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牙龈卟啉菌蛋白酶R重组表达产物在牙周炎中的作用
目的 构建蛋白酶R基因原核表达系统,初步探讨蛋白酶R( gingipain R,Rgp)与慢性牙周炎的关系.方法 构建Rgp原核表达系统,以重组表达的rRgp作用于人单核细胞THP-1株,用流式细胞术检测细胞膜表面CD-14表达的变化,并用酶联免疫吸附测定检测细胞分泌白细胞介素(IL)-1β水平的变化.结果 扩增的Rgp基因与已报道的基因序列进行比较,核苷酸序列和氨基酸序列的同源性均＞97％.THP-1细胞表达CD-14的平均荧光强度为68.97,rRgpAcat或rRgpB作用于THP-1细胞0.5h后,CD-14的平均荧光强度分别减少到45.30、46.47,差异有统计学意义(P＜0.05),rRgp对THP-1细胞分泌IL-1β的水平也有明显的阻断作用(P＜0.01).结论 成功构建了Rgp基因原核表达系统,rRgp蛋白酶能够降解CD-14,阻断THP-1细胞炎症因子的分泌,从而可能延缓炎症的进程,导致炎症的慢性化.
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牙龈成纤维细胞表达蛋白酶激活受体的类型及作用研究
目的 明确牙龈成纤维细胞表达蛋白酶激活受体(protease-activated receptors,PAR)的类型及PAR在牙周炎中的作用.方法 培养原代人牙龈成纤维细胞,反转录PCR法检测PAR在牙龈成纤维细胞中的表达.以重组蛋白酶R(recombinant gingipain R,rRgp)作用于牙龈成纤维细胞,实时定量反转录PCR法检测PAR表达水平在两种rRgp(rRgpAcat和rRgpB)作用前后(rRgpAcat组和rRgpB组)的变化,并用酶联免疫吸附测定法检测细胞分泌白介素6水平的变化,以相同体积的磷酸盐缓冲液组作为对照组.应用SPSS10.0统计软件对结果数据进行分析,采用两独立样本t检验比较反转录PCR获得的PAR表达水平的差异及酶联免疫吸附测定获得的IL-6表达水平的差异,以双侧P ＜0.05为差异有统计学意义.结果 牙龈成纤维细胞表达PAR-1和PAR-3,二者的表达水平在rRgpAcat和rRgpB作用前后发生明显变化,PAR-1相对表达量从1.04±0.31分别下降为0.67 ±0.11和0.31 ±0.11,PAR-3相对表达量从1.01 ±0.44分别下降为0.79 ±0.13和0.44±0.12;白介素6表达水平在蛋白酶作用8h时达峰值,对照组为(18.77±4.09) μg/L,rRgpAcat和rRgpB组分别为(179.36 ± 15.81)和(320.56±26.19) μg/L,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 牙龈成纤维细胞表达PAR-1和PAR-3,并参与牙周炎症反应,可能与牙周炎的早期急性炎症反应有关.
