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人牙龈上皮细胞诱导分泌β-防御素的信号通路研究
目的：研究牙龈上皮细胞在炎症因子IL-1β，TNF-α诱导下分泌β-防御素1，2，3的信号通路。方法取30岁以下因拔除第三磨牙或助萌需切除的牙龈，原代培养人牙龈上皮细胞，并用10μmol/L MAPK抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂BAY 11-7082孵育2 h，而后用150 ng/ml IL-1β或TNF-α诱导抑制剂孵育过的细胞24 h，实时荧光定量PCR检测β-防御素1，2，3的基因表达水平。结果在MAPK或NF-κB抑制剂存在的情况下，人牙龈上皮细胞经炎症因子IL-1β，TNF-α诱导后，HBD-1的表达量无明显变化；但HBD-2的表达量明显降低，MAPK抑制剂使牙龈上皮细胞在IL-1β和TNF-α诱导下分泌HBD-2的量分别下降81%和76%，NF-κB抑制剂使牙龈上皮细胞在IL-1β和TNF-α诱导下分泌HBD-2的量分别下降93%和95%；两种抑制剂对HBD-3的表达量表现出不同效应， MAPK抑制剂使牙龈上皮细胞在IL-1β和TNF-α诱导下分泌HBD-3的量分别下降65%和66%，而NF-κB抑制剂对HBD-3的表达量无明显影响。结论人牙龈上皮细胞较稳定的分泌HBD-1，不受外界炎症因子及信号通路抑制剂的影响。MAPK和NF-κB信号通路在HBD-2的诱导分泌中起了非常重要的作用；本研究中MAPK信号通路与HBD-3的诱导表达密切相关。
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槲皮素对HaCat细胞增殖及β-防御素和谷胱甘肽过氧化物酶表达的影响
目的 研究槲皮素(quercetin)对人永生化上皮细胞(HaCat细胞)增殖及其非特异性免疫分子表达的影响.方法 利用MTT法检测不同浓度槲皮素溶液作用对HaCat细胞增殖的影响,利用ELISA法检测在不同浓度槲皮素干预下的HaCat细胞培养上清液中β-防御素(β-DF)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的含量. 结果 100 μmol/L槲皮素对HaCat细胞的增殖有抑制作用,50 μmol/L以下的槲皮素对HaCat细胞的增殖无明显影响.HaCat细胞经过不同浓度的槲皮素处理48、72 h后,其细胞上清液中谷胱甘肽过氧化物酶的浓度与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),但β-防御素的表达在50.00 μmol/L和25.00 μmol/L槲皮素处理组上调. 结论 槲皮素具有增强细胞非特异免疫功能作用,其机制可能通过上调β-防御素的表达来实现.
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重症脓毒症患者感染真菌与β-防御素-1基因多态性的临床相关性研究
目的 研究β-防御素-1 (DEFBI)基因多态性与重症脓毒症患者感染真菌的临床相关性.方法 回顾性研究2014年5月至2017年5月ICU治疗的脓毒症患者200例,分为真菌感染组80例和未发生真菌感染的对照组120例.应用DNA直接测序、聚合酶联反应双引物等位基因特异性扩增法(PCR-ASA)或Taqman方法检测DEFB1基因-1816A/G、-390A/T、-52A/G、-44C/G、-20A/G等5位点在两组患者中的等位基因和基因型,用遗传分析法计算其单倍型的分布频率,ICU脓毒症患者感染真菌与遗传变异易感性的相关性采用Fisher或x2检验分析,风险度应用(OR)反映该遗传因素及其关联程度.结果 真菌感染组80例和对照组130例患者在年龄、性别构成比上无统计学差异(P＞0.05).DEFBI基因-1816A/G、-390A/T、-52A/G、-44C/G、-20h/G等5位点在两组患者中均遵守Hardy-Weinberg平衡,等位基因平率和基因型分布在对照组与真菌感染组之间差异无统计学意义(P＞0.05).5个位点中常见的单倍型在对照组和真菌感染组中无统计学差异(P＞0.05).结论 DEFBI基因等5位点与ICU重症脓毒症患者感染真菌无相关性.DEFBI基因遗传变异可能不是重症脓毒症患者感染真菌的重要遗传学位点.
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慢性鼻-鼻窦炎患者鼻黏膜β-防御素的表达及意义
目的 检测人 β-防御素(hBD)2,3,4在不同分型的慢性鼻-鼻窦炎(CRS)患者鼻黏膜和正常鼻黏膜上皮细胞中的表达,并明确各组间的差异,分析其在CRS的病因及疾病进展中的作用.方法 收集2015年3至12月在山西医科大学附属汾阳医院耳鼻喉科的住院患者,分为3组:正常对照组15例(鼻中隔矫正术时取中鼻甲外侧壁黏膜),CRS不伴鼻息肉组30例(取钩突黏膜),CRS伴鼻息肉组30例(取息肉组织),采用免疫组化染色法分别检测各组织中hBD的蛋白表达.结果 ①CRS各型及正常对照组鼻黏膜中hBD-2,3,4的蛋白均有表达,3组间hBD的蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05).CRS伴鼻息肉组hBD-2,4蛋白表达水平高于CRS不伴鼻息肉组,在正常鼻黏膜中表达低.CRS伴鼻息肉组患者hBD-3蛋白表达水平高于正常组,CRS不伴鼻息肉组表达低.②免疫组化染色显示,hBD-2,3,4主要在腺上皮、间质细胞、炎性细胞中表达.结论 ①鼻黏膜上皮细胞中hBD-2,3,4呈诱导性表达,CRS不伴鼻息肉组hBD-3表达低,可能与激素抑制其表达有关.②免疫组化染色显示hBD-2,3,4蛋白主要在腺上皮、间质细胞及炎性细胞中广泛表达,这主要与细胞分泌防御素参与鼻黏膜免疫有关.
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β-防御素--上皮组织天然的化学防御屏障(文献综述)
产生抗微生物肽(antimicrobial peptide)是真核生物宿主防御的一个重要途径.防御素(defensins)是重要的一类抗微生物肽,包括四个亚家族,即植物防御素、昆虫防御素、α-防御素和β-防御素.其中β-防御素主要分布在脊椎动物的皮肤、粘膜等上皮组织,构成机体抵御微生物侵袭的第一道化学屏障,在组织烧伤等创伤感染中发挥重要作用.本文主要对β-防御素的结构、功能、分布和作为抗生素肽的应用前景进行综述.
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白色念珠菌白斑中核苷酸结合寡聚化结构域1、核因子κB及人β-防御素的表达
目的 研究白色念珠菌白斑和无白色念珠菌感染的白斑患者组织中核苷酸结合寡聚化结构域1 (nucleotide-binding oligomerization domain 1,NOD1)、核因子κB及人β-防御素1,2,3的表达,探讨白色念珠菌感染对口腔白斑组织中NOD1信号通路内关键蛋白和人β-防御素表达的影响.方法 收集40例口腔黏膜白斑组织样本,采用HE染色、过碘酸-雪夫(periodic acid-Schiff,PAS)染色、真菌银染法和免疫组化法检测,四项均阳性者19例,判定为白色念珠菌白斑,其余21例判定为无白色念珠菌感染白斑.采用蛋白质印迹法检测白色念珠菌白斑和无白色念珠菌感染的白斑组织中NOD1和核因子κB的表达水平并进行比较.采用免疫组化法检测白色念珠菌白斑和无白色念珠菌感染的白斑组织中NOD1、核因子κB和人β-防御素1,2,3的表达,图像分析测定平均吸光度值,对平均吸光度值行独立样本t检验,检验水准为双侧α=0.05.结果 在40例口腔白斑中,白色念珠菌阳性率为48％(19/40).蛋白质印迹法结果显示白色念珠菌白斑中NOD1、核因子κB蛋白表达水平较无白色念珠菌感染的白斑显著降低.免疫组化结果表明,无白色念珠菌感染的白斑中NOD1、核因子κB和人β-防御素1,2,3染色的吸光度值分别为0.31 ±0.02、0.47±0.03、0.42±0.02、0.53±0.04、0.47±0.03,白色念珠菌白斑中NOD1、核因子κB和人β-防御素1,2,3染色的吸光度值分别为0.25±0.01、0.30±0.02、0.35±0.02、0.42±0.03、0.36±0.02,白色念珠菌白斑组织中NOD1、核因子κB和人β-防御素1,2,3的表达水平均较无白色念珠菌感染组显著减弱,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 白色念珠菌感染可能通过抑制NOD1信号通路降低口腔白斑组织中人β-防御素的表达.
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人绒毛及胎盘组织中β-防御素-3基因表达
目的检测人β-防御素-3基因在妊娠绒毛及胎盘组织中的表达.方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常妊娠早孕绒毛、蜕膜及晚孕胎盘、胎膜及脐带组织中HBD-3的表达,同时用甘油醛-3磷酸脱氢酶作内参照.结果HBD-3在绒毛、胎盘及胎膜组织中均有表达,但在蜕膜、脐带组织中不表达.结论HBD-3在妊娠组织中的表达,提示其在妊娠期内环境的稳定、天然抗感染免疫中发挥重要作用.
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芍药苷增高小鼠恶唑酮结肠炎黏膜中β-防御素表达并减轻病变
观察芍药苷对恶唑酮诱导的实验性结肠炎(IBD)小鼠的结肠组织黏膜中β-防御素-2(HBD-2)、IL-6和IL-10表达的影响.通过建立BALB/c小鼠恶唑酮结肠炎模型,并将其分为正常对照组、恶唑酮诱导组、5-氨基水杨酸(5-ASA)组、芍药苷(20、10及5 mg·kg~(-1))治疗组;进行疾病活动指数(DAI)和组织学评分(HGC);使用免疫组织化学、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测结肠黏膜中HBD-2和细胞因子IL-10、IL-6蛋白及其mRNA的表达.结果显示,恶唑酮诱导组的DAI和HGC显著高于正常对照组(P<0.01),芍药苷各组和5-ASA组的评分均显著低于恶唑酮诱导组(P<0.05,P<0.01);恶唑酮诱导组的HBD-2和IL-6表达较正常对照组均显著升高.且与恶唑酮结肠炎症DAI和HGC呈正相关(Pearson r=0.728(DAI/HBD-2),Pearson r=0.758(DAI/IL-6),P<0.01,respectively;Pearson r=0.819(HGC/HBD-2),Pearson r=0.825(HGC/IL-6),P<0.01,respectively);恶唑酮诱导组的IL-10表达较正常对照组显著降低(P<0.01),且与恶唑酮结肠炎症DAI和HGC呈负相关(Pearson r=-0.789(DAI/IL-10),Pearson r=-0.725(HGC/IL-10),P<0.01,respectively);芍药苷各组和5-ASA组均能显著下调恶唑酮诱导组结肠黏膜部位HBD-2、IL-6含量和上调IL-10蛋白和mRNA的表达.结果表明,芍药苷通过调节HBD-2、IL-6和IL-10的表达来减轻或改善恶唑酮结肠炎小鼠的症状.
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rhBD3-BPI对7株临床分离革兰阴性菌的抗菌活性
目的:探讨rhBD3-BPI是否对革兰阴性菌具有抗菌活性.方法:采用密度梯度稀释法检测rhBD3-BPI对铜绿假单胞菌标准株和不同来源的临床多药耐药革兰阴性菌株的抗菌活性,确定其小抑菌浓度(MIC)和小杀菌浓度(MBC).以基因工程重组的人β-防御素3(rhBD3)作为对照.结果:rhBD3-BPI对各待检菌的MIC在1～4 μg·mL-1之间,MBC在4～8 μg·mL-1之间.rhBD3对革兰阴性菌的MIC在4～8 μg·mL-1之间,MBC在8～16μg·mL-1之间.rhBD3-BPI和rhBD3对G-菌的小抑菌浓度和小杀菌浓度有统计学差异(分别为P=0.006 0、P=0.005 3),rhBD3-BPI对G-1菌的小抑菌浓度和小杀菌浓度低于rhBD3对G-1菌的小抑菌浓度和小杀菌浓度.结论:rhBD3-BPI和rhBD3均对革兰阴性细菌具有显著的抗菌活性,两者之间具有显著差异.
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β-防御素及其在耳鼻咽喉科中的研究
β-防御素是一种具有广谱抗菌活性的内源性抗生素肽,目前已发现其在许多器官组织的黏膜防御中有重要作用.β-防御素在黏膜上皮广泛表达,在黏膜抗感染防御机制中扮演重要角色,其功能失活或其基因表达障碍可能与黏膜感染或其他感染性疾病的发病机制密切相关,也可能参与黏膜正常防御功能.本文综述了防御素的分子结构、抗菌活性、基因表达及其在耳鼻喉组织中的研究进展,为临床防治提供新的思路.
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长爪沙鼠β-防御素(defβ-83)基因的克隆与鉴定
目的 克隆长爪沙鼠β-防御素基因序列,并对其进行鉴定及分析.方法 从长爪沙鼠小肠中提取总RNA,根据GeneBank中大小鼠的β-防御素的基因序列,通过防御素基因的保守性设计引物,采用RT-PCR技术得到预期的PER产物,将所得的片段进行克隆、测序,并应用相关生物信息学软件对序列进行鉴定和分析,序列提交genbank.结果 Blast比较发现终测序的结果与小鼠β-防御素-1和大鼠β-防御素-1的同源性全都大于80%,genebank登录号为EU834052.结论 经测序鉴定证实该PCR产物为长爪沙鼠β-防御素基因1的一部分,本研究为深入探讨长爪沙鼠β-防御素的生物学活性奠定基础.
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维生素D_3对丝毛乌鸡的3个β-防御素基因在不同组织中表达的影响
抗菌肽是鸡先天免疫的重要效应分子,在宿主被致病性微生物入侵时起重要的作用~([1-3]).随着研究的深入,发现通过添加维生素D_3(VD_3)可提高内源性抗菌肽表达.其调控通路存在以下途径:激活相应TLR→诱导Cyp27B1表达→形成1,25-(OH)_2-D_3→激活VDR→调节抗菌肽表达~([4-6]).
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慢性牙周炎患者牙周基础治疗前后龈沟液(GCF)中β-防御素分析
目的 探析慢性牙周炎患者牙周基础治疗前后龈沟液(GCF)中β-防御素的价值及可能的影响因素.方法 选取2015年6月—2017年2月44例在本院检查、治疗的慢性牙周炎患者,随机分为对照组与实验组各22人,按其纳入标准各组均选择20位点,分别在牙周基础治疗前后记录各个GCF的临床变化指标[采用酶联免疫吸附法测定其GCF中的 β-防御素及白细胞介素(IL-1β)含量].结果 实验组患者牙周基础治疗后的HBD含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),IL-1β 含量水平低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05).结论 针对慢性牙周炎患者进行牙周基础治疗后,其龈沟液中HBD表达升高,IL-1β 水平降低,可为临床疾病的诊断与治疗提供参考依据.
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β-防御素与呼吸系统的防御和损伤
β-防御素是近年来发现的一类广泛存在于皮肤和黏膜上皮组织中具有广谱抗微生物活性的小分子多肽,具有广谱的抗菌、抗病毒活性和非特异的细胞毒性作用,是先天性和获得性免疫系统的重要组成部分.本文主要总结与呼吸系统相关的内容,对β-防御素的分布、结构、表达、生物学作用、作用机制及其临床应用前景等进行简述.
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人β-防御素与下呼吸道黏膜免疫
细菌耐药现象日益严重,如何降低耐药菌产生和怎样治疗耐药菌感染是一个世界性难题.近10年来人们发现了β-防御素,它具有广谱抗微生物作用,除了极个别病原体对其天然耐药外,未发现获得性耐药菌,下面主要对人β-防御素1、β-防御素2、β-防御素3的分子结构、生物学活性、基因表达调控、β-防御素在下呼吸道抗感染中的作用及展望进行综述.
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β-防御素-2在感染性疾病中应用的研究进展
人体β-防御素-2(human β-defensin-2,HBD-2)是一种可诱生型小分子抗菌肽.近年来的研究表明,HBD-2不仅对普通病原微生物具有抗菌作用,还对目前日益增多的多重耐药菌具有一定的抗菌优势.HRD-2在感染、炎症中的特性使其在某些疾病的发生、发展与转归过程中起到一定的预后评估作用,并具有某种生物标记物的潜在价值.
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α-防御素基因和β-防御素基因在外周血白细胞中的不同表达
目的观察健康人外周血白细胞中α-防御素和β-防御素基因表达的阳性率及外周血白细胞中α-防御素和β-防御素两大家族基因表达的特征,探讨其在感染免疫中的作用.方法51名献血员被随机纳入研究中,在体外用100 ng/ml内毒素刺激其外周血白细胞,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定0、1、3、6、12、24 h时白细胞防御素信使RNA(mRNA)的水平,DNA印迹分析和序列测定法证实核苷酸扩增产物的特异性.结果在无刺激时,所有研究对象的外周血白细胞均检测到α-防御素1-3 mRNA的转录,而无β-防御素mRNA的转录.内毒素刺激3 h后,88.2%研究对象的外周血可检测到β-防御素1 mRNA的转录,39.2%β-防御素2 mRNA表达阳性,并于刺激6 h时β-防御素1和2mRNA水平达到峰值,而α-防御素1-3 mRNA的水平并无显著性改变.α-防御素1-3基因在外周血白细胞中呈持续性表达,而β-防御素1-2呈可诱导性表达,β-防御素1和2基因的可诱导性表达存在个体间差异.结论α-防御素和β-防御素的不同表达特征与其基因调控顺式作用成分不同有关,提示两大类防御素在感染免疫中具有不同的作用.
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双下肢缺血预处理对大鼠肺脏损伤的影响
目的 观察大鼠下肢缺血再灌注后肺组织β-防御素-2(BD-2)mRNA的表达情况,同时下肢缺血预处理对BD-2的表达是否有影响.方法 18只健康雄性Wistar 大鼠随机分为3组:下肢缺血再灌注组(C组),下肢缺血预处理组(IPC组),假手术组(S组).采用动脉钳阻断双侧髂外动脉的方法来制备双下肢缺血模型.C组阻断120 min后再灌注150 min;IPC组双侧髂外动脉分离后,先缺血5 min,再复灌5 min,重复3次后,进行120 min缺血,150 min再灌注;S组仅分离不阻断.分别于实验结束时处死大鼠,提取肺组织、支气管肺泡灌洗(BAL)液和血清;计算肺通透性指数(PPI)、聚合酶链反应(PCR)法测定肺组织BD-2 mRNA表达水平,Western Blot法检测肺组织BD-2和肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量.结果 与S组相比,C组PPI明显升高;BD-2 mRNA表达上调;同时BD-2和TNF-α含量增加;IPC组与C组相比,PPI的升高和BD-2的表达都有所下降.结论 大鼠双下肢缺血再灌注后肺组织BD-2 mRNA表达上调,同时肺组织PPI升高;缺血预处理可以减轻双下肢缺血再灌注引起的肺损伤.
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大鼠肝脏缺血再灌注后肺组织β-防御素-2mRNA的表达
目的 探讨大鼠肝脏缺血再灌注后肺组织是否有β-防御素(BD)-2的表达.方法 12只健康雄性Wistar大鼠随机分为肝脏缺血再灌注组(C组)和假手术组(S组),每组6只.制作70%肝脏缺血再灌注模型,3 h后放血处死大鼠,提取肺组织、支气管肺泡灌洗(BAL)液和血清;计算肺通透性指数(PPI)、聚合酶链反应(PCR)法测定肺组织BD-2 mRNA表达水平、Western-Blot法检测肺组织BD-2蛋白的含量.结果 与S组相比,C组PPI明显升高;BD-2 mRNA表达上调.结论大鼠肝脏缺血再灌注后肺组织BD-2mRNA表达上调,同时肺组织PPI升高、BD-2蛋白含量也明显增加.
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大鼠肝脏缺血再灌注后肺组织β-防御素-2mRNA的表达
目的 探讨大鼠肝脏缺血再灌注后肺组织是否有β-防御素(BD)-2的表达.方法 12只健康雄性Wistar大鼠随机分为肝脏缺血再灌注组(C组)和假手术组(S组),每组6只.制作70%肝脏缺血再灌注模型,3 h后放血处死大鼠,提取肺组织、支气管肺泡灌洗(BAL)液和血清;计算肺通透性指数(PPI)、聚合酶链反应(PCR)法测定肺组织BD-2 mRNA表达水平、Western-Blot法检测肺组织BD-2蛋白的含量.结果 与S组相比,C组PPI明显升高;BD-2 mRNA表达上调.结论大鼠肝脏缺血再灌注后肺组织BD-2mRNA表达上调,同时肺组织PPI升高、BD-2蛋白含量也明显增加.
