细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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缺氧诱导因子-1α在肥胖哮喘大鼠肺组织中的表达及意义
目的 观察缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)在肥胖哮喘大鼠中的表达并探讨其作用.方法 将40只清洁级雄性SD大鼠随机分为正常体质量对照组(A组)、正常体质量哮喘组(B组)、肥胖对照组(C组)、肥胖哮喘组(D组).正常体质量组大鼠给予基础饲料,肥胖组大鼠给予高能饲料以建立肥胖大鼠模型.鸡卵清蛋白(OVA)致敏、激发,建立哮喘模型.对肺泡灌洗液(BALF)中白细胞进行计数.ImageProPlus软件测定气管壁总面积(WAt),并以基底膜周长(Pbm)标准化,结果以气管壁厚度(WAt/Pbm)表示.免疫组织化学染色检测肺组织中HIF-1α的表达.ELISA测定血清中HIF-1α的水平.采用Pearson相关分析法分析HIF-1α的表达水平与BALF中白细胞总数、气管壁厚度的相关性.结果 D组大鼠BALF中白细胞总数为(98.0±5.5)×104/mL,较A组(24.7±3.3)×104/mL、B组(87.8±7.1)×104/mL、C组(26.1±3.8)×104/mL升高(P＜0.05);D组大鼠WAt/Pbm为(9.91±0.56) m2/m,较A组(6.11±0.99)m2/m、C组(5.99±0.83) m2/m升高,与B组(8.60 ±0.53) m2/m差异无显著性意义;D组大鼠肺组织中HIF-1α的阳性细胞表达率为(19.44±0.96)％,较A组(2.19±0.91)％、B组(18.25±1.29)％、C组(2.56±0.89)％升高;D组的大鼠血清及BALF中HIF-1α浓度分别为(29.107±1.576) ng/mL、(0.511±0.011) ng/mL,较A组(19.380±1.506) ng/mL、(0.280±0.008) ng/mL,B组(23.961±1.565) ng/mL、(0.397±0.011) ng/mL,C组(20.782±2.034) ng/mL、(0.281±0.010) ng/mL升高;HIF-1α表达水平与BALF中白细胞总数、WAt/Pbm呈正相关.结论 HIF-1 α在肥胖哮喘大鼠血清及肺组织中的表达明显增加,与BALF中白细胞总数、气管壁厚度呈正相关.
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生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2
目的 观察生殖支原体脂质相关膜蛋白(LAMP)能否诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2(hBD-2),并探讨其可能的调控机制.方法 体外培养End1/E6E7人宫颈上皮细胞,用不同浓度的LAMP作用细胞48 h,反转录PCR检测hBD-2 mRNA的表达,Western blot法检测hBD-2蛋白的表达;用Toll样受体2(TLR2)和TLR6中和抗体孵育End1/E6E7细胞,并用TLR2、TLR6和MyD88负显性突变体转染细胞,以明确ⅡR2、TLR6和MyD88在介导hBD-2表达中的作用;Western blot法检测核因子κB(NF-κB) p65亚基核转位情况,电泳迁移率实验(EMSA)分析LAMP处理前后NF-κB的DNA结合活性;采用NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)处理,观察对hBD-2表达的影响.结果 生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2mRNA和蛋白.TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后,能降低hBD-2表达;MyD88负显性突变体也能显著抑制LAMP诱导的hBD-2表达.Western blot结果显示,LAMP处理后可诱导p65核转位,并能增强NF-κB的DNA结合活性.而NF-κB抑制剂PDTC处理后,hBD-2表达降低.结论 生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2,可能受TLR2、TLR6/MyD88/NF-κB调控.
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铜绿假单胞菌弹性蛋白酶抑制肺表面活性蛋白A介导的免疫吞噬作用
目的 探讨肺表面活性蛋白A(SP-A)与铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)弹性蛋白酶在铜绿假单胞菌肺部感染过程中的关系.方法 铜绿假单胞菌突变菌株P.aeruginosa野毒株PAO1、弹性蛋白酶LasB突变株△lasB和回复突变株PDO240LasB鼻腔接种C3H小鼠建立肺部感染模型以观察细菌的毒力变化.将同等数量的细菌与SP-A共同孵育,通过Western blot法检测SP-A的体外降解.将预先经SP-A作用过的细菌与小鼠Raw264.7巨噬细胞孵育进行体外吞噬实验以观察细菌被吞噬的情况.结果 由于弹性蛋白酶表达的缺失,铜绿假单胞菌突变菌株P.aeruginosa△lasB在通过鼻腔接种C3H小鼠建立的肺部感染模型中,与野毒株PAO1相比毒力显著降低.体外SP-A降解实验显示,△lasB基本失去了降解SP-A的能力.进一步的体外吞噬实验和聚集实验表明,△lasB在SP-A作用下更容易聚集成簇并被鼠巨噬细胞Raw264.7吞噬.结论 铜绿假单胞菌弹性蛋白酶可降解SP-A,破坏SP-A介导的细菌聚集作用.
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沉默葡萄糖调节蛋白78基因增强高氧诱导的肺泡上皮细胞凋亡
目的 探讨小干扰RNA(siRNA)干扰内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因表达对高氧诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响及作用机制.方法 培养人肺腺癌A549细胞,用构建的siRNA片段通过脂质体LipofectamineTM 2000转染A549细胞,将细胞分为高氧空白组、阴性对照(阴性siRNA)组和实验(GRP78-siRNA)组3组,利用950 mL/L O2建立高氧细胞损伤模型.48 h后通过实时定量PCR检测C/EBP同源蛋白(CHOP) mRNA的表达,Western blot技术检测CHOP蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 应用siRNA抑制GRP78表达后,GRP78 mRNA和蛋白表达下调、CHOP mRNA和蛋白表达上调、A549细胞凋亡增加.结论 下调GRP78基因可增强高氧活化的CHOP凋亡途径,诱导肺泡上皮细胞凋亡.
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鱼类传染性造血器官坏死病病毒糖蛋白的截短表达及免疫原性检测
目的 研究鱼类传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)糖蛋白不同区域对免疫原性的影响.方法 本研究通过DNAStar 6.0软件分析糖蛋白跨膜区、疏水性及抗原性后,对其进行截短表达;纯化后的糖蛋白制备兔抗血清,ELISA检测兔抗血清的效价,用间接免疫荧光技术检测纯化后蛋白的免疫原性.结果 SDS-PAGE结果显示,截短糖蛋白相对分子质量(Mr)为40 000,纯化后的糖蛋白经高效液相色谱检测纯度达到90％.利用纯化后的蛋白制备兔抗血清,ELISA结果显示,所制备的兔抗血清与糖蛋白的反应效价为1∶80 000,与IHNV-Sn株细胞培养物的反应效价为1∶20000;间接免疫荧光结果显示,兔抗血清与IHNV-Sn分离株及参考毒株均能发生特异性的反应.结论 实验所表达的糖蛋白与天然的病毒表面糖蛋白具有几乎相同的免疫原性.
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CD11b在小鼠脾脏和淋巴结细胞中的差异表达及其功能
目的 研究CD11b在小鼠脾脏和淋巴结细胞的差异表达及其生物学特性.方法 流式细胞术分析CD11b在C57BL/6小鼠脾脏和淋巴结细胞、不同T细胞亚群的表达及其与T细胞活化的关系.结果 CD11b在脾脏细胞的表达(19.9±2.5)％略高于淋巴结的细胞(16.0±4.2)％(P=0.026).脾脏中CD11b主要表达于CD3-细胞(14.93±0.94)％,淋巴结中CD11b主要表达于CD3+细胞(12.52±1.32)％;在脾脏和淋巴结T细胞亚群中,CD11b均主要表达于CD4+T细胞.进一步分析发现,CD4+ CD11b+细胞高表达CD44和CD62L,且Freund完全佐剂(CFA)激活后的CD4+T细胞高表达CD11b.结论 CD11b主要表达于脾脏的非T细胞和淋巴结的T细胞.T细胞中CD11b主要表达于CD4+T亚群,且CD11b表达与T细胞活化有关.
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产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位可有效诱导和增强对肠道病毒71型的黏膜免疫应答
目的 研究产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的免疫原性.评价肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1联合LTB的鼻腔免疫效果.方法 构建重组质粒pET32a-LTB,表达的6×His-LTB融合蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化后免疫新西兰大白兔制备抗血清,ELISA检测抗血清效价.用纯化的EV71 VP1、LTB联合EV71 VP1、生理盐水分别经鼻腔免疫BALB/c小鼠,收集血清、肺和小肠黏膜冲洗液,采用间接ELISA检测IgG和分泌性IgA(sIgA).结果 已成功构建重组质粒pET32a-LTB.表达的6×His-LTB融合蛋白主要以包涵体形式表达,相对分子质量(Mr)约为30 000,免疫兔所制备的抗血清效价为1∶125 000.EV71VP1联合LTB组的小鼠特异性IgG和sIgA水平较EV71 VP1单独免疫组和对照组有明显增高.结论 在E.coli BL21 (DE3)中成功表达了6×His-LTB融合蛋白,纯化的融合蛋白具有良好的免疫活性和佐剂活性.通过滴鼻免疫,LTB可有效增强特异性血清抗体反应,诱导黏膜免疫应答.
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启动子区DNA去甲基化增强子宫内膜异位症患者子宫内膜基质细胞MMP-9的表达
目的 研究子宫内膜异位症中基质金属蛋白酶9 (MMP-9)基因表达的DNA甲基化调控机制.方法 采用甲基化特异性PCR检测在位与异位子宫内膜组织中MMP-9 mRNA的表达,采用免疫组织化学染色检测在位与异位子宫内膜组织中MMP-9蛋白的表达.原代培养子宫内膜异位基质细胞,细胞经5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理后,分析MMP-9基因的表达及其启动子甲基化状态.结果 异位子宫内膜组织中MMP-9mRNA和蛋白的表达高于在位子宫内膜组织.异位子宫内膜组织中MMP-9基因启动子区DNA甲基化水平低于在位子宫内膜组织.5-Aza-dC处理异位子宫内膜细胞后,MMP-9的表达水平升高,MMP-9基因启动子区出现明显的去甲基化.结论 MMP-9基因启动子区DNA去甲基化增强子宫内膜异位症患者异位内膜基质细胞中MMP-9的表达.
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LC3-LpqH增强Ag85B抗结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫保护作用
目的 探讨微管相关蛋白轻链3-脂蛋白前体-LpqH(LC3-LpqH)DNA佐剂对Ag85B抗结核分枝杆菌(MTB) DNA疫苗免疫保护作用的影响.方法 分别用纯化的pCMV-Ag85B、pCMV-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV质粒DNA对BALB/c小鼠进行3次肌肉注射免疫.末次免疫2周后,ELISA检测血清中抗Ag85B IgG亚型及滴度.Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测血清白细胞介素2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-4、IL-10分泌水平.末次免疫3个月后,用MTB标准毒株H37Rv尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏MTB载量并观察肺组织病理变化.结果 与Ag85B免疫组相比,LC3-LpqH/Ag85B免疫组抗Ag85B的IgG2a水平显著提高,而IgG1水平显著降低,并伴随IL-2、IFN-γ分泌增加及IL-4、IL-10减少,肺和脾脏内MTB载量降低,肺组织病变程度减轻.结论 LC3-LpqH可显著增强Ag85B抗MTB疫苗的Th1型免疫应答,并显示较好的免疫保护效应.
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重组人血管内皮抑素联合低氧诱导HeLa细胞自噬和凋亡
目的 观察重组人血管内皮抑素(rhES)联合低氧对人宫颈癌HeLa细胞自噬和凋亡的影响.方法 取对数生长期HeLa细胞在低氧的基础上分别给予以下处理:PBS、rhES、rhES联合3-甲基腺嘌呤(3-MA).处理24h后,Hoehest33528染色及annexin V-FITC/PI染色集合流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blot法检测微管相关蛋白轻链3(LC-3)、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 Hochest33528染色提示低氧联合rhES组可以诱导细胞出现核碎裂;AnnexinV-FITC/PI染色结合流式细胞术检测发现3组细胞的凋亡率分别为:(2.94±0.45)％、(21.38±0.92)％、(6.87±0.58)％,低氧联合rhES诱导细胞凋亡比率明显高于其他2组;Western blot法检测结果显示,与其他2组比较,低氧联合rhES处理HeLa细胞后LC-3Ⅱ及Bax表达水平明显升高,而Bcl-2明显降低.结论 rhES联合低氧可以促使HeLa细胞发生自噬和凋亡.
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用shRNA下调泛素表达抑制人肺癌H1299细胞生长并促进其凋亡
目的 通过下调人肺癌细胞中泛素(Ub)基因的表达,研究其对肺癌细胞生长的影响及其作用机制.方法 设计沉默泛素基因表达的shRNA-UBB、shRNA-UBC质粒,用反转录PCR及Western blot法验证shRNA的沉默效果;研究泛素低表达后H1299细胞的生长和克隆形成能力的变化;采用annexin V-PE及DNA片段法检测细胞凋亡变化;PI染色结合流式细胞术检测细胞周期的变化.结果 敲减泛素基因(Ub-KD)48、72 h后,能明显抑制H1299细胞的增殖、降低细胞的克隆形成率;与对照组相比,Ub-KD (shRNA-UBB/UBC)组细胞凋亡率显著增加(shRNA-NC:5.60％,shRNA-UBB:9.07％,shRNA-UBC:11.70％,shRNA-UBB/UBC:17.82％).联合shRNA-UBB、shRNA-UBC作用下能显著增加H1299细胞G1期比例(shRNA-NC:34.53％,shRNA-UBB:34.40％,shRNA-UBC:42.77％,shRNA-UBB/UBC:50.20％).结论 联合敲减UBB、UBC基因通过增加细胞凋亡及细胞G1期阻滞抑制肺癌细胞的生长及克隆形成能力.
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体外诱导人羊膜上皮细胞分化为结膜上皮样细胞
目的 将人羊膜上皮细胞(HAEC)和兔结膜上皮细胞共培养,观察是否能将HAEC诱导分化为结膜样上皮细胞.方法 分别采用酶消化法和组织块法获得HAEC和兔结膜上皮细胞,并对培养的细胞进行形态学观察;运用TranswellTM非接触共培养系统将HAEC和兔结膜上皮细胞共培养2周,诱导HAEC分化;通过免疫荧光组织化学染色法检测诱导后HAEC中细胞角蛋白4(CK4)、黏蛋白Muc4、Muc5AC的表达,实时定量PCR(qRT-PCR)检测分化细胞Muc4、Muc5AC mRNA的表达.结果 体外培养的人羊膜上皮细胞和兔结膜上皮细胞形态较为相似,免疫荧光组织化学染色法检测到诱导后HAEC中CK4、Muc4、Muc5AC呈阳性表达,qRT-PCR检测分化细胞Muc4、Muc5ACmRNA表达阳性.结论 HAEC在与兔结膜上皮细胞共培养的诱导条件下,可以向结膜上皮样细胞和产黏蛋白细胞转分化.
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卡介苗核酸联合CO2激光治疗后白癜风患者皮损组织Th17细胞及相关细胞因子减少
目的 探讨卡介苗核酸联合CO2激光治疗白癜风的疗效及对患者Th17细胞及其相关因子水平的影响.方法 选取2011-06/2013-10期间在我院接受治疗的白癜风患者102例,随机分为对照组和观察组,每组51例.对照组给予CO2激光治疗,观察组在对照组基础上给予卡介苗核酸联合治疗.分别评定2组的治疗效果.并采用流式细胞术分析患者外周血Th17细胞亚群变化,采用ELISA分析外周血血清中白细胞介素17(IL-17)和IL-23水平变化,采用实时荧光定量PCR分析患者皮损组织中IL-17和IL-23 mRNA水平变化.结果 观察组治疗有效率明显高于对照组,观察组治疗后外周血Th17细胞亚群变化较对照组显著下降,观察组治疗后外周血清中IL-17和IL-23水平较对照组治疗后明显下降.与对照组治疗后比较,观察组患者皮损组织中IL-17 mRNA和IL-23 mRNA水平显著性下调.结论 卡介苗核酸联合CO2激光治疗白癜风疗效显著,可显著降低患者外周和皮损组织Th17细胞及其相关细胞因子.
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聚肌胞苷酸对人胎盘胎儿源性间充质干细胞细胞因子产生的影响
胎盘来源的间充质干细胞(plancenta derived mesenchymal stem cells,PMSC)越来越多的用于临床治疗[1].PMSC免疫调节功能可能与抑制树突状细胞、T细胞、B细胞等多种免疫细胞功能,同时释放多种免疫调控因子相关[2].其中一些免疫调控因子的分泌受到Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路的调控.因此TLR激活剂可能诱导人胎盘胎儿源性间充质干细胞(human fetal original placenta mesenchymal stem cells,hfPMSC)产生多种抗炎因子从而增强hfPMSC免疫调节功能.聚肌胞苷酸(poly-inosinic acid∶ cytidylic acid,PolyI∶C)是双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),可被TLR家族的重要成员TLR3识别,是一种干扰素诱导剂[3-4].
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原发性肝癌组织中B7-H3表达与浸润的CD8+T细胞数负相关
目的 探讨原发性肝癌组织中B7-H3的表达与CD8+T细胞浸润之间的关系.方法 采用免疫组织化学技术分析原发性肝癌组织和正常肝组织中B7-H3的表达、CD8+T细胞的浸润数量,对B7-H3的表达与CD8+T细胞浸润数量的相关性进行统计学分析.结果 63例肝癌患者中B7-H3高表达26例(41.3％),低表达37例(58.7％),总阳性率为90.5％,其中正常肝组织基本不表达B7-H3.B7-H3高表达组CD8+T细胞浸润数量明显低于B7-H3低表达组,CD8+T细胞浸润数量与肝癌组织中B7-H3的表达呈负相关.肝癌组织中B7-H3的表达和CD8+T细胞数量在肝癌患者的临床病理分期、是否有局部淋巴结转移以及远隔器官转移等方面具有显著性差异.结论 原发性肝癌组织中高表达B7-H3,与肿瘤组织中CD8+T细胞浸润呈负相关.
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人ULBP3在不同肿瘤细胞和肿瘤组织的检测及分析
目的 研究UL16结合蛋白3(ULBP3)在不同类型肿瘤细胞和不同实体肿瘤中的表达.方法 流式细胞术检测膜型ULBP3在SW620结直肠癌细胞、SGC7901胃癌细胞、A549肺癌细胞和结肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌组织中的表达情况,免疫组织化学染色检测肿瘤组织中ULBP3的表达;时间分辨荧光免疫分析法检测肿瘤细胞株培养上清和肿瘤患者血清可溶性ULBP3(sULBP3)的水平.反转录PCR方法检测ULBP3 mRNA在肿瘤中的表达.结果 ULBP3在SW620细胞、SGC7901细胞中表达,在A549细胞中不表达;ULBP3在结直肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌组织中广泛分布;sULBP3存在于SW620细胞、SGC7901细胞培养上清液和结直肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌患者血清中.结论 ULBP3可在不同实体中肿瘤细胞表达,血清sULBP3是潜在的肿瘤标志物.
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慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞/调节性T细胞比值变化的意义
目的 测定慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)和CD4+ IL-17+T细胞(Th17细胞)频率及其相关细胞因子的变化,并探讨Th17/Treg平衡在CHB发病过程中的作用.方法 选取CHB住院患者(CHB组)60例,其中35例轻中度CHB患者(CHB-LM),25例慢性重型肝炎患者(CSHB),同时选取21位健康体检者作为正常对照组(HC).流式细胞术检测外周血中Th17和Treg的细胞频数,双抗体夹心ELISA检测血清中IL-17、IL-23、IL-10及转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平.结果 与HC组相比,CHB患者外周血Th17细胞频率及其相关细胞因子IL-17、IL-23浓度明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);Treg频率及其相关细胞因子IL-10及TGF-β1浓度明显增高.Th17/Treg比值变化显示,与HC组相比,在CHB组中该比例明显升高,具有显著性差异,且与CHSB组相比,在CHB-LM组中该比值明显降低.结论 Th17细胞/Treg的失衡是造成慢性乙型肝炎病程演变的重要因素,检测Th17细胞/Treg比值变化对疾病发展的早期预测有一定价值.
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钙黏素11在类风湿性关节炎滑膜组织中的表达及其与炎症的关系
目的 探讨类风湿性关节炎(RA)滑膜钙黏素11(cadbcrin-11)的表达与滑膜炎症的相关性及炎性因子对RA滑膜成纤维样细胞(RAFLS)钙黏素11表达的调节效应.方法 收集28例行全膝关节置换术的RA患者的滑膜,HE染色后对滑膜炎症进行Rooney评分,免疫组织化学染色检测滑膜钙黏素11的表达,分析钙黏素11表达与滑膜炎性评分及系统性炎症指标的相关性.实时定量PCR和Western blot法检测不同浓度转化生长因子β(TGF-β)或白细胞介素17(IL-17)刺激后RAFLS钙黏素11表达的变化.结果 不同C-反应蛋白分层的RA患者滑膜炎性评分无统计学差异.RA滑膜衬里层及衬里下层钙黏素11的表达均与D-二聚体、衬里层厚度、新生血管增多、血管周围淋巴细胞浸润、淋巴细胞滤泡样浸润、淋巴细胞弥散浸润呈正相关,衬里层钙黏素11的表达与间质纤维化呈负相关.经TGF-β或IL-17刺激后RAFLS钙黏素11的mRNA及蛋白表达均上调.结论 RA滑膜钙黏素11的表达明显增加,与滑膜衬里层厚度、新生血管增多及淋巴细胞浸润等密切相关.TGF-β和IL-17可以诱导RAFLS钙黏素11的表达增加.
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抗人CA19-9单克隆抗体的制备和鉴定及化学发光检测体系的建立
目的 制备抗人糖抗原19-9 (CA19-9)单克隆抗体(mAb),建立双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系.方法 CA19-9免疫小鼠后,通过细胞融合技术,获得抗CA19-9的mAb.鉴定其抗体的纯度、效价、特异性和配对,建立双抗体夹心化学发光体系.在包被缓冲液、包被浓度及加样模式上优化化学发光体系,对该体系进行准确度、低检测限、线性、重复性评估以及血清样本的检测.结果 获得4株名称为#1-1、#2-1、#3-1和#4-1的mAb.抗体效价均大于10-8,与CA125、CA15-3、CA72-4均无交叉反应.其中#3-1 mAb与#2-1-HRP建立的双抗体夹心体系经优化后,其检测范围为0～1 000 U/mL;低检测限为2.0 U/mL;线性相关系数为0.9999.与罗氏试剂检测结果对比,Kappa系数大于0.75;相关系数大于0.9.结论 成功制备了抗人CA19-9 mAb,建立了双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系.
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抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位单克隆抗体制备和鉴定及其应用
目的 制备抗幽门螺杆菌(Hp)的单克隆抗体(mAb),并对该Hp mAb进行分析鉴定,建立一种检测患者由于Hp感染而在血清中产生Hp抗体的竞争ELISA检测方法.方法 用灭活的Hp免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备Hp mAb.我们采用Hp混合蛋白包括毒素相关蛋白A(CagA)、空泡毒素A(VacA)和尿素酶以及灭活的Hp菌体筛选阳性杂交瘤细胞株,用ELISA和Western blot等技术对所获得的Hp mAb进行鉴定.利用辣根过氧化物酶(HRP)标记所筛选的Hp mAb来建立一个可检测患者血清中Hp抗体的竞争ELISA.结果 通过大规模的杂交瘤筛选,我们选择了1株将其命名为C3 Hp mAb,其抗体亚型为IgG2a,腹水效价可达1×107.Western blot法、ELISA和质谱检测结果显示,该C3 Hp mAb能特异地识别Hp的尿素酶B亚单位.用这个C3 Hp mAb,我们建立了一种可检测患者血清中Hp抗体的竞争ELISA.结论 成功获得一种可以特异识别Hp 尿素酶B亚单位的mAb,建立了一种可检测患者血清中Hp抗体的竞争ELISA.
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B19和B21单倍型鸡NK细胞受体B-NK19和B-NK21的多克隆抗体制备及鉴定
目的 利用大肠杆菌系统表达对多种禽病存在敏感性差异的B19和B21单倍型鸡NK细胞抑制性受体B-NK基因,并制备其多克隆抗体.方法 分别提取B19和B21鸡外周血淋巴细胞总RNA,采用反转录PCR法扩增B-NK基因(分别命名为B-NK19和B-NK21),克隆至pET-30a原核表达载体中,经酶切和PCR鉴定构建重组质粒.转入到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析外源蛋白的表达.将含有与组氨酸(His)标签融合表达的外源蛋白胶条切下,多点皮下免疫新西兰兔,分别制备B-NK19和B-NK21特异性多克隆抗体.利用Western blot法鉴定其组织相容性复合体(MHC)单倍型特异性.结果 成功构建了原核表达重组质粒pET-B-NK19和pET-B-NK21,利用IPTG在37℃诱导4h后目的蛋白获得表达,免疫5次后收获兔多克隆抗体,Western blot表明B-NK19和B-NK21蛋白存在免疫学交叉反应和部分特异性.结论 对多种禽病具有敏感性差异的MHC单倍体型B19和B21鸡的NK细胞抑制性受体B-NK蛋白存在抗原反应交叉性,其多克隆抗体具有部分特异性.
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PI3K-AKT信号通路及其在类风湿性关节炎滑膜细胞增殖和凋亡中的作用
PI3 K-AKT信号通路是重要的细胞内信号转导通路,与类风湿性关节炎(RA)的发生发展密切相关.该信号通路的活化状态受到严密调控:包括负调控因子PTEN、SHIP和正调控因子TNF-α、TGF-β、TRAIL等.RA患者滑膜细胞中此信号通路处于异常激活状态,导致下游抗凋亡基因高表达并且影响下游多种效应分子,在RA患者关节滑膜细胞增殖和凋亡失衡中发挥关键作用.过度增生的滑膜细胞向关节软骨和骨组织浸润生长,导致患者关节畸形和功能障碍.因此,使用PI3 K-AKT信号通路抑制剂或上调该信号通路中的内源性负性调节蛋白的表达可逆转RA滑膜细胞的过度增殖,为治疗此疾病提供新靶点.
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阿尔茨海默病治疗性单链抗体的研究进展
阿尔茨海默氏病(AD)的免疫治疗方法自提出以来尽管经历了些许挫折,但经过研究人员多年不懈努力,已经得到了快速发展.其中针对β-淀粉样蛋白的单链抗体(scFv)已经成为AD治疗性抗体中有希望实现突破的一种策略,并正在成为免疫治疗AD的抗体药物研究的前沿和热点.本文概述了AD治疗性scFv的来源优势,对AD致病抗原识别与结合的特点,改善AD病理特征的效应以及与其效应相关的脑转运机制和体外亲和力成熟过程和结构因素,旨在为相关研究提供理论线索和发展思路.
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IL-34的生物学特性及与心血管疾病和自身免疫性疾病关系的研究进展
IL-34可由神经元、角质形成细胞和成骨细胞等分泌,并在多种组织中表达.目前发现的受体有巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)和蛋白酪氨酸磷酸酶ζ(PTP-ζ),其中重要的是M-CSFR.IL-34与M-CSF的生物学活性相似,能促进单核-巨噬细胞系统的增殖与分化,能诱导多种细胞因子和趋化因子生成增加,具有促炎,促进破骨细胞形成以及神经保护的作用.在心血管疾病和自身免疫性疾病中,IL-34水平有明显增高,表明其与这些疾病关系密切,可能在疾病的发生、发展中起重要作用.
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NF-κB信号通路在肾移植排斥中作用的研究进展
肾移植是临床上治疗终末肾脏疾病的一种重要手段,而移植后的急、慢性排斥反应是术后移植失败的重要原因.许多研究表明在同种异体移植中,核因子κB(NF-κB)的活化诱导炎性因子释放,因而患者发生排斥反应的风险随之增高.许多药物能通过抑制NF-κB的活性来发挥作用,如糖皮质激素、免疫抑制剂可减轻肾移植术后的排斥反应,PPAR-γ激动剂能缓解肾脏疾病引起的炎症,而吡咯烷二硫基甲酸盐则能起到保护肾脏的作用.本文回顾了NF-κB及其信号通路的构成、NF-κB在肾移植排斥反应中的作用,以及通过阻断NF-κB信号通路来降低肾移植排斥反应发生的方法,以期对预防和治疗肾移植术后的排斥反应有所帮助.
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以树突状细胞为基础的肿瘤免疫治疗策略研究进展
树突状细胞(DC)是目前发现的功能强的专职抗原提呈细胞,它具有激活T淋巴细胞和诱导免疫反应的功能,如今DC体外培养的方法日趋成熟,以DC为基础的免疫治疗已成为肿瘤治疗的研究热点,改善DC疫苗效能使它能更好的为临床治疗肿瘤服务尤为重要.改善DC疫苗效能的方法有体外DC疫苗增效策略和体内DC疫苗增效策略.本文主要综述了体内DC疫苗策略在肿瘤免疫治疗中的研究进展.
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人羊膜上皮细胞的体外培养及标志分子的检测分析
目的 进行人羊膜上皮细胞(HAEC)的体外培养,观察其生物学特性,检测其分子特征.方法 取剖宫产术后人羊膜,应用酶消化法获得HAEC,倒置显微镜下观察细胞生长变化;CCK-8法检测HAEC的生长曲线;Giemsa染色观察HAEC的克隆形成率;流式细胞术检测HAEC的细胞周期;取第2代HAEC,流式细胞术检测其CD29、CD31、CD44、CD59、CD105、CD117、CD133、HLA-DR的表达.免疫荧光法检测其CD9、上皮性钙黏素(E-cadherin)、足糖萼素样蛋白(PODXL)、阶段特异性胚胎表面抗原4(SSEA-4)、性别决定区Y相关因子2蛋白(SOX2)、SSEA-1、Nanog蛋白、八聚体结合蛋白3/4 (Oct-3/4)的表达情况.结果 酶消化法可以获得较纯的HAEC,细胞呈贴壁生长,呈多角形,核呈圆形.细胞在贴壁后第3天进入指数生长期.细胞周期分析显示66％处于G0/G1期,S期细胞占31.69％,G2/M期细胞占2.31％.HAEC的克隆形成率为(9.33±2.00)％.流式细胞仪检测显示HAEC阳性表达CD44、CD29、CD105、CD59,不表达CD31、CD117、CD133、HLA-DR.免疫荧光法检测显示HAEC表达胚胎干细胞相关分子CD9、E-cadherin、PODXL、SSEA-4、SOX2、SSEA-1、Nanog、Oct-3/4.结论 HAEC可以在体外培养生长并在一定时期内保持其增殖活性;HAEC表达胚胎干细胞相关的表面标志分子.
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构建睾丸特异性乳酸脱氢酶真核表达载体稳定转染HeLa细胞并成功表达
睾丸(精子)特异性乳酸脱氢酶(testis-specific lactate dehydrogenase),是上世纪60年代发现的乳酸脱氢酶同工酶之一,早期称乳酸脱氢酶-X,现称乳酸脱氢酶C4(lactatedehydrogenase C4,LDHC4).LDHC4的合成受LDHC基因的控制,该基因开放读码框为999 bp,可编码一个相对分子质量(Mr)为35 000的C亚基,4个C亚基可同源聚合形成催化活性的四聚体即LDHC4.与其他乳酸脱氢酶同工酶不同,LDHC4主要见于成年男性的睾丸及精子[1-2],是精子能量代谢的一个关键酶类,且与精子的运动、获能、精卵结合等密切相关[3-6],其功能或活性异常可能导致男性不育[7-9].本研究拟构建人LDHC基因的真核表达载体,并以人宫颈鳞癌HeLa细胞为模型,建立稳定表达LDHC的细胞系,同时鉴定融合蛋白的表达及催化活性,为后续深入研究LDHC4功能及探讨其在男性不育症发病中的作用奠定实验基础.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
