细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
- 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子: 0.81
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1007-8738
- 国内刊号: 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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带有人红细胞生成素信号肽序列的IL-1β基因在HepG2细胞中的表达
目的 构建由经典分泌途径和非经典途径表达人IL-1β的慢病毒载体,制备慢病毒后,感染HepG2肝癌细胞,比较肝癌细胞中IL-1β表达的水平.方法 分别以表达人IL-1β前体蛋白基因和人红细胞生成素(EPO)信号肽序列与IL-1β成熟蛋白融合基因的pIRES2-EGFP-proIL-1β和pIRES2-EGFP-epoIL-1β质粒为模板,PCR扩增获得人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的序列,将其分别克隆入pLenti6/V5慢病毒载体中,构建由非经典途径和经典途径分泌IL-1β的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒表达载体.利用三质粒包装体系在HEK293T细胞中包装生产慢病毒,随后感染HepG2肝癌细胞,双抗体夹心ELISA和Western blot法检测细胞质和培养上清中IL-1β的表达水平.结果 构建了含有人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒载体,经双酶切和DNA测序证实与基因库中登录的人IL-1β以及EPO信号肽序列一致.利用三质粒系统包装制备经不同途径表达IL-1β的慢病毒,研究证实经由2条不同途径分泌表达人IL-1β的慢病毒感染HepG2细胞后,与转染空载体的对照细胞相比,细胞培养液上清和胞质中IL-1β的水平均显著升高(P<0.01),其中HepG2/epoIL-1β细胞培养液上清中成熟蛋白IL-1β的水平明显高于HepG2/proIL-1β细胞,而胞质中总IL-1β的水平HepG2/proIL-1β高于HepG2/epoIL-1β.结论 构建的带有EPO信号肽序列的IL-1β基因的慢病毒载体,在HepG2细胞表达后,分泌成熟IL-1β的水平明显高于非经典途径分泌的表达载体.
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输注体外扩增的同源CD4+CD25+调节性T细胞增进小鼠肿瘤易感性
目的 研究过继输注体外扩增同源调节性T细胞(Treg)对小鼠抗肿瘤免疫的影响,探索过继输注Treg治疗方法可能存在的风险.方法 免疫磁珠分离法分离小鼠脾脏内CD4+ CD25+ Treg,流式细胞术测定其纯度后予以CD3/CD28单克隆抗体磁珠和大剂量IL-2(1 000 U/mL)刺激,进行2周2轮次扩增后收集Treg,混合淋巴细胞培养测定其体外抑制功能;后将1×107Treg静脉注射BALB/c小鼠,24h后再注射B16F10肿瘤细胞,同时设置单独接种肿瘤细胞组,14 d后计数肺部移植瘤数目,测定外周血Treg比例.结果 新鲜CD4+ CD25+ Treg纯度大于95%,平均96.3%士2.88%,体外扩增后纯度大于85%,平均87.73% ±2.35%;与新鲜Treg相比,扩增后抑制功能未受损(P>0.05);给BALB/c小鼠注射1×106 B16F1o细胞后14 d肺部肿瘤结节数为(14±5)个,先注射1 × 107体外扩增Treg后再注射1×106 B16F10细胞,肿瘤结节数增多为(73±9)个(P =0.007),与单独注射2×106 B16F10细胞相当(86±8)个(P=0.230);给C57BL/6小鼠输注5×105 B16 F10细胞后结节数为(70±15)个,预先输入8×106体外扩增Treg后再注射5×105 B16F10细胞,肺部肿瘤结节数明显增多,大于300个,与前者相比,差异有统计学意义(P<0.01),同时荷瘤小鼠外周血Foxp3+ Treg比例上升更为显著(P<0.05).结论 过继输注体外扩增Treg诱导移植物免疫耐受的同时,可能抑制机体的抗肿瘤免疫,因此存在一定风险.
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醛糖还原酶基因敲除促进视神经损伤后巨噬细胞向M2方向极化并促进视神经功能恢复
目的 观察小鼠视神经夹伤(ONC)后醛糖还原酶(AR)对视神经损伤后功能恢复的影响及可能机制.方法 分别采用C57BL/6-AR“+(B6野生型)、C57BL/6-AR-/-(AR基因敲除)、hy1-YFP/AR+/+和Thy1-YFP/AR-/-小鼠,建立ONC模型.行视觉电生理F-VEP检查,观察ONC后AR基因敲除对小鼠视神经转导功能的影响;通过视网膜组织冰冻切片,观察AR基因敲除对Thy1-YFP转基因小鼠ONC后存活视网膜神经节细胞数目的影响;玻璃体内注射Alexa Fluor(R) 488标记的霍乱毒素B(CTB)顺行标记,观察AR基因敲除对小鼠ONC后神经纤维生长的影响;Western blot法检测野生型小鼠ONC后AR基因的表达变化,及AR基因敲除对M1、M2型巨噬细胞特异性分子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)表达的影响.结果 AR基因敲除可促进小鼠ONC后视神经转导功能的恢复,增加存活的视神经节细胞数量;AR基因敲除可促进小鼠ONC后视神经纤维生长;AR基因敲除可促使小鼠ONC后巨噬细胞向M2方向极化.结论 AR可能通过调节视神经损伤后巨噬细胞极化影响视神经功能恢复.
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rL-RVG体外抑制肺癌细胞增殖并促进其凋亡
目的 将表达狂犬病毒糖蛋白的重组LaSota株新城疫病毒疫苗(rL-RVG)感染至A549肺腺癌细胞,观察其对肺癌细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法 采用直接感染的方法将rL-RVG感染至A549细胞,采用Western blot法检测rL-RVG中RVG和NDV蛋白在A549细胞内的表达;MTT法检测rL-RVG对细胞增殖的影响,TUNEL法检测rL-RVG对A549细胞凋亡的影响;Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞检测术检测A549细胞凋亡情况;Western blot法检测caspase-3的表达,并与对照组LaSota株进行比较,PBS组为空白对照组.结果 A549细胞感染rL-RVG后RVG蛋白和NDV蛋白都稳定表达,MTT法结果显示细胞增殖明显被抑制,rL-RVG组抑制率高于LaSota组.A549细胞凋亡增多,其中流式细胞检测术中显示rL-RVG组早期凋亡细胞较其他2组增多,差异有统计学意义(P<0.05),TUNEL检测凋亡指数增加,rL-RVG组较其他2组增多,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot法显示促凋亡蛋白caspase-3表达增加,加入caspase抑制剂Z-VAD-FMK后,caspase-3蛋白表达明显降低.结论 rL-RVG感染A549细胞后能在细胞内稳定表达,rL-RVG可抑制肺癌细胞生长、促进肺癌细胞凋亡,效果优于野生LaSota株.
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烟草烟雾提取物促进髓样树突状细胞共刺激分子的表达
目的 通过体外实验研究烟草烟雾提取物(CSE)对小鼠髓样树突状细胞(mDC)成熟的影响及可能的机制.方法 小鼠骨髓来源的单个核细胞加入粒-单集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和含100 mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液诱导出可供实验用的高纯度的未成熟DC (iDC),分空白对照组和CSE刺激组;CSE刺激组按15 mL/L的终浓度加入CSE,两组继续培养24h,流式细胞检测技术检测mDC的共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ的表达.结果 空白对照组的mDC低表达CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ;CSE刺激后mDC表达CD40、CD80和MHC-Ⅱ比空白对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 烟草烟雾提取物促进小鼠骨髓来源的mDC的CD40、CD80和MHC-Ⅱ的表达.
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抑制卵巢癌3AO细胞增殖并促进细胞凋亡
目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导卵巢癌3AO细胞凋亡的分子机制.方法 用(12.5、25.0、50.0) ng/mL的重组人TRAIL蛋白与卵巢癌3AO细胞共孵育72 h,观察细胞的形态变化,在不同时间段收集细胞,MTT法检测细胞生长增殖,计算细胞的生长抑制率,annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,原位末端标记法(TUNEL)观察凋亡形态特征,Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3蛋白表达.结果 各浓度组的TRAIL都可以引起3AO细胞形态学改变,对细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),25 ng/mL和50 ng/mL TRAIL处理的3AO细胞出现明显的细胞凋亡和周期阻滞,随着药物作用时间的延长,G1期细胞比例逐渐增多,而S期和G2/M期细胞比例减少,caspase-3蛋白呈高表达,但两组之间的凋亡率和凋亡蛋白的表达无显著性差异(P>0.05).结论 TRAIL是通过抑制细胞周期、阻滞DNA合成、活化caspase-3诱导卵巢癌3AO细胞凋亡.
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提高树突状细胞腺病毒感染效率的融合蛋白的表达及活性鉴定
目的 构建表达靶向树突状细胞融合蛋白CT40L的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对CT40L融合蛋白进行纯化鉴定及功能验证.方法 从GenBank上查找柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)、T4噬菌体fibritin和小鼠CD40L的基因序列,并将其主要功能区域连接形成拼接序列;序列进行原核表达密码子优化后将其克隆至原核表达载体pET42a(+),构建重组表达载体pET42a-CT40L,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达CT40L/GST融合蛋白,并采用GST琼脂糖凝胶纯化重组蛋白.纯化后的重组蛋白经Western blot法、间接ELISA鉴定其免疫活性.结果 重组表达载体经Nco Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(Mr)78000大小的重组蛋白;纯化后的蛋白纯度达到90%.Western blot法和ELISA检测证实纯化的CT40L分子能够与特异性抗体及相应受体发生反应,表明该融合蛋白具有良好的免疫学活性.结论 成功构建了原核表达载体pET42a-CT40L,利用大肠杆菌表达系统实现了融合分子的可溶性表达,纯化后CT40L融合蛋白经检测具备较高的免疫学活性.
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过表达Sprouty 2分子促进HEK293T细胞增殖与存活
目的 构建表达人Sprouty 2(SPRY2)基因的重组表达载体pDC315/hSPRY2,转染人胚肾(HEK) 293T细胞表达目的蛋白,初步探讨其对HEK293T细胞增殖与存活的影响.方法 构建hSPRY2重组腺病毒表达载体,体外转染HEK293T细胞,以Western blot法检测目的蛋白的表达,以CCK-8法检测SPRY2对HEK293T细胞增殖或去血清条件下细胞存活的影响.结果 成功构建重组表达载体pDC315/hSPRY2,在转染的HEK293T细胞中检测到目的蛋白hSPRY2的表达,转染pDC315/hSPRY2组HEK293T细胞的增殖率及存活率均明显高于对照组即转染pDC315/EGFP组(P<0.05).结论 成功构建了hSPRY2重组表达载体,过表达hSPRY2可促进HEK293T细胞的增殖与存活.
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结核分枝杆菌小分子热休克蛋白16.3蛋白的原核表达及功能检测
目的 进行结核分枝杆菌小分子热休克蛋白MTB Hsp16.3原核表达载体的构建、表达、纯化并初步观察其生物学效应.方法 提取临床H37Rv分离株基因组DNA,PCR扩增Hsp16.3基因,将其重组到原核表达载体Pet28a中,构建原核表达载体Pet28a-Hsp16.3,进行双酶切及测序鉴定.将测序正确的重组质粒转化至E.coli BL21 (DE3)中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE检测,同时通过镍柱纯化试剂盒纯化Hsp16.3,测定纯化后蛋白浓度,并进行Western blot法检测.将不同浓度纯化后蛋白作用小鼠腹腔巨噬细胞,实时定量PCR(qRT-PCR)检测巨噬细胞IL-10和IFN-γ的表达,同时设定空白对照组及阳性对照组.结果 成功构建重组质粒Pet28a-Hsp16.3,并在E.coli BL21 (DE3)中获得成功表达,通过镍柱纯化系统得到纯化Hsp16.3融合蛋白.qRT-PCR检测结果显示,不同浓度纯化后Hsp16.3蛋白作用小鼠腹腔巨噬细胞,可促进IFN-γ的产生而抑制IL-10的产生.结论 成功克隆、表达和纯化了MTB Hsp16.3蛋白,Hsp16.3能促进小鼠腹腔巨噬细胞产生IFN-γ,抑制IL-10的产生.
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sh Wnt5a重组慢病毒的制备及其对黑素瘤细胞侵袭的抑制作用
目的 构建下调人Wnt5a基因表达的重组质粒并制备重组慢病毒,感染黑素瘤细胞后,观察其对该细胞侵袭的影响.方法 构建下调入Wnt5a基因表达的重组质粒pLKO.1-sh Wnt5a,利用pLKO.1慢病毒包装系统和HEK293T细胞包装、制备携带shWnt5a的重组慢病毒颗粒,并感染WM793B黑素瘤细胞,建立稳定低表达Wnt5a的WM793BWnt5a-黑素瘤细胞株.采取细胞迁移与侵袭实验检测Wnt5a对黑素瘤细胞侵袭的影响.结果 成功制备了携带sh Wnt5a的重组慢病毒,建立低表达Wnt5a的稳定转染细胞株WM793BWn5a-,细胞迁移与侵袭实验证明抑制Wnt5a基因的表达可以显著抑制黑素瘤的侵袭能力.结论 下调Wnt5a基因的表达对黑素瘤的侵袭能力有明显的抑制作用.
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基于Keap1-NF-E2相关因子2/抗氧化反应元件探讨干燥综合征模型大鼠心功能变化的机制
目的 基于Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)-NF-E2相关因子-2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)探讨干燥综合征(SS)模型大鼠心功能变化的机制.方法 30只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组,每组15只.模型组大鼠两后足的足跖部皮下注射完全弗氏佐剂联合同种鼠颌下腺抗原造模,诱导SS模型.致炎30 d后观察大鼠的体质量变化、饮水量变化、颌下腺指数、脾指数、腺体的组织学变化;有创血流动力学监测SS大鼠心功能的变化;ELISA检测血清中活性氧(ROS)、丙二醛(M DA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(TAC)、IL-18、IL-35;免疫组织化学方法检测ROS、活性氮自由基(RNS)、谷胱甘肽(GSH)、硫氧还蛋白(TrX)蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Keap1、Nrf2、巨噬细胞活化因子(Maf)、ARE mRNA的表达;Western blot法测定大鼠心肌组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠饮水量变化显著升高(P<0.01),颌下腺指数、脾指数及体质量显著下降(P<0.05);模型组大鼠心率(HR)、心脏指数(HI)、左室收缩期压(LVSP)、左室舒张期压(LVEDP)显著升高(P<0.05),左室内压上升下降大速率(±dp/dtmax)显著下降(P<0.05);模型组IL-18、MDA、RNS、TAC、ROS含量均升高,而TrX、GSH、IL-35、SOD含量下降;同时,心组织Keap1、Maf、Nfr2的mRNA,HO-1、γ-GCS蛋白表达水平亦上升(P<0.01).结论 SS大鼠免疫平衡失调可能与Keap1、Maf、Nfr2的mRNA,HO-1、γ-GCS表达上调有关.
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中国恒河猴DNGR-1分子C型凝集素样结构域在大肠杆菌系统表达
目的 获得恒河猴C型凝集素结构域家族9的A成员(Clec9A)基因编码区序列;体外表达CLEC9A的C型凝集素样结构域(CTLD).方法 利用Clec9A基因特异引物,反转录PCR扩增中国恒河猴Clec9A基因编码区,亚克隆至pGEM-T载体,获得pGEM-T-DNGR质粒并进行测序.构建CLEC9A分子的CTLD区原核表达质粒pET-32a-CTLD,转化BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,并用SDS-PAGE和Western blot法对目的蛋白进行鉴定.结果 PCR扩增得到726 bp的Clec9A编码区全长,测序和序列比对发现恒河猴CLEC9A编码区的核苷酸序列与人和小鼠的同源性分别为95.0%和73.1%,推测的氨基酸同源性分别为91.7%和57.3%.体外表达获得相对分子质量(Mr)约32 000的CTLD融合蛋白,Western blot方法鉴定发现其与人DNGR-1分子具有相似的抗原性.结论 中国恒河猴Clec9A基因与人的高度相似并能编码与人CTLD抗原性相似的蛋白.
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下调环指蛋白2的表达促进U87脑胶质瘤细胞凋亡并增强其放射敏感性
目的 在U87脑胶质瘤细胞中下调环指蛋白2(RNF2)的表达,观察对U87细胞生长及放射敏感性的影响.方法 用含有针对RNF2基因小发夹RNA (shRNA)的表达载体转染U87细胞,利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别在mRNA及蛋白水平验证RNF2的表达下调,用MTT法检测细胞增殖,用annexin V-FTTC/PI标记结合流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况;经X射线照射后,用流式细胞术检测对照细胞和RNF2表达下调细胞的凋亡情况.结果 2条针对RNF2的shRNA均可有效抑制U87细胞中RNF2的表达.RNF2表达下调后,U87细胞的增殖受到显著抑制,S期细胞明显减少(shRNA-NC:27.31±1.35;shRNF2-1:16.72±2.90;shRNF2-3:10.35±1.33),G1期细胞显著增加(shRNA-NC:56.13士1.80;shRNF2-1:76.32±3.11;shRNF2-3:80.45±2.83),同时出现细胞凋亡.经X线照射后,RNF2下调的细胞凋亡率明显增加(shRNA-NC:20.88±0.64;shRNF2-1:39.69±0.57;shRNF2-3:47.82士0.45).结论 下调RNF2表达可明显抑制细胞生长,并增强U87细胞对放射的敏感性.
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全反式维甲酸对小鼠缺血性脑损伤的保护作用及调节性T细胞数量的影响
目的 通过检测全反式维甲酸(ATRA)处理对小鼠短暂性大脑中动脉缺血(tMCAO)后24 h的脑梗死容积以及不同时期脾脏内CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)的变化,探讨ATRA是否具有通过干预Treg分化实现对小鼠缺血性脑损伤的保护作用.方法 60只昆明小鼠随机分为预处理组(n=40)和后处理组(n=20).每组再分为tMCAO联合ATRA处理组,tMCAO联合DMSO对照组.预处理组在小鼠tMCAO前1周开始每天腹腔注射含100 mL/L DMSO的ATRA(10 mg/kg,1次/d)或100 mL/L DMSO(n =20/组).7d后处死一部分小鼠行流式细胞术(FCM)测定Treg在脾细胞中的百分率(n=10/组),另一部分小鼠通过腔内线栓法建立tMCAO模型(n=10/组),24h后进行神经行为学评分(NDS),其后行氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察脑梗死容积.后处理组在小鼠tMCAO模型建立后,即刻腹腔注射ATRA (10 mg/kg)或相等体积的100 mL/L DMSO(n=10/组),24 h后行NDS,测定脑梗死容积和Treg在脾细胞内的百分率.结果 ATRA预处理7d未能改善小鼠tMCAO后24h的神经功能障碍(P>0.05),未能降低的脑梗死容积(P>0.05).ATRA后处理可以明显改善小鼠tMCAO后24h的神经功能障碍(P<0.05),显著降低脑梗死容积(P<0.05).然而,ATRA预处理和后处理对小鼠脾脏内的Treg均无影响(P>0.05).结论 在小鼠tMCAO前给予ATRA处理7d对脑缺血损伤无保护作用,在小鼠tMCAO后及时给予ATRA治疗后24h有显著的保护作用,但与调节Treg分化无明显关系.
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卵巢浆液性肿瘤中IQGAP1与E-cadherin表达的检测
目的 探讨上皮性钙黏素(E-cadherin)与具有IQ结构域的人Ras GTP激活蛋白相关蛋白1(IQGAP1)在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其临床意义.方法 分别用免疫组织化学SP法和Western blot法检测20例卵巢浆液性囊腺癌、10例卵巢交界性浆液性囊腺瘤、10例卵巢浆液性囊腺瘤以及10例正常卵巢组织中E-cadherin和IQGAP1的蛋白表达.结果 E-cadherin蛋白在浆液性囊腺瘤中表达高,明显高于正常卵巢组织和浆液性囊腺癌组织(P<0.05),其均值高于交界性囊腺癌,无统计学意义.IQGAP1在卵巢浆液性囊腺癌中表达较正常卵巢组织、良性及交界性肿瘤组织均增高(P<0.05);免疫组织化学染色证实IQGAP1在浆液性囊腺癌中以胞膜表达为主,而在良性肿瘤中以胞质表达为主.结论 E-cadherin和IQGAP1在卵巢浆液性瘤高表达,可联合用于卵巢浆液性肿瘤的免疫组化诊断.
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胶质瘤细胞组蛋白去甲基化酶JMJD3表达降低
目的 检测和分析组蛋白去甲基化酶含十字形结构域蛋白3(JMJD3)在胶质瘸及瘤旁脑组织中的表达.方法 用组织芯片筛选出JMJD3表达阳性的胶质瘤组织,选取50例相关胶质瘤患者的石蜡标本,采用免疫组化SP法检测JMJD3在相关胶质瘤组织中的表达与定位以及与瘤旁组织中表达的差异,分析JMJD3与胶质瘤的相关性.结果 通过组织芯片筛选,发现JMJD3在正常少突胶质细胞中有表达.在50例胶质瘤患者的石蜡标本中,15例标本肿瘤组织为阳性,35例瘤旁组织为阳性.结论 与瘤旁脑组织相比,胶质瘤JMJD3的表达降低.
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血清反应因子促进人腹膜间皮细胞的转分化
目的 探讨血清反应因子(SRF)在人腹膜间皮细胞(HPMC)转分化中的作用.方法 腹膜间皮细胞由腹膜透析(PD)患者透出液离心后进行培养,观察不同透龄患者的原代腹膜间皮细胞改变,并用免疫荧光细胞化学方法检测SRF及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Snail、E-钙黏素(E-cadherin)的表达.细胞经高糖刺激发生转分化后,将SRF siRNA转染至细胞中使SRF下调,用免疫荧光细胞化学技术及Western blot法检测E-cadherin和α-SMA、Snail的表达.采用染色体免疫共沉淀(ChIP)及报告基因方法检测SRF与Snail的结合情况.结果 无菌收集50例PD患者透出液,原代培养HPMC,随着透析时间的延长,细胞从铺路石样逐渐转变为成纤维细胞样;SRF表达显著增强时,间质标志分子α-SMA的表达增强,而上皮标志分子E-cadherin 表达减弱.永生化的HPMC经高糖刺激72 h使其发生转分化后,用小干扰RNA使SRF沉默.与对照组相比,免疫荧光细胞化学染色显示SRF下调后,α-SMA、Snail的表达明显减弱,而E-cadherin表达明显增强;Western blot结果显示SRF的表达水平降低时,E-cadberin表达升高,而α-SMA、Snail的表达明显减少.ChIP结果提示,SRF可与Snail启动子区2个结合位点SRE1和SRE2结合,报告基因结果显示,SRF主要与SRE2位点结合并启动Snail的表达.结论 SRF在已发生间充质转分化的HPMC或腹膜纤维化时高表达,可能通过启动Snail表达来促进HPMC转分化.
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乳腺癌患者肿瘤组织IL-10的表达及其与预后的关系
目的 探讨IL-10在乳腺癌患者肿瘤组织中的表达与临床病理特征、预后的关系.方法 回顾性收集2000-01/2002-12期间在解放军总医院接受手术的130例Ⅰ~Ⅲ期乳腺癌患者的临床资料及石蜡切片,用免疫组织化学法检测乳腺癌原发灶IL-10蛋白的表达,分析IL-10表达与乳腺癌临床病理特征及预后的关系.结果 IL-10在肿瘤细胞及肿瘤间质细胞中均有表达.肿瘤细胞IL-10高表达与较小的肿瘤直径、较高的肿瘤分化程度、ER阳性和脉管癌栓阴性相关(P<0.05或P<0.01);在COX多因素预后分析中,肿瘤细胞质IL-10染色强度是无病生存期的独立预后因素(HR =0.443,P=0.022),IL-10+间质细胞密度是总生存期的独立预后因素(HR =0.411,P=0.051).结论 IL-10在乳腺肿瘤细胞和间质的表达强度可作为乳腺癌预后的预测指标.较低的IL-10表达水平与乳腺癌较差的预后有关.
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不孕症患者外周血中Th1、Th2细胞因子与自身抗体产生的相关性
目的 探讨免疫性不孕症患者外周血细胞因子与自身抗体产生的相关性,为免疫性不孕症的诊治提供新的思路.方法 用抗体芯片技术及ELISA检测30例免疫性不孕症患者和20例健康女性外周血中细胞因子水平及抗人绒毛膜促性腺激素抗体(AhCGAb)、抗精子抗体(AsAb)、抗卵巢抗体(AoAb)、抗子宫内膜抗体(EMAb)水平,并分析它们的相关性.结果 不孕症组外周血血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-21、TNF-α、IFN-y含量明显高于对照组(P<0.01),IL-8升高不明显(P<0.05),而其他细胞因子则无明显变化;AhCGAb、AsAb、AoAb、EMAb的阳性率均明显高于对照组(P<0.01);IL-21与AhCGAb、AsAb、AoAb、EMAb的产生呈正相关;IL-12与AhCGAb、AsAb的产生呈正相关,TNF-α与AoAb、EMAb的产生呈负相关.结论 不孕症患者外周血中细胞因子含量与自身抗体具有相关性;同时检测自身抗体及相应细胞因子有助于免疫性不孕症的诊断.
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人IL-37在大肠杆菌表达及多克隆抗体的制备与鉴定
目的 原核表达白细胞介素37(IL-37)及制备其多克隆抗体.方法 PCR扩增IL-37b成熟肽编码区基因,克隆至表达载体pET28a,转化大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化重组蛋白,以纯化的重组蛋白1L-37为免疫原免疫BALB/c小鼠制备其特异性抗体,用ELISA、Western blot法和免疫组织化学染色检测抗体的效价和特异性.结果 原核表达了重组蛋白IL-37b成熟肽,并获得高效价的小鼠抗IL-37抗体,能特异性识别天然的IL-37抗原.结论 成功制备效价高、特异性好的小鼠抗IL-37抗体.
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IL-17单克隆抗体对病毒性心肌炎小鼠的保护作用及其机制
目的 探讨IL-17单克隆抗体(mAb)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠的保护作用及可能机制.方法 90只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(n=15)、模型组(n=15)、同型对照组(n=25)及IL-17 mAb组(n=25).模型组、同型对照组、IL-17mAb组小鼠腹腔接种0.1mL内含柯萨奇病毒B3(CVB3)的Eagle液建立VMC模型,对照组仅注射Eagle液.接种后第3、5天,同型对照组腹腔注射100μg非特异性IgG,IL-17抗体组腹腔注射100μg IL-17 mAb.第7天,每组处死5只小鼠,取心脏,采用Reed-Muench法测定病毒滴度,实时荧光定量PCR检测CVB3 mRNA拷贝数.第14天称体质量后处死全部小鼠,比较各组死亡率;分离血清,ELISA测定血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)浓度;称心脏质量(HM),计算心脏指数(HM/BM);HE染色计算心肌病理积分,Western blot法测定心脏核因子-κB(NF-κB) p65表达,ELISA检测心脏IL-6、TNF-α含量.结果 模型组心脏指数、血清cTnI浓度、NF-κB p65表达水平及心脏IL-6、TNF-α含量高于对照组(P<0.01).IL-17 mAb组死亡率、心脏指数、血清cTnI浓度、心肌病理积分、病毒滴度、CVB3 mRNA拷贝数、NF-κB p65表达水平及心肌IL-6、TNF-α含量较模型组及同型对照组减少(P<0.05或P<0.01).同型对照组上述指标与模型组比较,无显著性差异(P>0.05).结论 IL-17 mAb能够减轻VMC小鼠心肌损伤,其机制可能与抑制病毒复制及NF-κB激活有关.
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氧化/还原态高迁移率族蛋白B1在自噬和凋亡中作用的研究进展
高迁移率族蛋白B1 (HMGB1),作为损伤相关模式分子与晚期的炎症介质,在炎症、自身免疫性疾病、肿瘤、神经组织的损伤与修复、器官缺血再灌注损伤以及细胞的自噬和凋亡过程中发挥着重要的作用.在调节细胞的自噬与凋亡过程中的作用与HMGB1的氧化/还原状态密切相关,即还原型HMGB1通过结合晚期糖基化终产物受体(RAGE)促进依赖于beclin 1的自噬和细胞增殖,而氧化型HMGB1促进依赖于caspase-3和caspase-9的线粒体凋亡途径.本文综述了它的3种不同的氧化/还原形式及在调节细胞自噬与凋亡中作用的研究进展.
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甘露聚糖结合凝集素与临床疾病的研究进展
甘露聚糖结合凝集素(MBL)是天然免疫补体系统中的一员,主要由肝细胞合成,作为急性期反应蛋白分泌人血清.血清MBL的水平主要由MBL2基因启动子区及外显子1区的基因多态性决定.MBL可选择性的与病原微生物(如G+/G-细菌、病毒、真菌、原生物等)、坏死损伤细胞、凋亡细胞以及肿瘤细胞等表面的相应配体结合,通过激活补体系统、调理吞噬、调节炎症反应等保护人体.血清MBL的水平对人体影响较大:当血清MBL缺乏时,机体易患某些疾病,如感染性疾病、自身免疫性疾病;但如果血清MBL水平过高,又会对自身组织造成损伤,如在心肌梗死及器官移植中,引起机体的缺血再灌注损伤;此外,MBL基因型及血清MBL水平与肿瘤的易感性可能也存在一定关系.
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microRNA在系统性红斑狼疮中的作用及其机制的研究进展
系统性红斑狼疮(SLE)病因未明、发病机制复杂.microRNA(miRNA)是一类非编码RNA分子,通过与靶基因mRNA3′UTR相互作用,使靶基因mRNA降解或翻译抑制,作为转录后基因沉默的调控分子,miRNA调控的免疫细胞发育和功能异常与自身免疫病相关.研究证实多种miRNA与SLE发病及免疫功能异常密切相关,在SLE患者中表达上调或下调并与疾病活动度相关.研究表明miRNA可能通过以下方式参与SLE发病:1型干扰素通路;异常的炎性因子分泌;DNA低甲基化和组织炎症等.本文综述了miRNA与SLE发病之间的关系及作用机制研究进展.
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树突状细胞亚群在动脉粥样硬化中的作用
动脉粥样硬化是一种免疫相关的大中动脉的慢性炎症性疾病.固有免疫应答和适应性免疫应答均参与动脉粥样硬化的发生,树突状细胞(DC)是联系固有性免疫和适应性免疫的桥梁,在启动机体免疫应答和维持免疫耐受中处于中心地位.本文综述了动脉壁中的DC亚群组成以及DC亚群在动脉粥样硬化炎症免疫中的作用,包括摄取脂质、释放细胞因子和通过调控T细胞从而影响动脉粥样硬化的发生发展,并总结了基于DC疫苗在防治动脉粥样硬化中的研究现状和展望.
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异基因间充质干细胞对T淋巴细胞的免疫调节作用
间充质干细胞(MSC)不仅具有多系分化潜能,而且具有免疫调节功能,对树突状细胞,T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞等多种免疫活性细胞的增殖、分化和功能发挥调节作用.近年来,有关MSC的免疫调节尤其对T淋巴细胞的调节作用研究颇受关注,现就近年来异基因MSC对细胞毒性T淋巴细胞、辅助性T细胞、Th17细胞和调节性T细胞的免疫调节作用进行综述.
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人源化NOD/SCID小鼠的细胞免疫重建
目的 探讨人脐带血CD34+细胞移植于非肥胖性糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠后的免疫重建作用.方法 免疫磁珠法分选人脐血CD34+细胞,经外侧尾静脉移植于亚致死量照射的NOD/SCID小鼠.移植后4、6、8、10周流式细胞术动态监测小鼠外周血人源CD45+、CD3+、CD56+细胞的数量;10周后PCR检测小鼠骨髓人ALU基因的表达,免疫组织化学染色检测小鼠脾脏人源CD3+、CD56+细胞的表达.结果 NOD/SCID小鼠经照射后骨髓腔内有核细胞及巨细胞数量均明显减少或消失,达到理想的清髓预处理效果;移植后4、6、8、10周,移植组所有存活小鼠外周血均可检测到人源性CD45+、CD3+、CD56+细胞的表达,人源淋巴细胞的数量随时间的延长面变化,8周时达到高峰,10周仍有较高的比例.10周时移植组所有存活小鼠骨髓细胞均检测到人ALU基因的表达,脾脏均检测到人CD3+、CD56+细胞;未移植组小鼠照射后2周内全部死亡.结论 经照射后的NOD/SCID小鼠通过移植人脐血CD34+细胞成功地建立了hu-SRC-NOD/SCID模型,并有效地重建了小鼠细胞免疫系统.
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猪链球菌H因子结合蛋白截短体的表达、纯化及其结合人血清IgG的活性分析
目的 构建带His标签的2型猪链球菌H因子结合蛋白(Fhb)截短表达片段Fhb-N(45-344aa)和Fhb-C(345-664aa)的重组质粒,并在大肠杆菌中表达,获得高纯度的重组蛋白,鉴定其与人血清IgG(hIgG)结合的活性.方法 以05ZYH33基因组为模板并设计引物扩增目的片段,构建His-Fhb-N和His-Fhb-C重组表达质粒,利用亲和层析纯化目的蛋白并用Western blot法进行验证.蛋白G亲和层析柱从健康人血清中纯化人IgG(hIgG),Western blot法和生物膜干涉(BLI)鉴定和分析His-Fhb与hIgG结合的活性.结果 成功构建了带His标签的原核表达质粒并获得了His-Fhb-N和His-Fhb-C截短表达蛋白,验证出Fhb特异性地与hIgG结合,且结合区域位于Fhb-N(45-344aa).结论 Fhb能够结合hIgG,结合区域位于Fhb-N.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 |
1995 | 01 02 03 |
1994 | 01 02 |
1993 | 01 02 03 04 |
1992 | 01 02 03 04 |
1991 | 01 02 03 04 |
1990 | 01 02 |
1989 | 01 02 03 04 |