细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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和厚朴酚抑制白血病U937细胞侵袭及血管新生作用
目的 探讨和厚朴酚(HNK)对人白血病U937细胞侵袭及血管新生作用的影响及其可能的分子机制.方法 应用不同浓度的HNK处理U937细胞不同时间,用MTT法检测HNK对细胞增殖抑制作用;基质黏附试验检测HNK对U937细胞黏附功能的影响;TranswellTM小室检测HNK对U937细胞侵袭抑制作用.实时定量PCR (qRT-PCR)检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9) mRNA水平变化.ELISA检测HNK处理U937细胞后上清VEGF蛋白表达水平.结果 HNK对U937的体外增殖有显著抑制作用,呈剂量和时间依赖性.低浓度HNK能够抑制U937细胞的黏附及侵袭能力.不同浓度HNK处理U937细胞24h后,细胞VEGF、VEGFR1及MMP-9表达水平呈剂量依赖性下调.结论 HNK可能通过抑制VEGF、VEGFR1及MMP-9表达,抑制U937细胞侵袭及血管新生功能.
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺毒素Ⅰ型A亚基的表达与鉴定
目的 表达肠出血性大肠杆菌(EHEC) O157∶H7志贺毒素1型A亚基(Stx1A)重组蛋白并鉴定.方法 从EHECO157∶H7基因组中扩增编码Stx1A的基因,经测序无误后,克隆入表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导、纯化获得目的蛋白Stx1A,并对纯化的目的蛋白进行质谱鉴定.重组的Stx1A蛋白免疫BALB/c小鼠,观察小鼠抗血清与EHECO157∶H7毒株特异性反应.结果 PCR扩增的Stx1A基因为945 bp,成功构建重组质粒pET22b(+)-Stx1a,重组蛋白在原核细胞中获得高效表达,通过AKTATM-His亲和层析柱获得纯化.质谱分析表明目的蛋白为Stx1A.Western blot显示鼠抗Stx1A血清可与EHEC O157∶H7毒株产生的天然毒素蛋白结合.结论 成功克隆了EHEC O157∶H7 Stx1A基因,并获得重组表达,为后续研究奠定基础.
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人Wilms瘤基因1重组腺病毒Ad5/F35的制备及感染树突状细胞后的鉴定
目的 构建人Wilms瘤基因1(WT1)重组腺病毒载体Ad5/F35并鉴定.方法 运用不同病毒滴度的Ad5-EGFP和Ad5/F35-EGFP感染黑素瘤患者外周血树突状细胞(DC),用荧光显微镜检测EGFP的表达,选择对DC感染率高的腺病毒;同源重组构建Ad5/F35-WT1腺病毒载体,用免疫细胞化学和流式细胞术(FCM)检测WT1的表达.结果 在相同滴度下,腺病毒载体Ad5/F35的感染优于Ad5;成功构建了Ad5/F35-WT1重组腺病毒,免疫细胞化学染色和FCM证实该病毒能有效介导WT1在DC中的表达.结论 Ad5/F35-WT1重组腺病毒能将WT1基因成功导入DC并有效表达.
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连翘酯苷A对脂多糖诱发的小鼠急性肺损伤的保护作用
目的 研究中药单体连翘酯苷A对脂多糖(LPS)诱发小鼠急性肺损伤的保护作用及可能机制.方法 采用腹腔注射LPS(10 mg/kg体质量)建立内LPS诱发急性肺损伤小鼠模型;实验分正常对照组,急性肺损伤模型组,抗体组,连翘酯苷A高、中、低剂量组;其中抗体组在造模前12 h前腹腔注射抗小鼠Toll样受体4/髓样分化蛋白2(TLR4/MD2)复合物抗体(50 μg/20 g体质量),连翘酯苷A干预组在造模前7d腹腔注射连翘酯苷A1次/d,剂量分别为(80、20、5)mg/kg体质量;各组小鼠在造模4h后留取血和肺组织,动态浊度法检测血浆内毒素的含量,HE染色法观察肺组织病理的改变,RT-PCR和Western blot法测定肺组织TLR4的表达,免疫组化测定肺组织MyD88和NF-κB的表达,ELISA检测血清中TNF-α的含量.结果 与正常组相比,模型组血浆中内毒素含量显著升高,肺泡间隔明显增厚,充血,水肿及大量的中性粒细胞浸润;与模型组相比,连翘酯苷A用药各组血浆内毒素含量明显下降(P＜0.01),肺组织病理损伤不同程度的减轻,TLR4 mRNA和蛋白的表达明显下调(P＜0.01),MyD88和NF-κB蛋白的表达也显著降低(P＜0.01),血清中TNF-α的含量降低,连翘酯苷A干预各组呈剂量依赖关系.结论 连翘酯苷A对LPS诱发的急性肺损伤小鼠起保护作用,其机制可能与其抑制LPS-TLR4-MyD88-NF-κB信号通路有关.
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过表达microRNA-7通过下调CGG结合蛋白1的表达抑制人肺癌细胞生长
目的 探讨过表达microRNA-7(miR-7)对人肺癌细胞体内外生长的作用和可能机制.方法 利用真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7 (p-miR-7),体外瞬时转染95D人肺癌细胞,MTT法和克隆形成实验检测95D细胞的增殖变化;免疫荧光技术检测95D细胞Ki-67和CGG结合蛋白(CGGBP1)的表达;建立人肺癌裸鼠肿瘤模型,肿瘤局部注射p-miR-7真核表达载体,测量肿瘤大小并观察小鼠生存时间;实时PCR检测肿瘤组织中miR-7表达水平;免疫组织化学技术检测组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达.结果 过表达miR-7可明显抑制肺癌细胞的体外增殖(P＜0.05),Ki-67和CGGBP1的表达显著减少(P＜0.05);体内实验结果显示,局部注射p-miR-7组中miR-7表达水平明显增加,同时荷瘤裸鼠的肿瘤生长缓慢,生存时间明显延长(P＜0.05).肿瘤组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达量均显著减少(P＜0.05).结论 过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体内外生长,可能与其下调肿瘤生长相关蛋白CGGBP1的表达有关.
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健脾清化方对局灶节段性肾小球硬化大鼠NF-κB及下游分子的影响
核因子κB (nuclear factor kappa B,NF-κB)的活化可促进其主要下游因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的表达,TNF-α是早期炎症反应的重要介质.TNF的下游因子TRAF6是肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptorassociated factors,TRAF)家族中唯一可以直接与NF-κB受体激活因子(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)相结合的信号分子,在Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)介导的信号转导途径激活NF-κB,TRAF6是激活NF-κB通路和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedprotein kinase,MAPK)信号通路的交叉点[1].以上3种互为上下游关系的因子相互作用,扩大了对肾纤维化的作用.对Platt模型大鼠和阿霉素所致局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomurular sclerosis,FSGS)模型大鼠使用健脾清化方后发现,该方不仅对模型大鼠的肾功能和蛋白尿有明显改善[2],能明显抑制成纤维细胞的激活和细胞免疫介导的炎症损伤,而且对p38MAPK免疫炎症通路也有明显抑制作用[3].为进一步观察该方对NF-κB通路的影响,本研究从抑制NF-κB激活角度,探讨健脾清化方对阿霉素致局灶节段硬化肾病模型大鼠FSGS的影响,进一步探讨健脾清化方改善肾纤维化的机制.
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基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株的构建及鉴定
目的 构建基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株.方法 以H5N1禽流感病毒血凝素(HA)基因和鼠伤寒沙门菌SL7202基因组为模板,通过重叠PCR扩增出HA1-2-fljB基因片段,将其插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a-HA1-2-fljB,再将其转化表达菌E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导目的蛋白表达.SDS-PAGE和Western blot法鉴定分析融合蛋白HA1-2-fljB.通过刺激HEK293-TLR5细胞,检测融合蛋白的TLR5生物学活性.结果 正确构建出重组质粒pET32a-HA1-2-fljB,SDS-PAGE显示,融合蛋白HA1-2-fljB相对分子质量(Mr)约为100 000,Western blot法表明融合蛋白具有良好的免疫反应性.TLR5生物活性实验结果显示,与HA1-2蛋白刺激组相比,HA1-2-fljB诱导HEK293-TLR5细胞分泌了高水平的IL-8(P＜0.01).结论 成功表达出具有TLR5活性的融合蛋白HA1-2-fljB,为研究H5亚型禽流感新型疫苗奠定了基础.
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HIV-1gp120通过影响NR2B、PSD-95表达损伤神经元
目的 研究HIV-1病毒的表面包膜糖蛋白gp120对大鼠皮质神经元的毒性机制.方法 实验用SD胎鼠来源的原代培养的皮层神经元,用免疫细胞化学染色和Western blot法检测gp120对含2B亚基的NMDA受体(NR2B)和突触后致密蛋白95(PSD-95)表达的影响,用MTT法检测gp120对神经元的毒性.结果 gp120对神经元有剂量依赖性的毒性作用,其毒性能被NR2B特异拮抗剂美金刚阻断.gp120能明显增加大鼠皮层神经元总NR2B的表达,而降低PSD-95的表达量.结论 gp120可通过使神经元NR2B表达增加及PSD-95的表达减少来损伤神经元,NR2B特异受体拮抗剂能阻止gp120诱导的神经元损伤.
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单核细胞亚群在大鼠心肌缺血再灌注模型中的动态变化及意义
目的 观察单核细胞不同亚群在大鼠心肌缺血再灌注(I/R)模型中的动态变化,并探讨其与I/R损伤后炎症程度及组织修复的关系.方法 Wistar大鼠16只随机分为缺血再灌注组(I/R组)和假手术组(sham组).采用结扎左冠状动脉前降支45 min后再灌注的方法制备I/R模型.于术前、术后1、3、5、7、14 d抽取大鼠尾静脉血,运用流式细胞术将单核细胞分为CD172a+ CD43low和CD172a+ CD43high曲两个亚群,检测各时间点单核细胞亚群的比例,并于术后第30天取心脏行Masson及麦胚凝集素(WGA)染色,观察心肌梗死区纤维化程度及心肌细胞肥大程度与单核细胞表型变化的关系.结果 I/R组CD172a+CD43low单核细胞比例在术后第1天较基线显著升高(P＜0.05),第3天达到高峰(P＜0.01),之后逐渐下降,从第7天起与基线水平一致;Sham组CD172a+ CD43low单核细胞比例在术后第1天升高,与基线相比差异有统计学意义(P＜0.05),从第3天起降至基线水平;与sham组相比,I/R组第3天时CD172a+ CD43low比例较显著性升高(P＜0.01),其余时间点则无显著性差异.两组大鼠CD172a+ CD43high细胞比例在各组呈现与C D43low相反的变化.Masson及WGA染色结果显示,I/R组大鼠心肌存在大量胶原纤维的沉积(P＜0.05),且心肌细胞存在不同程度的肥大(P＜0.01).术后第3天CD172a+ CD43low单核细胞比例与术后30 d左室壁心肌纤维化程度的相关性分析结果显示两者呈正相关(r=0.86,P＜0.05).结论 研究表明大鼠心肌I/R后单核细胞亚群发生了动态变化,具有促炎症表型的CD172a+ CD43low单核细胞可能成为心肌I/R损伤的治疗靶点.
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罗格列酮通过PI3K/PTEN/Akt通路抑制人肝癌HepG2细胞增殖
目的 研究罗格列酮对人肝癌HepG2细胞增殖与细胞周期的影响,通过检测相关蛋白的表达变化,探讨其可能机制.方法 不同浓度罗格列酮作用于HepG2细胞,MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blot 法检测PTEN、pAkt、S期激酶相关蛋白2(Skp2)及P27kipl蛋白表达变化,RT-PCR检测PTEN、Skp2及P27kipl mRNA表达变化.结果 罗格列酮可明显抑制HepG2细胞的增殖,呈现时间和浓度依赖性(P＜0.05);G0/G1期HepG2细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(P＜0.05).Western blot结果显示罗格列酮可下调HepG2细胞中pAkt和Skp2蛋白的表达,上调PTEN和P27kipl蛋白表达(P＜0.05).RT-PCR结果显示罗格列酮可明显上调PTEN mRNA的表达,下调Skp2mRNA的表达,而P27kipl mRNA表达无明显变化.结论 罗格列酮可抑制HepG2细胞的增殖,造成G0/G1期阻滞,其机制可能与罗格列酮经PI3K/PTEN/Akt信号通路参与Skp2及P27 kipl蛋白的调控有关.
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地塞米松通过下调PC12大鼠嗜铬细胞瘤细胞葡萄糖的摄取诱导细胞凋亡
目的 观察地塞米松(DEX)诱导PC12大鼠嗜铬瘤细胞凋亡及对葡萄糖摄取的影响.方法 体外培养的PC12细胞随机分为正常对照组、10μmol/L DEX组、100 μmol/L DEX组.MTT法测细胞存活率,DAPI荧光染色、线粒体膜通透性转换孔(mPTP)、capase-3、caspase-9活性测定细胞凋亡.葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测葡萄糖的摄取率,Western blot法检测葡萄糖转运子3(GLUT-3)的表达.结果 与正常对照组比较,DEX作用PC12细胞48 h,DEX组细胞活力下降、引起细胞凋亡;DEX组葡萄糖的摄取下降,GLUT-3蛋白水平下降(P＜0.05).结论 DEX可以诱导PC12细胞凋亡,其机制可能与DEX引起细胞GLUT-3蛋白表达水平下降引起葡萄糖摄取下降有关.
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丹参酮ⅡA对阿尔茨海默病模型大鼠脑组织caspase-3、Akt与NF-κB表达的影响
目的 观察丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对p淀粉样蛋白(Aβ)诱导的大鼠脑组织Akt、NF-κB、caspase-3表达水平的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、AD模型组和TanⅡA治疗组.在大鼠脑海马内注射Aβ方法建立AD动物模型.免疫荧光法检测Aβ1-16标记部位和表达水平,免疫组化法检测caspase-3的表达水平,免疫组化染色和Western blot法检测Akt、NF-κB的表达水平.结果 Aβ1-16在假手术组中无表达,而在AD模型组和TanⅡA治疗组二者间Aβ1-16表达水平无明显差异(P＞0.05).Akt的表达在模型组低于假手术组和Tan ⅡA治疗组,差异有统计学意义(P＜0.05),而模型组NF-κB与caspase-3的表达水平明显高于假手术组和TanⅡA组,差异显著(P＜0.05).结论 TanⅡA可降低模型鼠NF-κB与caspase-3的表达水平,且上调Akt的表达.
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软叶针葵花粉疫苗治疗小鼠过敏性鼻炎的效果和机制
目的 建立小鼠过敏性鼻炎模型,用重组软叶针葵花粉profilin疫苗免疫预防治疗,观察过敏性鼻炎小鼠的病理变化,探讨该疫苗对过敏性鼻炎治疗效果及可能机制.方法 用腹腔注射法建立BALB/c小鼠软叶针葵花粉过敏性鼻炎模型,皮下注射过敏原疫苗进行预防治疗.通过小鼠无创肺功能仪检测小鼠治疗前后气道高反应性、间接ELISA检测血清中特异性抗体(IgE和IgG2a)、细胞因子,透射电镜观察鼻黏膜组织超微结构变化.结果 疫苗特异性免疫治疗后,小鼠鼻部症状和气道高反应性减轻,其血清中特异性IgG2a水平升高、IgE水平降低,培养脾细胞上清中INF-γ、IL-1O含量增加,IL-4生成减少.结论 重组软叶针葵花粉profilin作为疫苗对花粉过敏性鼻炎有一定的疗效,可能与促使Th2向Th1转换,调节辅助性T细胞的平衡有关.
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c-Jun激活域结合蛋白1在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义
c-Jun激活域结合蛋白1(c-Jun activation domainbinding protein 1,Jabl)基因定位于小鼠2号染色体、人类8号染色体上;Jabl蛋白由334个氨基酸分子组成,相对分子质量(Mr)为38 000.Jab1在多种恶性肿瘤中可能通过下调p27等细胞周期因子的表达来促进肿瘤细胞的增殖[1].Jab1与口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的预后有一定的关系[2-3],但其表达与临床病理指标间的关系仍存在一定争议,本研究旨在探讨OSCC中Jab1的表达及其与临床病理指标及预后关系.
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新疆汉族HLA-DRB1基因多态性与再生障碍性贫血的相关性
目的 探讨人类白细胞抗原(HLA) DRB1与再生障碍性贫血(AA)的相关性.方法 采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP) DNA分型技术对43例新疆汉族AA患者(AA病例组)和200例新疆汉族人群作为健康对照者(健康对照组)进行HLA-DRB1基因分型,研究HLA-DRB1基因多态性与新疆汉族AA患者的相关性.结果 AA病例组和健康对照组的等位基因频率有相同之处,均表现为DRB1 * 15表达高,同时DRB1*4、DRB1*7、DRB1*9、DRB1*12表达均较高,频率低的均为DRB1*17;AA病例组中DRB1*8等位基因频率(13.73％)显著高于对照组(6.99％),差异有统计学意义(OR=2.202,P <0.05);AA病例组DRB1*12、DRB1*14等位基因频率低于对照组,差异无统计学意义.其中AA病例组女性等位基因DRB1* 12(5.41％ vs 10.00％,OR=0.2079,P＜0.05)和AA病例组男性DRB1* 14等位基因频率(2.11％)显著低于对照组(7.53％),差异有统计学意义(OR =0.1403,P＜0.05);AA病例组女性DRB1* 15等位基因频率(27.45％)显著高于对照组(14.56％),差异有统计学意义(OR =2.433,P＜0.05).结论 DRB1* 08可能是AA患者的易感基因;DRB1* 12可能是女性AA患者拮抗基因;DRB1*14可能是男性AA患者的拮抗基因;DRB1* 15可能是女性AA患者的易感基因.
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糖尿病肾病患者血清FGF-2、TGF-β及CD4+、CD8+T细胞的数量变化
糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病全身微血管合并症之一,终可发展成终末期肾病,也是糖尿病主要的死亡原因之一[1-2].糖尿病肾病在临床上分为5期,一旦发病,缺乏有效的方法控制其发展,大多数患者转为慢性肾功能衰竭,威胁着患者的生命.因此,对DN各期影响因素的研究,可控制DN的进一步发生和进展,以往研究主要集中于糖代谢和血流动力学研究等[3-7].本研究通过对DN各期患者血清成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor 2,FGF-2)、转化生长因子p(transforming growth factorp,TGF-p)和辅助/诱导T淋巴细胞(CD3+ CD4+)、抑制/细胞毒T淋巴细胞(CD3+CD8+)指标的测定,对DN的早期病变和病程监测的有效性和可行性作出综合评价,为DN的发展与临床治疗提供新的认识.
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鼻咽癌组织中DNA损伤与EB病毒感染的相关性研究
目的 分析鼻咽癌(NPC)组织磷酸化组蛋白H2AX (γ-H2AX)的表达水平和EB病毒(EBV)的感染情况,探寻二者的相关性.并用细胞实验进行验证,以阐明EBV诱导DNA损伤应答进而促进NPC发生发展的可能机制.方法 选取NPC标本50例和鼻咽炎(NPI) 20例,采用免疫组化法检测γ-H2AX及EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)的表达,对LMP1阴性标本采用原位杂交方法检测EB病毒编码的RNA(EBER);采用Western blot法检测EBV感染鼻咽癌细胞CNE1后γ-H2AX表达的变化.结果 NPC组γ-H2AX的阳性率达94％,显著高于NPI组的40％;EBV阳性率为94％,显著高于NPI组的30％;97.9％ EBV感染的NPC组织γ-H2AX阳性,二者表达有相关性(P＜0.05).通过Western blot法检测进一步验证,EBV感染可使CNE1中γ-H2AX的表达量增高.结论 γ-H2AX表达和EB病毒感染有密切关联性,EBV感染可能是通过诱导细胞DNA损伤,造成基因组不稳定从而促进NPC的发生发展.
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肾透明细胞癌组织中树突状细胞与微血管密度之间的关系
目的 探讨树突状细胞(DC)的数量及成熟情况与肾透明细胞癌微血管密度(MVD)的相关性.方法 收集解放军307医院2010-07/2013-01期间手术的30例肾透明细胞癌患者术后癌组织及癌旁标本,通过免疫组化检测石蜡切片中DC特异性标志CD11c、DC成熟标志MHC-Ⅱ和MVD标志CD34的表达情况并进行分析.结果 30例肾透明细胞癌患者中,癌组织中CD11c阳性率和MVD分别为(93.08士66.14)‰和26.31±11.05个明显高于癌旁组织(25.91±12.29)‰和12.78±5.49个,癌组织中MHC-Ⅱ阳性率为(9.65±3.61)‰明显低于癌旁组织(17.60±6.26)‰.MVD与MHC-Ⅱ阳性率成负相关关系,而与CD11c则无明显相关性.癌组织中各指标的表达与患者性别、年龄、TNM分期之间未见明显相关性.结论 肾透明细胞癌癌组织中的血管密度、DC含量高于癌旁组织,而成熟DC含量低于癌旁组织,肿瘤微血管密度与DC成熟度之间存在负相关关系.
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PI3K抑制剂对正常人外周血单个核细胞糖皮质激素抵抗的作用
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是以气流受限为特征的全身慢性进行性疾病,炎症是重要的发病机制之一,糖皮质激素作为一种有效的抗炎药物,在炎症性疾病的治疗中起着至关重要的作用,但由于COPD患者体内存在糖皮质激素抵抗,使激素对COPD慢性炎症的疗效较差[1].有研究显示氧化应激可激活炎症细胞的磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)信号通路,使组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)表达降低,导致糖皮质激素抵抗[2-3].因此,本研究采用烟草烟雾提取物(cigarette smoking extracts,CSE)及PI3K抑制剂作用于正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),观察并证实氧化应激下,应用PI3K抑制剂是否能够减轻炎症细胞的糖皮质激素抵抗作用,以便为COPD的防治提供新的思路.
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抗HBsAg表位单克隆抗体的制备及HBV血清型夹心ELISA的建立
目的 制备抗乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)表位单克隆抗体(mAb),建立HBV血清型夹心ELISA检测方法.方法 将HBsAg亚型蛋白分别免疫小鼠,通过细胞融合、高通量筛选ELISA (HTS-ELISA)筛选后得到杂交瘤细胞株并在无血清培养基中扩大培养.采用蛋白A对抗体进行纯化并测定抗体亲和力、亚型、特异性,后建立双抗体夹心ELISA.结果 HBsAg的亚型蛋白ad、adr及ayw分别免疫小鼠后,其血清效价达到1∶105.细胞融合及HTS-ELISA筛选后获得4株杂交瘤细胞株.经过纯化后得到的mAb分别命名为#2-4,#18-3,#7-7,#56-5,亲和力都在1×109 L/mol以上.间接ELISA结果显示,#2-4,#18-3,#7-7,#56-5分别特异性地与HBsAg的“d,y,r,w”表位结合.用抗HBsAg“a”表位的mAb#3-11分别与这4株抗体组合,进行夹心ELISA检测.结果显示,不同的ELISA组合能特异性地检测HBsAg的“d,y,r,w”表位.结论 成功制备了亲和力高、特异性好的抗HBsAg 4个表位的mAb,建立了检测HBV血清型的双抗体夹心ELISA.
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酿酒酵母烯醇化酶单克隆抗体的制备、筛选与鉴定
烯醇化酶(enolase,ENO)是糖酵解过程中必需的关键酶,能催化磷酸甘油酸向磷酸烯醇式丙酮酸转变,也能在糖异生过程中催化逆向反应.白念珠烯醇化酶由440个氨基酸组成,相对分子质量(Mr)47 000左右.据研究,其含量分别约占白念珠菌孢子相和菌丝相的0.7％和2％[1],是白念珠菌含量为丰富的蛋白质之一.近年来,住院患者院内侵袭性真菌感染(invasive fungi infection,IFI)的问题日益严峻,其中念珠菌血流感染(blood stream infection,BSI)占医院获得BSI中的第4位,在重症监护室发生的侵袭性念珠菌病中,病死率可高达49％[2].人们不断探讨将检测真菌的抗原、抗体及代谢产物用于临床早期诊断侵袭性真菌病,烯醇化酶是其中重要的靶标分子[3].
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HPV16型E7重组蛋白的表达及其多克隆抗体的制备
目的 制备人乳头瘤病毒(HPV) 16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体.方法 用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21 a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定;纯化的HPV16 E7重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA检测多克隆抗体的效价,并用Western blot法及免疫荧光技术分析多克隆抗体的特异性.结果 HPV16 E7重组蛋白可通过原核表达系统进行表达和纯化;通过兔免疫后可制备特异性的多克隆IgG抗体,效价达1∶30 000;经Western blot法和免疫荧光染色结果证实兔多克隆抗体可特异性识别HPV16 E7蛋白.结论 成功进行了HPV16 E7原核表达并制备了HPV16 E7兔多克隆抗体.
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抗人CD33单链抗体与CD80胞外区融合基因的构建、表达及其生物活性检测
目的 构建及表达CD80胞外区与抗人CD33单链抗体(scFv)融合基因,并初步检测融合蛋白的生物活性.方法 扩增CD80胞外区,利用人血清白蛋白(HAS)第三结构域亲水性的403-427位氨基酸作为链间连接肽将其与抗人CD33 scFv连接,并克隆至原核表达载体PET22b(+)中,经IPTG诱导,在大肠杆菌Rosseta(DE3)内得到融合蛋白的表达.表达产物经过溶解包涵体,镍柱亲和层析纯化和体外复性过程,获得了高纯度的融合蛋白.并用间接免疫荧光法检测融合蛋白与人CD33抗原结合活性.结果 克隆出CD80胞外区序列,大小为633 bp,正确合成作为链间连接肽的人血清白蛋白(HAS)第三结构域的403 ～427位氨基酸.成功构建融合基因表达载体,SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,融合蛋白在Rosseta(DE3)中得到高效表达,融合蛋白相对分子质量(Mr)约为55 000,复性后经过间接免疫荧光检测表明具有与人CD33抗原结合活性.结论 成功构建PET22b(+)-CD80胞外区-CD33 scFv(ExCD80-CD33scFv)融合基因表达质粒,融合蛋白在宿主菌Rosetta(DE3)中获得了表达,并初步检测其生物学活性.
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IFN-λ在抗病毒作用研究进展
干扰素(IFN)是建立多方面抗病毒反应的关键因子,基于其受体、结构特性和生物活性公认有三种不同的类型的IFN(1型、2型和3型).IFN-λ是一个新近发现的在体外和体内都能引发抗病毒反应的细胞因子,与受体结合可以诱导受体异二聚体化,导致Janus激酶-信号转导子和转录激活子(JAK-STAT)信号转导途径的激活,发挥与1型干扰素相似的抗病毒生物学效应,如调节Th1、Th2及疾病治疗等.在乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)和人类疱疹病毒-6B(HHV-6B)等治疗上有很大的影响,而且其副作用比1型干扰素低,为IFN-λ的临床应用研究提供了新思路.
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脾脏吞噬细胞清除凋亡细胞的免疫学调控机制研究进展
正常组织新陈代谢中会产生大量的凋亡细胞,它们作为机体自身抗原的主要来源在诱导免疫耐受中发挥重要的作用.脾脏边缘区的巨噬细胞(如边缘区巨噬细胞和边缘区嗜金属巨噬细胞等)和脾脏中的树突状细胞通过“find-me”信号“eat-me”信号快速识别并清除体内不断产生的凋亡细胞,以致于在体内很难检测到凋亡细胞.同时,凋亡细胞的清除可诱导机体对自身抗原的免疫耐受.并且已有研究指出,清除凋亡细胞诱导免疫耐受这一理论已被用于预防自身免疫病和诱导肿瘤免疫.本文主要综述了机体清除凋亡细胞的分子机制及临床意义.
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干燥综合征相关性细胞因子
干燥综合征(SS)是一种慢性全身性炎症性自身免疫病,主要侵犯泪腺、唾液腺等外分泌腺.近年来,细胞因子在干燥综合征的发生发展中所起的作用引起了关注.Th1/Th2失衡抑制免疫细胞的凋亡,使细胞内累积大量免疫原性核小体,刺激T细胞产生自身抗体,加重自身免疫反应.Th17/Treg失衡可能诱发或加剧SS的发生发展.B细胞反应性增生产生大量细胞因子、免疫球蛋白及多种自身抗体,导致局部组织炎症损伤.SS患者唾液腺及血清中B细胞活化因子(BAFF)水平均较高,并与炎症活动及损害程度相关.趋化因子及其受体在SS炎性细胞迁移至病灶腺体及促进异位生发中心形成的过程中起重要作用.
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树突状细胞对Th17细胞分化的调节作用
树突状细胞(DC)作为主要的抗原提呈细胞(APC),是连接先天免疫和继发免疫的桥梁.在病原微生物的刺激下,APC会将抗原提呈给T细胞,进而引起初始T细胞的活化并分化成为不同的效应细胞.Th17是CD4辅助性T细胞的一个亚群,在机体抗感染和自身免疫性疾病中发挥重要作用.Th17细胞的分化过程主要受来自APC(外源信号)和T细胞自身内源信号的调控,其中外源信号主要包括DC上的各类受体以及胞内的节点分子所介导的信号.本文主要概述了树突状细胞所介导的信号是如何影响Th17细胞的分化.
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IL-10在病毒持续性感染中的研究进展
机体在受到病原体入侵时,免疫系统通过多种应答有效防御病原体的侵入,清除感染并限制过度的免疫应答,在宿主平衡免疫系统的过程中免疫调节发挥着至关重要的作用.免疫调节是一个复杂的正、负信号调控的网络,大量的细胞因子参与其中,已有研究显示宿主来源的细胞因子IL-10是某些病毒感染持续的关键因素,现就IL-10在病毒持续感染中的研究进展进行综述.
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一种小鼠睾丸细胞涂片的快速制备方法
目的 建立一种用于免疫荧光实验的小鼠睾丸细胞涂片的快速制备新方法.方法 分别给出生后16、21、28 d和120 d的小鼠腹腔注射秋水仙素,3h后取睾丸组织剔除白膜,分离曲精小管进行剪碎,加入冷PBS重悬细胞,过滤,并用冷PBS洗涤细胞3次,然后低渗处理,后经多聚甲醛固定后铺片.对细胞核进行DAPI染色,并以21 d小鼠睾丸涂片为例进行免疫荧光实验,检测所制备的细胞涂片的质量.结果 所制备的小鼠睾丸细胞涂片经DAPI染色,每张细胞涂片均分布大量生殖细胞,背景清晰,根据细胞核的大小与着色,可初步判断生殖细胞类型;用不同发育阶段小鼠所制备的睾丸细胞涂片,细胞分布类型有很大差异,其中28 d小鼠制备的睾丸细胞涂片中生殖细胞类型多;以21 d小鼠睾丸细胞涂片为例进行免疫荧光实验,红色和绿色荧光标记的目标蛋白在精母细胞中表达清晰,背景干净,说明所制备的细胞涂片适合于免疫荧光检测.结论 成功建立了一种快速制备小鼠睾丸细胞涂片的新方法.
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