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核苷酸结合寡聚化结构域样受体对结核分枝杆菌免疫应答研究的新进展
结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)是引发结核病的主要病原菌.宿主对MTB的免疫应答在结核病发病过程中有重要地位,该过程主要通过模式识别受体(pattern recognition receptor,PPR)进行.核苷酸结合寡聚化结构域(nucleotide-binding oligomerization domain,NOD)样受体(NOD-like receptor,NLR)是其中的一种重要PPR,在MTB感染和发病中扮演重要角色,目前已发现有20多种.NLR主要针对胞内的细菌和病毒进行免疫应答,同时对它们释放或降解的产物也产生免疫反应.NLR在MTB感染早期固有免疫系统对病原菌的识别和清除,以及启动适应性免疫应答和分泌细胞因子、介导炎症和细胞自噬等过程中都有重要作用.近几年,NLR在这些功能研究上有新进展,笔者就NLR介导的对MTB感染的免疫应答过程,以及其与结核病发病关系研究的新动态进行综合分析,以期为MTB和宿主细胞的相互作用研究提供新提示.
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PAR-2、EGFR 和 Ki67在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的探讨PAR-2、EGFR和Ki67在胃癌组织中的表达及其临床病理意义。方法应用免疫组织化学的方法检测80例胃癌组织中PAR-2、EGFR和Ki67的表达，并分析PAR-2表达与EGFR、Ki67及临床病理特征的关系。结果80例胃癌组织标本中42例（52.5％） PAR-2表达阳性，44例（55％） Ki67表达阳性，39例（48.8％）EGFR表达阳性；PAR-2和EGFR蛋白主要表达在肿瘤细胞的胞膜和胞质中，而Ki67主要表达于细胞核上；PAR-2的表达与肿瘤浸润深度、远隔转移和病理分期呈正相关，但与组织类型、分化程度、淋巴结转移不相关；PAR-2的表达与EGFR和Ki67的表达呈正相关。结论 PAR-2、EGFR和Ki67在胃癌组织中的高表达与肿瘤增殖和进展相关。
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牙龈成纤维细胞表达蛋白酶激活受体的类型及作用研究
目的 明确牙龈成纤维细胞表达蛋白酶激活受体(protease-activated receptors,PAR)的类型及PAR在牙周炎中的作用.方法 培养原代人牙龈成纤维细胞,反转录PCR法检测PAR在牙龈成纤维细胞中的表达.以重组蛋白酶R(recombinant gingipain R,rRgp)作用于牙龈成纤维细胞,实时定量反转录PCR法检测PAR表达水平在两种rRgp(rRgpAcat和rRgpB)作用前后(rRgpAcat组和rRgpB组)的变化,并用酶联免疫吸附测定法检测细胞分泌白介素6水平的变化,以相同体积的磷酸盐缓冲液组作为对照组.应用SPSS10.0统计软件对结果数据进行分析,采用两独立样本t检验比较反转录PCR获得的PAR表达水平的差异及酶联免疫吸附测定获得的IL-6表达水平的差异,以双侧P ＜0.05为差异有统计学意义.结果 牙龈成纤维细胞表达PAR-1和PAR-3,二者的表达水平在rRgpAcat和rRgpB作用前后发生明显变化,PAR-1相对表达量从1.04±0.31分别下降为0.67 ±0.11和0.31 ±0.11,PAR-3相对表达量从1.01 ±0.44分别下降为0.79 ±0.13和0.44±0.12;白介素6表达水平在蛋白酶作用8h时达峰值,对照组为(18.77±4.09) μg/L,rRgpAcat和rRgpB组分别为(179.36 ± 15.81)和(320.56±26.19) μg/L,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 牙龈成纤维细胞表达PAR-1和PAR-3,并参与牙周炎症反应,可能与牙周炎的早期急性炎症反应有关.
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非甾体抗炎药肠损伤大鼠模型小肠组织中蛋白酶激活受体2的表达与肥大细胞分布
目的 观察蛋白酶激活受体2(PAR-2)和肥大细胞在双氯芬酸致小肠黏膜损伤大鼠模型小肠组织中的表达、分布及意义.方法 随机数字表法将24只成年雄性SD大鼠随机分为空白对照组和模型组,每组12只,空向对照组按1 ml/250 g蒸馏水灌胃1次,模型组给予7.5 mg·kg-1·d-1双氯芬酸灌胃1次,至第5天行腹腔注射麻醉,取末端回肠,采用甲苯胺蓝染色法测定小肠黏膜中肥大细胞的分布,并对肥大细胞进行计数;采用免疫组织化学、Western印迹、荧光定量PCR分析PAR-2在小肠黏膜组织中的定位、表达和mRNA的变化.结果 模型组小肠黏膜肥大细胞数明显高于空白对照组(10.3±2.2比4.2±1.2,P＜0.05).免疫组织化学结果显示PAR-2表达于黏膜表面上皮、隐窝上皮和固有层炎性细胞,阳性染色位于细胞质.模型组小肠黏膜中PAR-2 mRNA表达高于空白对照组(2.63±0.26比1,P＜0.05),PAR-2蛋白表达高于空白对照组(24.3±2.4比17.5±3.5.P＜0.05).结论 PAR-2、肥大细胞参与了双氯芬酸致大鼠小肠黏膜损伤过程.PAR-2可能由肥大细胞分泌的类胰蛋白酶激活而参与非甾体抗炎药致小肠损伤的发病过程.
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蛋白酶激活受体介导的凝血激活在脓毒症中的作用
脓毒症时由于内毒素及炎性递质的作用,机体处于高凝状态,凝血激活过程中产生的许多蛋白酶,如凝血酶、组织因子复合物等又可通过其特异的受体--蛋白酶激活受体(Protease-activated receptors,PARs)促进炎性反应过程.目前已有许多针对脓毒症时的凝血紊乱进行干预的临床前及临床试验,其中许多与PARs有关的试验都得出了肯定的结论.本文就有关PARs介导的凝血激活在脓毒症中的作用研究做一综述.
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蛋白酶激活受体在腹泻型肠易激综合征患者结肠黏膜组织中的表达及意义
目的 研究蛋白酶激活受体(PAR)家族在腹泻型肠易激综合征(D-IBS)患者结肠黏膜中的表达变化情况.方法 入选28例D-IBS患者及18名健康对照者,经结肠镜钳取乙状结肠黏膜组织,采用Western印迹法和实时荧光定量PCR法观察蛋白酶激活受体超家族的表达情况.应用SPSS 18.0软件进行统计分析,两组间差异采用Mann-Whitney U检验.结果 PAR1在D-IBS患者和对照组结肠黏膜中的表达差异无统计学意义(P=0.300).PAR2和PAR4在D-IBS患者的结肠黏膜中均表达增加,其灰度值分别为0.99±0.67和0.37±0.14,显著高于对照组的0.63±0.38和0.25±0.11(P值分别=0.038和0.013).实时荧光定量PCR显示PAR mRNA的表达与蛋白水平相一致.结论 PAR2、PAR4的表达在D-IBS患者结肠黏膜中明显增高,可能在D-IBS疾病过程中发挥某些作用.
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蛋白酶激活受体-2在急性坏死性胰腺炎大鼠肠黏膜组织中的表达
目的 探讨蛋白酶激活受体-2(PAR-2)的表达与急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肠黏膜屏障损伤的相关性.方法 制备ANP大鼠模型,采用免疫组织化学法、Western印迹法及RT-PCR方法检测假手术对照组和造模后6、12、24 h大鼠肠黏膜组织中PAR-2的表达.组间数据比较采用单因素方差分析.结果 免疫组织化学法显示,假手术对照组大鼠小肠黏膜组织中PAR-2的表达较微弱.ANP造模后,PAR-2阳性细胞表达数量明显增加,染色强度明显增强.造模后6、12、24 h的免疫组织化学评分分别为4.88±0.33、5.87±0.32、11.17±0.27,与假手术对照组(2.86±0.31)相比,差异有统计学意义(F=747.08,P＜0.01).假手术对照组大鼠小肠黏膜中PAR-2的mRNA和蛋白表达量均较少,随着ANP造模时间的延长,两者的表达水平均逐渐升高,造模后6、12、24 h,mRNA分别为0.56±0.03、0.69±0.03、1.05±0.05,蛋白分别为0.28±0.02、0.35±0.03、0.69土0.04;各时间点与假手术对照组相比,差异均有统计学意义(F=785.69、1177.82,P值均＜0.01).结论 PAR-2在ANP炎性反应中被激活,在肠黏膜屏障损伤的发生发展过程中发挥重要作用.
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蛋白酶激活受体2在特应性皮炎患者皮损组织中的表达与分布研究
目的:观察蛋白酶激活受体(PAR)2及其相关蛋白在特应性皮炎(AD)患者皮损组织中的表达,探索AD的发病机制.方法:AD患者15例,正常对照10例,应用免疫组化方法(ABC法),对皮肤组织中PAR2的表达及组织分布进行测定.结果:AD患者皮损组织呈现以慢性皮炎为主的病理改变:表皮突向下增生延长,棘层肥厚,细胞增生明显;真皮浅层血管周围淋巴单一核细胞浸润,患者非皮损组织未见明显的炎性细胞浸润,但可见轻度棘层细胞增生.PAR2表达水平在AD患者皮损组织中明显升高,但在AD患者非皮损组织中变化并不显著.结论:在AD患者中,PAR2表达水平异常增加,由于PAR2表达的增加主要见于AD患者的皮损组织,南此推测.PAR2的激活和表达主要与AD的早期急性炎症反应有直接关联.
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以蛋白酶激活受体-1为靶点的99Tcm-(HYNIC-BMS-200261)(tricine) (TPPTS)荷乳腺癌裸鼠显像
目的 探讨99Tcm-[联肼尼克酰胺(HYNIC)-BMS-200261](N-三羟甲基甘氨酸)[三苯基膦三间磺酸钠盐(TPPTS)][99Tcm-(HYNIC-BMS-200261)(tricine) (TPPTS)]显像用于检测人乳腺癌蛋白酶激活受体-1(PAR-1)表达水平的可靠性.方法 选取PAR-1表达水平高、中、低的3种人乳腺癌细胞株(MDA-MB-435、MDA-MB-231和MCF-7)制备荷瘤裸鼠,每种各5只,行99Tcm-(HYNIC-BMS-200261) (tricine) (TPPTS)γ显像,勾画感兴趣区,计算肿瘤/正常组织放射性(T/NT)比值;显像结束后取出肿瘤组织,计算其放射性摄取值[每克组织百分注射剂量率(％ ID/g)],并行PAR-1免疫荧光染色进行半定量分析.采用单因素方差分析和Pearson相关分析处理数据.结果 MDA-MB-435、MDA-MB-231和MCF-7荷瘤裸鼠注射后2h显像的T/NT比值分别为3.03±.0.32、2.27±0.25和1.51±0.13;肿瘤组织对应的放射性摄取值分别为(1.03±0.15)、(0.56±0.14)和(0.30±0.06) ％ID/g;肿瘤组织免疫荧光染色PAR-1表达水平分别为(17.22±2.71)％、(10.78±1.95)％和(2.80±1.18)％;上述指标均为MDA-MB-435 ＞MDA-MB-231 ＞MCF-7(F值:47.66、46.36和62.35,均P＜0.05).注射后2h显像的T/NT比值、肿瘤组织放射性摄取值与免疫荧光染色PAR-1表达水平有相关性(r值:0.934和0.929,均P＜0.05).结论 99Tcm-(HYNIC-BMS-200261) (tricine) (TPPTS)显像有望成为探测乳腺癌PAR-1受体表达水平的有效方法.
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蛋白酶激活受体2在溃疡性结肠炎患者肠黏膜中的表达
目的 探讨溃疡性结肠炎(UC)患者肠黏膜蛋白酶激活受体2(PAR-2)表达和肥大细胞的变化,以及两者在UC发病机制中的作用.方法 32个黏膜标本取自行结肠镜检查的UC患者,对照组肠黏膜取自15名健康成人,半定量RT-PCR检测两组肠黏膜PAR-2的mRNA表达,免疫组化方法检测PAR-2蛋白表达和肥大细胞数量.结果 与对照组相比,UC肠黏膜中PAR-2 mRNA和蛋白过度表达,PAR-2 mRNA表达与疾病严重程度正相关(P＜0.01).UC组肠黏膜肥大细胞数显著高于对照组(P＜0.01).免疫组化结果显示,PAR-2蛋白表达于UC肠黏膜表面上皮、隐窝上皮和固有层炎性细胞.病理分级Ⅲ、Ⅳ级肠黏膜PAR-2蛋白表达及肥大细胞数较病理分级Ⅰ、Ⅱ级组明显增加(P＜0.05).PAR-2与肥大细胞数量之间呈正相关(r=0.78,P＜0.01). 结论 UC的发生发展与PAR-2的表达、肥大细胞数量变化密切相关,PAR-2可能由肥大细胞分泌的类胰蛋白酶激活而参与UC的发病.
