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多色荧光原位杂交及其在遗传毒理学中的应用
多色荧光原位杂交(MFISH)在检测核酸序列、染色体和基因方面有着强大功能.由于染色体结构和数目畸变被认为是遗传毒性研究重要的生物学终点,而该方法可准确直观地评价暴露于职业、医疗和环境毒物后的染色体异常,因此以其为基础的各类方法在人类遗传学、生殖医学、尤其是遗传毒理学中将会得到广泛的应用.
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多色荧光原位杂交检测尿沉渣诊断膀胱尿路上皮癌
目的 研究应用多色荧光原位杂交检测尿沉渣诊断膀胱尿路上皮癌的可行性,并与尿脱落细胞学相比较.方法 M-FISH法分析100例可疑膀胱尿路上皮癌或有相关病史患者和10例良性前列腺增生患者晨尿尿沉渣,同时行尿脱落细胞学检查,以病理为诊断标准.FISH探针是用随机引物法标记3、7、17号染色体着丝粒及9p21区带,统计染色体畸变组合诊断膀胱尿路上皮癌的阳性率.结果 M-FISH低级别尿路上皮癌灵敏度75.6%,高级别尿路上皮癌为100%,总体灵敏度85.5%;尿脱落细胞学低级别尿路上皮癌灵敏度33.3%,高级别是96.0%,总体灵敏度62.9%,两者总体灵敏度之间有统计学差异(P＜0.05);两者特异件分别是84.6%和87.8%,无统计学差异.结论 M-FISH法检测灵敏度比尿脱落细胞学高,特异性相似,并可以诊断出所有的高级别浸润性肿瘤.
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多色荧光原位杂交技术检测急性淋巴细胞白血病复杂核型异常
本研究建立多色荧光原位杂交(M-FISH)技术平台,探讨其在检测急性淋巴细胞白血病(ALL)复杂核型异常中的应用.联合应用常规细胞遗传学方法和M-HSH技术分析了5例伴有复杂核型异常的ALL患者.结果表明:M-FISH证实了原有的异常t(9;22)、t(1;19)和t(y;1),同时还发现了新的异常der(1)(1::3::7)、der(6)t(6;9)(q?;p13)、der(1)t(1;11)、der(12)t(1;12)、der(3)t(3;5)、der(2)t(2;16)、der(9)(9::18::7)和der(7)(9::18::7),并且纠正了原有的错误分析,其中der(9)(9::18::7)及der(7)(9::18::7)为世界上首例报道.结论:M-FISH在检测ALL复杂核型中的应用前景广阔,是进行精确染色体核型分析所不可缺少的先进手段.
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建立十二色荧光原位杂交技术鉴定食管癌KYSE450细胞系的核型
目的:应用12色荧光原位杂交技术(multicolor fluorescence in situ hybridization,M-FISH)鉴定食管癌细胞系KYSE450的染色体畸变.方法:采用DOP-PCR(degeneeate oligonucleotide primer-polymerase chain reaction)法混合标记两组多色painting探针,先后两次杂交到相同的KYSE450染色体片,结合反相DAPI显带技术进行核型分析.结果:成功地建立了一种重复的12色荧光原位杂交技术,并鉴定出KYSE450中存在的畸变染色体.该细胞系共有54条染色体,只有13,21和X号染色体是正常的,其余21条染色体均表现异常.1,2,3,5,6,8,9,14,15,16和17号染色体部分区带增益,4和18号染色体部分区带缺失.7,11,12和19号染色体同时存在区带增益和其它部分区带缺失.1,2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17,18和19号染色体显示有易位.22号染色体丢失1条,未检测到10,20,Y染色体成分.结论:12色荧光原位杂交可用于鉴定肿瘤中复杂的染色体异常.KYSE450存在较多与原发性食管鳞癌一致的染色体改变.
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急性白血病分子-细胞遗传学研究及临床应用进展
近年来,染色体双色或多色荧光原位杂交(FISH)、光谱核型分析、高通量基因芯片、染色体涂抹及基因扩增、定位和克隆等新技术的应用,大大提高了白血病常规法易漏检的隐匿性或复杂性异常染色体的检出率.
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M-FISH技术检测辐射诱导染色体易位和双着丝粒畸变
目的探讨用多色荧光原位杂交(M-FISH)技术检测的易位和双着丝粒染色体畸变的差异.方法用1,2,3,7,8,9,14和15号染色体端粒和着丝粒特异性探针的M-FISH方法,分析60C0γ射线离体照射的脐带血淋巴细胞染色体易位和双着丝粒畸变.结果(1)用M-FISH方法分析60Coγ射线诱导的易位和双着丝粒染色体畸变的剂量-效应曲线,均符合线性二次剂量效应模式;易位与双着丝粒的比值在大多数剂量水平不等于1.(2)细胞中无非稳定性畸变的完全相互易位的比例随着吸收剂量的增加而降低.(3)对大多数被标记染色体,3.00Gyγ射线照射诱发的染色体畸变观察值与理论值无差别;9号染色体畸变(易位和双着丝粒)观察值显著高于理论值(P＜0.05或P＜0.01),15号染色体易位观察值显著低于理论值(P＜0.01).结论电离辐射诱导的染色体易位率不等于双着丝粒畸变率;对于大多数染色体,辐射诱发染色体易位率和双着丝粒畸变率符合随机性规律.
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多色荧光原位杂交技术的建立及其在早先受照射者剂量重建中的应用
目的建立多色荧光原位杂交方法,并探讨用该方法进行早先辐射受照射者的剂量重建的可行性.方法筛选8对染色体端粒和着丝粒特异性人工细菌染色体(BAC)克隆,建立多色荧光原位杂交方法,用该方法分析60Co γ射线离体照射的新生儿脐带血淋巴细胞染色体畸变,并建立相应的标准剂量-效应曲线,参照标准剂量-效应曲线来估算两例早先受照射者的累积吸收剂量.结果本研究中建立的多色荧光原位杂交方法用生物素和(或)地高辛将端粒和着丝粒BAC DNA标记成绿、红、黄(绿+红)3种荧光染色,使得1,2,3,7,8,9,14和15号染色体很容易辨认.用该方法分析受60Co γ射线照射的新生儿脐带血淋巴细胞染色体畸变,除断片外,其他染色体畸变的剂量-效应曲线均为线性二次剂量反应模式.用所有细胞或稳定性细胞中的完全相互易位率作指标,估算了两例早先受射照者的吸收剂量.结论本研究所建立的多色荧光原位杂交方法可以用来进行早先受照射者的剂量重建.
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多色荧光原位杂交(M-FISH)在肺癌早期诊断中的应用
目的 探讨多色荧光原位杂交(M-FISH)在肺癌早期诊断中的临床意义.方法 通过苏北人民医院2007年1月至2011年1月89例肺癌患者支气管镜活检组织及刷检细胞标本作为观察组.结果 89份标本中61份标本中有X染色体数目的增多,其中男性45份,女性16份.具有异常X染色体数目的细胞比例为15.1％～93.2％.26例Y染色体异常,占29.21％,其中8例Y染色体增多的标本均为男性患者,占8.99％,另18例男性患者发生Y染色体数目减少,占20.22％.结论 原位荧光杂交技术对肺癌组织细胞进行检测,有助于肺癌的早期诊断,同时对于判断治疗效果、预后及有无复发等均有辅助作用.
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女性年龄与卵细胞染色体非整倍体异常的相关关系
目的:直接从卵细胞水平研究女性年龄与其卵细胞染色体非整倍体间的相关关系.方法:取试管婴儿助孕技术后未能受精成功的卵细胞,采用多色荧光原位杂交方法检测卵细胞13,16,18,21和22号染色体的情况.结果:卵细胞的非整倍体率为27.1%,随着女性年龄的增加,卵细胞的非整倍体率也随之上升,两者呈较强的正相关关系(r=0.88,P<0.001).结论:女性年龄与其染色体非整倍体异常间存在相关性,对于35岁以上行试管婴儿助孕术的妇女应同时进行遗传咨询.
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M-FISH在实体肿瘤研究中的应用
本文综述了M-FISH在实体肿瘤研究的新进展.介绍了M-FISH技术的原理,讨论了M-FISH使用的探针、M-FISH在肿瘤细胞系研究和肿瘤组织标本研究中的应用以及M-FISH技术的优缺点.
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多色荧光原位杂交技术的临床应用
目的检测来源不明的额外标记染色体和衍生染色体.方法用多色荧光原位杂交技术结合G显带技术和NOR技术,对1例47,XY,inv(9)(p11q13),+mar和1例46,XY,t(5;?)核型进行诊断.结果病例1的额外标记染色体片段来源于15号染色体,患者核型为47,XY,inv(9)(p11q13),+SMC(15).病例2的核型为46,XY,der(5)t(4,5)(q27;q35).在此基础上对患者的核型-表型进行了分析.结论多色荧光原位杂交技术结合细胞遗传学核型分析,对于来源不明的标记染色体和衍生染色体的诊断是非常有帮助的.
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染色体畸变与膀胱移行细胞癌临床病理相关性研究
目的 探讨通过多色荧光原位杂交(Multicolor Fluorescence in Situ Hybridization,M-FISH)检测3、7、9、17号染色体数目畸变情况与膀胱移行细胞癌(Bladder Transition Cell Carcinoma,BTCC)临床分期与病理分级的关系.方法 采用3、7、17号染色体着丝粒探针和9p21区带探针对46例BTCC尿脱落细胞进行M-FISH检测,得出其敏感性,并分析染色体畸变与BTCC生物学特性的相关关系.结果 ①M-FISH的灵敏度为73.90％(34/46).②M-FISH在肿瘤Ta～T1、T2～T4的阳性率分别为50.00％和84.38％,其阳性率与BTCC临床分期呈正相关性(P＜o.05).③M-FISH在肿瘤G1、G2、G3的阳性率分别为42.86％、80.00％和100.00％,其阳性率与BTCC病理分级呈正相关性(P＜0.05).④M-FISH在复发性BTCC的敏感性为83.33％(10/12).结论 使用M-FISH技术检测尿脱落细胞3、7、9、17号染色体数目畸变在无创性辅助诊断BTCC,分析其浸润深度和恶性程度及对预后复发的监测具有重要的参考价值.
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多色荧光原位杂交在膀胱尿路I皮癌诊断中的应用
背景与目的:膀胱尿路上皮癌是我国泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤.本研究旨在分析中国人膀胱尿路上皮癌中染色体畸变的情况,探讨多色荧光原位杂交(multicolor fluorescence in situ hybridization,M-FISH)技术辅助诊断膀胱尿路上皮癌的可行性和有效性.方法:用随机引物法标记3、7、17号染色体着丝粒及9p21区带探针,对57例膀胱尿路上皮癌间期细胞核进行荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH),统计染色体畸变情况并分析其与病理分期、分级的关系以及染色体畸变组合诊断膀胱尿路上皮癌的阳性率.结果:3、7、17号染色体和9p21的畸变率分别为47.4%(27/57)、50.9%(29/57)、56.1%(32/57)和59.6%(34/57),畸变与分期无相关性,3、7和17号染色体畸变与病理分级有显著相关性(P＜0.01).四个探针组合诊断膀胱尿路上皮癌的总阳性率为54.4%.结论:M-FISH技术检测有助于探索3、7、17号染色体畸变与病理分级的关系.
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雪旺细胞与神经元共培养时NGF、CNTF和GDNF mRNA共表达的计算机成像
目的研究雪旺细胞与背根节神经元共培养条件下多种神经营养因子共表达的计算机数字成像技术.方法运用多色荧光原位杂交技术和计算机图像处理技术, 对相同视野下分别采用绿、红、蓝单色滤光片摄取的NGF(绿)、CNTF(红)和GDNF(蓝)mRNA表达的荧光图像以及明视场细胞图像进行其共表达分布的图像合成.结果在单个雪旺细胞内同时显示出NGF、CNTF和GDNF mRNA表达所对应绿、红、蓝色区域及其在细胞相同部位同时表达所对应的由绿、红、蓝色混合而衍生的白、黄、紫红和浅蓝色区域.结论应用多色荧光原位杂交技术和计算机图像处理技术可对雪旺细胞中多种神经营养因子的共表达进行可视化研究.
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用荧光原位杂交技术研究人类未受精卵细胞的染色体非整倍体
目的探讨人类未受精卵细胞非整倍体的产生机制.方法取未受精卵细胞固定后行 多色荧光原位杂交,分析卵细胞中13、16、18、21和22号染色体的核型情况.结果 47%的卵细胞核型正常,53%的卵细胞为异常核型,其中18%为同源染色体不分离 ,12%为姐妹染色单体非平衡性过早分离,36%为姐妹染色单体平衡性过早分离; 在体外培养 >24小时的卵细胞中,姐妹染色单体平衡性过早分离的发生率明显高于体外培养≤24小时的 卵细胞(P<0.01).结论同源染色体不分离和姐妹染色单体平衡性及 非平衡性过早分离这三种机制均参与了卵细胞非整倍体的产生.姐妹染色单体平衡性过早分离与体外培养时间具有相关性.
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两条染色体复杂易位伴无精子症患者细胞与分子遗传学分析
目的 对1例46,XY,t(3;11)(q27;q13),ins(11;3)(q13;p26p13)伴无精子症患者进行细胞与分子遗传学研究.方法 采用外周血淋巴细胞培养、G显带制备染色体,应用多色荧光原位杂交技术进一步分析确定其核型,多重PCR检测Y染色体AZF微缺失.结果 该患者涉及3号、11号染色体相互易位,并伴有3号染色体的带插入到11号染色体的四断裂点的复杂易位.AZF所在区域的6个序列标签位点均无微缺失.结论 染色体复杂易位可导致男性不育,无精症的遗传因素分析可为其提供更准确的生育咨询.
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家族性染色体复杂重排的分子细胞遗传学研究
目的用分子细胞遗传学技术确诊染色体复杂重排,并探讨其临床效应.方法对1例涉及5号、16号和20号染色体复杂重排核型的男性携带者,应用多色荧光原位杂交和显微切割技术进一步分析确定其核型,并进行家系调查.结果该病例为涉及5号、20号及16号染色体复杂易位,并伴有20号染色体的一个带插入到5号染色体.家系调查发现该病例的母亲及妹妹均有相同的染色体异常.结论多色荧光原位杂交结合显微切割技术能够确诊染色体复杂结构重排.染色体复杂重排仍可在家庭中稳定传递,携带者具有出生正常后代的可能.
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多色荧光原位杂交技术在急性白血病研究中的应用
染色体核型与急性白血病的预后、诊断及治疗关系密切.目前各实验室常规应用的方法是传统染色体核型分析与荧光原位杂交技术,但这两种技术各有不足之处.新近发展起来的多色荧光原位杂交技术有效地弥补了这些不足.本文就多色荧光原位杂交技术的原理、种类、特点及其在急性白血病研究中的应用作一综述.
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M-FISH技术分析60Coγ射线急慢性照射诱发小鼠的骨髓染色体畸变
背景与目的:探索多色荧光原位杂交(Multicolor fluorescence in situ hybridization,M-FISH)技术分析急慢性电离辐射照射诱发的小鼠染色体畸变的差异.材料与方法:建立用小鼠1、2和4号染色体端粒和着丝粒特异性人工细菌染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)的M-FISH方法,分析受到急慢性60Co γ射线整体照射1.5和3.0Gy的小鼠骨髓染色体畸变,确定剂量和剂量率因子(Dose and dose rate effect factor,DDREF).结果:急性照射的小鼠骨髓染色体稳定性畸变和非稳定性畸变相同,慢性照射的小鼠染色体非稳定性畸变显著低于稳定性畸变.以染色体稳定性畸变为指标DDREF在1.5、3.0Gy分别为2.2±0.4和3.1±0.6.结论:M-FISH方法可用于分析电离辐射诱发的小鼠骨髓染色体畸变,DDREF低于文献中报道的数值.
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多色荧光原位杂交方法同时检测人精子染色体数目畸变和结构畸变
背景与目的:建立可以同时检测人精子染色体数目畸变和结构畸变的多色荧光原位杂交技术.材料与方法:使用2条1号染色体探针(着丝粒和末端探针),2条18号染色体着丝粒探针,分别用地高辛或生物素标记,与人精子核DNA进行荧光原位杂交,用CY3-链亲和素检测生物素探针杂交信号;用与FITC结合的抗地高辛抗体检测地高辛信号,结果:在Nikon荧光显微镜下,可以清楚看到精子头部呈现兰色的荧光信号背景下,有红色荧光点信号(1号染色体着丝粒),绿色荧光信号(1号染色体末端),和黄色荧光信号(18号染色体着丝粒部位红、绿两种荧光信号的混合色).本方法能够同时检测到精子1号,18号染色体非整倍体率(双体率,缺体率),1号染色体短臂和着丝粒结构畸变(重复率,缺失率),以及二倍体精子率3种染色体异常.用建立的方法检测14名正常人135 937条精子,测得1号染色体双体率、缺体率分别为0.045%和0.048%;18号染色双体率、缺体率分别为0.053%和0.045%;二倍体精子率为0.061%;1号染色体末端重复率、缺失率分别为0.082%、0.069%,1号着丝粒重复率、缺失率分别为0.075%,0.060%;均在文献报道范围内.结论:本研究建立的多色FISH可用于测定正常人和环境化学物接触人群精子染色体数目畸变和结构畸变.
