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γ射线和微波复合照射小鼠骨髓细胞凋亡形态学特点及Bax、Bcl-2蛋白表达定量分析
目的研究60Co γ射线(以下简称γ线)与微波复合照射后小鼠骨髓细胞的凋亡情况及凋亡相关基因bax、bcl-2表达规律,以探讨复合照射对造血组织的损伤机制.方法用光镜及透射电镜观察复合照射后不同时间点小鼠骨髓细胞凋亡的变化,用原位末端标记法检测复合照射后6 h骨髓细胞凋亡率,用免疫组化和图象分析技术检测骨髓细胞Bax、Bcl-2蛋白表达.结果γ线与微波复合照射后出现典型的凋亡改变,以照后6 h为明显;微波组骨髓细胞凋亡率仅轻微升高,而γ线组和复合组则显著升高(p﹤0.01),同单纯γ线组相比,复合组凋亡率升高更明显(p﹤0.05).照后初期Bax表达增强、Bcl-2表达降低,与γ线组相比,复合组照射后6 h Bax表达增强更为明显(p﹤0.05).结论γ线与微波复合照射后小鼠骨髓细胞发生凋亡,微波可进一步促进γ线对骨髓细胞凋亡的诱导作用.Bax和Bcl-2协调发挥作用是复合照射导致骨髓细胞发生凋亡且较单伤加重的机制之一.
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富勒醇对60Co γ射线致小鼠损伤的防护作用
目的研究C60衍生物富勒醇对60Co γ射线损伤的防护和恢复治疗作用及机制.方法分别在辐照前和辐照后给小鼠腹腔注射富勒醇,60Co γ射线全身均匀照射,吸收剂量5.0Gy,测定小鼠体重、脾指数、胸腺指数、血象和SOD含量的变化;取小鼠脾脏并制成脾细胞悬液,应用流式细胞仪(FCM)检测脾脏细胞的周期.结果辐照损伤后小鼠体重减轻、脾指数和胸腺指数降低、血象中各项指标下降、脾脏细胞周期中S期所占的比例升高.富勒醇可促进上述指标不同程度的恢复,并使脾脏细胞周期中S期恢复正常.加速了脾脏细胞的分裂增殖,从而使脾细胞能较快的得到修复.结论富勒醇对60Co γ射线照射小鼠具有一定的防护和恢复治疗的作用.
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60Coγ射线照射与去白细胞血血浆部分细胞因子含量变化的研究
目的 探讨60Co γ射线照射与去白细胞血血浆IL-2、IL-6、INF-γ与TNF-α含量的变化和患者输注后的发热情况.方法 应用ELISA法检测经60Co γ射线照射与去白细胞过滤血血浆IL-2、IL-6、INF-γ和TNF-α的含量.结果 随着保存期的延长,经60Co γ射线照射与去白细胞过滤血血浆IL-2、IL-6、INF-γ和TNF-α含量变化不很明显;并经60Co γ射线照射或去白细胞过滤血液给患者输注后的发热现象均明显减少.结论 60Co γ射线照射血液制品输注在有效预防输血相关性移植物抗宿主病的同时也能有效减少非溶血性发热输血反应的发生.
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BAC FISH与PAINT法检测辐射诱发染色体易位的比较
目的 比较自行建立的BAC FISH方法和常规染色体涂染(PAINT)方法分析辐射诱发染色体易位有效性的不同.方法 对正常人外周血照射不同剂量(0～5.0 Gy)的60Co γ射线,用1、2和4号染色体特异性端粒和着丝粒探针BAC FISH及PAINT分析染色体易位,将观察到的染色体易位率换算为全基因组易位率,并建立两种方法分析辐射诱发的染色体易位率剂量-效应曲线.结果 用两种方法分析0～5.0 Gy 60Coγ射线诱发的全基因组易位率均随着吸收剂量的增加而增高;在相同的剂量点,BAC FISH染色体易位检出率高于PAINT方法.两种方法分析吸收剂量和全基因组易位率之间的剂量-效应曲线均为二次方程模式,分别为Y=0.043D2+0.0008D+0.0048(BAC FISH)和Y=0.043D2+0.006D+0.0027(PAINT).结论 自行建立的BAC FISH方法分析辐射诱发染色体易位检出率高于常规染色体涂染方法,两种方法建立的剂量-效应曲线方程的β系数相同.
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56Fe17+、12C6+重离子束与60Co γ射线对人淋巴细胞染色体畸变、细胞周期和凋亡的影响
目的 比较56Fe17+、12C6+重离子束与60Coγ射线对人淋巴细胞染色体畸变、周期、凋亡的影响.方法56Fe17+、12C6+重离子束和60 Coγ射线分别照射人淋巴细胞系Peng-EBV,吸收剂量均为0、0.5和2.0 Gy,56Fe17+重离子束剂量率为0.26 ～0.55 Gy/min,12C6+重离子束剂量率为0.30 ～0.50 Gy/min,γ射线照射剂量率为0.75 Gy/min.研究不同射线对染色体细胞畸变率、“双+环”畸变率的影响.利用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.结果12C6+、56Fe17+重离子与60 Coγ射线照射后细胞畸变率与0 Gy相比,差异有统计学意义(x2=12.08～322.97,P＜0.05).“双+环”畸变率与0 Gy相比,差异有统计学意义(x2=4.06 ～205.37,P＜0.05).其中,12C6+重离子束诱导的细胞畸变率和“双+环”畸变率高,其次是56Fe17+重离子束,而且二者均高于60Coγ射线.56Fe17+、12C6+离子束与60Coγ射线均能诱导人淋巴细胞发生明显的G2期阻滞,差异有统计学意义(t=-80.9～0.17,P＜0.05),12C6+重离子、γ射线及56Fe17+重离子诱导的G2期阻滞程度依次降低.56Fe17+、12C6+离子束与60Coγ射线均能促进细胞凋亡,差异有统计学意义(t=-22.65 ～ 0.87,P＜0.05),12C6+重离子、γ射线及56Fe17+重离子诱导的早期凋亡率依次降低.结论 56Fe17+、12C6+离子束与60 Co γ射线均能诱导人淋巴细胞发生明显的染色体畸变、G2期阻滞及细胞凋亡.12C6+离子束诱导的染色体畸变、周期阻滞和凋亡程度高.56Fe17+、12C6+离子束与γ射线的生物学效应与LET相关.
关键词： 56Fe17+重离子 12C6+重离子 60Co γ射线 染色体畸变 细胞凋亡 -
60Co γ射线诱导人淋巴细胞线粒体基因表达效应的研究
目的 探讨电离辐射诱导正常人B淋巴细胞线粒体辐射敏感基因mRNA水平的剂量-效应关系.方法 用0、0.5、1、3、5、8、10和15 Gy60 Coγ射线分别照射指数增长期的人淋巴细胞永生化细胞株,24h后用反转录PCR和实时荧光定量PCR方法检测7个相对辐射敏感基因,包括ND3、Cyt b、COX Ⅰ、COXⅡ、COXⅢ、ATPase6和ATPase8基因mRNA的表达水平,观察其剂量-效应关系.结果 60Co γ射线照射后24 h,线粒体7个辐射敏感基因表达总体上调.线粒体呼吸链复合体Ⅳ亚基Ⅰ (COX Ⅰ)基因表达在受到8 Gy照射后增强明显,为对照组的13倍左右.除COX Ⅰ和COXⅡ外,其余5个基因在受照后表现出一定的剂量-效应关系.其中,ND3、ATPase6和ATPase8这3个基因在3 ～15 Gy的范围内线性关系良好,而COXⅢ基因在3～10 Gy的范围内也有十分良好的线性关系.结论 60Co γ射线照射后24 h,线粒体基因表达水平总体上调,其中ND3、ATPase6、ATPase8和COXⅢ这4个基因在一定剂量范围内线性关系良好,可以作为联合辐射损伤生物标志物进一步研究.
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激光共聚焦显微镜观察60Coγ射线对CNI-H446 DNA/RNA比值及三维结构的影响
目的探讨电离辐射对小细胞肺癌细胞株(CM-H446)DNA/RNA代谢比值的影响及观察细胞三维结构的改变.方法利用共聚焦显微镜双重荧光标记、全自动三维图像分析CNI-H446细胞受到不同剂量60Co γ射线照射后DNA和RNA含量的比值.结果对照组细胞DNA/RNA比值为1.15±0.07,当受到1 Gv以上剂量照射时,DNA含量明显降低,诱导RNA合成逐渐增加,DNA降低的程度大于RNA,1,3 Gy组与对照组相比差异具有非常显著性(P＜0.01).三维图像显示RNA聚集,RNA荧光强度明显增强,而DNA均匀散在于细胞内.当剂量＞8 Gy时,RNA合成受到显著抑制,两者比值明显增加,细胞体积增大,其比值与照射剂量存在一定的联系.结论 CNI-H446细胞受到不同剂量60Co γ射线照射后DNA/RNA之比及细胞大小随着照射剂量的增加不断发生变化.
关键词： 共聚焦显微镜 CM-H446细胞株 DNA RNA 60Co γ射线 -
γ射线吸收剂量及受照人性别对外周血淋巴细胞诱导基因表达变化的影响
目的 研究剂量效应和性别效应两方面对电离辐射后人体外周血淋巴细胞GA DD45和p21基因表达的影响.方法 从6名(3男、3女)健康人体取血后,用60Co γ射线辐照剂量0.01-6.0 Gy后4h提取RNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction)的方法测定GA DD45和p21基因的表达,分析其与剂量、性别的关系.结果 在较高剂量的辐照下,GA DD45和p21基因对辐射均较为敏感,其表达具有良好的剂量效应关系,具有作为生物剂量计的潜力.此外,虽然在0.5 Gy时,辐射诱导GA DD45基因的表达在男性和女性淋巴细胞样品中都不明显,但是在其余的剂量范围内,女性样品的基因表达量显著高于男性样品.而对于p21基因,在1 Gy和2Gy时,辐射诱导女性样品基因表达低于男性样品,但在0.5 Gy和4Gy时,女性样品基因表达的敏感性显著高于男性样品.结论 相较于p21基因,研究GA DD45在低剂量情况下作为辐射生物指示剂将更为可行;当放射事故发生后,为避免剂量估算结果的阳性或阴性误差,需要考虑测试样品的性别.
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加味玉屏风散在60Co γ射线致小鼠免疫损伤中的应用研究
目的 探讨加味玉屏风散在60Co γ射线所致小鼠免疫损伤中的作用机制.方法 将60只健康小鼠随机分为空白对照组、照射对照组、加味玉屏风散低剂量组、加味玉屏风散中剂量组及加味玉屏风散高剂量组,60Co γ射线照射剂量为5 Gy;检测5组的脾指数、胸腺指数、吞噬百分率、吞噬指数及淋巴细胞转化率.结果 加味玉屏风散低、中、高剂量组的脾指数、胸腺指数、吞噬百分率、吞噬指数、淋巴细胞转化率均高于照射对照组.结论 加味玉屏风散可预防60Co γ射线所致小鼠的免疫损伤.
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60Co γ射线照射联合三氧化二砷对人脑胶质瘤SHG44细胞DNA损伤的研究
目的 研究60Co γ射线照射联合As2O3对SHG44细胞的生长抑制作用.方法 以SHG44细胞为实验对象,3H-TdR掺入法研究As2O3和照射对SHG44细胞DNA合成率的影响;用单细胞凝胶电泳法,以DNA彗星尾长及尾部DNA百分含量来比较As2O3、照射分别单独作用及它们联合作用对细胞DNA的损伤.结果 联合组SHG44细胞存活率低于As2O3(P<0.01);3组均诱导DNA损伤,联合作用组对细胞DNA的损伤程度明显高于照射及As2O3单独作用组.结论 电离辐射和As2O3联合应用对SHG44细胞的杀灭作用均强于电离辐射和As2O3单独作用.
关键词： 60Co γ射线 三氧化二砷 DNA损伤 人脑胶质瘤SHG44细胞 -
海军放射工作人员用热释光剂量计的能量响应特性
海军放射工作人员用热释光剂量计是一种多区结构并可在n-γ混合辐射场中测量γ、热中子和快中子剂量的新型个人热释光剂量计.作者测量并检验了这种剂量计对不同能量的X及γ射线的能量响应范围,为正确使用本剂量计提供了依据.
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原位杂交技术测定放烧复合伤创面aFGF mRNA的表达
目的:探讨放烧复合伤创面愈合过程中aFGF的作用.方法:用SD大鼠制备深Ⅱ°烧伤、放烧复合伤模型,分别于模型后12 h和1、3、7 d取背部创面皮肤组织,采用原位杂交技术测aFGF mRNA的表达.结果:烧伤组大鼠在上述4个时相点aFGF mRNA表达明显增加,而放烧复合伤组仅在第7天有少量表达;aFGF mRNA的表达部位位于真皮及皮下.结论:提示aFGF有助于创伤的愈合;放烧复合伤创面愈合延迟与aFGF mRNA表达低下及延迟有关.
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低剂量率60Co γ射线和252Cf裂变中子混合照射对大鼠造血及抗氧化系统的影响
目的 探讨低剂量率60Co γ射线与252Cf裂变中子混合照射对大鼠的生物效应.方法 16只雄性SD大鼠按数字表法随机分成实验组和对照组,每组8只.实验组每天依次暴露于60Co γ射线1h(剂量率为0.072 Gy/h),252Cf裂变中子20 h(剂量率为0.085 mGy/h),连续7d.照后第8天检测大鼠外周血细胞计数、主要脏器指数、骨髓DNA含量、血清超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量.结果 与对照组[(6.2 ±2.4)×109/L]相比,实验组大鼠外周血白细胞数[(3.4±1.2)×109/L](WBC)显著降低(P＜0.05),各项脏器指数变化组间差异无统计学意义(P＞0.05),骨髓DNA含量显著降低(P＜0.05)；血清SOD活力显著降低(P＜0.05),MDA含量有上升趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 低剂量率60Co γ射线和252Cf裂变中子混合照射对大鼠造血系统及抗氧化系统有一定的损伤作用.
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RMP基因的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响
目的 制备RPB5调节蛋白(RMP)抗体并研究RMP在60Co γ射线诱导的SMMC-7721肝癌细胞凋亡过程中的表达及功能.方法 RT-PCR检测HT-29、A549、Hep-2、SGC-7901、293T、HeLa、WI-38和SMMC-7721细胞株中RMP的表达；从质粒中PCR扩增得到人RMP基因并克隆至原核表达载体中,诱导表达后经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-RMP/D1,以该蛋白作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体；肝癌细胞SMMC-TT21、PFlaG-CMV4-SMMC-7721、PFlaG-CMV4-RMP-SMMC-7721经6 Gy 60Co γ射线照射后,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡的变化.结果 RMP在以上细胞系中均有表达,但程度不同；SDS-PAGE鉴定示纯化蛋白为目的蛋白人RMP片段.Western blot结果显示,制备的多抗可与RMP蛋白特异性结合；肝癌细胞株经6 Gy60Coγ射线照射后,流式细胞术结果表明RMP使肝癌细胞SMMC-7721的凋亡减少.结论 RMP在不同细胞株中均有表达且能减少肝癌细胞SMMC-7727的凋亡,为RMP用于肝癌的基因治疗奠定了基础.
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γ-射线对抗辐射菌抗氧化酶活性的影响
目的研究不同剂量60Co γ-射线作用后抗辐射菌中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的变化,与不同剂量60Co γ-射线照射后大肠杆菌中这两种酶活性变化相比较,探讨SOD、CAT与抗辐射菌辐射抗性的相关性.方法应用单胺氧化法和钼酸铵法分别测定SOD和CAT活性,用Bradford法测定蛋白质含量.结果未受照射时抗辐射菌的CAT和SOD活性大于大肠杆菌中这两种酶的活性(P＜0.01);当受到不同剂量的γ-射线作用后,抗辐射菌中这两种酶的活性随着剂量的增加出现先升高后降低的趋势,而大肠杆菌受照后这两种酶活性几乎均呈下降趋势.并且受照后抗辐射菌中这两种酶的活性均高于大肠杆菌(P＜0.01).结论抗辐射菌的抗氧化能力高于大肠杆菌.
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三氧化二砷诱导人脑胶质瘤细胞抑制与活性氧水平的关系
目的 研究三氧化二砷(As2O3)对人脑胶质瘤SHG44细胞活性氧浓度及60Co γ射线照射联合As2O3对细胞DNA损伤中的影响.方法 用2,7-二氢二氯荧光素(DCFH)标记细胞内活性氧(ROS),激光共聚焦显微镜扫描检测细胞内荧光强度;用单细胞凝胶电泳法检测DNA彗星尾长及尾部DNA百分含量,比较As2O3、γ线照射单独及联合作用对细胞DNA的损伤程度.结果 (1)As2O3可明显提高SHG44细胞内ROS水平,其ROS水平的改变随As2O3作用浓度的增加而升高.(2)60Coγ射线与As2O3联合作用诱导SHG44细胞DNA的损伤,其损伤程度随照射剂量的增加彗星尾长、尾部DNA百分比递增.两者联合作用后彗星尾长、尾部DNA百分比分别大于相应剂量的单独照射和As2O3组(P＜0.01).结论 As2O3可明显抑制SHG44细胞的增殖,增强细胞的辐射敏感性,其抑制机制与诱导细胞内ROS水平提高具有相关性.
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茶多酚对60Coγ射线诱发小鼠外周血淋巴细胞Hprt基因突变的影响
目的 探讨茶多酚(tea polyphenols,TP)对60Co γ射线诱发小鼠外周血淋巴细胞Hprt基因突变的影响.方法 小鼠分为正常对照组、照射组(1、2、4、8 Gy照射),TP保护组(高、中、低剂量组分别于8 Gy照射后TP灌胃725 mg/kg、145 mg/kg、29 mg/kg),每组6只,照射后当日给药,14天后心脏取血,应用多核细胞法检测Hprt基因位点突变频率.结果 0～8 Gy60Co γ射线可诱发小鼠淋巴细胞Hprt基因发生突变,且随照射剂量增加突变频率随之增加,突变频率Y(10-3)与照射剂量D(Gy)间可拟合为Y=1.1795 +0.6135D.TP保护组Hprt基因突变率与照射组细胞Hprt基因突变率相比明显下降(P＜0.01).结论 茶多酚对60Co γ射线所诱发的小鼠外周血淋巴细胞Hprt基因突变具有保护效应.
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150例60Co γ射线工作者辐射效应分析研究
目的了解60Co γ射线工作者的辐射效应,为卫生防护监督管理部门搞好健康管理提供科学依据.方法用全自动血球计数分析仪分析全血细胞.用微量全血培养法观察分析染色体畸变和淋巴细胞微核细胞率.用APAAP桥联酶标技术测T淋巴细胞亚群.结果射线组白细胞总数明显低于正常对照组(P＜0.05).遗传学指标:染色体畸变率为0.40%,单体型畸变率为0.50%,总畸变率为1.10%.微核细胞率为2.98‰,阳性检出率(≥4‰)为26%,是对照组(13%)的2倍.T淋巴细胞亚群主要是CD4/CD8比值明显低于正常对照组(P＜0.05).结论射线工作者机体已出现不同程度的辐射损伤效应.提示有关行政管理部门应加大力度搞好防护,避免不必要的照射.
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内质网应激对γ射线照射诱导肿瘤细胞死亡的影响
目的 探讨内质网应激反应下肿瘤细胞对辐射敏感性的影响.方法 将人宫颈癌HeLa细胞置于60Co设备行γ射线照射;采用反转录PCR方法检测内质网应激反应标志分子X盒结合蛋白1(XBP1) mRNA剪切;细胞克隆形成试验检测内质网应激反应剂二硫苏糖醇(DTT)作用后对HeLa细胞的生存变化.结果 DTT作用后XBP1 mRNA出现剪切;克隆形成试验发现HeLa细胞存活率明显提高.结论 在内质网应激反应下,增加肿瘤细胞的辐射抵抗性.
关键词： 二硫苏糖醇 内质网应激剂 宫颈肿瘤HeLa细胞 克隆形成试验 60Co γ射线 -
辐射致雄性小鼠不育症模型的建立及生精细胞损伤的初步分析
目的：构建辐射致雄性小鼠不育症模型，并对模型小鼠的生精细胞损伤进行初步分析。方法：不育症模型构建：65只雄性C57BL/6小鼠随机分为7组，正常对照组(A组)及6组60Co γ照射组，后者包括B组(12 Gy)、C组(6+6 Gy)、D组(10 Gy)、E组(6+4 Gy)、F组(8 Gy)、G组(4+4 Gy)。观察分析小鼠死亡情况(24w)及30、50、70 d受孕率。生精细胞损伤分析：72只雄鼠随机分为4组：正常对照组、6+4 Gy组、4+4 Gy组、6 Gy组。30、50、70 d观察睾丸组织切片(HE染色)并评估其生精功能( Johnsen评分)；对PLZF阳性标记的精原干细胞(免疫组化法)计数。结果：A、E、F、G组生存时间较长，B、C组生存时间较短。30、50、70 d，D、E组受孕率均为0%。各照射组Johnsen评分均低于对照组(P<0.05)；6+4 Gy组的PLZF阳性细胞计数呈逐渐上升趋势，但均明显低于对照组(P<0.05)。结论：6+4 Gy的60Co-γ射线照射7周龄的C57BL/6雄性小鼠，可以构建不育症模型。模型小鼠的PLZF标记的精原干细胞计数虽然低于对照组，但并非完全消失，提示不育症的原因并非精原干细胞的完全消亡。
