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GDNFR-α在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中分布的免疫组织化学研究
目的观察胶质细胞源性神经营养因子受体-α(GDNFR-α)在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中的分布,探讨GDNF对脊髓运动神经元和感觉神经元的作用. 方法原代培养脊髓和背根节神经元,5d后行抗GDNFR-α多克隆抗体免疫组织化学SP法染色. 结果 GDNF免疫反应存在于体外培养的脊髓神经元、背根节神经元以及胶质细胞中. 结论 GDNF可能对脊髓神经元、背根节神经元和胶质细胞的生理功能具有一定的调节作用.
关键词： 胶质细胞源性神经营养因子受体-α 脊髓 背根节 大鼠 -
成年肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因鼠脊髓增殖细胞的分化
目的 探讨成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内增殖细胞的类型及分化情况. 方法 对ALS转基因鼠发病期进行BrdU标记,分别于不同时间点取材,冷冻切片,应用免疫荧光双标及三标染色技术检测ALS转基因鼠病变进展过程中脊髓内增殖细胞的分化情况. 结果 成年ALS转基因鼠发病期脊髓的中央管、灰质、白质均未检测到BrdU/DCX双标记阳性细胞和BrdU/NeuN双标记阳性细胞.灰质、白质和中央管周围检测到大量NG2阳性细胞,阳性细胞数量随病变进展逐渐减少,NG2阳性细胞多呈BrdU阳性表达;可检测到少量BrdU/A2B5双标记阳性细胞;ALS转基因鼠发病期脊髓BrdU/GFAP双标记阳性细胞较多,部分双阳性细胞呈Nestin阳性,而野生型鼠脊髓内未检测到BrdU/GFAP双标记阳性细胞.结论 神经退行性病变激活ALS转基因鼠脊髓内源性增殖细胞向神经胶质细胞方向分化,未检测到向神经元方向分化,内源性增殖细胞尚不能有效地促进退行性病变的修复.
关键词： 肌萎缩脊髓侧索硬化症 脊髓 分化 免疫荧光 转基因鼠 -
脊髓横断损伤后再生基因蛋白的表达
目的 探讨再生基因蛋白(Reg-2)在脊髓横断损伤后表达的时序变化及其可能的意义.方法 SD雌性大鼠45只,实验分为脊髓损伤组(30只)、假手术组(15只).脊髓损伤组大鼠麻醉后于T9、T10脊髓节段之间用手术刀完全切断脊髓,建立大鼠脊髓横断损伤模型;假手术组大鼠只打开推板,不损伤脊髓,为阴性对照.分别于脊髓损伤后1h、1d、3d、7d、14d用多聚甲醛灌注后,以T10节段为中心取出长约2cm的脊髓.制作冠状切面及横断切面冷冻切片.分别通过免疫组织化学、免疫荧光和Western blotting法检测Reg-2的表达水平及部位,并与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、少突胶质细胞系转录因子2(Olig2)以及神经肽Y(NPY)、降钙素基因相关肽(CGRP)、神经性生长蛋白-43(GAP-43)等神经细胞特异性标记物做双重标记.结果 脊髓损伤组中,表达Reg-2的阳性细胞随着时间的推移,先增加后减少,脊髓损伤后的1周内维持在较高水平,其中第3d后角神经元的Reg-2表达高,第7d前角神经元Reg-2的表达高.结论 Reg-2可能参与了脊髓损伤后早期的神经再生和重建进程.
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成年肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因鼠脊髓细胞增殖的研究
目的 观察成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内源性细胞的增殖和存活情况.方法对ALS转基因鼠进行BrdU注射,分别于不同时间点取材,冷冻切片,应用免疫荧光染色技术检测脊髓内细胞的增殖、分布和存活情况. 结果成年ALS鼠脊髓的中央管、灰质、白质均可检测到BrdU阳性细胞,经常可检测到形状相似、成对出现的细胞.在灰质内,BrdU阳性细胞主要分布于脊髓前角.在白质内,BrdU阳性细胞散在分布.前角ALS鼠脊髓内BrdU阳性细胞数量较野生型鼠多.BrdU末次注射后1d、14d均可检测到BrdU阳性细胞,但细胞数量逐渐减少,28d ALS鼠脊髓内仍可检测到少量BrdU阳性细胞,主要分布于中央管部位.增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞的分布和变化规律与BrdU阳性细胞一致.在95d龄ALS鼠(BrdU末次注射1d后),脊髓中Nestin阳性细胞较野生型鼠多,多数Nestin阳性细胞分布于脊髓前角,某些细胞呈BrdU/Nestin双标阳性.在BrdU注射后14d、28d脊髓中,未检测到BrdU/Nestin双标阳性细胞. 结论神经退行性病变可激活ALS转基因鼠脊髓的细胞增殖,且细胞存活可达28d.
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哮喘小鼠肺内及内脏感觉传入系统SH2-Bβ的表达
目的研究SH2-Bβ在哮喘小鼠肺及内脏感觉传入系统(C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角)的表达,探讨SH2-Bβ在哮喘发病中的作用.方法 BALB/c小鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组,每组15只.利用免疫组织化学方法测定两组小鼠肺、C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ的免疫反应变化;用免疫印迹法(Western blotting)检测肺及C7～T5节段脊髓SH2-Bβ及神经生长因子(NGF)的免疫反应变化;Metamoph图像分析系统对结果进行分析.结果免疫组织化学结果显示哮喘小鼠肺、C7～T5节段脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ免疫阳性产物平均光密度值分别为0.806±0.023、0.766±0.018、0.547±0.014,明显高于对照组(0.243±0.018、0.131±0.011、0.215±0.029)(P＜0.01).Western blotting显示SH2-Bβ及NGF在哮喘小鼠的C7～T5节段脊髓及肺内表达明显强于对照组;正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.346±0.017和0.512±0.018,哮喘组为0.738±0.021和1.526±0.022.NGF在正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.357±0.021和0.734±0.013,哮喘组为1.445±0.015和1.265±0.018;且SH2-Bβ与NGF光密度值呈正相关(r=0.651,P＜0.01).结论结果提示,SH2-Bβ在哮喘小鼠肺、C7～T5节段脊神经节及对应的脊髓后角过表达,可能是NGF参与哮喘发病的重要信号分子.
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神经激肽B受体在猫三叉神经脊束核尾侧亚核和脊髓内的分布
目的了解神经激肽B受体(NK3受体)与伤害性信息的传递和调制的可能关系,调查NK3受体在三叉神经尾侧亚核和脊髓内的分布状况. 方法免疫组织化学技术. 结果 NK3受体样免疫反应产物在三叉神经尾侧亚核和脊髓内的分布基本一致.致密的免疫反应产物分布于Ⅱ内层(inner part),而Ⅰ层和Ⅱ外层(outer part)染色浅淡.NK3受体阳性神经元胞体主要见于三叉神经尾侧亚核和脊髓的Ⅰ层和Ⅱ层,少量分布于脊髓后角深层. 结论提示三叉神经尾侧亚核和脊髓内的NK3受体可能与初级伤害性信息的传递和调控有密切关系.
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cDNA微阵列技术比较胚胎大鼠脑和脊髓神经干细胞的基因差异表达
目的从分子水平探讨脑和脊髓来源的神经干细胞(NSCs)的生物学特性,并鉴定这两种来源的NSCs的分子表达差异.方法应用cDNA微阵列技术对脑和脊髓来源的NSCs的基因表达情况进行检测和比较,在成功分离、培养和鉴定脑和脊髓两种来源的NSCs的基础上,抽提细胞总RNA并纯化、定量,以32P逆转录标记合成cDNA探针.AltasTM cDNA Expression Array(Clontech Co)与探针杂交、洗膜后在磷屏上曝光并扫描成像,以Arrayvision5.1软件分析杂交结果.结果cDNA阵列膜上覆盖的1 176个基因中,绝大部分基因表达无明显差异,但也有14个基因在两种来源的NSCs中的表达有显著差异,其中8个在脑来源的NSCs中表达较高,6个在脊髓来源的NSCs中表达较显著.在两种来源的NSCs都明显表达的基因中,许多分子如P-选择素(P-selectin)、钙黏素(cadherin)、乙酰胆碱受体α、cyclins、某些转录因子和原癌基因等可能在NSCs的自我更新(增殖)、神经球形成和保持不分化状态中起重要作用.结论两种来源的NSCs的生物学特性基本相同,但也存在一定的差异.
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Ⅰ型和Ⅱ型囊泡膜谷氨酸转运体在大鼠、猫和猴脊髓内的定位分布
目的观察Ⅰ型和Ⅱ型囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1和VGluT2)在大鼠、猫和猴脊髓内的定位分布.方法免疫组织化学技术. 结果 VGluT1和VGluT2在大鼠、猫和猴脊髓灰质内均有分布.VGluT1在大鼠和猫脊髓背角Ⅱ层内侧部(ⅡI)及Ⅲ～Ⅵ层的内侧部分布为密集,在Ⅰ层和Ⅱ层外侧部(Ⅱo)的分布较稀疏,其他层能观察到中等密度的分布.而在猴脊髓,VGluT1的分布与大鼠和猫有所不同,Ⅰ层、ⅡI层、Ⅲ层及Ⅳ～Ⅵ层内侧部分布密集,在Ⅱ o层及Ⅳ～Ⅵ层外侧部较稀疏,甚至观察不到阳性结构.在猴的脊髓前角,仅在Ⅸ层观察到较稀疏的阳性产物,而其他层未见阳性产物.除此之外,在猴的脊髓后索内侧部能见到散在的阳性结构,而在大鼠和猫未观察到.VGluT2阳性产物在3种动物脊髓灰质内均呈中等强度的分布,其中在Ⅰ层、Ⅱ层和Ⅹ层内呈密集分布,在Ⅲ～Ⅵ层内侧分布较稀疏.在猴的背角深层外侧部,阳性产物非常少.在大鼠的外侧脊核(LSN)能见到中等强度的VGluT2阳性产物,而在猫和猴中并未观察到.在3种动物脊髓中,VGluT1和VGluT2阳性产物均呈点状分布. 结论 VGluT1和VGluT2在3种动物脊髓内均有分布,但其分布有一定的种属差异.提示它们可能在不同动物脊髓兴奋性神经元的活动中发挥重要作用.
关键词： 囊泡膜谷氨酸转运体定位分布 Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体 Ⅱ型囊泡膜谷氨酸转运体 脊髓 免疫组织化学 大鼠 猫 猴 -
nNOS、VEGF和Bcl-2蛋白在人胚胎发育中脊髓前角的表达及意义
目的 探讨神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白在人胚胎发育早期脊髓前角中的分布规律及其表达意义. 方法 应用免疫组织化学法检测第2、3、4月龄段,人胚胎脊髓前角中nNOS、VEGF和Bcl-2蛋白的表达. 结果 在第2～4个月龄段,nNOS和Bcl-2蛋白在人胚胎脊髓前角组织细胞中由弱阳性表达逐渐变为阳性表达.在第2个月龄段,VEGF蛋白在人胚胎脊髓前角组织中均呈阴性表达;第3～4个月龄段,VEGF蛋白在人胚胎脊髓前角组织细胞中由弱阳性表达逐渐变为阳性表达. 结论 nNOS、Bcl-2和VEGF蛋白与人胚胎脊髓前角神经元的生长发育关系密切.
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神经病理性痛大鼠脊髓背角缝隙连接蛋白表达变化及鞘内注射甘珀酸的镇痛作用
目的 研究慢性神经病理性痛大鼠脊髓背角内缝隙连接蛋白家族(Cx)中Cx43和Cx32的表达变化,以及鞘内注射缝隙连接阻断剂甘珀酸(CBX)的镇痛作用.方法 成年SD大鼠50只,分为正常对照组、假手术组和坐骨神经分支选择性损伤组(SNI).手术前1d、术后3d、5d、10d、20d和30d,观察大鼠行为并检测机械刺激缩足反射阈值(PWMT).15只大鼠于术后10d、20d、30d取脊髓腰段进行免疫印迹检测,另15只大鼠于术后10d、20d、30d取脊髓腰段进行免疫荧光染色,检测腰段脊髓背角内Cx43和Cx32表达的变化.有10只大鼠先进行鞘内插管,后行SNI手术,术后20d向鞘内注射生理盐水或CBX,观察大鼠PWMT的变化. 结果 SNI大鼠手术侧PWMT阈值较非手术侧或假手术组明显降低,术后20d达低值.SNI大鼠手术侧脊髓背角内Cx43、32表达增多,明显高于非手术侧和假手术组背角.鞘内注射CBX 3h后,PWMT平均阈值由(2.5±1.0)g上升到(20.0±3.2)g,有抑制效应, 而生理盐水组则无抑制效应.结论 脊髓背角内的缝隙连接在因外周神经损伤引起的神经病理性痛中起重要作用.
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本体觉传入纤维在小鼠脊髓内的发育变化
目的观察本体觉传入纤维在小鼠脊髓内投射和终止的发育变化. 方法采用小牛白蛋白(PV)免疫组织化学染色特异标记本体觉传入纤维,用免疫荧光单标记和双标记方法观察本体觉传入纤维在脊髓内的生长模式以及与运动神经元的关系.染色后的切片用激光共聚焦显微镜进行观察. 结果PV样免疫阳性(LI)本体觉纤维早于胚胎(E)14 d出现在后索,E15时进入脊髓灰质.E16时,已有较多的PV-LI纤维到达中间带灰质和前角(VH).此后,随着发育阶段的增长,脊髓VH内PV-LI本体觉纤维和终末的数量和密度逐渐增加,并在生后早期P0-P7达到高水平.P14后,上述本体觉纤维和终末的数量逐渐减少.本体觉传入纤维的终末在E17时开始与脊髓VH运动神经元形成密切的接触.结论本体觉传入纤维在脊髓内的定位模式形成于小鼠胚胎后期和生后早期,本研究结果为深入理解脊髓反射运动环路的发育特点提供了依据.
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CNTF基因在大鼠脊髓中的表达及生后发育的变化
目的观察CNTF基因在大鼠脊髓中的表达以及生后发育过程中的变化. 方法以地高辛标记(dig-)CNTF cDNA为探针,采用原位杂交法,观察C NTF mRNA在大鼠脊髓中的分布;采用RT-PCR法,半定量分析大鼠生后发育过程中,脊髓CNT F mRNA表达水平的变化. 结果 CNTF mRNA原位杂交阳性信号存在于正常大鼠脊髓白质的腹索、外侧索周边的部分胶质细胞中;灰质中未能发现阳性杂交信号.RT-PCR结果显示,大鼠生后1 ?d脊髓组织中即可见CNTF mRNA表达,但表达量较低;出生15?d表达量迅速增加;30?d时高;60?d时的表达量有下降的趋势. 结论大鼠脊髓白质的部分胶质细胞可表达CNTF mRNA;大鼠出生后1d C NTF mRNA即有表达,之后随脊髓的发育而呈动态变化的趋势.
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大鼠腰髓背角星形胶质细胞及神经元对一侧胫、腓骨骨折的反应及其相互关系
目的研究大鼠脊髓内星形胶质细胞及神经元对一侧胫、腓骨骨折的反应及相互关系. 方法应用细胞免疫组织化学方法,观察脊髓内胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、Fos蛋白双标记以及蛋白激酶C(PKC)在左侧胫、腓骨骨折后不同时程的表达变化. 结果 1.左侧胫、腓骨骨折后,GFAP阳性反应产物主要分布于同侧腰髓背角的星形胶质细胞胞浆,Fos阳性产物在其胞核也有表达,且以浅层为主,神经元的胞核也有Fos阳性产物;2. Fos-LI神经元与GFAP/Fos-LI星形胶质细胞的分布基本一致,两者关系密切;3. GFAP/Fos-LI星形胶质细胞表达高峰期在骨折后45min,而Fos-LI神经元的表达高峰期在骨折后90min;PKC-LI星形胶质细胞出现及达到高峰的时间比PKC-LI神经元要早. 结论腰髓背角的星形胶质细胞参与了下肢骨折伤害性刺激的应激反应及调节过程,而且Fos-LI、PKC-LI的表达早于神经元,可能主动地影响神经元的活动.
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Nogo(N-18)在成年大鼠三叉神经节、背根节及腰段脊髓中分布的免疫组织化学研究
目的观察Nogo在成年大鼠三叉神经节、背根节及腰段脊髓中的分布,探讨其存在的意义.方法采用抗Nogo(N-18)多克隆抗体免疫组织化学SP法. 结果成年大鼠三叉神经节、背根节感觉神经元胞浆和胞核以及腰段脊髓灰质神经元胞核内出现Nogo免疫反应.结论Nogo免疫反应存在于大鼠三叉神经节、背根节感觉神经元胞浆和胞核以及腰段脊髓灰质神经元胞核内,应重新认识Nogo的功能.
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蛋白激酶Cγ在成年大鼠延髓和脊髓白质中的分布
目的 观察蛋白激酶Cγ亚型(PKCγ)在成年大鼠延髓和脊髓白质内的分布.方法 免疫组织化学ABC法显示PKCγ免疫阳性物质在延髓和脊髓颈、胸、腰、骶段白质内的表达和分布.结果 PKCγ免疫阳性物质分布于锥体、锥体交叉及脊髓颈、胸、腰、骶段后索腹侧中;延髓和脊髓背角神经元中也有PKCγ免疫阳性物质存在.结论 PKCγ免疫阳性反应产物广泛分布于成年大鼠延髓和脊髓白质内的皮质脊髓束中.PKCγ免疫阳性反应产物在延髓锥体和脊髓后索内的定位与大鼠皮质脊髓束的位置和走行一致,提示其在运动神经传导通路中可能起着重要作用.
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代谢型谷氨酸受体7亚型在大鼠中枢神经系统内的分布
目的为研究代谢型谷氨酸受体在中枢神经系统内的功能作用提供形态学依据. 方法用免疫组织化学技术,在光学显微镜下观察代谢型谷氨酸受体7亚型(mGluR7)在大鼠脑和脊髓内的分布. 结果 mGluR7阳性浓染的神经元胞体和纤维主要密集分布于Calleja岛、海马、齿状回、内侧缰核、橄榄顶盖前核、上丘带状层、三叉神经尾侧亚核浅层、三叉旁核、中缝大核、中缝苍白核、蓝斑、脊髓背角浅层和外侧脊核.呈中等强度染色的神经元胞体和纤维见于嗅结节、前嗅核、梨状皮质、隔伞核、终纹床核、下丘脑外侧区、下丘脑室旁核、乳头体上核、乳头体内、外核、丘脑大部分核团、内外侧膝状体、视束核、红核、黑质、脚间核、桥核、臂旁外侧核、上橄榄复合体、斜方体核、三叉神经运动核、面神经核、疑核、耳蜗核、前庭核簇、楔束外核、孤束核、舌下神经核、舌下神经前置核、中缝隐核、延髓网状结构、小脑蒲肯野细胞层、脊髓中间带外侧核、Onuf核和中央管周围灰质.此外,在许多脑区还可见淡染的和散在分布的阳性胞体和纤维. 结论 mGluR7广泛分布于大鼠中枢神经系统内,提示它在谷氨酸引起的兴奋性信息传递中可能起着重要作用.
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脑红蛋白在成年大鼠脊髓中的分布
目的 观察脑红蛋白(NGB)在成年大鼠脊髓中的分布.方法 制备成年大鼠脊髓的冰冻切片,用免疫组织化学染色方法研究NGB蛋白在成年大鼠脊髓内的分布及细胞定位.结果 在脊髓的颈、胸、腰段,NGB免疫反应阳性细胞主要分布于脊髓灰质中,其范围包括灰质脊髓前角、中间带和后角.NGB免疫反应阳性物质广泛存在于脊髓灰质神经元的胞浆中.结论 NGB蛋白在大鼠脊髓灰质有广泛的表达,提示NGB在脊髓功能活动中可能起重要作用.
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大鼠腰骶髓和延髓星形胶质细胞及神经元对慢性结肠炎的反应
目的探讨大鼠腰骶髓和延髓星形胶质细胞及神经元对慢性结肠炎的反应,及反应性星形胶质细胞和反应性神经元之间的关系.方法成年雄性SD大鼠,实验组(n=17)给予三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠诱导结肠炎;对照组(n=16)给予生理盐水灌肠.免疫组织化学法显示大鼠腰骶髓和延髓内胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性星形胶质细胞和Fos阳性神经元.结果TNBS灌肠后,GFAP阳性星形胶质细胞主要分布在脊髓背角浅层(Ⅰ～Ⅱ层)、中间外侧核(Ⅴ层)、后连合核(Ⅹ层)和腹角外侧核(Ⅸ层).Fos阳性神经元集中分布在背角深层(Ⅲ～Ⅳ,Ⅴ～Ⅵ层).在延髓,两者均主要分布在由孤束核、中间网状带和腹外侧区组成的延髓内脏带(MVZ).TNBS灌肠后3、7、14 d,脊髓中GFAP阳性细胞密度明显高于对照组(P＜0.05).TNBS灌肠后3 d,延髓中GFAP阳性细胞密度明显高于对照组(P＜0.05).TNBS灌肠后28 d,脊髓和延髓中GFAP阳性细胞密度下降,与对照组无显著性差异(P＞0.05).结论结肠炎性刺激引起脊髓和延髓中星形胶质细胞激活.随着结肠炎的恢复,星形胶质细胞的反应性下降.在延髓内脏带,反应性星形胶质细胞与反应性神经元关系密切.
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孤儿受体酪氨酸激酶在成年大鼠腰段脊髓和背根节中的分布
目的观察孤儿受体酪氨酸激酶(Ret) 在成年大鼠腰段脊髓和背根节中的分布,探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对大鼠脊髓和背根节神经元的作用. 方法采用Ret抗体免疫组织化学ABC法. 结果 Ret免疫反应存在于成年大鼠腰段脊髓神经元和背根节神经元中. 结论 Ret在大鼠腰段脊髓和背根节神经元中有一定的分布.
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肿瘤抑制因子PTEN蛋白在成年大鼠腰段脊髓和背根节中的表达与分布
目的观察肿瘤抑制因子PTEN蛋白在成年大鼠腰段脊髓和背根节中的表达和分布. 方法免疫组织化学ABC法显示大鼠脊髓和背根神经节中PTEN阳性免疫反应产物. 结果背根节神经元及穿越背根节神经纤维轴突有阳性免疫反应产物存在;PTEN阳性免疫反应产物在脊髓主要位于灰质神经元. 结论 PTEN在成年大鼠腰段脊髓和背根节神经元及神经纤维轴突中表达.
关键词： 肿瘤抑制因子PTEN 脊髓 背根节 大鼠
