细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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草木犀石油醚提取物对NF-κB和血红素氧合酶1表达的影响
目的: 探讨草木犀的石油醚提取物在炎症中的作用.方法: 通过LPS干预RAW264.7 细胞系建立炎症细胞模型, 免疫细胞化学法检验NF-êB的表达及分布变化, 实时荧光定量RT-PCR法检测血红素氧合酶1(HO-1)的基因表达, Western blot法测定HO-1的蛋白表达量.结果: 免疫细胞化学法结果显示药物干预时胞质被染为棕色, NF-êB多分布在胞质未被激活; 仅有LPS干预时, 胞核被染为棕色, NF-êB集中分布在细胞核表达增强.药物提取物干预后HO-1的mRNA表达水平明显升高, 且呈剂量依赖型关系; Western blot结果显示药物干预后HO-1的蛋白表达水平也明显升高.结论: 草木犀的石油醚提取物通过抑制NF-êB的激活, 同时促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用.
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海洛因暴露对小鼠前额叶皮层、海马和伏核caspase 3表达的影响
目的: 观察海洛因暴露对小鼠前额叶皮层(PFC)、海马(HP)和伏核(Acb)脑组织caspase 3表达的影响, 探讨发育期海洛因暴露是否干扰了学习记忆和成瘾脑区的细胞凋亡.方法: 于胚胎鼠E8～E18 d时, 给孕鼠皮下注射海洛因10 mg/(kg*d), 建立子宫内海洛因暴露的小鼠模型.按出生前处理将小鼠分为盐水(Sal) 组和海洛因(Her) 组, 待其14 d脑凋亡高峰期时取PFC、 HP和Acb脑区组织, 采用RT-PCR和Western blot法检测caspase 3表达变化.结果: 与Sal组相比, Her组小鼠的caspase 3 mRNA在PFC、 HP和Acb脑区的表达明显增加(P<0.05); 激活的caspase 3蛋白表达也明显增加(P<0.05).结论: 海洛因暴露可增加小鼠PFC、 HP和Acb脑区caspase 3的表达, 提示海洛因可通过诱导相关脑区细胞凋亡增多而发挥其神经毒性作用.
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γ射线与LPS作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7的生物学效应
目的: 研究γ射线与LPS协同激活小鼠巨噬细胞RAW264.7的效应机制, 以及γ射线与LPS诱导钙结合蛋白S100A8的表达及意义.方法: 相差显微镜观察细胞形态; 流式细胞计数方法检测细胞周期及活性氧介质(ROI)水平; Griess颜色反应测定细胞NO水平; 实时定量RT-PCR方法检测细胞S100A8 mRNA水平的表达.结果: γ射线与LPS作用于RAW264.7细胞引起细胞形态改变, 部分细胞出现非整倍性, 少量细胞出现凋亡, 胞内ROI水平、 NO水平明显升高, S100A8 分子mRNA水平明显升高, 而且这些效应几乎都比?射线或LPS单因素的作用要强.结论: γ射线与LPS协同诱导巨噬细胞激活是细胞周期改变、信使分子水平变化、炎症因子如S100A8的表达等多方面生物效应的综合结果, 其中S100A8基因的表达与巨噬细胞功能状态密切相关.
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白细胞介素23在小鼠乳腺癌中的抗肿瘤作用及其免疫机制
目的: 研究白细胞介素23(IL-23)在小鼠乳腺癌中的抗肿瘤作用及其免疫功能变化.方法: 将逆转录病毒介导转染IL-23基因的小鼠乳腺癌细胞(IL-23/MA-891)、转染逆转录病毒空载体的小鼠乳腺癌细胞(LXSN/ MA-891)及亲代小鼠乳腺癌细胞(MA-891)分别接种于小鼠皮下, 观察小鼠成瘤及肿瘤生长情况; 30 d时取3组小鼠脾脏和肿瘤组织, 用ELISA法检测3组小鼠脾细胞在MA-891诱导下IFN-?、 TNF-á、 IL-12和IL-4的产生情况; 用流式细胞术(FCM)检测肿瘤组织细胞表面分子MHC-Ⅰ、 MHC-Ⅱ、 CD80、 CD86的表达, 检测脾细胞中CD11c阳性细胞的比率, 并对脾细胞中CD4+、 CD8+淋巴细胞进行分选; 用免疫组织化学技术对3组肿瘤组织中CD4+、 CD8+淋巴细胞浸润情况进行检测.结果: IL-23基因转染组小鼠皮下结节生长速度明显慢于接种空载体转染组及未转染组; 接种IL-23/MA-891细胞的小鼠脾细胞可产生较水平的IFN-γ、 TNF-á和IL-12等Th1类及相关细胞因子, 与接种LXSN/MA-891细胞和MA-891细胞2组小鼠的脾细胞相比明显增高(P<0.01), 而Th2类细胞因子IL-4的水平却无统计学意义(P>0.05); 接种IL-23/MA-891细胞组小鼠脾细胞中CD11c阳性细胞率、 CD4+、 CD8+淋巴细胞比率以及肿瘤组织中CD4+、 CD8+淋巴细胞浸润程度均较LXSN/MA-891、 MA-891组明显增加(P<0.01); IL-23/MA-891细胞组小鼠肿瘤组织细胞表面MHC-Ⅰ、 MHC-Ⅱ、 CD80、 CD86分子的表达明显提高(P<0.01).结论: 转染IL-23基因的小鼠乳腺癌细胞所分泌的IL-23具有生物学活性, 增强了细胞免疫功能, 在小鼠体内发挥了明显的抗肿瘤作用.
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VEGFR2 D3.4/GST融合蛋白在大肠杆菌的表达、纯化及鉴定
目的: 构建人血管内皮细胞生长因子II型受体(VEGFR2)胞膜外区第三及第四个免疫球蛋白样结构域与GST融合蛋白VEGFR2 D3.4/GST基因的原核表达载体, 在大肠杆菌中表达并纯化该融合蛋白.方法: 由公司合成VEGFR2胞膜外区第三、第四免疫球蛋白样结构域氨基酸的编码序列, 克隆入原核表达载体pGEX-4T1中GST标签的下游, 构建重组表达载体pGEX4T-VEGFR2D3.4, 将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3) pLysS, IPTG诱导表达VEGFR2 D3.4/GST融合蛋白, 经不同浓度尿素洗脱纯化后, 表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果: SDS-PAGE分析表明, 表达产物的相对分子质量(Mr)为46 000, 与理论值相符, 主要以包含体形式存在; 灰度扫描分析融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的38.6%, 纯化产物纯度高为87.1%, Western blot 证实该蛋白为VEGFR2 D3.4/GST融合蛋白.结论: 利用大肠杆菌表达系统, 获得了较高纯度的包含体形式VEGFR2 D3.4/GST融合蛋白.
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sIL-15Rá与脾细胞孵育后对小鼠黑色素瘤细胞生长的免疫调节作用
目的: 研究可溶性IL-15Rá与脾细胞共同孵育后对小鼠黑色素瘤细胞生长的免疫调节作用.方法: 制备小鼠脾细胞, 分成两组, 一组加入可溶性重组IL-15Rá (sIL-15Rá), 另外一组不加, 培养48 h后, 分离两组的贴壁细胞和非贴壁细胞, 流式细胞术(FCM)分析CD4、 CD8、 B220、 CD11c、 CD1a的表达; 并把上述4组细胞(即脾细胞非贴壁细胞组, 脾细胞贴壁细胞组, 脾细胞+sIL-15Rá非贴壁细胞组, 脾细胞+sIL-15Rá贴壁细胞组)和黑色素瘤细胞一起分别注射到小鼠腹部皮下, 观察小鼠腹部皮下肿瘤生长抑制情况, 对照组只注射小鼠黑色素瘤细胞.结果: 脾细胞+sIL-15Rá贴壁细胞组小鼠黑色素瘤的生长速度显著小于其他各组; FCM分析, 此组细胞主要成分可能为树突状细胞(DC). 结论: sIL-15Rá与脾细胞共同孵育后, 可能通过DC的作用, 对黑色素瘤的生长进行免疫调节, 从而抑制瘤细胞的生长.
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慢病毒载体介导的小鼠骨髓树突状细胞RelB基因沉默
目的: 利用慢病毒载体沉默小鼠骨髓树突状细胞(DC)的RelB基因, 建立RelB基因低表达的骨髓致耐受DC, 为自身免疫病的防治提供新方法.方法: 设计小鼠RelB基因干扰的靶序列R5, 合成并克隆到慢病毒载体上, 与慢病毒的包装材料在293FT细胞中包装成病毒颗粒, 收集病毒上清, 测定病毒滴度, 然后包装慢病毒感染DC, RT-PCR和免疫荧光方法检测, 灰度扫描并用软件分析RelB基因的表达水平, 未成熟DC作对照组, 选择T6包装病毒为RNAi的阴性对照.结果: RT-PCR和免疫荧光方法发现R5病毒感染的DC RelB基因表达水平与未成熟DC基因表达水平接近, 低于成熟DC的表达水平(P<0.05), 而实验对照T6组病毒感染的DC其RelB基因表达水平高于未成熟DC(P<0.05)和R5病毒转染DC组(P<0.05).结论: 小鼠骨髓DC表达的RelB基因被慢病毒载体有效沉默, 有望成为DC免疫治疗的新载体.
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新疆吐尔扈特蒙古族人群血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性分析
目的: 研究新疆地区吐尔扈特蒙古族人群血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失多态性分布情况.方法: 采用聚合酶链反应(PCR)分别检测 82例新疆地区吐尔扈特蒙古族正常人群样本的ACE I/D基因型, 分类计数进行统计学分析.结果: 新疆地区吐尔扈特蒙古族正常人的ACE基因3种基因型频率分别为: DD型 24.39%, ID型 26.83%, Ⅱ型 48.78%.D和I等位基因频率分别为37.80%和62.20%.结论: ACE基因多态性的分布与性别无关, 新疆地区吐尔扈特蒙古族人群ACE基因频率分布与日本人相近, 但DD型及D等位基因频率低于欧美人群.
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SP-TAT-Apoptin融合蛋白对HepG2细胞周期的影响
目的: 研究SP-TAT-Apoptin融合基因诱导人肝癌HepG2细胞凋亡和细胞周期阻滞, 探讨其用于肝癌治疗的可能性.方法: 通过DNA重组技术, 以pcDNA3.1/Apoptin质粒11为模板, 构建SP-TAT-Apoptin融合基因 plenti6-V5-D-TOPO真核表达载体.用SP-TAT-Apoptinplenti6-V5-D-TOPO真核表达载体转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO), 转染后Blasticidin霉素进行筛选, 并进行鉴定得到稳定表达SP-TAT-Apoptin的CHO细胞株.收集含有TAT-Apoptin融合蛋白的筛选细胞培养上清, 用于HepG2细胞培养.于共培养后的不同时段收集HepG2细胞, 流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡和细胞周期.结果: 用包含SP-TAT-Apoptin融合基因的plenti6-V5-D-TOPO真核表达载体瞬时转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO), 成功筛选出稳定表达SP-TAT-Apoptin融合蛋白的CHO细胞, 收集细胞培养上清, 继续用于HepG2细胞培养, 可观察到HepG2细胞阻滞于G1期并引起细胞凋亡.结论: SP-TAT-Apoptin融合表达可引起HepG2细胞的细胞周期G1期阻滞.
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诱导分化剂维胺酸对卵巢癌细胞超微结构的影响
目的: 探讨诱导分化剂维胺酸对卵巢浆液性囊腺癌细胞超微结构的影响.方法: 选取37例晚期卵巢浆液性囊腺癌患者为研究对象, 随机分为两组, 了解在手术和化疗的基础上联合维胺酸诱导分化治疗后肿瘤细胞超微结构的变化.结果: 诱导分化组肿瘤细胞出现明显的成熟性分化趋势: 核浆比例减小, 细胞质较丰富; 细胞间出现发育较好的桥粒连接、紧密连接; 线粒体数量增加形态较规则, 基质电子密度增加; 细胞质内糖原颗粒丰富; 部分细胞中出现数量较多的粗面内质网和形态较规则的高尔基复合体.结论: 诱导分化剂维胺酸可诱导和促进肿瘤细胞分化, 诱导分化疗法能够改善卵巢浆液性囊腺癌肿瘤细胞的恶性生物学行为.
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Access全自动微粒子化学发光免疫分析系统检测运动员兴奋剂122例报道
化学发光免疫分析包括三大类型: 即标记化学发光物质的化学发光免疫分析、标记荧光物质的荧光化学发光免疫分析和标记酶的化学发光酶联免疫分析.化学发光免疫分析技术可测定内分泌激素、肿瘤标志物、血药浓度、传染病和心血管疾病标志物、贫血及过敏原等项目[1].
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血清IL-12p40和IL-18在缓解-复发型多发性硬化中的作用及相关分析
目的: 探讨白细胞介素IL-12p40、 IL-18及干扰素?(IFN-?)在缓解复发型多发性硬化(RRMS)发病中的作用.方法: 选取RRMS急性期患者24例, 对照组为非炎性神经系统疾病(NIND)患者12例, 应用ELISA法测定受试者血清中IL-12p40、 IL-18及IFN-γ水平.结果: 与NIND组相比, RRMS组血清中IL-18水平明显升高, 而IL-12p40明显下降(P<0.05).血清IFN-γ水平在两组间无明显差异, 而与IL-18水平之间呈显著正相关.结论: IL-18与IL-12p40均参与了多发性硬化发病的免疫病机.
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癌症高表达蛋白在原发性胆囊癌中的表达及其临床意义
目的: 探讨原发性胆囊癌(PGC)组织中癌症高表达蛋白(Hec 1)的表达与浸润、转移及预后的关系.方法: 首先, 随机选取PGC患者108例, 以慢性胆囊炎患者15例为对照, 应用SABC免疫组化方法检测Hec 1蛋白的表达.其次, 对108例PGC患者中的96例进行术后5年的随访, 分析Hec 1与PGC患者预后的关联.结果: Hec 1蛋白的表达与PGC组织的临床病理学特征及患者的预后均有密切的关系.在发生淋巴道转移及低分化的肿瘤组织中, Hec 1蛋白高表达.随着Nevin分级的加重, Hec 1蛋白的阳性表达率明显增加 (P<0.05).此外, Hec 1蛋白阳性表达的PGC患者的5年生存率明显低于阴性表达的患者 (P<0.01).结论: Hec 1蛋白可能与PGC的发生、浸润、转移有关; 联合应用Hec 1蛋白阳性表达率与其临床病理学分级, 有助于正确判断患者的预后.
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可溶性MICA在乳腺癌免疫逃逸中的作用
目的: 观察乳腺癌患者血清中可溶性MICA(sMICA)表达情况, 探讨sMICA在乳腺癌免疫逃逸中的作用.方法: ELISA方法检测乳腺肿瘤患者外周血sMICA的分泌.流式细胞术(FCM)检测sMICA及白细胞介素15(IL-15)对NK细胞表面NKG2D表达的影响.MTT法检测NK细胞对乳腺癌细胞的杀伤活性.结果: ELISA结果显示, 血清sMICA含量在健康成年人血清中为阴性, 在乳腺良性肿瘤患者血清中含量为(76.8±22.3)ng/L, 在恶性肿瘤患者血清中含量为(205.36±71.27)ng/L, 乳腺癌患者中血清sMICA含量高低与TNM分期呈正相关.应用含sMICA的血清与NK细胞共培养可明显下调NK细胞的杀瘤活性[(76.2±6.7)% vs (48.4±4.1)%], NK细胞表面NKG2D表达和上清中IFN-λ分泌量也下降.IL-15明显上调NK细胞表面NKG2D表达, 增加培养上清IFN-λ分泌量和增强NK对MCF-7的杀瘤活性.结论: sMICA表达与乳腺癌TNM分期正相关, sMICA通过下调NK细胞NKG2D表达水平而降低NK细胞杀瘤活性, 在肿瘤免疫逃逸中起重要作用.IL-15可以上调NK细胞NKG2D的表达并增强NK细胞杀瘤活性.
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MMP-2、 MMP-9与Ⅳ型胶原在大肠癌中的表达及其相关性研究
目的: 研究大肠癌中MMP-2、 MMP-9与IV型胶原的表达及其相关性.方法: 对30例Dukes'B、 C期大肠癌患者的癌组织和正常组织进行IV型胶原、 MMP-2、 MMP-9的免疫组织化学检测, 并进行相关性分析.结果: IV型胶原在大肠癌组织中的表达明显降低; MMP-2、 MMP-9在大部分正常大肠组织中均未见表达, 仅少数见到有阳性表达, 而在癌组织中表达明显增强.IV型胶原评分与MMP-9表达之间呈负相关.结论: 大肠癌组织中IV型胶原的表达明显降低, MMP-9对大肠癌中IV型胶原的降解起着重要作用.
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DcR3在结肠癌患者外周血及癌组织中表达水平的检测
诱骗受体3(decoy receptor 3, DcR3)是新近发现的一种可溶性的肿瘤坏死因子受体(tumour necrosis factor receptor, TNFR)家族成员[1].研究表明它在某些肿瘤、自身免疫病等疾病中高度表达, 其蛋白的表达和基因的扩增与人类多种恶性肿瘤的发生、发展以及肿瘤的免疫逃逸密切相关[2].故我们研究DcR3在结肠癌患者外周血及癌组织中的表达, 阐明其与结肠癌的相关性.
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胰腺癌组织中IL-8的表达及其临床病理意义
目的: 研究胰腺癌组织中IL-8表达并探讨其临床病理意义.方法: 胰腺癌手术切除标本51例经4 g/L甲醛固定后常规制作石蜡包埋切片, 染色为ABC免疫组化法.结果: 胰腺癌组织中IL-8阳性率及其评分明显低于低分化、无转移病例.其中分化程度、转移状况之间均有统计学差异(P<0.05).IL-8与胰腺癌其他临床病理牲无明显关系(P>0.05).结论: IL-8表达可能是反映胰腺癌发生、发展、生物学行为和预后的重要标记物.
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糖尿病KKAy小鼠的肝损害
目的: 探讨2型糖尿病肝损害的发生及可能的发病机制.方法: KKAy糖尿病小鼠高脂饮食喂养, 28周后处死小鼠, 分别取血清和肝组织, 全自动生化法检测血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、总胆固醇 (TC)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)等生化指标; HE、 Masson染色观察肝组织病理形态学改变; TUNNEL法检测肝细胞凋亡变化; 放免法检测肝组织中IL-1a、 TNF-á含量的变化等.结果: 与正常小鼠相比, KKAy糖尿病小鼠血清中GLU、 TG、 TC均增高(P<0.01), 血清中ALT、 AST增高(P<0.01), 肝组织病理形态学检测可见肝细胞呈脂肪变性, 肝组织纤维化, 并可见肝细胞凋亡;肝组织中IL-1a、 TNF-á含量明显增高(P<0.01).结论: 糖尿病KKAy小鼠存在肝损害; IL-1a、 TNF-á可能是其损伤机制之一.
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乙型肝炎病毒相关性肾炎肾组织中HBx、 MHBst mRNA的表达及其意义
目的: 检测乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBVGN)肾组织中乙型肝炎病毒X基因(HBx)及截短型乙型肝炎病毒表面抗原(MHBst)mRNA的表达, 探讨HBx、 MHBst在HBVGN发生中的意义.方法: 采用原位杂交的方法对40例HBVGN患者的肾组织进行HBx、 MHBst mRNA检测.结果: HBVGN患者肾组织中存在HBx、 MHBst mRNA, HBx、 MHBst mRNA主要分布于肾小管上皮细胞的胞质内, 少数肾小球上皮、内皮、系膜细胞的胞质内也有分布; 肾小管上皮细胞内HBx、 MHBst mRNA阳性率分别为82.5%(33/40)、 80%(32/40), 肾小球内HBx、 MHBst mRNA阳性率分别为30%(12/40)、 22.5%(9/40), HBx、 MHBst mRNA在肾小管上皮细胞的表达明显高于肾小球(P＜0.01).结论: 在HBVGN肾组织, 特别是在肾小管上皮细胞的胞质存在HBx、 MHBst mRNA的表达, 提示HBV感染及其基因整合可能在HBVGN发生中有一定意义.
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尿儿茶酚胺代谢物在嗜铬细胞瘤早期诊断中的临床意义
目的: 通过对尿中儿茶酚胺代谢产物氧甲基去甲肾上腺素(normetaneprine, NMN)及氧甲基肾上腺素(metaneprine, MN)的测定, 评价其在嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma, PHEO)早期诊断中的临床意义. 方法: 采用ELISA法, 分别对一般高血压患者及临床诊断为嗜铬细胞瘤及肾上腺占位病变并伴有阵发性高血压患者24 h的NMN/MN进行测定.结果 : 46例疑为嗜铬细胞瘤患者尿中的NMN检测显著升高, 其中32例经本院计算机断层摄影(CT)或磁共振扫描(MR), 确诊为嗜铬细胞瘤, 其24 h 尿中的NMN/ MN检测结果全部升高, 而14例其他肿瘤患者检测仅为尿中的NMN值升高.同时检测排除嗜铬细胞瘤及其他肿瘤患者的50例一般高血压患者尿中的NMN/ MN值结果均显示正常.嗜铬细胞瘤患者尿液中NMN的水平为(1838±167)ìg/L, 对照组为(331±153)ìg/L, MN的水平为(663.2±231.1) ìg/L, 对照组为(135.4±78.5)ìg/L, 病患组NMN/MN测定值明显高于对照组( P＜0.001). 结论: 24 h NMN/MN ELISA检测为患者提供了一种无创性并具有高灵敏度、特异性好的简便方法.对临床从肾上腺占位性病变并伴有阵发性高血压患者中筛查嗜铬细胞瘤具有较高的早期诊断价值.
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抗呼吸道合胞病毒免疫噬菌体抗体库的构建及初步鉴定
目的: 构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性噬菌体抗体库, 搭建人源性抗体制备的技术平台, 为小儿呼吸道合胞病毒感染发病机制的研究、诊断、治疗和预防提供新的有效途径.方法: 从52例呼吸道合胞病毒感染患儿外周血淋巴细胞中提取总RNA, 并逆转录为cDNA.用PCR扩增轻链和重链Fd段(即重链的可变区和第一恒定区)基因, 并将扩增的轻链和重链基因片段克隆于pComb3x噬粒载体, 电转化XL1-Blue大肠杆菌, 经辅助噬菌体M13K07超感染后构建成Fab段噬菌体抗体库.对此抗体库双酶切进行鉴定, 并用呼吸道合胞病毒颗粒作抗原进行初步筛选.结果: 经过重轻链基因的重组, 成功构建一免疫噬菌体抗体基因库, 共有2.6×106个不同的克隆菌, 其中70%的克隆均含有轻链和重链Fd 基因.因此, 所构建的噬菌体抗体库的库容量为1.8×106, 经初步筛选, 抗体库得到了不同程度的富集.结论: 利用基因重组技术和噬菌体展示技术, 成功构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性免疫噬菌体抗体库, 为进一步的研究奠定了基础.
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人TLR2胞外区基因的原核表达及其抗体的制备
目的: 在原核系统中表达人Toll样受体2(TLR2)胞外区基因的融合蛋白并制备多克隆抗体.方法: 应用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中扩增TLR2胞外区基因, 将其克隆到表达载体pET-32a(+)上构建重组原核表达质粒, 并在大肠杆菌中诱导表达, 目的融合蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化, 用SDS-PAGE和 Western blot进行鉴定.用纯化的蛋白免疫新西兰白兔, 制备多克隆抗体, 采用Western blot对抗体进行鉴定, 并用ELISA分析抗体活性.结果: 成功构建了pET-32a(+)-TLR2重组表达质粒并在大肠杆菌中进行表达, 获得了纯化重组蛋白, 重组蛋白免疫白兔后能够有效地刺激抗体产生, 并具有良好的免疫活性.结论: 成功地获得人TLR2胞外区基因的融合蛋白, 制备的多克隆抗体为进一步研究TLR2胞外区的功能和生物活性奠定基础.
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人抗体Fab段天然抗体库的建立
目的: 提取健康人外周血淋巴细胞的mRNA, 利用反转录PCR方法, 建立一个大容量的人抗体Fab段的天然抗体库.方法: 收集健康者外周血, 提取淋巴细胞, 以淋巴细胞mRNA为模板, 扩增人抗体Fab段, 连入载体pComb3内, 利用电转化的方法, 构建噬菌体抗体库.结果: 终建立了重链库为1.73×107, 轻链库为8.52×104的天然抗体库, 并利用酶切鉴定计算出实际库容为重链库1.21×107, 轻链库4.26×104, 所以理论上所建天然噬菌体抗体库总的库容量可以达到5.15×1011.结论: 成功构建了一个大容量的完全人源化的天然抗体库.
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人核迁移蛋白单克隆抗体的制备及其在人巨核细胞中的表达
目的: 制备人核迁移蛋白(hNudC )的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性.方法: 从人胎肝组织中克隆得到 hNudC 基因, 构建重组表达质粒 pET-28b/hNudC, 表达带有6-His标记的重组hNudC, 用纯化的重组 hNudC 蛋白免疫 BALB/c小鼠制备mAb, 用ELISA筛选抗体阳性的细胞克隆, 用免疫荧光染色法及Western blot 试验鉴定 mAb 的特异性.结果: 获得2株杂交瘤细胞系2C16和2D8, 其分泌的mAb的 Ig亚类(型)分别为IgG1 和IgM(ê) , 杂交瘤细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶ 64和1∶ 32; 腹水mAb的效价分别为1∶ 1×105和1∶ 5×104.mAb与重组hNudC蛋白有较强的特异性反应, 免疫荧光染色和Western blot试验证明, 制备的 mAb 可以识别人巨核系白血病细胞株 Dami、 Meg-01和人脐带血来源的CD41+巨核细胞中表达的 hNudC 蛋白.结论: 成功地制备了特异性抗 hNudC mAb, 为研究 hNudC 蛋白的功能、天然分布及异常表达奠定了基础.
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抗人转录因子DP3和TFDP1多肽抗体的制备
目的: 制备兔抗人转录因子TFDP3、 TFDP1的多克隆抗体, 并鉴定其反应性及特异性.方法: 选择TFDP3和TFDP1差异较大肽段, 利用人工合成多肽免疫家兔, 采用真核表达载体瞬时转染HEK293细胞表达TFDP3和TFDP1真核蛋白, 通过Western blot分析抗体的反应性和特异性.结果: 通过氨基酸序列比对选择TFDP3 17-26, TFDP1 17-32氨基酸残基合成多肽, 制备了兔抗人TFDP3、 TFDP1多肽抗体, Western blot检测显示, 抗TFDP3抗体可以特异性识别TFDP3, 而抗TFDP1抗体既可识别TFDP1又可与TFDP3结合.结论: 制备了兔抗人TFD31和TFDP1的多肽抗体, 且TFDP3抗体与TFDP1无交叉反应.
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从大容量抗体库中筛选抗TNF-α人单链抗体
目的: 从天然的单链大容量噬菌体抗体库中筛选特异性的抗TNF-á的人单链抗体(scFv).方法: 以TNF-á为抗原, 通过 "吸附-洗脱-扩增"过程从大容量抗体库中筛选特异性抗体, 对其抗原结合活性和序列进行分析鉴定 .结果: 经过4轮筛选, 获得62个与TNF-á结合的阳性克隆, 其中27个特异性结合的克隆, 指纹分析有7种不同的可变区片段; 其中5种获得可溶性表达; 基因序列分析表明其轻重链分属VλⅠ和VHⅣ亚群.结论: 利用单链大容量抗体库技术可以不经免疫制备获得特异性抗TNF-á的scFv, 为今后的研究和应用提供依据.
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小鼠几丁质酶的重组表达和抗体制备
目的: 检测脂多糖(LPS)刺激成骨细胞后, 几丁质酶(chitotriosidase)基因表达变化情况.进行小鼠chitotriosidase的原核和真核表达, 并利用原核表达纯化的蛋白, 制备兔抗鼠多克隆抗体.方法: 用LPS刺激MC3T3-E1细胞, 提取mRNA, 通过RT-PCR获得小鼠chitotriosidase的编码区全长序列, 克隆进pRSET A载体, 转化BL21菌株, IPTG诱导表达.获得的包涵体蛋白用镍柱纯化后, 作为抗原免疫兔子, 制备多克隆抗体.用该抗体检测真核表达的小鼠chitotriosidase蛋白, 并确定抗体的灵敏度和特异性.结果: LPS明显刺激chitotriosidase表达.原核表达的包涵体蛋白经镍柱纯化后也能制备出效果较好的多克隆抗体.结论: 成功地克隆表达了小鼠的chitotriosidase蛋白, 并制备出高灵敏度、高特异性的多克隆抗体, 为进一步阐明chitotriosidase在病理条件下的表达变化和功能提供了一条途径.
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RAI16蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用
目的: 制备RAI16蛋白的合成肽多克隆抗体, 并进行初步鉴定和应用, 为研究RAI16蛋白的功能及作用机制获得重要的实验工具.方法: 应用Fmoc法化学合成RAI16蛋白N端第44～55位氨基酸的多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的RAI16蛋白的多肽与KLH交联; 皮下注射抗原免疫新西兰纯种大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫组化、 Western blot等初步鉴定和应用.结果: 化学合成RAI16蛋白N端第44～55位氨基酸的多肽, 纯化后多肽纯度为96% , 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价为1∶ 125 000.该多肽抗体可特异识别人脾脏组织中相对分子质量(Mr)约为55 000的RAI16蛋白.结论: 所制备的多克隆抗体能与天然RAI16蛋白发生特异性反应, 可应用于ELISA、免疫组化、免疫沉淀和Western blot等实验, 为确定RAI16蛋白的组织分布和亚细胞定位、研究RAI16蛋白的功能及作用机制提供了重要的实验工具.
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Ficolin-A的克隆、蛋白表达和抗体的制备与鉴定
目的: 克隆小鼠ficolin-A(mouse ficolin-A)基因, 构建在真核及原核表达载体, 并在大肠杆菌中表达和鉴定其蛋白, 并制备其抗体, 以进一步用于研究小鼠ficolin-A的功能.方法: 用RT-PCR的方法从新生7 d的C57BL/6小鼠肝脏中运用GeneRacer kit扩增ficolin-A cDNA片段, 并将该片段分别插入pVAX-1真核表达载体及pGEX-KG 原核表达载体中, 实现插入基因的融合, 在IPTG的诱导下在大肠杆菌中表达.用GST-Sepharose 4B的柱子对表达的融合蛋白进行纯化, 用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定.制备ficolin-A的多克隆抗体并对其效价进行测定.结果: 成功地构建了pVAX-1-ficolin-A真核表达载体及pGEX-KG-ficolin-A原核表达载体, 并在大肠杆菌中获得高效的表达, 表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致.并且成功制备了多克隆抗体.结论: 成功地构建了重组表达载体pVAX-1-ficolin-A及pGEX-KG-ficolin-A, 并在E.coli BL21中表达了ficolin-A蛋白, 为下一步研究小鼠ficolin-A的功能奠定了基础.
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肥大细胞Toll样受体的研究进展
肥大细胞是重要的效应和调节性免疫细胞,广泛分布于皮肤、淋巴组织、子宫、膀胱以及呼吸道和消化道黏膜和黏膜下毛细血管、淋巴管周围的结缔组织中.
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Th17: 新兴的辅助T细胞
Th17近来逐渐被认为是一个独立的辅助T细胞亚群, 以分泌IL-17主要特征.Th17在防御胞外细菌感染的免疫应答、介导慢性炎症和自身免疫性疾病的发病机制中发挥重要作用.对Th17的进一步深入研究可以加深我们对相关疾病发病机制的认识并指导临床治疗.
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统计方法选择与综合运用
实验设计、资料搜集与整理分析是科学研究的3个紧密联系的阶段, 而良好的设计是顺利地进行实验和收集数据、分析数据的先决条件.统计方法的选择与正确应用依赖于研究方案中的统计学设计,应充分考虑实验目的、设计类型、观察指标组成的资料性质和样本大小等.
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百草枯人工抗原的合成及抗体的制备
目的: 制备百草枯人工抗原和抗血清, 为建立酶联免疫吸附法提供技术储备.方法: 以4, 4'-联吡啶和碘甲烷为起始原料, 于暗处通氮气保护下合成了百草枯半抗原; 混合酸酐法偶联大分子蛋白载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)制备免疫抗原和包被抗原; 免疫新西兰大白兔, 制备多抗.结果: 合成的半抗原经HPLC-MS、 1HNMR和IR鉴定, 初步确定合成成功; 百草枯半抗原与BSA和OVA的结合比分别为19∶ 1和14∶ 1; 抗血清经间接ELISA法检测, 效价达1∶ 2.56×104, 经饱和硫酸铵沉淀法纯化后抗体的效价达1∶ 5.12×104.结论: 合成的百草枯人工抗原具有较好的免疫原性, 为百草枯酶联免疫检测(ELISA)试剂盒的研制提供了基础.
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正常孕妇不同孕周血清中sHLA-G的水平
目的: 探讨正常妊娠妇女不同孕周血清可溶性人类白细胞抗原G(sHLA-G)在妊娠过程中的作用.方法: 采用ELISA法检测20例正常孕妇不同孕周血清中的sHLA-G水平.结果: 血清sHLA-G的水平在正常妊娠的早、中、晚孕期的均值依次为(11.96±4.27)ìg/L、 (11.50±4.17)ìg/L、 (10.72±3.40)ìg/L; 差异无统计学意义.结论: 血清sHLA-G的水平在正常妊娠的整个过程中差别不大, 对维持胎儿的正常发育具有重要意义.
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维生素C在铝、铁、铅3种离子诱导神经细胞凋亡中的作用
目的: 研究不同剂量不同时间铁、铝、铅元素神经细胞生存能力的影响和Vit C在铁、铝、铅元素诱导神经细胞凋亡中的作用.为探讨微量元素生理功能提供理论依据和资料.方法: 采用体外培养脑胶质瘤细胞, MTT比色法测定40 ìmol/L、 400 ìmol/L浓度下的三氯化铝、硫酸亚铁、醋酸铅3种药物及3种药物联合250 ìmol/L Vit C对脑胶质瘤细胞体外生长的影响.结果: 24 h醋酸铅、三氯化铝联合维生素C实验组, 细胞生长抑制作用明显大于400 ìmol/L和40 ìmol/L 浓度组.弱为40 ìmol/L浓度硫酸亚铁, 细胞数量明显高于联合Vit C和400 ìmol/L浓度组.72 h各实验组对细胞生长抑制作用减弱, 40 ìmol/L浓度的硫酸亚铁细胞生长数量明显高于其他实验组.除硫酸亚铁+Vit C、 40 ìmol/L 浓度组与对照组无统计学意义, 其他各实验组细胞数量明显低于对照组.结论: 铝离子、高浓度铅离子和高浓度铁对肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用, Vit C能增强铁、铝、铅离子诱导胶质细胞凋亡.其中Vit C对铝离子的效应大于铅离子和铁离子.
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甲状腺肿瘤患者血清中甲状腺球蛋白含量的检测
甲状腺是人体内重要的内分泌腺,其分泌的主要成份为甲状腺球蛋白(thyroglogulin,TG),TG在甲状腺激素的合成、分泌和贮存过程中起着重要作用.
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血清浓度及饥饿时间在HeLa细胞G0/G1期同步化中的影响
目的: 探索HeLa细胞血清饥饿法周期同步化的培养条件.方法: 采用流式细胞术(FCM)研究了血清浓度及饥饿时间对HeLa细胞G0/G1期同步化及细胞凋亡的影响.结果: (1)当血清浓度处于0～10 mL/L, 饥饿时间为20～26 h时便可获得80%～90%的G0/G1期细胞;(2)当血清浓度处于0～2 mL/L且饥饿时间达到44 h以上时, 可以获得接近100%的G0/G1期细胞, 但此时饥饿时间越长, 凋亡细胞的比例会越高.结论: HeLa细胞可以通过血清饥饿法获得高纯度的G0/G1期细胞, 为周期相关研究提供了实验依据.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
