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昆明鼠胚胎干细胞系建立中原代克隆生长及其传代方法的研究
目的:探讨昆明鼠胚胎内细胞团分离方法、原代干细胞克隆分离时机及干细胞传代方法对干细胞建系效率的影响.方法:取昆明鼠3.5d囊胚建胚胎干细胞系,比较全胚培养法与免疫外科法两种内细胞团分离方法对胚胎干细胞建系效率的影响,观察原代克隆的分离时机,机械法传代和酶消化传代对胚胎干细胞建系效率的影响.结果:全胚培养法30个囊胚建系3个,免疫外科法32个囊胚建系4个,两组均可以有效地形成胚胎干细胞系；昆明鼠原代干细胞克隆分离佳时机是增殖4～6 d;5代以前的干细胞以机械传代方法较好,5代后用酶消化法传代效果较好.结论:全胚培养法和免疫外科法均能有效建立昆明鼠胚胎干细胞系,采用机械化与酶消化法相结合传代更适合昆明鼠干细胞建系.
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感染人芽囊原虫昆明鼠肠粘膜的病理改变
目的通过观察昆明鼠感染人芽囊原虫后肠粘膜病理变化,探讨人芽囊原虫的致病机制. 方法从腹泻患者粪便中分离培养人芽囊原虫.15只昆明鼠分为3组:A组为接受免疫抑制剂处理组,B组为非免疫抑制剂处理组,经口感染人芽囊原虫1.6×105个/鼠,观察小鼠感染情况及肠粘膜的病理变化;C组为健康对照组. 结果实验鼠人芽囊原虫检出率90%(9/10),虫体主要寄生在小鼠回盲部肠腔和肠粘膜表面,个别虫体侵入肠粘膜上皮,部分肠粘膜充血水肿,腺体增生,粘液分泌增强,可见有炎症细胞浸润,偶见局灶性肠粘膜坏死.病变程度免疫抑制剂处理组比未接种免疫抑制剂处理组重. 结论感染人芽囊原虫的昆明鼠回盲部肠粘膜发生病理损害,病变程度受宿主机体免疫状况的影响.
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野生型P53基因对肝癌组织端粒酶活性及bcl-2表达的影响
目的:观察野生型p53基因对昆明鼠肝癌组织端粒酶活性及bcl-2表达的影响,探讨p53基因的抑瘤机制.方法:♂5周龄昆明鼠30只,随机分类肝癌组(Ⅰ)和p53基因治疗组(Ⅱ).每只鼠于后肢股部皮下接种Hep-A-22肝癌细胞悬液0.2 mL,建立动物模型.接种后24 h,Ⅱ组实验动物于荷瘤局部皮下注射介导野生型p53基因的复制缺陷型重组腺病毒液0.2 mL,14 d后处死实验动物.PCR-ELISA定量检测肝癌组织端粒酶活性,免疫组化观察肝癌细胞中Bcl-2蛋白的表达情况.结果:腺病毒介导的野生型p53基因能够显著抱制肝癌的生长(肿瘤直径23.32±1.45 cm vs5.13±0.37 cm,P＜0.001),明显降低端粒酶的活性表达(A值2.46±0.35vs0.78±0.06,P＜0.01),下调Bcl-2基因蛋白的生成(表达阳性率67.8%vs 25.9%,P＜0.05).结论:野生型p53基因从抑制肝瘤细胞增生,促进肿瘤细胞凋亡两个方面发挥抑癌功能.
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经消化道诱导昆明鼠耐受实验性自身免疫性脑脊髓炎
诱导特异性免疫耐受是多发性硬化治疗学的一个重要研究方向.实验性自身免疫性脑脊髓炎是研究多发性硬化常用的动物模型,在此介绍我们使用同源脊髓匀浆诱导昆明鼠耐受实验性自身免疫性脑脊髓炎的一些实验工作结果及体会.
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电镜病理诊断中样品快速制备方法
1 材料1.1 动物昆明鼠,牡丹江医学院动物中心提供.1.2 试剂 OsO4(进口)、618#环氧树脂、十二烷基琥珀酸酐(DDSA)、邻苯二甲酸二丁酯、2,4,6-三(二甲基氨基苯酚)、醋酸铀、硝酸铅等药品由牡丹江医学院供应科外购.
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电镜样品声波和真空技术处理的快速制备方法
1材料1.1 动物昆明鼠,牡丹江医学院动物中心提供.1.2 试剂OsO4 (进口);618#环氧树脂;十二烷基琥珀酸酐(DDSA);邻苯二甲酸二丁酯;2、4、6-三(二甲基氨基苯酚);醋酸铀;硝酸铅等药品由牡丹江医学院供应科外购.
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低硒对小鼠心肌影响机制的研究
目的 建立硒缺乏小鼠动物模型,观察低硒对小鼠心肌的影响机制.方法 利用酵母配制低硒饲料,喂养昆明幼鼠,经过4个月的喂养,测定血清、肝脏、心肌细胞的硒含量,观察心肌超微结构的变化,测定血清心肌酶的变化.结果 利用酵母配制的低硒饲料,硒含量为0.016 mg/kg,符合低硒标准.昆明鼠用该饲料喂养4个月,心肌、肝脏、血清硒含量分别为0.187mg/kg、0.219mg/kg、0.241 mg/kg,符合低硒诊断标准.观察低硒鼠心肌超微结构,可见心肌细胞线粒体肿胀,细胞核出现了异型性,血清心肌酶水平升高.结论 经过低硒饲料饲养可建立低硒鼠动物模型.低硒主要引起昆明鼠心肌细胞线粒体的损伤.
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AFB1对昆明鼠肝组织和人肝细胞CPS1表达的影响
观察黄曲霉毒素B1 (aflatoxin Bl,AFB1)对昆明鼠肝组织和人肝细胞(Chang liver)中氨甲酰磷酸合成酶1(carbamoylphosphate synthetase 1,CPS1)表达的影响.将20只雄性昆明鼠随机分成正常组和实验组,实验组用AFB1注射10周后采用实时荧光定量PCR法检测肝组织中CPS1的mRNA表达变化;AFB1处理人肝细胞株Chang liver细胞12 h,24 h,36 h,48 h后,实时荧光定量PCR法检测CPS1的mRNA表达变化.结果显示与正常组对比,实验组小鼠CPS1的mRNA表达下调.同时AFB1处理人肝细胞后CPS1的mRNA表达在不同时间段发生一定的下调,暗示AFB1抑制昆明鼠肝组织和人肝细胞中CPS1的mRNA表达.
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海豚链球菌类M样蛋白基因突变株BY-1ΔsimA的免疫保护作用
目的 探讨海豚链球菌类M样蛋白基因突变株BY-1ΔsimA作为减毒活疫苗保护小鼠免受海豚链球菌感染的能力.方法 通过同源重组的方法构建海豚链球菌类M样蛋白基因突变株,利用穿梭载体pVE6007温度敏感、可在链球菌中复制的特征,高效率筛选突变株BY-1ΔsimA.将鉴定正确的BY-1ΔsimA经腹腔注射免疫昆明鼠,21 d后,用3倍半数致死剂量的海豚链球菌BY-1进行攻毒,观察15 d,统计动物死亡数.结果经海豚链球菌突变株BY-1ΔsimA免疫后的昆明鼠感染海豚链球菌BY-1后的死亡率为13.3%,即相对保护率(RPS)为77.8%,与免疫海豚链球菌野生株BY-1全菌灭活疫苗获得的RPS(55.5%)之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 海豚链球菌突变株BY-1ΔsimA可有效保护昆明鼠免受海豚链球菌感染,是一种较为理想的减毒活疫苗候选物.
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正常昆明种小鼠后爪图谱及RGB分析
为探讨动物望诊的客观指标、建立正常昆明小鼠后爪标准图谱,20只18～20g雄性鼠左后爪,相同条件下以数码相机每周拍摄1次,连续8次;在此基础上,对所有照片进行图像处理,并对其掌部作RGB色度的定量分析.结果表明,小鼠后爪图谱的RGB分量值作为实验小鼠望诊的客观指标具有一定的可行性.
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弓形虫感染雄性小鼠对生育影响的研究
目的观察弓形虫急性感染雄性小鼠后对其生育能力的影响.方法实验组雄鼠急性感染弓形虫后和对照组雄鼠同时与性成熟雌鼠分笼配对饲养,观察其受孕、产仔情况及仔鼠的身长、体重情况.取雄鼠生殖器官及丘脑作病理切片,观察弓形虫感染后对雄鼠睾丸、附睾、输精管、前列腺及生殖中枢所致病理变化.结果急性感染弓形虫的雄鼠配对平均产仔鼠数为10只,对照组平均产仔鼠数为15只,差异显著(P＜0.05).两组仔鼠身长、体重差异无显著性意义(P＞0.05).病理学检查实验组雄鼠睾丸、附睾、输精管、前列腺、丘脑均出现明显病变,睾丸中仅见初级、次级精母细胞,少见或不见成熟精子.附睾管中精子明显少于正常鼠.输精管正常结构改变.结论弓形虫急性感染雄性小鼠可致生殖系统明显病变.成熟精子减少或无精,导致雄性不育.
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急性弓形虫感染所致昆明鼠不孕的实验研究
目的观察弓形虫感染昆明鼠后对小鼠受孕及产仔的影响.方法将弓形虫AH株包囊感染雌性昆明鼠,一周后与雄性昆明鼠交配,确认阴栓,记录受孕及产仔情况.同时设对照组.结果实验组33.3%受孕,平均每鼠产仔为4.4只;对照组100%受孕,平均每鼠产仔为12只,实验组与对照组受孕率经卡方检验(χ2=15.45,P＜0.01),有非常显著性差异.结论急性弓形虫感染可使昆明鼠的受孕率及产仔率明显降低.病理检查结果也显示子宫、输卵管有炎症病变.
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孕早期人巨细胞病毒感染对仔鼠神经行为的影响
目的 探讨孕早期人巨细胞病毒(HCMV)感染对仔鼠神经行为的影响.方法 将8周龄昆明小鼠按雌雄2:1合笼配对,将受精小鼠随机分为实验组与对照组,于妊娠第4天分别腹腔内注射1×10-6半数组织培养感染量HCMV悬液0.5 mL和等量的人胚成纤维细胞上清液,孕第20天时每组随机选取3只作剖宫产,取胎鼠脑组织进行光镜和电镜检查;定性检测仔鼠及孕鼠血清HCMV DNA;在仔鼠6～7周时进行Morris水迷宫和Lashley Ⅲ水迷宫检测.结果 与对照组比较,光镜下实验组仔鼠脑组织可见神经细胞变性坏死,细胞核消失,部分细胞呈巨细胞变;电镜下发现神经元细胞明显肿胀,胞质中可见类球形病毒颗粒;实验组7只仔鼠血清中检测出特异性HCMV pp65片段.在Morris水迷宫测试中,实验组仔鼠第7天潜伏期为(30.21±12.74)s,对照组为(11.87±3.62)s,二组比较有显著性差异(P＜0.05);游泳速度实验组为(19.10±1.90) cm/s,对照组为(23.21±1.02) cm/s,二组比较有显著件差异(P＜0.05);在Lashley Ⅲ水迷宫测试中,第5天实验组潜伏期为(45.88±18.24)s,与对照组[(125.56±9.82)s]比较有显著性差异(P＜0.01);错误次数实验组与对照组比较,亦存在、显著性差异(P＜0.05).结论 孕早期HCMV感染可使仔鼠学习记忆能力、运动能力显著下降.
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昆明鼠感染弓形虫AH株后获得性免疫力观察
目的提高昆明鼠抗弓形虫强毒株(RH株)的免疫力,延长其生存时间,为进行相关实验研究提供动物模型.方法对实验组(已感染弓形虫弱毒株(AH株)并进入带虫免疫状态的昆明鼠)和对照组(健康昆明鼠)同时感染弓形虫强毒株(RH株)观察其发病情况及生存时间.结果慢性带虫感(染弱毒株AH株)小鼠接种强毒株后发病时间及生存时间均比健康昆明鼠感染强毒株(RH株)后大为延长,短为7天,长为30.5天,而对照组小鼠在3～4天内全部死亡.结论感染弱毒株(AH株)进入慢性带虫感染阶段的昆明鼠具有较强的抵抗强毒株(RH株)攻击的能力,从而延长了生存时间.
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肝硬化对小鼠羧酸酯酶的影响
我们在酶学及基因水平观察肝硬化对小鼠羧酸酯酶的影响,以期为临床上肝硬化患者用药提供实验依据.一、材料与方法1.动物模型及分组:雄性昆明鼠40只,体重20 g,随机分2组,每组20只:正常对照组,2次/周用生理盐水0.1 ml/10g体重灌胃3个月;肝硬化组,2次/周用体积分数为10%的CCl4花生油溶液0.1ml/10g体重灌胃3个月.肝硬化组有2例死亡.
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广州管圆线虫对不同宿主感染性的比较研究
目的 比较广州管圆线虫在褐云玛瑙螺和福寿螺螺体内的发育情况及对BALB/c小鼠和昆明鼠的毒力,寻找适宜的实验室易感宿主.方法 连续7 d分别用感染大鼠的粪便喂食福寿螺和褐云玛瑙螺,1个月后解剖感染螺,观察螺体内广州管圆线虫幼虫的发育情况及虫数;从褐云玛瑙螺和福寿螺分离广州管圆线虫Ⅲ期幼虫(L3)分别感染昆明鼠;而感染BALB/c小鼠的Ⅲ期幼虫来自于褐云玛瑙螺.通过观察感染小鼠的死亡率、体重变化、mmp-9活性、脑组织的病理变化、脑内虫体数及脑脊液总蛋白含量等指标评价不同来源幼虫对不同小鼠的致病力.结果 广州管圆线虫在褐云玛瑙螺及福寿螺中的发育无显著性差异.但褐云玛瑙螺感染的幼虫数量高于福寿螺.BALB/c小鼠感染广州管圆线虫后其死亡率、mmp-9活性、脑内虫体数及脑脊液总蛋白含量等明显高于昆明小鼠,其体重减轻、病理变化也更明显.用不同螺来源的Ⅲ期幼虫感染的小鼠其mmp-9活性、脑内虫体数、脑脊液总蛋白含量、体重减轻及脑组织病变程度均无显著差异.结论 BALB/c小鼠、褐云玛瑙螺与福寿螺对广州管圆线虫易感,BALB/c小鼠足较好的实验室易感宿主,褐云玛瑙螺与福寿螺来源的广州管圆线虫Ⅲ期幼虫对小鼠的毒力无差异,从环保角度考虑褐云玛瑙螺更适合于实验室应用.
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日本血吸虫童虫细胞免疫母鼠的子代抗攻击感染的保护性研究
目的 以2种日本血吸虫易感小鼠为动物模型, 探讨日本血吸虫 (Schistosoma japonicum, S.j) 童虫细胞免疫母鼠的子代鼠抗日本血吸虫攻击感染的应答水平.方法 用S.j童虫细胞分别免疫昆明母鼠和Balb/c母鼠, 将免疫母鼠或正常母鼠与相应鼠种的正常公鼠进行配对饲养, 用其子代鼠建立2个感染模型共4组 (A1:免疫昆明子代感染组;B1:正常昆明子代感染对照组;A2:免疫Balb/c子代感染组;B2:正常Balb/c子代感染对照组);计数A1、B1、A2、B2组经日本血吸虫尾蚴攻击感染后从其子代鼠体内收获的虫荷和每克肝卵荷 (liver eggs per gram, LEPG);测量上述4组小鼠经HE染色后的肝组织切片内虫卵肉芽肿的大小;间接ELISA检测血清中抗S.j可溶性童虫抗原 (soluble juvenile worm antigens, SJWA) IgG (H+L) 水平.结果 与正常昆明株、Balb/c株子代对照组B1、B2组相比, 2组S.j童虫活细胞免疫母鼠子代A1、A2组均表现出不同程度的抗攻击感染的免疫力, 尤其抗生殖效果显得尤为突出.其中, A1获得35.6％的减虫率和59.4％的LEPG减卵率;A2获得29.8％的减虫率和47.4％的LEPG减少率.从肝脏外表来看, B1、B2组子代对照鼠肝脏的坏死程度明显高于A1、A2免疫子代鼠.此外, A1组肝脏虫卵肉芽肿平均直径和面积比B1组分别减少23.8％和43.4％, A2组肝脏虫卵肉芽肿平均直径和面积较B2组减少28.4％和50.3％.A1、A2与B1、B2各指标结果的组间差异均具有统计学意义 (P＜0.05) .间接ELISA结果显示, 不同时间点采集的2株免疫子代鼠血清中的抗SJWA-IgG水平高于同期相应对照组血清中的特异性IgG水平.结论 用S.j童虫细胞接种母鼠所诱生的保护性免疫能传给子代, 进而使子代鼠产生针对后天初次感染的保护性免疫.
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腹腔注射刀豆蛋白A诱导昆明小鼠肝纤维化模型的建立
目的 建立昆明小鼠肝纤维化模型.方法 48只昆明小鼠随机分组.实验组40只,腹腔注射20 mg/kg剂量的刀豆蛋白A(ConA),每周一次,共9次.对照组8只,每周一次腹腔注射PBS.所有小鼠在每次注射后24 h采血测ALT、AST.实验组分别于第6、7、8、9次注射后1周各处死8只小鼠,余8只第9周起停止注射,第13周处死.对照组第9次注射后1周处死.所有小鼠处死后取肝脏计算肝脏指数,并作病理检查.结果 实验组第8次注射后出现典型肝纤维化,停止刺激4周仍然有纤维化表现.结论 反复腹腔注射ConA可以建立昆明小鼠肝纤维化模型.
