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基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱法和表面等离子谐振法在HPV分型检测中的应用比较
目的:评价比较基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)和表面等离子谐振法(SPR)在人乳头瘤病毒(HPV)分型检测中的应用.方法:两种方法对30种不同型别HPV L1基因分型国家参考品和129份经液基薄层细胞检测的样本分别进行检测和评价.结果:MALDI-TOF-MS法和SPR法检测参考品具有100％的一致性.采用测序法确定129份样本中有93份为HPV阳性,36份为HPV阴性.高危型样本的分型准确率MALDI-TOF-MS法为100％ (77/77),SPR为94.8％ (73/77);MALDI-TOF-MS法HPV分型检测的敏感率为88.2％ (82/93)、特异性为88.9％ (32/36),与SPR法的灵敏率和特异性相当.结论:MALDI-TOF-MS在HPV分型检测中具有较好的灵敏性和特异性,与SPR法一致.
关键词： 基因分型 HPV 基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱 表面等离子谐振 -
基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱对临床常见细菌和酵母菌的鉴定能力评价
目的：利用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）和VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定及药敏系统、ATB Expression微生物鉴定及药敏系统鉴定临床常见的细菌和酵母菌，比较鉴定结果的一致性，评价MALDI-TOF MS对临床常见病原菌的鉴定能力。方法连续5 d鉴定123株临床分离株，其中革兰氏阳性菌42株，革兰氏阴性菌71株，酵母菌10株。细菌鉴定同时使用法国梅里埃公司的VITEK MS（采用MALDI-TOF MS技术）和VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定及药敏系统，酵母菌鉴定同时使用VITEK MS和ATB Expression微生物鉴定及药敏系统。将MALDI-TOF MS与传统生物化学方法得到的鉴定结果进行比较，结果不一致的菌株采用16S rRNA测序验证。结果 MALDI-TOF MS与传统生物化学方法得到的鉴定结果相比较，革兰氏阳性菌鉴定符合率为78.6%（33/42），革兰氏阴性菌鉴定符合率为84.5%（60/71），酵母菌鉴定符合率为100.0%（10/10）。其中金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肠球菌及大多数肠杆菌科细菌、非发酵菌的符合率可达95.0%。19株鉴定结果在种的水平上不一致的细菌经16S rRNA测序验证，MALDI-TOF MS的正确率为73.7%，传统生物化学鉴定结果的正确率为49.2%。结论与传统生物化学鉴定手段相比，MALDI-TOF MS对临床常见致病菌具有较好的鉴定能力，鉴定时间显著缩短，可实现临床微生物的快速、准确鉴定。
关键词： 基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱 细菌 酵母菌 鉴定方法 -
分枝杆菌液体培养MALDI-TOF MS快速直接鉴定法的建立与评价
目的 建立并评价分枝杆菌液体培养基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)直接鉴定技术.方法 收集2014年6月至2016年5月首都医科大学附属北京同仁医院1 466例呼吸科住院患者痰标本,进行BactecTM MGITTM 960分枝杆菌快速液体培养(简称液体培养),以其中报警并经萋-尼抗酸染色确认为抗酸杆菌的105例(无重复病例)为研究对象,对比本实验室自行设计并改良的“同仁”分枝杆菌液体培养直接鉴定法(培养液经特殊前处理后直接进行MALDI-TOF MS鉴定)及传统鉴定法(培养液转种于L-J固体培养基,得到菌落后再进行MALDI-TOF MS鉴定),并通过16S rRNA基因及16S～23S rRNA基因间隔区测序验证.结果 以基因测序鉴定为金标准,液体培养直接鉴定与传统鉴定法结果一致率为100％;二者鉴定至属的准确率均为100％(105/105),鉴定至种的准确率均为99.05％(104/105).液体培养后直接鉴定与传统鉴定法MALDI-TOF MS鉴定分值≥2.000分的比例差异无统计学意义(x2=2.952,P=0.086).4例分值＜1.700分的菌株谱图杂峰较多而有效峰较少.结论 本实验室自行设计的“同仁”分枝杆菌液体培养MALDI-TOF MS直接鉴定法鉴定结果准确,缩短了分枝杆菌培养和鉴定的时间,且可保证生物安全,对分枝杆菌感染的快速诊断和及时治疗意义重大,适用于我国各级临床实验室.
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单纯室间隔缺损与房间隔缺损患者血清蛋白质组学分析
目的 应用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对单纯性室间隔缺损(ventrieular septal defect,VSD)、房间隔缺损(atrial septal defect,ASD)患者术前、术后及正常人血清蛋白质谱进行分析,得到高敏感性和特异性的血清蛋白,建立诊断模型指纹图谱.方法 采用MALDI-TOF-MS技术分别检测27例单纯VSD、ASD患者与20名正常人血清蛋白相对含量,运用Flex Analysis和Bio Tools软件对两组血清蛋白质谱进行分析;筛选出差异蛋白,再通过分析软件对其进行交叉验证,得到具有诊断意义的特异性蛋白标志物.结果 检测到蛋白质质荷比(M/Z)在600～10500 Da范围内,单纯VSD、ASD组与正常人组有差异的蛋白质峰为15个(P＜0.05).生物标记物可以将单纯VSD、ASD组与正常人准确地分组,其敏感性为91.5％,特异性为97.2％.结论 MALDI-TOF-MS技术对单纯VSD、ASD组术前、术后及正常人组血清蛋白质谱进行分析,可以筛选出单纯VSD、ASD患者的特异性血清标志物.
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MALDI-TOF-MS技术筛查原发性小肝细胞癌血清特异蛋白
目的 应用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对原发性小肝细胞癌(小肝癌)患者与正常人血清蛋白质谱进行分析,得到高敏感性和特异性的血清蛋白,且能将小肝癌与正常人较准确的分开,建立诊断模型指纹图谱.方法 采用德国Bruker公司的基质辅助激光解析电离质谱仪(MALDI-TOF-MS)分别检测35例原发性小肝癌患者与50名正常人血清蛋白质相对含量,运用FlexAnalysis和BioTools软件对两组血清蛋白质谱进行分析,寻找差异蛋白,再通过分析软件对其进行交叉验证,得到具有诊断意义的特异性蛋白标志物.结果 检测到蛋白质质荷比(M/Z)在0～100000 Da范围内,小肝癌组与正常人组有差异的蛋白质峰为55个(P＜0.05),交叉验证结果显示以M/Z值为7771.17 Da的蛋白质,具有较高敏感性和特异性,可将正常人及小肝癌患者准确分开,且M/Z值为7771.17 Da蛋白质在小肝癌组中低表达,在正常人组中高表达.再以M/Z值为7771.17Da的蛋白质作为生物标记,随机抽取小肝癌与正常人血清标本进行双盲验证,结果表明M/Z值为7771.17Da蛋白质作为生物标记物可以将小肝癌与正常人准确地分组,其敏感性为91.0％,特异性为70.0％.结论 MALDI-TOF-MS技术对小肝癌患者组、正常人组血清蛋白质谱进行分析,可得到原发性小肝癌早期诊断特异性、敏感性较高的血清特异性蛋白.
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蛋白质组学方法筛选肺腺癌相关蛋白
目的 寻找肺腺癌的相关蛋白标志物,为肺腺癌的诊断、监测及治疗提供新的途径.方法 提取肺腺癌和癌旁正常组织中可溶性蛋白质,应用双向凝胶电泳技术筛选两者间的差异表达蛋白,基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱结合生物信息学技术鉴定在肺腺癌组织中高表达的蛋白质.应用免疫组织化学技术验证分析差异蛋白grp94的表达情况.结果 应用蛋白质组学技术从肺腺癌组织中成功筛选出grp94等6种蛋白,其在癌组织的表达明显高于癌旁正常组织.免疫组化技术也证实grp94在肺腺癌组织中的表达比例明显高于癌旁正常组织.所鉴定的蛋白功能分别涉及细胞内蛋白的合成、装配,体内超氧自由基的清除、细胞凋亡等与肿瘤生物学特性密切相关的方面.结论 蛋白质组学技术可有效从组织中筛选肺腺癌相关蛋白.筛选出的蛋白标志物包括铜锌超氧化物岐化酶、热休克蛋白27、磷酸丙糖异构酶B链、膜联蛋白Ⅰ、94ku糖调节蛋白和热休克蛋白90-β,为肺腺癌进一步的分子诊断和治疗提供了参考靶点.
关键词： 肺腺癌 蛋白质组学 蛋白标志物 基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱 GRP94
