细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
- 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子: 0.81
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1007-8738
- 国内刊号: 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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IL-33通过ERK1/2信号通路促进哮喘模型小鼠气道重塑
目的 探讨白细胞介素(IL-33)诱导支气管哮喘气道重塑的机制.方法 雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、卵清蛋白(OVA)组和IL-33中和抗体联合OVA组.HE染色观察小鼠气道重塑,免疫组织化学染色及Western blot法观察IL-33、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、1型胶原蛋白(Col1)的表达,Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)及丝裂原和应激激活的蛋白激酶1(MSK1)的磷酸化水平;培养HLF-1人成纤维细胞,分别给予人重组IL-33(rIL-33)、ERK1/2的抑制剂U0126联合rIL-33、MSK1的抑制剂H89联合rIL-33处理;实时荧光定量PCR及Western blot法检测α-SMA与Col1的mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光细胞化学技术观察ERK1/2及MSK1的磷酸化.结果 OVA组小鼠发生气道重塑,IL-33、α-SMA、Col1表达增加,ERK1/2及MSK1磷酸化增强;IL-33中和抗体预处理可显著降低OVA诱导的小鼠气道重塑及IL-33、α-SMA、Col1表达以及ERK1/2及MSK1的磷酸化.U0126或H89可抑制rIL-33引起的HLF-1细胞中ERK1/2及MSK1磷酸化增强及α-SMA与Col1表达增加.结论 IL-33通过ERK1/2-MSK1信号通路促进哮喘模型小鼠气道重塑.
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全人源抗IL-33scFv-IgG1Fc融合蛋白在CHO k1细胞中稳定高表达
目的 利用两种不同真核表达载体构建全人源抗白细胞介素33单链抗体c片段(IL-33 scFv-Fc)重组载体,转染中国仓鼠卵巢(CHO) k1细胞,筛选稳定高表达单细胞株以提高融合蛋白产量.方法 双酶切前期构建的重组质粒pcDNA3.1/SP-scFv-Fc,回收SP-scFv-Fc片段,插入载体PMH3EN中,构建PMH3EN/SP-scFv-Fc重组载体并与重组质粒pcDNA3.1/SP-scFv-Fc分别转染CHO k1细胞;反转录PCR、Western blot法检测目的基因scFv-Fc的转录及表达;Dot blot法筛选稳定高表达细胞株;ELISA检测scFv-Fc的水平及生物学活性.结果 重组质粒测序结果表明成功构建了真核表达载体PMH3 EN/SP-scFv-Fc,插入目的基因SP-scFv-Fc大小为1560 bp左右.反转录PCR检测重组质粒表达情况显示两组重组质粒的目的基因在CHO k1细胞中均成功转录.scFv-Fc不仅可分泌到细胞培养基中,还可与人IL-33以及抗人IgG1 Fc特异性结合.重组载体PMH3EN/SP-scFv-Fc组融合蛋白表达水平相对较高.经过4轮筛选,选出了稳定高表达细胞株,初步测其scFv-Fc表达产量为10 mg/L;竞争ELISA检测结果显示scFv-Fc可显著抑制IL-33与其受体ST2的结合.结论 在CHO k1细胞成功高表达IL-33 scFv-Fc.
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免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6可选择性杀伤HER2阳性SGC-7901胃癌细胞
目的 构建融合白喉毒素转位序列的免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6的真核表达载体,真核表达纯化该重组蛋白后验证其对人表皮生长因子受体2(HER2)阳性细胞的选择性杀伤活性.方法 把Kozak序列与单链抗体e23sfv、白喉毒素的促转位片段白喉毒素弗林蛋白酶识别位点(fdt)、caspase-6以及免疫球蛋白IgG Fc段基因重组,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,命名为pcDNA3.1(+)-AFC.瞬时转染CHO-S细胞,Western blot法检测上清中目的蛋白的表达;收集培养上清并利用蛋白A纯化柱对目的蛋白进行纯化;流式细胞术验证目的蛋白对HER2阳性SGC-7901细胞的杀伤作用.结果 成功构建pcDNA3.1(+)-AFR真核表达载体;瞬时转染悬浮CHO-S细胞后,Western blot法证实目的蛋白可分泌性表达于细胞培养上清中,流式细胞术结果显示纯化后的目的蛋白可以显著促进HER2阳性SGC-7901细胞凋亡.结论 真核细胞表达的免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6可选择性高效杀伤HER2阳性SGC-7901细胞.
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地塞米松可增强支气管哮喘小鼠肺组织RECK的表达
目的 研究Kazal基序逆向诱导富含半胱氨酸蛋白(RECK)在支气管哮喘小鼠肺组织的表达及地塞米松处理后对其表达的影响.方法 BALB/c小鼠分为哮喘组、对照组、地塞米松组,每组10只.采用鸡卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏及雾化吸入的方法制作哮喘模型,进行支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)及淋巴细胞(Lym)分类计数;HE染色观察气道炎症细胞浸润及气道重塑情况,实时荧光定量PCR检测RECK mRNA的表达,免疫组织化学法检测RECK蛋白的表达及定位.结果 与对照组和地塞米松组相比,哮喘组BALF中细胞总数、EOS明显增多;RECK mRNA在哮喘组表达较对照组、地塞米松组明显降低.免疫组织化学结果显示RECK主要表达于气道上皮细胞、上皮下炎症细胞.哮喘组表达低,对照组表达高,地塞米松组表达较哮喘组有所增高.结论 RECK在哮喘小鼠肺组织中表达明显降低,而地塞米松可上调RECK的表达.
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旋毛形线虫肌幼虫代谢分泌抗原的鉴定
目的 采用免疫共沉淀偶联质谱技术分离和鉴定旋毛形线虫肌幼虫代谢分泌抗原中的血清学抗原.方法 收集感染旋毛形线虫的新西兰兔血清,硫酸铵沉淀法分离血清IgG;从感染肌肉中分离纯化肌幼虫并培养收集代谢分泌抗原.免疫共沉淀和SDS-PAGE分离代谢分泌抗原,Western blot法分析血清学抗原,并予质谱鉴定.结果 间接ELISA检测旋毛形线虫感染新西兰兔的血清抗体滴度达1∶6400以上;采用硫酸铵沉淀法获得血清IgG.免疫共沉淀的旋毛形线虫肌幼虫代谢分泌抗原经电泳分离获得4条较清晰的蛋白质条带,Western blot法分析发现在相对分子质量(Mr)40000、50000、83000处存在旋毛形线虫感染血清识别、而正常兔血清不识别的3条较强的蛋白质条带.切取Mr40000、50000、83000处的蛋白质条带进行质谱鉴定,获得4种蛋白质分子,分别为丝氨酸蛋白酶、肌幼虫特异性丝氨酸蛋白酶、43000分泌糖蛋白、53000代谢分泌抗原.结论 采用免疫共沉淀偶联质谱技术从旋毛形线虫肌幼虫代谢分泌抗原(ES)中获得4种血清学抗原,为旋毛形线虫病有效诊断和疫苗候选分子的获得提供了新的来源和视角.
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联合应用达沙替尼可增强吉非替尼对HCC827肺癌细胞的杀伤作用
目的 探讨达沙替尼(dasatinb)增强吉非替尼(gefitinib)对HCC827肺癌细胞杀伤作用的分子机制.方法 单独(0、100、500、1000) nmol/L gefitinib及联合使用dasatinb(1000 nmol/L)处理HCC827细胞及gefitinib耐药株HCC827GR细胞,采用MTT法检测HCC827细胞、HCC827GR细胞增殖活力,采用分光光度法检测caspase 3活性,Western blot法检测各组细胞中Src、表皮生长因子受体(EGFR)蛋白磷酸化水平.结果 HCC827GR细胞中Src磷酸化水平显著增高,dasatinb显著抑制Src磷酸化水平,抑制细胞增殖并促进caspase 3表达,两种药物联合应用杀伤效果显著高于单纯gefitinib处理组.结论 Dasatinb与gefitinib联合应用可增强对Src家族表达的抑制,增强gefitinib对HCC827肺癌细胞的杀伤作用.
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单增李斯特菌感染抑制HepG2细胞RhoA表达并促进其凋亡
目的 探讨单增李斯特菌(Lm)调控HepG2细胞的凋亡能力以及对Rho家族RhoA蛋白表达的影响.方法 常规方法培养HepG2细胞,分别以感染复数(MOI)=10和MOI=100接种Lm菌EGD株,共培养lh和20 h后收集培养物.异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,反转录PCR检测HepG2细胞RhoA和caspase 3编码基因表达,分光光度法检测HepG2细胞活化的caspase 3水平,Western blot法检测HepG2细胞RhoA蛋白表达.结果 Lm的侵袭可促进HepG2细胞凋亡,下调HepG2细胞RhoA编码基因和蛋白表达,并上调caspase 3编码基因表达.结论 Lm感染促进宿主细胞凋亡,抑制宿主细胞RhoA表达.
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炎性条件下PD-L1敲除小鼠星形胶质细胞的活化和增殖能力降低
目的 观察炎性条件下程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)敲除小鼠皮层来源的星形胶质细胞(AS)的增殖和活化情况.方法 制备PD-L1敲除小鼠模型,分离出野生型和PD-L1敲除小鼠皮层AS,用100 ng/mL脂多糖(LPS)联合100 ng/mLγ-干扰素(IFN-γ)刺激,免疫细胞化学染色和实时定量PCR检测野生型和PD-L1敲除小鼠来源的AS的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、波形蛋白(vimentin)、S100钙结合蛋白B(S100β)、bystin、神经上皮干细胞蛋白(nestin)、一氧化氮合成酶2(NOS2)、CC趋化因子配体5(CCL5)、白细胞介素6(IL-6)、集落刺激因子2(CSF2)、丝氨酸蛋白酶抑制剂A3n(SerpinA3n)和脂质运载蛋白2(Lcn2)的改变.结果 LPS联合IFN-γ刺激可明显促进AS的PD-L1的表达,PD-L1敲除小鼠AS的骨架结构较野生型AS存在差异.敲除小鼠AS的GFAP、vimentin、S100β、bystin mRNA水平较野生型AS明显下调,nestin mRNA水平无明显差异,但PD-L1敲除小鼠AS的增殖水平低于野生型AS.LPS联合IFN-γ刺激增加NOS2、CCL5、IL-6 mRNA的表达水平、但CSF2、SerpinA3n和Lcn2 mRNA无明显变化.结论 炎性条件下PD-L1敲除小鼠星形胶质细胞的活化与增殖水平较野生型AS下降.
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地塞米松抑制谷氨酸诱导的大鼠小胶质细胞活化
目的 探讨地塞米松(DEx)对谷氨酸(GLU)诱导的大鼠小胶质细胞活化的影响.方法 分离纯化并体外培养SD幼鼠脊髓小胶质细胞,并通过免疫荧光技术鉴定小胶质细胞并检测其纯度,按照随机数字表法将细胞分为5组:Dulbecco磷酸盐缓冲液处理组(DPBS组)、GLU处理组、DEX预处理后再用GLU处理组、DEX与GLU同时处理组、GLU刺激再用DEX处理组.通过免疫荧光技术检测糖皮质激素受体(GR)与小胶质细胞活化标志蛋白CD11b/c的表达.结果 与DPBS对照组比较,GLU处理组CD11b/c表达增强,且细胞突起长度缩短,形态变圆;而与GLU组比较,DEX与GLU同时处理组和GLU刺激后DEX再处理组CD11b/c表达降低,DEX预处理后再用GLU处理组无差异.结论 DEX对GLU诱导大鼠小胶质细胞的活化产生抑制作用,而预处理无此作用.
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下调蛋白酶活化受体4(PAR4)的表达抑制SW620结直肠癌细胞迁移
目的 建立诱导型蛋白酶活化受体4(PAR4)表达抑制的人肠癌细胞SW620/PAR4D细胞模型,探讨PAR4对肠癌细胞增殖迁移的影响.方法 建立带有四环素诱导表达调控系统的SW620/Tet-On人肠癌细胞,并构建针对PAR4的诱导型人工小RNA(miRNA)表达慢病毒载体pLVX-Tight-Puro-PAR4-miR,获得诱导型PAR4表达抑制的SW620/PAR4D细胞模型.用Western blot法对经强力霉素(DOX)药物诱导后SW620细胞中PAR4的表达抑制情况进行验证,采用CCK-8法检测抑制PAR4对SW620细胞增殖的影响,划痕实验检测SW620细胞的迁移情况.结果 成功建立了PAR4低表达的SW620/PAR4D细胞模型.与对照组细胞相比,DOX诱导PAR4表达抑制前后,SW620/PAR4D细胞的生长增殖情况无明显变化,但运动迁移能力明显下降.结论 下调PAR4水平不影响SW620细胞的增殖但抑制其迁移.
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大麻素WIN55,212-2抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖和侵袭迁移
目的 研究大麻素WIN55,212-2(WIN)对SMMC-7721肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子机制.方法 应用CCK-8法分析(0、1、5、10、20) μmol/L WIN对SMMC-7721细胞活力的影响;Hoechst33258染色荧光显微镜下观察各组细胞形态改变;异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白P53、P21、Bcl-2、Bax和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达;采用TranswellTM侵袭实验及划痕实验检测细胞侵袭、迁移的能力,Western blot法检测基质金属蛋白酶14(MMP-14)蛋白水平.结果 WIN抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡,两者都具有剂量依赖性;WIN处理后的细胞,经Hoechst3258染色,可发现细胞核浓缩、破碎,引起明显细胞凋亡;凋亡相关蛋白P53、P21、Bax激活,抗凋亡蛋白Bcl-2水平下降;AKT、p-AKT、p-ERK水平下降,而ERK总蛋白无明显变化;与对照组比较,WIN处理后的SMMC-7721细胞侵袭和迁移的能力均显著降低,MMP-14蛋白水平也下降.结论 WIN能抑制SMMC-7721细胞增殖和诱导其凋亡,与WIN激活P53,抑制AKT、p-AKT、p-ERK表达有关.WIN通过下调MMP-14蛋白水平,抑制SMMC-7721细胞侵袭和迁移.
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土荆皮乙酸对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应及M1表型偏移的抑制作用
目的 初步探讨土荆皮乙酸(PLAB)对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞抗炎作用及影响M1表型偏移的分子机制.方法 LPS诱导RAW264.7细胞建立体外炎症模型,给予0.5 μmol/L PLAB和1μmol/L过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)阻滞剂GW9662处理.流式细胞术检测细胞周期变化,实时定量PCR检测PPARγ和M1型巨噬细胞标志物白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达,Western blot法检测核因子κB (NF-κB)信号通路相关信号分子水平.结果 PLAB能够明显降低LPS诱导RAW264.7细胞的IL-1β、TNF-α的mRNA水平,上调PPARγ的mRNA水平.下调NF-κBp65、pNF-κB p65、IKKα、IKKβ、pIKKα/β、IκBα、pIκBα的蛋白水平,使RAW264.7细胞阻滞在G0和G2期.GW9662可以抵抗PLAB的抗炎作用.结论 PLAB抑制LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应并抑制巨噬细胞向M1表型偏移,与影响细胞周期分布、调控NF-κB/PPARγ通路有关.
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过表达白细胞介素8促进乳腺癌BT549细胞迁移
目的 构建含有白细胞介素8(IL-8)基因的重组腺病毒,并观察其对BT549乳腺癌细胞增殖、细胞周期以及迁移能力的影响.方法 以143B细胞cDNA为模版,PCR扩增IL-8基因,与穿梭质粒pAdTrack-TO4连接,构建重组穿梭质粒pAdTrack-TO4-IL-8,由PmeⅠ线性化并电转入AdEasier细菌中,获得重组腺病毒质粒pAdIL-8,PacI酶切经LipofectamineTM 2000介导转入HEK293细胞进行包装扩增,检测滴度;反转录PCR检测BT549细胞中IL-8 mRNA的水平,ELISA检测BT549细胞培养上清液中IL-8的水平;流式细胞术检测细胞周期情况;MTT法检测细胞增殖能力;划痕愈合实验检测细胞迁移能力.结果 PCR以及测序证实pAdTrack-TO4-IL-8构建成功;pAdIL-8经酶切证实重组正确;重组腺病毒AdIL-8感染BT549细胞,可高表达IL-8.过表达IL-8的BT549细胞迁移能力增强,但其增殖活性无明显变化、将细胞周期阻滞于S期.结论 过表达IL-8可促进BT549细胞的迁移.
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Sonic Hedgehog(SHH)促进胶原蛋白诱导关节炎大鼠滑膜成纤维细胞的增殖
目的 探讨Sonic Hedgehog(SHH)在滑膜成纤维细胞增殖中的作用.方法 收集类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、强直性脊柱炎(AS)患者及健康正常人血清样本各(30例),ELISA检测上述血清SHH的含量.SD大鼠皮内注射2型胶原蛋白(Col2)诱导RA大鼠模型(CIA),取其滑膜组织原代培养滑膜成纤维细胞(SF).免疫荧光细胞化学染色法检测vimentin表达鉴定SF,并检测SHH在SF中的表达.培养SF给予SHH-胶质瘤相关癌基因1(Gli-1)通路特异性阻断剂GANT61处理72 h,Western blot法检测SF表达SHH的变化情况,CCK-8法检测SF的增殖情况.结果 RA患者血清中SHH的含量较SLE、AS患者及正常组含量升高.成功建立CIA模型及分离培养SF;CIA-SF表达SHH较正常组SF高.给予GANT61处理72 h,CIA-SF中SHH蛋白表达降低且细胞增殖水平下降.结论 SHH参与RA发病与CIA-SF增殖有关.
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γ干扰素(IFN-γ)刺激小鼠肥大细胞释放组织蛋白酶S
目的 探讨γ干扰素(IFN-γ)对P815小鼠肥大细胞以及小鼠髓源性肥大细胞(BMMC)表达组织蛋白酶S(CTSS)的影响.方法 用(10、25、50) ng/mL IFN-γ分别刺激P815细胞及原代培养的小鼠BMMC,利用实时定量PCR、ELISA分别检测P815细胞及BMMC CTSS的mRNA和蛋白水平.用25 ng/mL IFN-γ处理P815细胞及小鼠BMMC,P815细胞分别处理6、12、18、24、48、72 h,BMMC分别处理12、24、48 h,重复上述检测步骤.结果 IFN-γ可增加P815细胞及BMMC CTSS的mRNA和蛋白水平,并具有一定的时间、剂量依赖关系.结论 IFN-γ可促进小鼠肥大细胞表达CTSS.
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慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞Toll样受体9水平与CD38、HLA-DR、CD95水平正相关
目的 探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染过程中外周血单个核细胞(PBMC)的Toll样受体9(TLR9)表达水平与CD38、HLA-DR、CD95水平的关系.方法 募集70例未经抗病毒治疗的慢性HBV感染者,按HBV DNA的含量高低分为高病毒载量组与低病毒载量组,12例健康人作为对照组;采集外周抗凝血,密度梯度法分离PBMC;使用流式细胞术检测PBMC的TLR9、CD38、HLA-DR、CD95的水平.结果 慢性HBV感染过程中,高病毒载量组和低病毒载量组PBMC的TLR9、HLA-DR、CD95表达水平显著高于健康对照组;高病毒载量组和低病毒载量组PBMC上TLR9与CD38、HLA-DR、CD95的共表达率显著高于健康对照组;相关性分析结果显示慢性HBV感染者PBMC上,TLR与CD38、HLA-DR、CD95的表达正相关(r分别为0.345、0.334、0.227).结论 慢性HBV感染过程中,PBMC的TLR9、HLA-DR、CD95表达水平升高,TLR9表达水平与CD38、HLA-DR、CD95水平正相关.
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活动期强直性脊柱炎患者外周血效应性T细胞的比例增加且程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)水平降低
目的 分析强直性脊柱炎(AS)患者外周血CD4+ CD25-效应性T细胞(Teff)和CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)的比例以及两群细胞表面程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)的表达情况.方法 流式细胞术检测49例AS患者和31例健康对照者外周血中Teff和Treg的比例以及PD-L1在这两种细胞表面的表达水平.结果 与健康对照组相比,活动期AS患者外周血中Teff的比例显著增加,Treg比例无明显变化;活动期AS患者外周血PD-L1+ Teff的比例显著降低,且低于稳定期AS患者;活动期AS患者外周血Teff膜表面PD-L1的相对表达量也显著低于稳定期AS患者和健康对照组;AS患者外周血PD-L1+Treg的比例和Treg膜表面PD-L1的相对水平均显著低于健康对照组.结论 活动期AS患者外周血中Teff比例增加,PD-L1水平降低.
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晚期非小细胞肺癌患者外周血固有样淋巴细胞亚群比例变化和临床意义
目的 检测固有样淋巴细胞、αβT细胞、B2细胞在非小细胞肺癌(NSCLC)患者和正常人体内的分布情况及相关性.方法 收集16例正常对照和5例NSCLC初诊患者和15例病情稳定患者外周血,采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞中,恒定型自然杀伤T(iNKT)细胞、γδT细胞、B1细胞及αβT细胞、B2细胞的比例.结果 病情稳定组的iNKT细胞比例显著低于对照组和初诊患者组,而αβT细胞比例显著高于对照人群;初诊患者组的γδT细胞显著高于病情稳定组;初诊患者组B1细胞比例明显低于对照组.病情稳定组iNKT细胞和γδT细胞呈正相关;病情稳定组和对照组B1和B2细胞呈正相关.结论 NSCLC患者外周血固有样淋巴细胞亚群失衡.
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Tim-3和PD-1在慢性丙型肝炎患者不同单核细胞亚群的表达水平分析
目的 分析慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血单核细胞亚群分布,同时观察负性调节分子T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域蛋白3 (Tim-3)和程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)在各亚群表达的变化及意义.方法 利用流式细胞术检测CHC患者外周血单核细胞亚群比例和各亚群Tim-3、PD-1表达,并与临床指标如丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)采用Spearman方法进行相关性分析.结果 与健康对照组比较,CHC患者外周血CD14+ CD16+单核细胞比例增高,以CD14++CD16+单核细胞比例增高显著.Tim-3在CD14++ CD16-单核细胞和CD14+ CD16++单核细胞上表达水平升高;PD-1在CD14++CD16-单核细胞和CD14++ CD16+单核细胞上表达水平升高.CHC患者单核细胞亚群以及各亚群Tim-3、PD-1和临床指标ALT及AST无明显相关性.结论 Tim-3和PD-1在不同单核细胞亚群表达水平不同.
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下调结直肠癌细胞受体酪氨酸激酶样孤儿受体抑制细胞生长并促进其凋亡
目的 探讨受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)在人结直肠癌中的表达及其生物学功能.方法 收集60例结直肠癌及对应癌旁组织,实时定量PCR(qRT-PCR)检测ROR1的mRNA水平,免疫组织化学染色检测ROR1的蛋白水平,并分析ROR1蛋白与肿瘤临床病理资料间的相关性.利用ROR1的siRNA特异性敲低结肠癌SW480细胞中ROR1表达,采用qRT-PCR、Westem blot法检测ROR1的敲减效果,MTT法检测下调ROR1后,SW480细胞的增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测下调ROR1后,SW480细胞的凋亡情况.结果 ROR1在结直肠癌组织中表达水平明显高于对应癌旁组织;结直肠癌组织中ROR1高表达与肿瘤体积增大(≥5 cm)、淋巴结转移及高TNM分期(Ⅲ+Ⅳ期)显著相关;ROR1的siRNA可显著降低SW480细胞ROR1 mRNA及蛋白的水平;下调ROR1表达能够抑制SW480细胞的增殖并促进其凋亡.结论 ROR1在结直肠癌组织中表达上调并与结直肠癌恶性临床病理特征有关,下调ROR1能够抑制结肠癌细胞的生长并促进其凋亡.
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4397例孕产妇ABO和RhD血型检测及不规则抗体的分析
目的 探讨孕产妇ABO、RhD血型和不规则抗体阳性率的分布及临床意义.方法 采用微柱凝胶血型定型卡和抗人球蛋白卡,对孕产妇进行ABO、RhD血型和不规则抗体检测,对有特异性抗体者采用试管法检测抗体效价、免疫球蛋白(Ig)类型及37℃反应性.结果 在4397例孕产妇中,A型1308例(29.75%),B型1366例(31.07%),O型1265例(28.77%),AB型458例(10.42%);RhD阳性4348例(98.89%),RhD阴性49例(1.11%).在4397例孕产妇中检出不规则抗体阳性55例(1.25%),其中Rh血型系统49例(89.09%),MNS血型系统4例(7.27%),Lewis血型系统2例(3.64%).抗体特异性:抗D6例(10.91%)、抗E 21例(38.18%)、抗Ec 10例(18.18%)、抗C4例(7.27%)、抗c3例(5.45%)、抗Ce 5例(9.09%)、抗M4例(7.27%)、抗Lea 2例(3.64%),其红细胞相应抗原检测均为阴性;抗体效价在1∶8~1∶512之间;Ig类型:IgM类2例,IgG类49例,IgM-IgG类4例;37℃反应性:1+~4+.结论 孕产妇不规则抗体阳性率高于非孕女性,在产前和输血前对孕产妇进行不规则抗体检测是预防新生儿溶血病和溶血性输血反应的重要措施.
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变应性鼻炎IgE高亲和力可溶型Fc段受体1α(sFcε1α)蛋白的制备及血清中相应抗体的检测
目的 构建人可溶型Fc段受体1α(sFcεR1α)的原核表达载体,诱导表达并纯化重组FcεR1α胞外区段蛋白,检测其与血清中IgE的结合力及相应抗体的含量.方法 应用巢式PCR技术获得人FcεR1α胞外区段基因,构建原核表达载体pET-sFcε1α,佳诱导条件表达出sFcεR1α,采用亚胺二乙酸His标签纯化树脂纯化并进行Western blot法鉴定.ELISA检测人sFcεR1α与血清中IgE的结合力及血清中sFcεR1α总量、sFcεR1 α-IgE及抗FcεR1α自身抗体的含量.结果 扩增出人FcεR1α胞外区段基因,大小为600 bp左右.pET-sFcεR1α经PCR、双酶切、测序鉴定正确.诱导表达、纯化出人sFcεR1α,相对分子质量(Mr)大小约为42000.Western blot法鉴定为人sFcεR1α.人sFcεR1α可以与人血清中IgE结合.变应性鼻炎(AR)患者血清中sFcεR1α总量、sFcεR1 α-IgE含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人.结论 获得人sFcεR1α,sFcεR1α与人血清中IgE有较强的结合力,AR患者血清中sFcεR1α总量、sFcεR1α-IgE含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人.
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His标签单克隆抗体的制备及交叉抗原的表位分析
目的 研究His标签对重组蛋白在疫苗、免疫和致病等方面的影响.方法 制备His标签的单克隆抗体(mAb),通过ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色方法研究其生物学特性、免疫反应特性以及与人体组织的反应性.结果 His标签mAb和抗原的结合与空间构型有关,多数抗His标签mAb可以与血红蛋白结合,亦可与人体多种正常组织反应.结论 带His标签的重组蛋白进行体内实验时可刺激机体产生抗His标签的抗体,该抗体可与血红蛋白及人体正常组织结合而影响重组蛋白的后期研究.
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兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗体的制备和鉴定
目的 制备兔抗小鼠白细胞介素23p19(IL-23p19)多克隆抗体.方法 利用分子克隆技术构建重组表达质粒pET-16b-IL-23p19,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,SDS-PAGE及Western blot法分析鉴定蛋白,镍柱亲和层析纯化制备蛋白;以此蛋白为免疫抗原免疫新西兰大白兔,获得抗血清,并利用亲和层析法纯化抗血清,制备兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗体;采用ELISA检测抗体效价;Western blot法检测抗体特异性.结果 重组表达载体pET-16b-IL-23p19构建正确且IL-23p19蛋白能够在大肠杆菌BL21(DE3)中有效表达.通过多次IL-23p19蛋白免疫新西兰大白兔,成功制备兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗体.ELISA检测确定新西兰大白兔血清效价达1∶256 000,Western blot法证实兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗体能特异性识别小鼠IL-23p19蛋白.结论 成功制备了兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗体,抗体具有高的效价和较好的特异性.
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表达于B细胞的CD147分子相关功能的研究进展
CD147是一种广泛表达于人体多种组织细胞的跨膜糖蛋白,属于免疫球蛋白超家族.CD147参与机体多种生理病理过程,尤其在炎症和肿瘤发生过程中发挥重要作用.表达于B细胞的CD147可以通过多种机制参与炎症和肿瘤的发病.在B淋巴细胞表达的CD147,可以介导B细胞多种生物学功能,如B细胞激活、增殖、分化、黏附以及迁移;表达在B细胞肿瘤的CD147,可以促进肿瘤的增殖和转移.本文总结了表达于B细胞的CD147与炎症和肿瘤的关系.
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调节性T细胞治疗系统性红斑狼疮的研究进展
系统性红斑狼疮(SLE)作为一种典型的自身免疫性疾病,SLE患者体内免疫稳态被打破:T、B细胞功能紊乱,促炎因子过度释放,导致全身自身免疫反应的发生.然而调节T细胞(Treg)是一类具有免疫抑制和维持免疫稳态功能的细胞群,已被用于肿瘤、感染、炎症性疾病和1型糖尿病的治疗中.本文以Foxp3+ Treg为代表,阐述了Treg的分类、免疫抑制机制及其可塑性研究和调控机制,总结了Treg体内诱导的进展及培养扩增纯化技术,以期探索基于调节细胞的疗法(regulatory cell-based therapy)重建免疫耐受的治疗策略,达到治疗或治愈SLE的目的.
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树突状细胞活化或耐受诱导物的研究进展
树突状细胞(DC)是连接先天性免疫和固有免疫的重要桥梁,不同微环境,其成熟状态不同,成熟DC(mDC)可促进免疫应答,耐受型DC(tDC)则诱导免疫耐受.各种外源或内源因素均可调节DC的分化发育,刺激其活化成熟或诱导耐受以影响免疫应答的结局.本文主要对诱导DC活化或耐受的分子如Toll样受体(TLR)配体、多糖类、热休克蛋白、细菌毒素、树突状细胞和上皮细胞205(DEC205)单克隆抗体或单链抗体DEC融合蛋白、细胞因子、免疫调节剂的用量及其应用进行综述.
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幽门螺旋杆菌表位疫苗的研究进展
幽门螺旋杆菌(Hp)是导致人慢性活动性胃炎、胃和十二指肠溃疡的主要病原菌.目前临床治疗尚有众多不足,相关疫苗的研制对预防及控制其感染意义重大.以基因工程或人工合成得到的抗原表位作为触发机体免疫机制的表位疫苗是一种新型疫苗,较之传统疫苗具有高效、高特异性等优势.Hp基因组的测序、注释以及生物信息学方法的应用,促进了表位疫苗研究的发展.表位疫苗构建过程的优化、应用过程中佐剂的多样化选择提高表位疫苗使用的实用性,增强其免疫原性.本文就Hp表位疫苗的表位预测与筛选、优化、佐剂以及递送系统的研究现状进行综述.
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CD147在类风湿性关节炎发病机制中的作用
类风湿性关节炎(RA)是一种病因未知,不能根治而只可缓解的自身免疫性疾病,特征在于关节滑膜发炎和增生、自身抗体产生(类风湿因子和抗环瓜氨酸蛋白抗体)、软骨和骨破坏和全身特征,包括心血管、肺和骨骼疾病.CD147分子广泛表达在人体多种组织中,属于免疫球蛋白超家族成员,在RA患者滑膜组织中高表达,并通过多种免疫细胞或以可溶性分子的形式参与RA的免疫病理反应,进一步刺激多种基质金属蛋白酶的分泌,导致软骨及骨组织的降解和破坏.本文总结了CD147与RA发病机制的关系.
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肿瘤相关巨噬细胞调节抗肿瘤治疗的研究进展
肿瘤相关巨噬细胞(TAM)来源于血液中的巨噬细胞,进入肿瘤组织后,在细胞因子的刺激下可极化为“M1”型或“M2”型TAM.“M1”型TAM抑制肿瘤生长,“M2”型TAM通过产生各种促进肿瘤生长因子影响肿瘤发生发展过程,如:血管生成、免疫抑制、侵袭和转移.越来越多的研究表明,肿瘤相关巨噬细胞可增强或拮抗化学药物治疗、放射治疗和免疫治疗剂的抗肿瘤治疗疗效,也能带动肿瘤在放射治疗或血管靶向药物治疗之后的修复机制.因此,研究临床抗肿瘤治疗过程,TAM参与肿瘤免疫治疗的机制可为肿瘤免疫治疗提供新靶点.本文主要讨论TAM调节抗肿瘤治疗研究进展.
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人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者CD4+CD25+调节性T细胞的研究进展
人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者常常以自身免疫系统的过度活化为其显著特征,并且HIV疾病进展与自身的免疫活化程度密切相关.调节性T细胞(Treg)在维持机体免疫耐受和免疫应答稳态方面发挥着重要的作用.在HIV-1感染者中,Treg不仅限制机体的过度免疫活化,而且可能抑制针对HIV-1特异的细胞免疫应答;因此,Treg对HIV疾病进展的影响是利是弊,至今尚无定论.对此,深入了解HIV感染者中Treg“量”和“质”的变化及其在HIV感染中的作用,不仅有助于解决目前有关“Treg在HIV病程进展中作用”的争论,而且将有助于设计抗HIV的方案,以期为今后艾滋病的治疗和疫苗的研究提供新的靶点以及提供新的思路和理论参考.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 |
1995 | 01 02 03 |
1994 | 01 02 |
1993 | 01 02 03 04 |
1992 | 01 02 03 04 |
1991 | 01 02 03 04 |
1990 | 01 02 |
1989 | 01 02 03 04 |