细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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抑制S1PR2的活性可下调高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞SphK1和MCP-1的表达
目的 观察高糖及1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)特异性拮抗剂JTE-013对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)鞘氨醇激酶1(SphK1)、S1PR2、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响.方法 将培养的大鼠GMC分为正常糖对照组(NG,含5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇渗透压对照组(HM,含5.5 mmol/L葡萄糖、24.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(HG,含30 mmol/L葡萄糖)、JTE-013干预组(HJ,含30 mmol/L葡萄糖、10μmol/L JTE-013).实时定量PCR检测培养0、12、24、48 h的细胞中SphK1、S1PR2、MCP-1 mRNA的表达,ELISA检测培养细胞上清中MCP-1的蛋白表达.结果 与NG组相比,高糖培养下的大鼠GMC中SphK1、S1 PR2 mRNA的表达在12 h下降,之后随着时间延长基因的表达量升高,48 h达高.MCP-1 mRNA的表达随培养时间的延长而升高,12 h表达已升高,24h表达为高,48 h的表达下降.高糖诱导大鼠GMC的MCP-1蛋白分泌增加,呈时间依赖性.GMC经JTE-013处理后,高糖继续培养24h,与HG组相比,HJ组SphK1、S1PR2、MCP-1 mRNA及MCP-1蛋白的表达明显下降.结论 抑制S1PR2的活性可引起高糖培养下的大鼠GMC中SphK1、MCP-1表达下调.
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CCL21通过上皮间质转化促进胰腺癌Panc-1细胞的迁移
目的 研究C-C趋化因子配体21(CCL21)促进胰腺癌细胞迁移的作用机制.方法 TranswellTM检测不同浓度CCL21对胰腺癌Panc-1细胞的趋化作用;实时定量PCR检测穿梭到下室的胰腺癌细胞C-C趋化因子受体7(CCR7) mRNA的表达水平;Western blot法和免疫荧光法检测穿梭至TranswellTM下室胰腺癌细胞CD133及上皮间质转化(EMT)的特定蛋白表达.以TranswellTM小室的上室细胞作为对照组.结果 在(0、50、100、200) ng/mL CCL21的趋化作用下,穿梭到下室的Panc-1细胞数分别为(13.00±3.00、78.00±9.00、161.00±11.00、281.00±17.00),四组细胞数差异具有统计学意义;随着CCL21浓度增高,穿梭到下室的细胞数增多;CCL21趋化到下室的Panc-1细胞比未穿梭的上室Panc-1细胞CCR7 mRNA的表达水平增高.穿梭到下室的Panc-1细胞CD133、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、波形蛋白(vimentin)、上皮性钙黏素(E-cadherin)蛋白相对表达量分别为(0.46±0.03、0.42 ±0.04、2.94±0.15、0.12±0.02),与上室细胞相比,差异均具有统计学意义.结论 CCL21对高表达CCR7的胰腺癌干细胞具有趋化作用.CCL21通过EMT及上调MMP-9促进胰腺癌干细胞的转移.
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胎牛小肠上皮干细胞的分离和培养并诱导其向肝细胞样细胞分化
目的 建立胎牛小肠上皮干细胞(IESC)分离和培养的体系,并检测其表面标志物及向肝细胞样细胞分化的潜能.方法 取3～5月龄胎牛,分离小肠组织,用胶原酶消化获得IESC,在DMEM/F12培养基中培养,观察其形态学特征.传代培养、生长曲线分析其增殖能力,并探索体外分化潜能.反转录PCR检测IESC标志基因Bmi1、Hes1、Lgr5和细胞角蛋白19(CK19)的mRNA表达,免疫细胞化学染色检测CK19、Bmi1、LGR5蛋白的表达.经成纤维细胞生长因子4(FGF-4)和肝细胞生长因子(HGF)诱导后,通过糖原染色和反转录PCR法观察向肝细胞样细胞的分化情况.结果 IESC可在体外扩增培养,表达CK19、Bmi1、Hes1、Lgr5的mRNA和CK19、Bmi1、LGR5蛋白,诱导后细胞糖原染色阳性,表达甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)的mRNA.结论 成功建立了IESC的分离培养方法,并成功诱导IESC向肝细胞样细胞分化.
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慢病毒载体介导Nanog小分子干扰核糖核酸抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长
目的 构建对Nanog基因有干扰作用的慢病毒载体,探讨其在人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤模型中的表达,检测其对裸鼠移植瘤生长的影响.方法 将前期细胞实验验证有效的siRNA序列构建于慢病毒载体中,制备携带shRNA-Nanog的慢病毒,同时构建胃癌裸鼠移植瘤模型.以lentivirus-shRNA-Nanog感染的裸鼠作为实验组(目的组),以无关序列慢病毒感染的裸鼠(空载体组)及未感染的裸鼠(未感染组)作为对照组,测量肿瘤瘤体体积及质量的变化;活体荧光成像观察总荧光强度及转移情况,Western blot法检测移植瘤组织中Nanog蛋白的表达情况;TUNEL法观察其对皮下移植瘤细胞凋亡的影响.结果 经基因测序鉴定,Nanog基因shRNA重组慢病毒表达载体构建成功.活体荧光成像显示感染27 d后,目的组小鼠肿瘤总荧光强度明显低于空载体组和未感染组,裸鼠移植瘤瘤体积及瘤质量小于未感染组及空载体组;Western blot法显示目的组Nanog蛋白表达较对照组明显降低;TUNEL结果显示目的组凋亡指数较对照组明显增大,而空载体组与未感染组比较,差异无统计学意义.结论 成功构建了Nanog基因shRNA表达载体并包装成慢病毒颗粒,在体内感染能明显抑制肿瘤生长.
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TAT-Ag85B蛋白疫苗的制备和抗结核分枝杆菌效果评价
目的 探讨利用HIV反向转导结构域(TAT-PTD)系统表达的转导性Ag85B蛋白疫苗的抗结核分枝杆菌效应.方法 构建pET28a-Ag85B、pET28a-TAT-Ag85B质粒,原核表达纯化和鉴定后获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;将BALB/c小鼠随机分为3组:Ag85B组,TAT-Ag85B组,PBS组.重组蛋白经皮下免疫小鼠3次,末次免疫后1周处死部分小鼠,ELISA检测小鼠血清中Ag85B抗体滴度,以及脾细胞分泌的γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)的水平;用流式细胞术检测巨噬细胞经Ag85B、TAT-Ag85B蛋白刺激后表面分子CD80、CD86变化情况;剩余小鼠经尾静脉感染H37 Rv结核分枝杆菌,感染后第1、2、4、8周动态监测小鼠肺和脾内结核分枝杆菌载量,并在感染后8周取肺脏进行HE染色,观察肺组织病变情况.结果 成功获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;与Ag85B相比,TAT-Ag85B诱导小鼠表达高水平的IgG和IFN-γ、IL-2,感染小鼠的脾、肺结核分枝杆菌载量明显减少,肺组织病变范围小、结核分枝杆菌数量少.另外,TAT-Ag85B增强巨噬细胞表面分子CD80/CD86的表达.结论 TAT-Ag85B蛋白疫苗增强巨噬细胞的抗原提呈能力,诱导小鼠产生强烈的Th1免疫应答,有一定的抗结核分枝杆菌保护作用.
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舒尼替尼抑制小鼠骨髓来源树突状细胞表面PD-L1和PD-L2的表达
目的 观察小鼠髓源性树突状细胞(DC)在舒尼替尼刺激下,其表面程序性死亡分子1配体1(PD-L1)和PD-L2的表达变化.方法 取小鼠骨髓细胞,对照组加入二甲基亚砜,实验组分别加入(100、200、300) ng/mL舒尼替尼,刺激48 h,用流式细胞术检测DC表面PD-L1和PD-L2的表达水平.结果 与对照组相比,实验组中成熟DC(mDC)和总DC(包括mDC和imDC)表面PD-L1的表达水平显著降低;表达PD-L1的未成熟DC(imDC)、mDC和DC百分比均显著降低,表达PD-L2的mDC百分比显著降低;表达PD-L2的DC百分比在100 ng/mL、300 ng/mL舒尼替尼组中显著降低.结论 舒尼替尼可显著降低小鼠DC表面PD-L1、PD-L2的表达.
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过表达miR-16下调IL-4诱导分化的THP-1细胞IL-10和Arg1的表达
目的 探讨慢病毒介导的miR-16对THP-1巨噬细胞表达白细胞介素10(IL-10)和精氨酸酶1(Arg1)的影响.方法 利用重组人IL-4(rhIL-4)将THP-1细胞诱导分化为M2型巨噬细胞,利用ELISA检测诱导前后细胞IL-10的分泌,实时荧光定量PCR检测THP-1巨噬细胞诱导前后miR-16的表达;通过慢病毒感染获得miR-16过表达细胞;ELISA检测miR-16过表达细胞和对照细胞IL-10的分泌;流式细胞术检测miR-16过表达细胞和对照细胞IL-10的表达;Western blot法检测miR-16过表达细胞和对照细胞Arg1的表达.结果 THP-1细胞经IL-4诱导后,培养上清中IL-10的分泌逐渐增加,并在第6天达峰值.IL-4将THP-1细胞诱导为M2型巨噬细胞后,miR-16表达下调;慢病毒感染M2型巨噬细胞经嘌呤霉素筛选后GFP表达率提高至97.7％;ELISA检测M2型巨噬细胞miR-16过表达组上清液中IL-10的分泌量为(72.15 ±0.16) pg/mL,较对照组(103.47±0.14) pg/mL低.流式细胞术检测显示miR-16过表达细胞IL-10的平均荧光强度(Gm)为3.47,胞内IL-10的表达水平较对照组(Gm=12.40)低.过表达miR-16后,M2型巨噬细胞中Arg1表达降低.结论 慢病毒介导的miR-16能够抑制IL-4诱导分化的THP-1巨噬细胞中IL-10和Arg1的表达.
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表没食子儿茶素没食子酸酯抑制脂多糖诱导巨噬细胞趋化因子的表达
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和巨噬细胞炎症蛋白2(MIP-2)表达的影响.方法 小鼠RAW264.7巨噬细胞用1 mg/L LPS进行刺激,采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测MCP-1与MIP-2 mRNA水平、ELISA检测培养液中MCP-1与MIP-2的蛋白含量.结果 1mg/L LPS可显著刺激RAW264.7细胞MCP-1和MIP-2 mRNA表达,单独EGCG对MCP-1和MIP-2基因表达无明显影响,但EGCG可以抑制LPS诱导的MCP-1和MIP-2的表达,并存在剂量依赖效应.结论 EGCG能以剂量依赖方式抑制LPS诱导的巨噬细胞MCP-1和MIP-2的表达.
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氧化应激介导糖原合成酶激酶-3β促进肝细胞凋亡
目的 探讨糖原合成酶激酶-3β (GSK3β)在氧化应激诱导肝细胞凋亡中的作用.方法 以人肝HL-7702细胞为研究对象,H2O2/抗霉素A诱导细胞产生氧化应激,建立肝细胞凋亡模型.SB216763为GSK3β特异性抑制剂,在H2O2/抗霉素A给药前2h干预.采用钙黄绿素乙酰甲酯/碘化丙啶(PI)双染色观察细胞存活情况,采用annexin Ⅴ-FITC/PI联合流式细胞术检测细胞凋亡,同时对细胞培养上清进行乳酸脱氢酶(LDH)检测来评价细胞死亡程度;Western blot法检测p-GSK3β、GSK3β、caspase-3、cleaved caspase-3、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和细胞色素C(CytC)蛋白的表达.结果 H2O2/抗霉素A诱导的氧化应激促进了GSK3β活性增加,抑制GSK3β活性缓解了氧化应激和由氧化应激引起的细胞凋亡.与氧化应激模型组相比,SB216763干预组中PI染色的细胞显著减少,流式细胞术检测细胞凋亡率降低,细胞培养上清中LDH显著降低,Western blot法结果显示干预组中cleaved caspase-3、JNK、CytC蛋白表达下降.结论 GSK3β是氧化应激诱导细胞凋亡通路中的一种重要信号分子,抑制其活性可减轻氧化应激而改善肝细胞凋亡.
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糖原合酶激酶3β抑制剂TWS119激活NK细胞Wnt/β-catenin信号通路促进CD62L表达
目的 探讨糖原合酶激酶3β抑制剂4,6-二取代吡咯并嘧啶(TWS119)调控Wnt/β-catenin信号通路对NK细胞增殖和表型的影响.方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),加入到含重组人IL-2和人AB血清的NK细胞完全培养基中诱导培养,获得NK细胞.(0～ 8.0) μmol/L TWS119处理NK细胞72 h,Western blot法检测NK细胞β-catenin的表达、CCK-8法测定NK细胞增殖能力;流式细胞术检测各组NK细胞CD107a和CD62L(L-选择素)的表达.结果 培养10 d后的NK细胞纯度达到(61.76±3.74)％;TWS119能够活化NK细胞Wnt/β-catenin信号通路.(0～2.0) μmol/L TWS119处理NK细胞,能显著促进NK细胞增殖,浓度大于2.0 μmol/L时增殖率逐渐降低.(0～8.0) μmol/L TWS119处理NK细胞,CD62L的阳性表达率逐渐升高,且呈剂量依赖性;与之相反,CD107a阳性表达率逐渐下降.结论 TWS119活化NK细胞Wnt/β-catenin信号通路可获得早期成熟的CD62L+ NK细胞.
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沉默癌胚抗原相关细胞黏附分子1基因抑制SHG44人胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡
目的 采用RNA干扰技术(RNAi)沉默癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)基因的表达,观察沉默效果及沉默CEACAM1表达后对SHG44人胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计并化学合成针对CEACAM1的3对小干扰RNA(siRNA),脂质体法瞬时转染SHG44细胞.流式细胞术(FCM)检测转染效率,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测siRNA转染前后SHG44细胞中CEACAM1 mRNA的表达,Western blot法检测CEACAM1蛋白的表达.CCK-8法检测SHG44细胞细胞增殖活性,annexin Ⅴ-FITC/PI染色结合FCM检测SHG44细胞凋亡,Western blot法检测cleaved caspase-3和裂解型多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)的变化.结果 CEACAM1 siRNA转染效率达85％.与空白对照组和阴性对照组比较,qRT-PCR及Western blot结果显示,3组特异性siRNA转染48 h后,在mRNA和蛋白水平上CEACAM1的表达均降低,以CEACAM1-siRNA3效果明显.siRNA组SHG44细胞的增殖能力较正常对照组明显下降,凋亡细胞比例增加.沉默CEACAM1表达可以上调cleaved caspase-3和cleaved PARP的表达.结论 沉默CEACAM1基因表达可有效抑制SHG44胶质瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡.
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肝再生增强因子通过增加调节T细胞数量保护小鼠急性肝损伤
目的 研究肝再生增强因子(ALR)保护急性肝损伤的作用及机制.方法 将30只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、急性肝损伤组和ALR干预组.急性肝损伤组小鼠按2mL/kg体质量的剂量予以腹腔注射500 mL/L四氯化碳(CCl4)矿物油溶液1次.ALR干预组于CCl4注射前8h尾静脉注射ALR质粒,正常对照组注射等量生理盐水注射液.收集小鼠肝组织和血液标本,HE染色观察肝组织病理形态学变化;生化法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;流式细胞术检测肝组织中调节性T细胞(Treg)的数量,实时定量PCR(qRT-PCR)检测肝组织Foxp3、ALR、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平.结果 ALR干预组小鼠肝组织中ALR mRNA表达水平显著高于急性肝损伤组和正常对照组,急性肝损伤组与正常对照组相比无明显差异;流式细胞术检测结果显示ALR干预组小鼠肝组织中CD25+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞为(5.90±0.10)％,高于急性肝损伤组的(4.23±0.46)％和正常对照组的(2.93±0.74)％,急性肝损伤组显著高于正常对照组;ALR干预组小鼠肝组织中Foxp3 mRNA表达水平高于急性肝损伤组和正常对照组,急性肝损伤组高于正常对照组,但差异无统计学意义;ALR干预组与急性肝损伤组相比,IL-6 mRNA、TNF-α mRNA表达水平降低,而与正常对照组相比无明显变化,急性肝损伤组与正常对照组相比,IL-6 mRNA、TNF-α mRNA表达水平明显升高.结论 ALR通过上调Treg数量保护小鼠急性肝损伤,可能与Treg下调肝脏IL-6、TNF-α表达有关.
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瘦素促进低氧状态下大鼠气道平滑肌细胞增殖及HIF-1α、NF-κB表达
目的 研究瘦素对低氧状态下大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖及缺氧诱导因子1α (HIF-1α)、核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 分常氧、低氧2种状态体外培养大鼠ASMC,按随机数字表法将低氧组细胞分为低氧组、50 μg/L瘦素联合低氧组(L50组)、100μg/L瘦素联合低氧组(L100组)、200 μg/L瘦素联合低氧组(L200组)、200 μg/L瘦素联合低氧和瘦素受体抗体组(ob-R抗体组).各组均孵育24h,CCK-8法检测细胞增殖率,反转录PCR检测HIF-1 α、NF-κB的mRNA的表达,Western blot法检测HIF-1α、NF-κB的蛋白表达.结果 与常氧组相比,各低氧组细胞增殖活性明显增强;与低氧组相比,L50、L100、L200组细胞增殖活性增强,并与浓度呈正相关(r=0.992);与L50、L100、L200组相比,ob-R抗体组细胞增殖明显降低.与常氧组相比,各低氧组HIF-1α、NF-κB的mRNA及蛋白表达增加;与低氧组相比,L50、L100、L200组HIF-1α、NF-κB的mRNA及蛋白表达增加,并与浓度呈正相关;与L50、L100、L200组相比,ob-R抗体组HIF-1α、NF-κB的mRNA及蛋白表达降低.结论 瘦素能促进低氧状态下ASMC增殖,并且能够促进HIF-1α、NF-κB的表达.
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人易感H6N1禽流感病毒血凝素蛋白的B细胞抗原表位预测及进化分析
目的 预测人易感H6N1禽流感病毒血凝素蛋白的B细胞抗原表位,并分析其进化特征.方法 从GISAID和GenBank两大数据库获得人易感H6N1病毒的血凝素蛋白及近缘序列,采用多款预测软件分别预测了其B细胞线性和构象型抗原表位,并分析了这些表位的保守性、适应性和进化特征.结果 综合各种因素共预测出4个线性表位(表位A、B、C和D)和2个构象型表位(表位E和F).表位C和位点41、157、186、187在进化过程中易发生突变,其余表位较为保守,其中表位D保守;位点157受到强烈的正选择作用,它可能是H6N1病毒逃避宿主免疫系统攻击的一个关键位点.结论 人易感H6N1禽流感病毒血凝素蛋白拥有5个保守的B细胞抗原表位(3个线性、2个构象型)和1个正选择作用位点,将为其疫苗的研制、致病机制的理解和病毒防治提供理论基础.
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miR-25靶向RECK促进宫颈癌HeLa细胞的增殖
目的 探讨微小RNA-25(miR-25)对宫颈癌HeLa细胞增殖活性的影响及其与逆向诱导的带Kazal基序的富含半胱氨酸蛋白(RECK)的靶向关系.方法 构建pcDNATM6.2-GW-pre-miR-25、pmirGLO-野生型RECK (RECK-WT)和突变型RECK(RECK-MT)真核表达载体及miR-25抑制剂(anti-miR-25),采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测pre-miR-25和anti-miR-25在HeLa细胞中的转染效率,并采用MTT法分析miR-25对HeLa细胞增殖活性的影响,双萤光素酶报告基因、qRT-PCR和Westernblot法检测miR-25与RECK靶向关系.结果 测序结果显示pcDNATM6.2-GW-pre-miR-25、pmirGLO-RECK-WT和pmirGLO-RECK-MT重组载体构建成功,qRT-PCR提示pre-miR-25与anti-miR-25在HeLa细胞中具有良好的转染效率.MTT结果显示miR-25能够明显促进HeLa细胞的增殖.双萤光素酶报告基因检测显示共转染pre-miR-25与RECK-WT的HeLa细胞其萤光活性显著下降,同时qRT-PCR及Western blot也显示anti-miR-25在转录和转录后水平均能够显著增加HeLa细胞中RECK的表达.结论 miR-25能够靶向RECK,促进宫颈癌HeLa细胞的增殖.
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类风湿性关节炎患者外周血Th17细胞/调节性T细胞比例增加并与疾病活动相关
目的 通过检测类风湿性关节炎(RA)患者外周血Th17细胞、调节性T细胞(Treg)的相对数量,探讨其在RA发病机制中的作用及其临床意义.方法 选取符合入组标准的RA患者60例及健康体检者15例,采用流式细胞术检测Th17细胞/Treg占外周血CD4+细胞百分比,比较其在RA患者与健康体检者间的差异,分析其表达与肿胀关节数、压痛关节数、28个关节疾病活动度评分(DAS28)、疼痛视觉模拟评分(VAS)、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)的关系.结果 与健康对照组比较,RA组患者外周血Th17细胞数量明显增加、Treg数量明显减少.RA患者外周血中Th17细胞数量与肿胀关节数、压痛关节数、DAS28分值及CRP呈正相关;RA患者外周血中Treg的数量与肿胀关节数、压痛关节数、疼痛VAS、DAS28分值、ESR及CRP等病情活动指标无明显相关性.结论 RA患者外周血Th17细胞增加,Treg减少,以Th17占优势,Th17细胞数量增加与RA病情活动有关.
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自体肿瘤抗原致敏的树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞治疗晚期肾癌的疗效观察
目的 探讨负载自体肿瘤抗原的树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)在晚期肾癌治疗中的临床疗效,并监测患者的免疫状态及不良反应.方法 回顾分析2011-01/2013-12期间在我科治疗的82例晚期肾癌患者,单采其外周血单个核细胞(PBMC),其中贴壁细胞经体外诱导产生DC,并负载自体肿瘤细胞裂解物(Ag)制备Ag-DC;T淋巴细胞经体外诱导产生CIK细胞,将Ag-DC与CIK细胞共培养制备Ag-DC-CIK瘤苗,检测DC表面分子的表达及IL-12的分泌,监测CIK细胞增殖情况,并将Ag-DC-CIK分次回输给其中41名患者,以41例单纯的CIK细胞治疗作为对照,治疗2疗程后,检测患者外周血细胞因子水平及T细胞亚群变化,结合影像学等检查综合评价疗效,同时观察不良反应.结果 负载肿瘤细胞冻融抗原的DC,高表达CD11c、CD83、CD86、HLA-DR表面分子,IL-12的分泌显著增加.Ag-DC与CIK细胞共培养后,可明显刺激CIK细胞的增殖,同时CD3+ CD8+细胞及CD3+ CD56+细胞的含量明显增加,此外,Ag-DC-CIK瘤苗的临床疗效明显高于单纯CIK细胞治疗组,2组均未发生严重的不良反应.结论 晚期肾癌PBMC来源的DC负载自身肿瘤细胞冻融抗原能提高晚期肾癌患者的免疫状态.
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人外周血IL-35水平与乙型肝炎疫苗免疫效果相关性分析
目的 研究外周血单个核细胞(PBMC)和血清中IL-35的水平与乙型肝炎疫苗免疫效果的关系,探讨影响乙型肝炎疫苗免疫应答的可能原因.方法 随访400名按标准方案接种乙型肝炎疫苗后的健康大学生志愿者,化学发光法定量检测乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb),随机选取无应答、弱应答组和中、强应答组各8人,分离PBMC,并提取总RNA,实时定量PCR检测构成IL-35的EB病毒诱导基因3(EBI3)和IL-12p35 mRNA表达水平;随机选取无应答、弱应答者和中、高应答者各40名,ELISA检测、比较2组人群血清中IL-35的含量,并与HBsAb水平进行相关性分析.结果 乙型肝炎疫苗免疫后中、强应答组PBMC中EBI3和IL-12p35 mRNA的含量显著高于无应答、低应答组,分别是无应答、低应答组的(12.73 ±2.26)倍和(7.93±1.06)倍;另外,中、强应答组人群血清中IL-35平均含量为(111.50±49.53)ng/L,显著高于无应答、弱应答组的(15.01±12.82) ng/L;血清HBsAb水平与IL-35含量呈正相关(r=0.84).结论 外周血中IL-35水平与机体对乙型肝炎疫苗的免疫效果有关,IL-35水平低下可能是乙型肝炎疫苗无应答、弱应答发生的原因或机制之一.
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7596例患者血清不规则抗体分析与临床意义
不规则抗体是指不符合ABO血型Landsteiner规则的血型抗体,即抗A、抗B以外的血型抗体;常通过异型输血、妊娠免疫刺激产生,以IgG为主,少部分为IgM;IgG现已成为引起交叉配血困难[1-2]和免疫溶血性输血反应的重要影响因素.不规则抗体检查是保证安全输血的重要实验,本研究将对7596例患者的不规则抗体检查结果进行总结分析.
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类风湿性关节炎患者血清中结缔组织生长因子水平分析
目的 研究类风湿性关节炎(RA)患者血清中结缔组织生长因子(CTGF)的水平,分析其临床意义.方法 采用ELISA检测40例RA患者和20例正常对照者血清中CTGF水平,并分析与RA患者各临床和实验室指标相关性.结果 RA组患者血清的CTGF水平高于健康对照组.在DAS28≥5.1的RA高疾病活动度组患者血清CTGF水平高于DAS28＜ 5.1的中低疾病活动度组患者.RA的血清CTGF水平与类风湿因子水平呈正相关,与血沉、C反应蛋白(CRP)、DAS28评分无明显相关性.结论 RA患者尤其高疾病活动度组RA患者血清CTGF水平明显升高,与RF水平呈正相关.
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结核分枝杆菌耐热抗原激活的人γδT细胞Th2极性分化特征以及T-bet/GATA-3对分化的调控作用
目的 研究结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)激活的人外周血γδT细胞Th2极性分化特点和表达于T细胞中的T盒(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)转录因子的调控作用.方法 用MTB-HAg刺激人外周血单个核细胞(PBMC)获得MTB-HAg激活的T细胞(MTBAT),分别在中性条件和Th2极化条件培养后,再经10 ng/mL佛波醇酯(PMA)、500 ng/mL离子霉素(ionomycin)和2.5 μmol/L莫能菌素(monensin)刺激6h,四色荧光抗体染色流式细胞术检测γδT细胞和αβT细胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的表达.流式细胞术分选28 d MTBAT中的γδT细胞和CD4+T细胞,反转录PCR(RT-PCR)检测T-bet和GATA-3 mRNA的表达.结果 在中性条件和Th2极化条件下培养的MTBAT中,γδT细胞一直优势表达IFN-γ,而Th2极化条件下,随培养时间增加IFN-γ+αβT细胞百分率显著下降.与中性条件培养比较,Th2极化条件下MTBAT培养28 d,Th0型(IFN-γ+ IL-4+)γδT细胞显著增加;而Th2型(IFN-γ-IL-4+)αβT细胞显著增加.RT-PCR结果显示,Th2极化的γδT细胞仍高表达T-bet mRNA,而在CD4+T细胞T-betmRNA表达被显著下调;同时,GATA-3 mRNA在γδT细胞和CD4+T细胞的表达均显著上调.结论 Th2极化条件下,大部分γδT细胞仍为Th1型,仅部分极性分化为Th0型细胞;Th2极性分化的γδT细胞转录因子T-bet和GATA-3未表现出交互调节功能.
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HBV感染孕妇胎盘绒毛Hofbauer细胞并与HBV复制水平有关
目的 探讨胎盘Hofbauer细胞在乙型肝炎病毒(HBV)垂直传播中的作用.方法 以酶消化法、机械法、Ficoll-Hypaque分离法等多种方法分离纯化HBV感染孕妇流产绒毛Hofbauer细胞,CD163免疫组织化学染色鉴定Hofbauer细胞,PCR法检测绒毛Hofbauer细胞内HBV-DNA,实时定量PCR (qRT-PCR)检测Hofbauer细胞内CD16(FcγRⅢ)mRNA表达,免疫组织化学染色检测Hofbauer细胞CD16蛋白表达.结果 HBV感染孕妇流产绒毛Hofbauer细胞内HBV-DNA阳性率为31.67％ (19/60),其中乙型肝炎e抗原阳性(HBeAg+)和HBeAg-孕妇绒毛Hofbauer细胞内HBV-DNA阳性率分别为46.4％(13/28)和18.75％(6/32).qRT-PCR检测发现在HBV-DNA+的Hofbauer细胞内CD16 mRNA表达增加,其表达水平与HBV-DNA载量明显相关.免疫组织化学染色显示HBV-DNA+患者Hofbauer细胞胞膜和胞质CD16着色较HBV-DNA-者明显增强.结论 Hofbauer细胞作为胎盘巨噬细胞可被HBV感染,其感染率与体内病毒复制水平密切相关.
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杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性与原发性胆汁性肝硬化的相关性分析
目的 探讨江苏汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性.方法 收集2011-06-01/2013-07-31期间江苏省常州三院住院的PBC患者122例和198例相匹配的无血缘关系健康人群外周血标本.采用实时荧光定量PCR检测KIR基因多态性,分析KIR基因及基因型频率在2组人群间的差异.结果 PBC患者KIR2DL2和2DS2基因频率比对照组显著性降低,与降低疾病的患病风险有关.共检测出55种KIR基因型,其中PBC组24种,对照组47种.常见的基因型为AA1,其次为BX2、BX8、BX4、BX14.对存在于5个或以上个体的11个基因型进行分析,未发现PBC组与对照组之间有显著性差异.结论 KIR2DL2和2DS2的缺失可能是江苏地区汉族人群PBC发病潜在的保护因子.
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部分血液系统疾病对血型血清学检测的影响及鉴定结果分析
目的 探讨部分血液系统疾病血型抗原抗体减弱和血浆蛋白异常变化对血型血清学检测的影响及其鉴定方法.方法 采用正反定型、吸收放散试验、抗体筛选、抗体特异性鉴定及抗人球蛋白试验进行鉴定分析.结果 56例血液系统疾病患者中正反定型不符由血型抗原抗体减弱引起20例(35.7％),由冷凝集素和血浆球蛋白增高及抗M引起抗体筛选阳性及交叉配血不合36例(64.3％).正定型不符16例中,由A抗原减弱引起10例,B抗原减弱引起6例;反定型不符40例中,由抗A减弱引起3例,抗B减弱引起1例,由冷凝集素引起21例,由血浆球蛋白增高引起12例,由抗M特异性抗体引起3例.36例抗体筛选阳性中由冷凝集素引起21例(58.4％),由血浆球蛋白增高引起12例(33.3％),由抗M引起3例(8.3％).交叉配血中,主侧配血不合36例,次侧配血不合33例,经37℃孵育及4℃吸收冷凝集素,用间接抗人球蛋白试验交叉配血,36例中主侧配血不合3例,次侧配血不合33例(直接抗人球蛋白试验阳性).结论 采用正反定型、吸收放散试验、抗体筛选、抗体特异性鉴定及抗人蛋白试验,可准确鉴定部分血液系统疾病患者的ABO血型,输血时应以输注同型血液制剂为原则.
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新风胶囊改善类风湿性关节炎患者心功能的机制
目的 观察类风湿性关节炎(RA)患者心功能变化,外周血B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)及氧化应激相关指标变化,探讨中药新风胶囊(XFC)改善RA心功能的机制.方法 选取100例RA患者随机分为2组:XFC治疗组50例和来氟米特(LEF)对照组50例;30d为1个疗程,连续用药1个疗程;并从体检中心抽取40例健康人作为正常对照.采用流式细胞术检测BTLA表达频率及活化水平,采用魏氏法测定血沉(ESR),全自动生化分析仪测定C反应蛋白(hs-CRP)和类风湿因子(RF).ELISA检测2组血清细胞因子(IL-1β、IL-17、IL-35、IFN-γ)及氧化应激指标[总抗氧化能力(TAOC)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)]的含量.采用超声心动图检测2组心功能参数:心脏射血分数(EF％),每搏输出量(SV％),心室短轴缩短分数(FS％).二尖瓣血流舒张早期峰值流速(E)、二尖瓣血流房缩期峰值流速(A)、E波与A波峰值流速的比值(E/A).结果 与正常组相比,RA患者心功能参数EF％、E峰、E/A明显降低,A峰明显升高,FS％无明显差异.RA患者IL-1β、IL-17和ESR、CRP升高,BTLA、IL-35、IFN-γ降低;外周血ROS、MDA明显升高,SOD、GSH明显降低;相关性分析结果显示:心功能参数EF％、FS％与CD24+细胞、CD19+ CD24+细胞呈负相关,E/A与BTLA呈正相关,A峰与CD19+细胞呈正相关;EF％与ROS呈正相关,SV与MDA、SOD呈正相关;E峰与TAOC呈负相关.药物干预后,XFC组治疗RA总有效率为86％,能有效改善EF％、FS％、E峰、E/A等心功能参数,升高外周血SOD、GSH,降低ROS、MDA,升高BTLA、IL-35、IFN-γ,降低IL-1β、IL-17;与对照组相比,XFC在改善患者DAS28、提高心功能参数等方面优于LEF.结论 XFC通过提高外周血CD19+和CD24+B细胞的BTLA表达,抑制B细胞介导的体液免疫,减轻氧化应激损伤,从而改善心功能.
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志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70(DnaK)多克隆抗体的制备和鉴定
目的 制备小鼠抗志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70 (DnaK)的多克隆抗体,并鉴定其特异性和效价.方法 PCR扩增M90T中的基因dnaK插入到原核表达载体pET-24a中,获得pET24a-dnaK重组质粒,然后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过亲和柱纯化融合蛋白DnaK-His.将纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采集抗血清.用免疫印迹法、ELISA和免疫荧光技术鉴定抗血清的特异性和效价.结果 重组质粒pET24a-dnaK在大肠杆菌BL21(DE3)中可以高效表达.用纯化的融合蛋白DnaK-His免疫小鼠制备得到的多克隆抗体能特异性低检测志贺菌福氏5a M90T DnaK蛋白,能有效地用于免疫印迹法、ELISA和免疫荧光等试验.结论 成功制备了抗志贺菌福氏5a M90T DnaK蛋白的小鼠多克隆抗体.
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抗人CA50单克隆抗体的制备、鉴定及其应用
目的 制备抗人糖抗原50(CA50)单克隆抗体(mAb),鉴定其免疫学特性并建立化学发光免疫分析法检测体系.方法 将人CA50抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选后得到稳定分泌抗CA50抗体的杂交瘤细胞株.经细胞扩大培养及纯化获得mAb后,建立化学发光免疫分析法检测体系,并对其线性范围、准确度、灵敏度、重复性进行评估,同时进行血样的测定.结果 筛选出4株抗人CA50的杂交瘤细胞株,效价均在1∶108以上,2株配对抗体不与CA125、CA153、CA199、CA724交叉.建立的化学发光免疫分析法检测范围为0～500 U/mL,回收率为107.08％,灵敏度为0.83 U/mL,重复性CV值＜10％,与参比试剂检测血样的结果比较符合率为96.7％,Kappa值为0.911.结论 成功制备了抗人CA50mAb,建立了人CA50的化学发光免疫分析法检测体系.
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大鼠TLR2胞外段(405T-573Q)多克隆抗体的制备及活性鉴定
目的 制备大鼠Toll样受体2胞外段(TLR2ex,405T-573Q)的多克隆抗体并鉴定其活性.方法 用反转录PCR从大鼠肝细胞中扩增长507个碱基的TLR2部分胞外段,并构建重组表达载体pET28a-TLR2ex.在大肠杆菌BL21(DE3)中表达TLR2ex-6×His融合蛋白,该蛋白经亲和层析纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体.ELISA鉴定抗血清的效价,Western blot法检测抗血清的特异性.结果 成功构建了原核表达载体pET28a-TLR2ex,并成功表达纯化了TLR2ex-6×His融合蛋白,将该蛋白免疫BALB/c小鼠后获得抗血清;Western blot法结果显示该血清可以特异性地检出E3大鼠脾组织TLR2蛋白,ELISA测定该多克隆抗体的效价可以达到1∶76 800.结论 成功制备了大鼠TLR2胞外段(405T-573Q)的多克隆抗体.
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调节性T细胞在过敏性疾病发病机制中的作用
迄今发现至少有6种调节性T细胞(Treg).过敏性疾病发生的重要环节之一是Treg功能缺失或受到抑制而导致机体对过敏原的免疫耐受力降低,从而促使幼稚型CD4+T细胞向Th2类细胞分化,引起过敏.因此,旨在抑制Th2细胞因子产生、促进耐受机制产生、促进Treg和抑制性细胞因子产生的抗原特异性免疫治疗,已成为过敏性疾病具有竞争力的治疗措施之一.本文综述了Treg的分类及其在过敏性疾病发病机制中的作用.
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抗菌肽中和脂多糖调节免疫功能的分子机制
抗生素的滥用导致多重耐药菌的不断产生,并且抗生素在抑杀细菌使细菌死亡的同时释放出大量脂多糖,导致机体产生内毒素休克,甚至死亡.抗菌肽通过直接与细胞膜作用造成膜的物理性损伤以及通过选择性调节宿主免疫系统来清除病原微生物,因而病原微生物很难产生耐药性.研究表明抗菌肽在杀灭细菌的同时能中和内毒素,表现出很好的抑制炎症和败血症作用.本文综述了抗菌肽调节宿主免疫力、中和脂多糖的分子机制及相关应用前景,为开展抗菌肽的转化医学研究奠定基础.
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甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2的研究进展
甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)是补体凝集素途径关键酶,位于染色体1p36上,约20kb,由686个氨基酸残基构成.通过病原相关分子模式识别病原体,与凝集素结合,以酶原形式存在的MASP-2活化,继而激活后续级联反应,致使入侵的病原体被机体清除破坏.MASP-2基因多态性普遍存在,过高或过低的MASP-2水平都不利于免疫系统正常运行,影响着多种疾病的易感性及发展进程.MASP-2血清浓度在不同疾病及同一疾病不同阶段的不尽相同.MASP-2与肿瘤、感染性疾病以及自身免疫性疾病的发生发展密切相关.
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脂氧素受体及其配体在炎症反应中作用的研究进展
炎症反应参与人体多种疾病的发生发展.脂氧素受体(FPR2/ALX)通过结合不同的配体,在炎症相关疾病中,参与炎症的调节和疾病的进展过程.淀粉样蛋白A、β淀粉样蛋白(Aβ42)和一些微生物源性分子结合FPR2/ALX后促进炎症的发生发展;内源性脂类介质脂氧素和消退素D激活FPR2/ALX,产生抗炎、促炎症消退作用.FPR2/ALX在炎症反应中表现出生物功能的多样性,为新药研究和炎性疾病的治疗提供作用靶点和研究方向.本文主要综述了FPR2/ALX与其配体在炎症反应过程中的作用.
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负性共刺激分子阻断抗体用于肿瘤治疗的研究进展
在免疫系统中,负性共刺激分子可通过受体-配体的结合而抑制免疫应答,避免免疫造成的组织损伤,在维持自身免疫耐受方面发挥重要作用.负性共刺激分子也参与调节肿瘤的发生发展,细胞毒性T细胞相关抗原4(CTLA-4)和程序性死亡分子1(PD-1)主要表达于活化的T细胞,它们与相应配体结合后可传递抑制性信号,从而抑制机体的抗肿瘤免疫,导致肿瘤免疫逃逸的发生.在肿瘤患者中,利用特异性的抗体阻断这些负性共刺激分子,可消除它们的免疫抑制功能,从而促进机体的抗肿瘤免疫应答,实现对肿瘤生长的有效抑制.现针对负性共刺激分子的阻断抗体在肿瘤治疗中的研究进展进行综述.
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Rab7在自噬体和溶酶体融合过程作用的研究进展
自噬体与溶酶体的有效融合是细胞发挥自噬功能对细胞内多余物质进行降解和再利用的关键.自噬体与溶酶体的融合受控于复杂的信号通路网络,涉及多个环节及众多分子的协同作用,并与内吞机制有部分重叠.Ras相关蛋白7(Rab7,小GTP酶家族的成员)可能是自噬体与溶酶体的融合进程中为重要的分子之一,在指导自噬体成熟、胞内负荷运输及与溶酶体的对接与融合过程中发挥重要调节功能.自噬体与溶酶体的融合障碍可引起先天性及适应性免疫应答异常,导致炎症、肿瘤及胞内微生物感染的加重.因此控制Rab7的活性可能成为治疗这些疾病的潜在靶点.
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埃博拉出血热之殇——埃博拉病毒保护性抗原和中和抗体研究进展
埃博拉病毒(EBOV)于1976年在恩扎拉(苏丹)和扎伊尔(现刚果民主共和国)同时暴发的两起疫情中被首次发现,并以后者所在的埃博拉河而得名.EBOV因流行性强和致死率高被认为是目前已知对人类为致命的病毒之一,隶属于单股负链病毒目(mononegavirales)丝状病毒科(fioviridae)埃博拉病毒属(Ebolavirus),是一种呈长丝状体的RNA病毒.截至2014年10月25日,全球共确诊EBOV感染病例10 141例,死亡4922例.EBOV以其高度的致死性威胁着人类的健康,遏制EBOV疫情需要尽早开发有效的疫苗及抗体.本文概述了研究中的EBOV保护性抗原的生物学特性、致病性、疫苗的开发和中和抗体的研制情况,并简述了保护性抗原和中和抗体的研究策略.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
