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慢病毒高效感染皮肤人永生化表皮细胞株HaCaT细胞的分化状态
背景：研究证实YY1主要在小鼠基底层未分化表皮细胞中表达，且随着表皮细胞向基底上层分化其表达逐渐下降，这种差异性表达方式说明YY1可能是表皮细胞分化过程中重要的调节因子之一。
目的：采用慢病毒-YY1感染HaCaT细胞观察YY1过表达对细胞分化的影响。
方法：将慢病毒-YY1感染至HaCaT细胞，经puromycin筛选，建立单克隆稳定细胞株，设对照组为慢病毒感染的HaCaT细胞和未感染的HaCaT细胞，Western blot检测分析YY1蛋白的表达水平；将慢病毒-YY1-HaCaT组和 HaCaT-YY1组细胞各分成2组，一组在低钙(0.12 mmol/L)培养基条件下培养48 h，另一组在低钙(0.12 mmol/L)培养基条件下培养24 h后在高钙(0.35 mmol/L)培养基条件下再培养24 h，用Western blot法检测YY1过表达对HaCaT细胞分化中的表皮细胞特异性分化角蛋白K1、K10、K14和晚期分化产物外皮蛋白、中间丝相关蛋白、兜甲蛋白的影响。
结果与结论：慢病毒-YY1成功感染HaCaT细胞，高钙条件下获得的单克隆细胞株过表达YY1蛋白，可抑制K1、外皮蛋白和兜甲蛋白的合成，从而阻止表皮细胞角质化进程并使细胞处于未分化状态。结果说明慢病毒可高效感染皮肤人永生化表皮细胞株 HaCaT 细胞，YY1可能是抑制基底表皮细胞分化并维持其未分化增殖状态的重要因子之一。 -
miR-34a通过调控YY1抑制肾癌细胞的增殖及侵袭
目的 探讨miR-34a在肾癌组织中表达、miR-34a对人肾癌ACHN细胞增殖和侵袭的影响及调控机制.方法 实时聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a在20例肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将miR-34a mimics转染入肾癌ACHN细胞中,试验分空白对照组、阴性对照组、miR-34a mimics 转染组.实时PCR检测转染24 h后miR-34a表达量;噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力;实时 PCR和蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1表达水平.结果 与癌旁组织相比,20例癌组织中miR-34a平均表达量为1.06±0.67,显著低于癌旁组织(1.62±0.83,P<0.01);转染后24 h,miR-34a mimics转染组的miR-34a表达量为157.04±13.01,较阴性对照组显著上调(P<0.01);miR-34a mimics转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期;细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01);转染miR-34a mimics后YY1基因在mRNA表达无明显变化(P>0.05),蛋白水平下调.结论 miR-34a在肾癌中低表达,可能与肾癌的发生有关;miR-34a调控YY1的表达可能是抑制肾癌细胞生物活性的重要机制之一.
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转录因子YY1对垂体瘤侵袭性的影响
目的：观察转录因子YY1（Yin-Yang 1）在垂体腺瘤中的表达情况，并进一步分析沉默YY1对大鼠垂体瘤GH3细胞侵袭性的影响。方法运用免疫组化技术观察YY1在不同类型垂体腺瘤组织中的表达情况。 Western blot实验检测siRNA沉默大鼠垂体瘤GH3细胞中的基因YY1后，YY1蛋白及基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的表达水平。采用Transwell chamber细胞侵袭实验观察沉默YY1对GH3细胞侵袭的影响。结果 YY1在侵袭性垂体腺瘤中表达升高；沉默YY1后，GH3细胞侵袭能力下降35．7％（P＜0．05）， MMP-2、MMP-9蛋白表达量下降（P＜0．05）。结论转录因子YY1在侵袭性垂体腺瘤中的表达升高，并通过上调MMP-2、MMP-9的表达来促进GH3细胞侵袭性。
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转录因子Yin Yang1(YY1)在食管癌中的表达及其对食管癌细胞功能的影响
目的:探讨转录因子Yin Yang 1(YY1)在正常食管组织和食管鳞癌组织中的表达及其在食管癌发生发展中的作用.方法:免疫组化染色检测15例正常食管组织,39例食管癌旁组织和88例食管癌组织样品中YY1蛋白表达水平;噻唑蓝(MTT)和克隆实验检测食管鳞癌细胞(TE-1细胞)增殖和生长变化;蛋白质印迹(Westem blot)技术检测转染后转录因子YY1和p21表达水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测TE-1细胞迁移、侵袭能力的变化.结果:与正常食管组织和食管癌旁组织相比,YY1蛋白在食管鳞癌组织样品中的表达显著提高.此外,转染了YY1过表达载体后明显抑制TE-1细胞生长,而干扰YY1表达则可促进细胞的生长;同时伴随着YY1靶基因p21(也称p21WAF1/Cip1)的变化.TE-1细胞转染YY1过表达载体后,细胞的侵袭、迁移能力增强.结论:食管鳞癌组织中YY1表达显著上调,YY1可调节细胞的生长和转移侵袭能力.因此,YY1有望成为食管癌诊断和发展的分子标志物,也有可能是食管癌基因治疗的一个潜在靶点.
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YY1在胃癌组织中的表达及其对SGC-7901细胞株增殖和凋亡的影响
目的:检测YY1在胃癌组织中的表达情况,探讨YY1对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡的影响以及可能的机制.方法:利用定量PCR和免疫组织化学分别检测标本中YY1的mRNA和蛋白表达水平.利用慢病毒表达载体系统在胃癌细胞株SGC-7901中上调YY1,运用CCK-8、流式细胞术、平板克隆实验检测YY1对细胞的增殖、凋亡以及克隆形成能力的影响.结果:胃癌组织中YY1的mRNA和蛋白表达水平明显低于癌旁组织.与空载对照组(SGC-7901-Empty Vector,SGC-7901-EV)和与正常对照组(SGC-7901)相比,过表达YY1组细胞(SGC-7901-YY1)的增殖和平板克隆形成能力明显减弱,细胞凋亡增加.结论:YY1与胃癌的发生发展有一定的关系,可能起到抑癌基因的作用,YY1基因可能成为胃癌靶向治疗的新的潜在靶点.
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转录因子YY1在妇科肿瘤和妊娠疾病中的作用
转录因子Ying-Yang1(YY1)是正常细胞和癌组织中普遍表达的多功能转录调控蛋白,其参与调控多种细胞正常生理过程,如胚胎发育、细胞骨架蛋白结构和功能、染色体失活和修复、肿瘤发生和浸润转移等过程,在生物体内发挥着重要作用.已有大量证明YY1在多种肿瘤中有异常表达,并通过多种途径调控肿瘤的增殖过程,如宫颈癌、乳腺癌、卵巢癌等,在某些癌症类型中YY1的高表达可提高患者生存预后.并且,近年来YY1在妊娠中的作用也备受关注,以下将重点就YY1的作用机制和在妇科肿瘤方面和妊娠疾病中的研究进展作一综述.
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miR-29c对脑胶质瘤U251细胞生物学活性的影响
目的 探讨miR-29c对脑胶质瘤U251细胞生物学活性的影响及可能机制.方法 体外培养胶质瘤U251细胞,实验组将miR-29c mimics转染至细胞,miR mimcs转染作为对照组.应用实时荧光定量PCR检测转染后miR-29c表达量的改变,MTT实验测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况,体外侵袭实验分析miR-29c转染后细胞的体外侵袭能力,Western blot检测转染后转录因子YY1蛋白的表达.结果 荧光定量PCR结果显示:实验组miR-29c表达量为(106.65±15.51),较对照组显著上调(P＜0.01).与对照组比较,实验组U251细胞的增殖能力明显降低(P＜0.01),凋亡率增加(P＜0.05),体外侵袭能力明显减弱(P＜0.01),YY1蛋白表达下调(P＜0.01).结论 miR-29c可能通过调控YY1蛋白的表达抑制胶质瘤细胞的生物活性.
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YY1在胰岛素瘤中的表达及意义
目的：探讨YY1在良、恶性胰岛素瘤组织中的表达情况及意义。方法收集2000~2014年南方医院19例胰腺神经内分泌肿瘤组织蜡块，利用免疫组化法检测19例标本中YY1的蛋白表达水平。结果 YY1在良恶性胰岛素瘤中组织中都有表达，恶性胰岛素瘤组织中YY1表达强度高于良性胰岛素瘤组织（P=0.042），YY1表达强度与胰岛素瘤的良恶性质存在正相关关系（P=0.037），YY1表达强度高的胰岛素瘤更具恶性潜能。结论 YY1的高表达强度与胰岛素瘤发生发展有一定关系，YY1有望成为检测胰岛素瘤恶性转化的新肿瘤标志物。
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YY1基因对J82膀胱尿路上皮癌细胞增殖侵袭能力的影响
目的 观察YY1基因在不同表达水平下对J82膀胱尿路上皮癌细胞增殖侵袭能力的影响.方法 以转染YY1的J82细胞设为YY1增强表达组,选用靶向YY1序列的shRNA导入J82细胞设为YY1沉默组,并设定对照组.应用Western blot法检测YY1转染效率.以MTT、Transwell实验检测各组细胞增殖和侵袭能力.结果 Western blotting结果显示增强组的YY1表达高于空白组(P=0.001),空白组YY1蛋白表达水平高于沉默组(P<0.05).MTT实验结果显示YY1增强表达组在培养24 h、48 h和72 h后的吸光度均高于空白组和YY1沉默组(P<0.05).24 h后空白组和YY1沉默组的吸光度无明显区别(P>0.05).48 h和72 h后空白组吸光度明显高于YY1沉默组(P<0.05).Transwell实验结果显示YY1沉默组的细胞计数明显小于空白组和YY1增强组(P<0.05),空白组和YY1增强组之间无明显差异(P>0.05).结论 沉默YY1基因后可明显减弱J82膀胱尿路上皮癌细胞的增殖和侵袭能力.以YY1为靶点的RNA干扰技术有望成为针对该肿瘤的基因治疗新方法.
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转录因子阴阳1在多囊卵巢综合征患者性激素合成中的调节作用研究
目的 探讨YY1在多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗患者(以下简称PCOS-IR)卵泡液中的表达及其与IVF-ET结局的关系.方法 选取我院生殖中心PCOS-IR患者30例为实验组,随机选取我科30例同期PCOS非IR患者为对照组.两组患者均于取卵日术中取得卵泡液,在4℃下以3000 rpm离心10 min,取上清液冻存于-70℃待检.YY1采用ELISA法测定.结果 相比于对照组,PCOS-IR组患者卵泡液中YY1平均水平有显著升高,并具有统计学意义(P<0.05).结论 YY1表观修饰作用可能参与了多囊卵巢综合征患者胰岛素抵抗的病理生理过程.
