挑战。
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人类胎儿睾丸组织异种移植模型的建立
目的建立去势裸鼠为受体的异种人类睾丸组织移植模型.方法切取10~13孕周非因疾病因素人工引产胎儿的性腺组织(n=12个),剪成约1mm3组织块,植入雄性去势裸鼠背部皮下,9周后回收移植物,通过与移植前标本在组织细胞形态学和免疫组化的对比,来观察人类胎儿睾丸组织在异种异位的生长发育情况.结果胚胎睾丸移植物的回收率为9/12(75%).光镜下移植物标本显示出正常的大体形态,免疫组化显示移植前标本中生精小管未完全形成,移植后生精小管形成并显示出正常的形态及功能.结论人类早期人工引产胎儿睾丸组织移植到免疫缺陷小鼠体内后,可继续正常生长发育,可作为研究人类性别分化发育和DSD及TDS发病机制的较好模型.
