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白念珠菌氟康唑耐药的分子生物学进展
随着白念珠菌临床感染的不断增加,以及以氟康唑为主的唑类抗真菌药物的广泛应用,唑类耐药现象亦随之增多,并成为困扰临床念珠菌感染治疗的难题之一.出现耐药可能的原因包括:①编码药物靶酶羊毛甾醇14 α去甲基酶的ERG11基因的过度表达和点突变导致真菌细胞膜上的麦角固醇的生物合成发生异常;②药物外流泵相关的基因有ATP结合盒转运子基因-CDR1、CDR2和主要易化子超家族基因的过度表达导致药物在真菌细胞内有效浓度的减少.氟康唑耐药的发生可能同时出现不同的机制.
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气相色谱法快速鉴定光滑念珠菌与白念珠菌
目的:探讨脂肪酸组成对白念珠菌与光滑念珠菌的鉴别意义.方法:采用盐酸甲醇法提取5株白念珠菌和4株光滑念珠菌的脂肪酸,以气相色谱法进行检测,配以计算机分析各种饱和与不饱和脂肪酸含量.结果:光滑念珠菌与白念珠菌在脂肪酸的成份与含量上明显不同,光滑念珠菌不含亚麻酸(C18:3),且不饱和脂肪酸棕榈油酸(C16:1)与饱和脂肪酸棕榈酸(C16:0)比值不同(白念珠菌皆小于 1.3,光滑念珠菌除1例为1.2外,余皆大于 3.9):C16:0与硬脂酸(C18:0)的比值(白念珠菌皆大于2.7,光滑念珠菌皆小于 1.1):C16:1和油酸(C18:1)的比值(白念珠菌皆小于0.5,光滑念珠菌皆大于 0.7).结论:气相色谱法方法简便、快速,可用于白念珠菌与光滑念珠菌的化学分类鉴定.
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高通量测序技术在黄连解毒汤抗白念珠菌机制研究中的应用及探讨
白念珠菌(Candida albicans)是临床上发生为普遍的致病真菌,严重时可危及生命,目前主要以三唑类药物进行防治.但是由于药物长期广泛的使用及其作用位点的单一性,导致耐药问题日益突出.中药黄连解毒汤有良好的抑菌效果,并极大增强西药杀菌作用,但至今相关其分子机制的研究鲜有涉及.本文在阐述目前国内外现有高通量基因测序技术的基础上,重点探讨了高通量技术在黄连解毒汤抗白色念珠菌机制研究中的应用.
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白念珠菌消化道感染对脾虚小鼠肠组织中IFN-γ mRNA及IL-10 mRNA表达的影响
目的:探讨小鼠在脾虚状态下对消化道感染白念珠菌的易感性及其免疫学机制,为防治白念珠菌感染和脾虚证提供一定的实验依据.方法:采用饮食失节加劳倦过度的复合因素制备小鼠脾虚证模型,经消化道感染白念珠菌,检测粪便中的活白念珠菌数,应用RT-PCR方法检测肠组织局部V-干扰素(IFN-γ)mRNA和白细胞介素-10 (IL-10) mRNA的表达水平.结果:与正常感染组比较,自第6天起脾虚感染组小鼠粪便活菌数持续显著增高(P＜0.05,P＜0.01).与脾虚模型组比较,正常感染组与脾虚感染组小鼠在感染后期肠组织表达IFN-γ mRNA和IL-10 mRNA的水平均显著升高(P＜0.01);与正常感染组比较,脾虚感染组小鼠在感染后期IFN-γ mRNA的表达水平显著升高(P＜0.01),但IL-10 mRNA表达显著减少(P＜0.05).结论:消化道的白念珠菌感染是否致病与小鼠的免疫力密切相关,尤其是在免疫功能低下时危害更大,同时又进一步加重脾虚状态或感染的病情.
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基于RNA-seq技术的香连外洗液逆转白念珠菌耐药基因组学研究
目的:对香连外洗液诱导下恢复氟康唑敏感株及自然转种恢复敏感株差异基因进行转录组学研究.方法:通过测定低抑菌浓度值(MIC)观察香连外洗液诱导及自然转种白念珠菌耐药株恢复药物敏感性所需的代数;对两种情况下恢复敏感的白念珠菌分别进行转录组测序;GO方法分析比较二者的差异基因.结果:香连外洗液作用下的耐药株转种至第6代恢复药物敏感性,后者转种至第16代恢复敏感性.转录组测序表明,与自然转种株相比,香连外洗液诱导株有174基因RPKM指标上调表达,164基因RPKM指标下调表达.结论:香连外洗液可诱导耐药株较早恢复药物敏感性;在其作用下,菌株蛋白质合成运输活动活跃,线粒体活动增强,应激性明显.
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黄连解毒汤组方在体外对白念珠菌生物膜的影响
目的 对黄连解毒汤和单味药在体外对白念珠菌生物膜的影响进行对比分析,为今后的研究与临床工作提供有价值的参考信息.方法 采取MTT法对白念珠菌的悬浮菌、生物膜对黄连解毒汤、单味药的敏感性进行评价;药物预先包被对白念珠菌生物膜生成产生的影响.结果 经研究发现,黄柏、黄芩对白念珠菌悬浮菌的MIC50、MIC90以及对白念珠菌生物膜的SMIC50、SMIC90与黄连解毒汤比较无明显差异;而黄连MIC50、MIC90以及对白念珠菌生物膜的SMIC50、SMIC90与黄连解毒汤比较发生明显降低,并且低于黄柏和黄芩.结论 黄柏、黄芩对体外白念珠菌生物膜具有一定的抑制作用,并与黄连解毒汤效果相近,黄连的抑制效果更加的明显.
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没食子酸抑制白念珠菌生物膜作用的研究
目的:研究没食子酸对体外白念珠菌生物膜的影响.方法:采用XTT减低法评价没食子酸对白念珠菌的生物膜及黏附性的影响;镜下观察没食子酸对白念珠菌生物膜的形态学影响;细胞毒试验检测该药的毒副作用.结果:没食子酸抑制白念珠菌生物膜低药物浓度SMIC_(50),SMIC_(80)分别是500,1 000 mg·L~(-1);100,1 000 mg·L~(-1) 的没食子酸对白念珠菌的早期黏附及菌丝生长有抑制作用;没食子酸对人细胞毒性较弱.结论:没食子酸对体外白念珠菌生物膜有较强的抑制作用.
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黄连解毒汤乙酸乙酯提取物抑制白念珠菌菌丝的形成
目的:探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Huanglian Jiedu decoction,EAHD)对白念珠菌菌丝形成的影响.方法:以0,78,312,1 250 mg·L-1 EAHD干预白念珠菌6h,采用倒置显微镜、荧光显微镜及扫描电镜分别观察白念珠菌菌丝形态;固体培养基上观测菌落形态;实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测白念珠菌菌丝形成相关基因HWP1,ALS3,UME6,SUN41,CSH1,CaPDE2的表达量.结果:312,1 250 mg·L-1EAHD可显著抑制白念珠菌菌丝的形成及菌落的形态;qRT-PCR检测显示1 250 mg·L-1EAHD使HWP1,ALS3,UME6,CSH1表达分别下调4.13,3.64,2.46,2.75倍,SUN41表达上调7.26倍,CaPDE2表达无变化.结论:EAHD可能通过抑制HWP1,ALS3,UME6,CSH1等相关基因的表达来抑制白念珠菌菌丝的形成.
关键词： 黄连解毒汤乙酸乙酯提取物 白念珠菌 菌丝 -
穿心莲内酯对白念珠菌群感效应及相关毒力基因的影响
目的:研究穿心莲内酯(andrographolide,AG)对白念珠菌群感效应(quorum sensing,QS)及相关毒力基因的影响.方法:气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)检测AG干预白念珠菌不同时间后法尼醇和酪醇的含量变化;qRT-PCR检测QS调节的相关毒力基因CHK1,PBS2,HOG1的表达.结果:白念珠菌生长2h时法尼醇和酪醇分泌量较少,AG作用后变化不明显;12 h后分泌量高,24 h回落.不同浓度AG干预后,法尼醇含量降低,酪醇升高,呈现剂量依赖性,其中1 000 mg·L-1AG效果均明显.qRT-PCR结果显示,1 000 mg· L-1AG在2,12,24 h时分别使CHK1下调2.375,3.330,4.043倍;PBS2下调2.010,4.210,4.760倍;HOG1变化不明显.结论:AG可抑制法尼醇的分泌及促进酪醇的分泌,下调QS相关的毒力基因CHK1,PBS2的表达.
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白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌定植下溃疡性结肠炎小鼠的作用机制研究
研究白头翁汤正丁醇提取物(BAEB)对DSS诱导+白念珠菌(CA)定植状态下的小鼠急性溃疡性结肠炎(UC)的作用机制.将小鼠随机分为正常对照组,DSS组,DSS+ CA组,BAEB高、中、低剂量组,阳性药Mesalazine组.观察小鼠一般情况,平板法检测小鼠肠道内容物真菌载荷量,HE染色观察小鼠结肠病理变化;ELISA法检测小鼠血清ASCA及结肠黏膜组织IL-6,IL-8,IL-1β,HBD-2,HBD-3的含量变化.结果表明,与DSS模型组相比,DSS+ CA组小鼠一般状况及血清ASCA无明显变化,但肠道CA载荷量、组织病理损伤程度、结肠黏膜组织IL-6,IL-8,IL-1β,HBD-2,HBD-3的蛋白水平均超过DSS组,BAEB高剂量与Mesalazine治疗能改善结肠组织病理,降低IL-6,IL-8,IL-1β,HBD-2,HBD-3的表达水平.上述结果提示,BAEB能有效改善DSS+ CA定植下的UC小鼠结肠病理及免疫性损伤,对肠道真菌过度定植相关肠炎的治疗具有重要价值.
关键词： 白头翁汤正丁醇提取物 溃疡性结肠炎 白念珠菌 -
黄连提取物体外对白念珠菌丝侵袭的抑制作用
该文探讨黄连提取物(extract of Coptidis Rhizoma,ECR)体外对白念珠菌丝侵袭的抑制作用.以XTT还原法评价ECR对白念珠菌丝代谢活性的影响;固体培养基上观测白念珠菌落边缘生长的情况;半固体培养基上观察ECR如何影响白念珠菌丝生长;扫描电镜观察ECR对白念珠菌丝形态的影响;荧光显微镜观察ECR对白念珠菌丝形态及活力的变化;qRT-PCR法检测白念珠菌丝侵袭素ALS3,SSA1基因的表达.结果 显示,XTF法检测到在64,128,256 mg·L-1ECR干预下,白念珠菌丝活性逐渐降低;128,256 mg·L-1 ECR在固体培养基上可抑制菌落褶皱,在半固体培养基中可明显抑制菌丝侵袭性生长;扫描电镜与荧光显微镜下发现,128,256 mg·L-1 ECR能显著抑制白念珠菌丝形成;qRT-PCR法显示,64,128,256 mg·L-1 ECR作用下,侵袭素ALS3,SSA1基因表达均下调,且在256 mg·L-1 ECR干预下,侵袭素ALS3,SSA1基因表达分别下调4.8,1.68倍.该研究表明,黄连提取物通过抑制菌丝生长及侵袭素表达从而影响白念珠菌的侵袭力.
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穿心莲内酯诱导白念珠菌生物膜分散细胞凋亡的研究
目的:探讨中药有效成分穿心莲内酯对白念珠菌生物膜分散细胞凋亡的影响.方法:Hoechst33258染色荧光显微镜检测白念珠菌生物膜细胞凋亡的形态；Rh123染色流式细胞仪检测白念珠菌生物膜细胞线粒体膜电位(MMP)变化；DHR染色流式细胞仪检测白念珠菌生物膜细胞内活性氧(ROS)水平.结果:1 000,100 μmol·L-1的穿心莲内酯能诱导白念珠菌生物膜细胞核固缩、浓染致密,1 000,100,10 μmol·L-的穿心莲内酯能降低白念珠菌生物膜线粒体膜电位,提高细胞内ROS水平.结论:一定浓度的穿心莲内酯可诱导白念珠菌生物膜分散细胞凋亡.
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黄芩苷对白念珠菌芽管形成及黏附性的影响
目的:研究黄芩苷对白念珠菌芽管形成、对白念珠菌黏附人口腔上皮细胞及阴道上皮细胞的影响.方法:将100,50,10 mg·L-1黄芩苷分别与白念珠菌悬液、白念珠菌与口腔上皮细胞混合液、白念珠菌与阴道上皮细胞混合液共同孵育,显微镜下计数芽管形成率、白念珠菌对口腔上皮细胞及阴道上皮细胞的黏附百分率.结果:100,50,10 mg·L-1黄芩苷均能抑制白念珠菌芽管形成及对口腔上皮细胞和阴道上皮细胞的黏附;白念珠菌标准株与临床株之间无显著性差异.结论:黄芩苷对体外白念珠菌的芽管形成及黏附性有较强抑制作用.
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穿心莲内酯衍生物炎琥宁对大鼠体内白念珠菌生物膜的影响
目的:探讨穿心莲内酯(AG)衍生物炎琥宁(YHN)对大鼠体内白念珠菌生物膜的影响.方法:构建白念珠菌生物膜大鼠皮下导管模型,采用YHN(40,20,10,5,2.5 mg· kg-1)腹腔注射治疗,设氟康唑(FLC)阳性对照组(80 mg·kg-1),7d后计数导管的菌落形成单位(CFU),XTT代谢法评估YHN对体外白念珠菌生物膜的影响;扫描电镜(SEM)观察YHN干预大鼠体内生物膜的形态变化;采用实时荧光定量PCR法检测白念珠菌黏附相关基因ALS1,ALS3,HWP1,EAP1和MP65的表达量.结果:YHN组导管片上CFU明显少于空白组;XTT代谢活性也显示YHN组低于空白组,且呈剂量依赖性;扫描电镜照片显示YHN能显著减少白念珠菌对大鼠体内导管的黏附;qRT-PCR结果显示,YHN可下调ALS1,ALS3,HWP1,EAP1和MP65的表达量.结论:YHN能抑制大鼠体内白念珠菌生物膜.
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艾叶挥发油诱导白念珠菌凋亡
研究艾叶挥发油(Artemisia argyi essential oil,AAEO)诱导白念珠菌凋亡的活性.实验采用微量液基稀释法检测AAEO对白念珠菌(Candida albicans)SC5314的MIC;采用XTT还原法检测AAEO对白念珠菌SC5314代谢的影响;采用流式细胞仪检测AAEO对白念珠菌SC5314细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平的影响;采用Annexin-V/PI法测定AAEO对白念珠菌SC5314细胞凋亡率的影响;采用荧光显微镜观察AAEO对白念珠菌SC5314细胞Caspase酶活性的影响;采用DAPI染色法观察AAEO对白念珠菌SC5314细胞核固缩的影响.结果显示,AAEO对白念珠菌SC5314的MIC为0.5 mL·L-1;XTT代谢活性显示AAEO对白念珠菌SC5314代谢呈剂量依赖性的抑制;＞0.5 mL·L-1的AAEO干预后,白念珠菌SC5314细胞内活性氧水平显著升高、线粒体膜电位显著降低、凋亡比例明显增加、metacaspase活性显著升高、细胞核固缩.AAEO具有诱导白念珠菌细胞凋亡的活性,该作用可能与ROS积累和线粒体损伤相关.
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白头翁汤正丁醇提取物对碱性pH条件下白念珠菌VVC临床株形态转化的影响
目的:探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB)在碱性条件下对白念珠菌VVC(vulvovaginal candidiasis)临床分离株酵母-菌丝形态转化的影响.方法:采用肉汤稀释法测定白头翁汤不同溶剂萃取物对VVC临床株的低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);倒置显微镜观察不同pH环境下VVC临床株形态;采用XTT还原法评价在pH 8.0时菌丝活性;扫描电镜观察白念珠菌菌丝形态;荧光显微镜观察菌体代谢活力;固体培养基上观测菌落形态;半固体培养基上观察菌丝侵袭能力;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测菌丝特异性基因ALS3,CSH1,SUN41,HWP1和CaPDE2的表达量.结果:白头翁汤正丁醇提取物(BAEB)对VVC临床株的MIC为64～128 mg· L-1,低于总提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物和水提取物的MIC;pH 8.0时VVC临床株的菌丝形成能力强;扫描电镜结果显示512,1 024 mg·L-1的BAEB明显抑制VVC临床株的形态转化,荧光显微镜结果显示1 024 mg·L-1的BAEB可以降低VVC临床株的代谢活性;512,1 024 mg·L-1BAEB浓度的固体菌落未出现褶皱,1 024 mg·L-1BAEB浓度的半固体培养基内部未见菌丝侵袭;qRT-PCR检测显示1 024 mg·L-1时,ALS3,CSH1,SUN41,HWP1分别下调4.26,3.2,2.74,5.12倍,CaPDE2上调2.38倍.结论:BAEB在碱性pH条件下对白念珠菌VVC临床株的形态转化具有抑制作用.
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白头翁汤正丁醇提取物抑制白念珠菌细胞膜
该文探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB)对白念珠菌细胞膜的抑制作用.以Spot assay观察BAEB对白念珠菌细胞活性的影响;酶标仪检测BAEB干预后白念珠菌细胞内渗透压变化;荧光显微镜观察BAEB对白念珠菌细胞膜通透性的影响;高效液相检测白念珠菌细胞膜麦角甾醇的含量;qRT-PCR法检测细胞膜麦角甾醇生物合成相关基因的表达.结果显示,256,512,1 024 mg·L-1BAEB干预下白念珠菌活性逐渐降低;512,1 024 mg·L-1BAEB组白念珠菌胞内甘油含量显著性增多(P<0.05),与白念珠菌胞内渗透压相关的基因HOG1分别下调9.1,9.3,5.5倍;512,1 024 mg·L-1BAEB组白念珠菌红色荧光细胞明显增多;1 024 mg·L-1BAEB干预后麦角甾醇峰面积为35.884 95,有显著性差异(P<0.05);1 024 mg·L-1BAEB干预组ERG1,ERG2,ERG3,ERG4,ERG5,ERG6,ERG10,ERG11,ERG13,ERG24,ERG25,ERG251,ERG26与UPC2 分别下调6.58,4.89,4.15,9.24,3.41,9.84,3.08,7.50,5.53,5.90,2.45,3.25,1.98,10.07倍.BAEB可通过抑制麦角甾醇及其生物合成相关基因的表达,进而抑制白念珠菌细胞膜完整性.
关键词： 白头翁汤正丁醇提取物 白念珠菌 细胞膜 麦角甾醇 -
龙胆泻肝汤不同提取部位对白念珠菌生物膜的抑制作用研究
目的:观察龙胆泻肝汤提取物体外对白念珠菌生物膜形成影响,探讨其可能的作用机制.方法:采用XTT法和微量稀释法筛选龙胆泻肝汤各提取部位的抗菌活性并检测各提取物对白念珠菌生物膜的抑制作用.采用实时荧光定量PCR法检测其黏附相关基因ALS1和菌丝形成基因SUN41的表达量.结果:龙胆泻肝汤用石油醚、水、正丁醇、甲醇及乙酸乙酯提取部位对白念珠菌浮游菌的MIC分别为＞1000,＞1 000,＞1 000,125,125 mg·L-1;对白念珠菌生物膜的SMIC50分别为＞1 000,＞1 000,＞1 000,500,500 mg· L-1;SMIC80分别为＞1 000,＞1 000,＞1 000,＞1 000,1 000 mg· L-1;1 000 mg· L-1的乙酸乙酯提取物能明显抑制黏附相关基因ALS1和菌丝形成基因SUN41的表达.结论:龙胆泻肝汤抗白念珠菌生物膜的活性部位为乙酸乙酯提取部位.
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穿心莲内酯对白念珠菌生物膜分散的影响
随着真菌感染日渐增多,白念珠菌的防治成为当前抗真菌感染的重点.该研究拟探讨中药单体穿心莲内酯(AG)对白念珠菌生物膜分散的影响.实验以微孔板结合医用导管片构建白念珠菌生物膜模型,分别通过XTT减低法和平板法发现1 000,500,250 mg·L-1AG能不同程度的影响白念珠菌生物膜分散细胞的活性;以扫描电镜观察导管片残余生物膜形态结构,发现1 000,500,250 mg·L-1AG能剂量依赖性的诱导白念珠菌生物膜的分散,且分散出的细胞以酵母相为主;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测发现AG使HSP90表达上调,使UME6和PES1表达下调.该研究表明AG能一定程度的诱导白念珠菌生物膜分散.
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中药抗细菌生物膜研究进展
细菌生物膜能抵御抗生素与机体免疫系统的攻击,并易产生耐药性,造成慢性难治性感染.近年来有关生物膜研究文献及作者自身的相关研究结果表明,中药在防治细菌生物膜感染方面具有独特的优势.本文就中药抗铜绿假单胞菌、葡萄球菌、大肠杆菌、白念珠菌等生物膜的研究进行综述.
