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小鼠白细胞介素5真核表达质粒pVAX1-mIL-5的构建及其体外表达
目的构建能表达小鼠白细胞介素5(mIL-5)的质粒并鉴定其蛋白的体外瞬时表达. 方法以含有mIL-5cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得小鼠IL-5基因片段后,定向插入真核表达载体pVAX1中,获得重组表达质粒pVAX1-mIL-5.通过双酶切、PCR及插入片段序列测定对质粒进行鉴定.采用间接免疫荧光技术检测pVAX1-mIL-5在HeLa细胞的瞬时表达.结果酶切、PCR及测序鉴定证实,插入片段正确,间接免疫荧光检测表明其可以在HeLa细胞中瞬时表达. 结论构建的真核表达质粒pVAX1-mIL-5可以在HeLa细胞中瞬时表达小鼠IL-5的蛋白,为下一步利用IL-5作为DNA疫苗黏膜免疫佐剂研究奠定了基础.
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急性胃肠功能障碍诊治体会
目的：探讨急性胃肠功能障碍的病因，发病机理及临床表现，诊治效果。方法：通过分析60例不同病因的胃肠功能障碍的病人，分析原因，总结治疗方法。结果：55例治愈，5例死亡，平均住院时间18天。结论：及时诊断，积极治疗病因，纠正胃肠功能障碍是治疗多器官功能障碍综合征(MODS)成功的关键。
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农村维吾尔族育龄妇女宫颈炎358例总结分析
宫颈炎是妇科常见和多发病之一,主要发生在育龄妇女,正常情况下宫颈具有多种防御功能,包括黏膜免疫、体液免疫及细胞免疫是阻止病原菌进入上生殖道的重要防线,但宫颈亦受分娩、性交及宫腔操作的损伤且宫颈管单层柱状上皮抗感染能力较差,易发生感染.在我国不同地区的宫颈炎患病率也不同,经济发达的地区及城市妇女患病率较低而偏远落后的少数民族地区农村妇女宫颈炎患病率较高.现将收治农村维吾尔族宫颈炎患者的发病情况分析如下.
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慢性萎缩性胃炎胃黏膜免疫相关指标变化研究
目的 了解慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)胃黏膜免疫相关指标变化规律.方法 117例CAG患者(轻度萎缩22例、中度59例、重度36例)为观察组,118例健康者为对照组.采用化学发光方法定量测定血清胃蛋白酶原(PG)水平,ELISA法检测胃黏膜免疫球蛋白IgG、IgA、IgM和分泌型IgA (sIgA)及IL-1、IL-6、IL-8和TNF α水平,流式细胞术检测胃黏膜NK细胞、CD3+和CD4+水平及计算CD4+/CD8+值.结果 CAG患者PGI水平(63.61±8.97) μg/L和PGR (2.94±1.71)均较对照组降低(t=67.955、25.341,均P＜0.01).对于Ig变化情况,CAG患者IgG (1.31±0.65) mg/g、IgA(0.43±0.07) mg/g和sIgA (18.76±7.25) mg/g水平均降低,与对照组比较差异有统计学意义(t=8.644、15.782、16.982,均P＜0.01).细胞免疫方面,CAG患者NK细胞(6.04±1.44)％、CD3+(24.16±3.53)％和CD4+水平(12.93±3.28)％及CD4+/CD8+值(1.26±0.58)均降低,差异有统计学意义(t=8.262、6.698、11.941、3.164,均P＜0.01).对于细胞因子,CAG患者促炎性细胞因子IL-1(60.89±9.33) ng/g、IL-6 (15.09±1.14) ng/g、IL 8(0.41±0.05) μg/g和TNF-α (5.79±1.37) μg/g水平增强,差异有统计学意义(t=29.249、44.571、52.104、20.110,均P＜0.01).随着黏膜病变级别,PGI、PGR、IgG、IgA、sIgA、NK细胞、CD3+和CD4+水平及CD4+/CD8+值水平也随之降低,而促炎性细胞因子水平随着黏膜病变加深而增强(P＜0.01).结论 CAG患者胃黏膜免疫功能降低,并且随黏膜病变程度加重而加剧.
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固本止咳中药对COPD模型小鼠肺组织中角质细胞生长因子表达的影响
目的：观察固本止咳中药对COPD模型小鼠肺组织中角质细胞生长因子（ Keratinocyte Growth Factor，KGF）表达的影响，探讨其治疗COPD的作用机制。方法采用鼻腔滴入LPS加熏香烟的方法建立COPD小鼠模型，实验分为空白对照组、模型对照组、固本止咳中药组；运用免疫组化方法检测小鼠肺组织中KGF表达水平，ELISA方法检测小鼠肺组织匀浆上清液中KGF的分泌水平。结果肺组织中KGF表达检测显示，模型对照组较空白对照组明显减少（ P﹤0.05），经固本止咳中药治疗后，固本止咳中药组较模型对照组明显升高（ P﹤0.05）。结论固本止咳中药促进COPD模型小鼠肺组织黏膜损伤的修复作用的机制之一是通过促进KGF的分泌实现的。
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脾虚小鼠肠道感染白色念珠菌的局部黏膜免疫机制研究
目的：探讨脾虚小鼠肠道感染白色念珠菌的局部黏膜免疫机制。方法将60只小鼠随机分为空白组与脾虚模型组，每组30只。空白组小鼠正常饲养，脾虚模型组采用饮食不节加劳倦过度的方法进行造模。经过模型评价，模型复制成功后，对空白组与脾虚模型组进行亚组划分，空白组分为空白对照组和空白＋白念组，脾虚模型组分为脾虚模型对照组和脾虚＋白念组。对空白＋白念组及脾虚＋白念组小鼠经口感染白色念珠菌，空白对照组和脾虚模型对照组小鼠经口灌服等量蒸馏水。染菌后的第14天，处死小鼠，采用 western - blot 法检测各组小鼠小肠黏膜组织中分泌型免疫球蛋白 A（sIgA）和白细胞介素10（IL -10）的表达水平。结果与空白对照组比较，其余三组小鼠小肠黏膜组织中 sIgA 蛋白表达水平显著降低，而 IL -10表达水平明显上调（P ﹤0.01）；与空白＋白念组比较，脾虚模型对照组 sIgA 表达明显上调，脾虚＋白念组表达水平明显下调，而 IL -10表达水平明显下调（P ﹤0.01）；与脾虚模型对照组比较，脾虚＋白念组小鼠小肠黏膜组织中 sIgA 蛋白表达水平显著降低（P ﹤0.01），IL -10蛋白表达水平显著升高（P ﹤0.05）。结论脾虚状态的机体肠道黏膜免疫功能降低；小鼠发生感染后，机体的抗感染能力减弱。脾虚小鼠感染白色念珠菌后，感染程度加深，其小肠黏膜局部免疫功能受损较为严重，从而造成感染进行性加重。
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不同分子量段黄芪多糖对整体及黏膜免疫功能的影响
研究具有不同重均相对分子质量的黄芪多糖( astragalus polysaccharide,APS)免疫调节作用的差异.方法 环磷酰胺( cyclophosphamide,CY)25 mg·kg-1sc给予复制整体免疫低下小鼠模型,重均相对分子质量分别为(157.7,69.9,22.4,13.2,1.4) ×103的APS按139 mg·kg-1连续ig给予14d,分别检测小鼠血清溶血素水平、2,4二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠迟发型超敏反应耳肿胀度、腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数,以表征不同相对分子质量段样品对细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫的影响；CY按50 mg· kg-1sc给予复制黏膜免疫低下小鼠模型,同上药物处置,检测小肠和肺灌洗液中分泌型免疫球蛋白A(secreted immunoglobulin A,sIgA)水平,小肠Peyer's结变化,以表征样品对黏膜免疫的影响.结果 总APS及157.7×103,69.9×103 APS均可不同程度提高吞噬指数、吞噬率、耳肿胀度和溶血素水平,促进肠道及肺sIgA分泌,且在同等剂量下,具有较大相对分子质量的157.7×103 APS作用强于总APS及较小相对分子质量的组分.结论 较大相对分子质量APS可促进免疫低下小鼠整体及黏膜免疫功能,可能是黄芪免疫药理作用的主要物质基础.
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全蝎、蜈蚣对胶原诱导型关节炎大鼠肠黏膜免疫状态的调节作用
目的:观察全蝎、蜈蚣对胶原蛋白诱导型关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠肠黏膜免疫状态的调节作用.方法:Wistar大白鼠60只,随机分成6组,即正常组,模型组,全蝎蜈蚣高,中,低剂量组,Ⅱ型胶原蛋白(typeⅡcollagen,C11)组.采用Ⅱ型胶原蛋白诱导法复制大鼠关节炎模型,并ig给予全蝎蜈蚣混悬液(0.4,0.2,0.1 g·k一-1)进行干预,CII组予CII蛋白冻干粉60μg·kg-1ig进行对照,共计40 d.采用流式细胞术分别检测大鼠肠道派伊尔(peyer's patches,PP)结淋巴细胞亚群水平,采用酶联免疫吸附试验法检测小肠组织匀浆转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、分泌型免疫球蛋白(secreted immunoglobulin,sIgA)的表达水平.结果:与模型组比较,各治疗组均可明显下调CD4+,CD8+T细胞水平,升高CD4/CD8水平,并具有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01).同时,除中剂量组外,其他各治疗组小肠组织匀浆sIgA水平均明显上升(P＜0.01),至于TGF-β1,则仅中剂量组和CII组小肠组织匀浆中TGF-β表达明显下降(P＜0.05或P＜0.01).结论:全蝎、蜈蚣调节胶原免疫性关节炎黏膜免疫的作用可能通过调节小肠黏膜局部PP结T淋巴细胞亚群平衡,降低肠黏膜TGF-β1和升高sIgA表达水平来实现的.
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解表方通过调节黏膜免疫保护上呼吸道感染模型小鼠的研究
目的:观察解表方对上呼吸道黏膜免疫的作用.方法:复制寒冷刺激致上呼吸道黏膜免疫功能低下小鼠模型,观察解表方对模型小鼠唾液中分泌型免疫球蛋白A(S-IgA)含量和溶菌酶活性的影响；对模型小鼠进行滴鼻、腹腔注射感染肺炎链球菌,观察解表方对其死亡率和生存时间的影响；采用琼脂打孔法进行解表方体外抑菌实验,探讨解表方防治上呼吸道感染的作用.结果:麻黄汤、银翘散均能提高模型小鼠唾液中SIgA含量和溶菌酶活性,而玉屏风散仅能升高小鼠唾液中溶菌酶活性；麻黄汤和银翘散能降低滴鼻感染肺炎链球菌小鼠死亡率并延长生存时间；但3方对腹腔注射肺炎链球菌小鼠的死亡率没有抑制作用；体外实验证实,3方均无抑菌作用.结论:提高呼吸道黏膜免疫功能可能是解表方防治上呼吸道感染的作用机制.
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预防性中药防治流感病毒作用及其免疫调节机制探讨
目的:研究预防性中药抗流感病毒及其黏膜免疫调节机制.方法:56只雌性SPF级BALB/C小鼠,随机分为造模组(48只)和正常组(8只),建立小鼠流感病毒H1N1/FM/1感染模型,造模成功后随机分为模型组、病毒唑组(0.1g·kg-1),银翘散组(40 g·kg-1),玉屏风散组(60 g·kg-1),冰香散雾化组(0.6 g·kg-1),冰香散滴鼻组(0.03 g·kg-1),ig给药,5d后处死小鼠,测定病毒载量,同时进行肺组织病理学检查;检测对气管黏膜树突状细胞(DC)数量(0X-62),成熟度:以CD80,趋化因子激素受体7(CCR7)阳性表达面积表示及抗原识别受体Toll样受体2(TLR2)和TLR4的影响;对鼻通道淋巴组织细胞CD4+,CD8+进行相应的检查.结果:与模型组比较,预防性中药对病毒载量及肺组织病理学有显著的抑制作用,流感病毒感染小鼠气管黏膜OX-62增加,冰香散(雾化)能使流感病毒感染鼠DC数降低,CD80和CCR7明显下降,而病毒唑和银翘散制剂能提升CCR7阳性表达面积,流感病毒感染鼠黏膜TLR2,TLR4表达增强,冰香散能抑制流感病毒感染鼠TLR2的表达,冰香散滴鼻给药能提高CD4+,CD8+的水平,均具有明显的统计学差异(P ＜0.05,P＜0.01).结论:三类防治流感的中药均有较好的抑制流感病毒作用,其作用可能与其调节呼吸道黏膜免疫作用有关.
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固本止咳中药对COPD小鼠肺组织γδT细胞及IL-17的影响
目的:观察固本止咳中药对COPD模型小鼠肺组织上皮细胞间γδT细胞及IL-17影响,探讨其治疗COPD的作用机制.方法:采用鼻腔滴入LPS加熏香烟的方法建立COPD小鼠模型,实验分为空白对照组、模型对照组、固本止咳中药组;运用HE染色对形态学进行观察,评价COPD小鼠模型;应用流式细胞术检测肺组织上皮间γδT淋巴细胞表达情况;并应用ELISA方法检测小鼠肺组织上皮细胞间淋巴细胞培养上清液IL-17分泌水平.结果:COPD小鼠模型形态学结果符合COPD临床病理形态学改变;模型对照组较空白对照组γδT淋巴细胞比例明显升高(P＜0.05);中药治疗组较模型对照组γδT淋巴细胞比例明显降低(P＜0.05).淋巴细胞培养上清液中IL-17含量与γ δ T细胞变化趋势同步.结论:固本止咳中药通过调节γδT细胞的生物活性,减少IL-17的分泌,从而减轻气道炎症,减少气道壁损伤-修复过程的发生,改善了呼吸道黏膜免疫功能.
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培土生金与黏膜免疫
培土生金法是中医常用的治疗方法之一，本文试从黏膜免疫角度对其机理进行探讨。 培土生金又称补脾益肺，土指脾土，金为肺金，是借五生相生理论用补脾益气的方法来治疗肺脏亏虚病证的方法。 中医藏象理论中，脾与肺有密切的联系。首先，肺主气司呼吸，可吸入自然界之清气；而脾主运化，把食入的水谷运化为精微物质，再上输于肺，水谷精微与自然界的清气相结合，共同构成机体中气的主要物质基础。因此，气的生成与脾肺的关系为密切，若脾气虚弱不能正常运化，则人体气的生化乏源，肺气就会亏虚，产生咳嗽、气短、自汗，卫外功能减弱等症状。另外，肺主通调水道，为“水之上源”；脾主运化水湿，水液之转输运化，皆以脾为中心。只有脾肺紧密配合，机体才能完成正常的水液代谢。
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前胡咳痰汤药理作用黏膜免疫机制研究
目的:探讨前胡咳痰汤药理作用的黏膜免疫机制.方法:以流感病毒滴鼻法造成模型,观察了本方的抗病毒作用,并运用免疫组化的方法,研究了本药对黏膜免疫的影响.结果:前胡咳痰汤大剂量组肺重比病毒组减轻.前胡咳痰汤组小鼠的肠道IgA与空白对照组及病毒组比较显著增高.病毒组小鼠肠道的ICAM-1表达明显高于未感染组,而服用前胡咳痰汤的小鼠ICAM-1表达得到明显抑制,其表达水平基本与空白组相似.结论:前胡咳痰汤有明显的抗病毒作用,能增加肠道IgA并抑制肠道ICAM-1表达可能是其药理作用的黏膜免疫机制.
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四君子汤对利血平所致脾虚大鼠肠道黏膜TGF-β和TNF-α表达的影响
目的:观察四君子汤对利血平所致脾虚大鼠肠道黏膜免疫功能的影响.方法:雄性SD大鼠120只,腹腔注射利血平造成大鼠脾虚模型,四君子汤作为治疗药物,并分高、低剂量组,选用阿托品作为阳性对照药,并设自然恢复组与治疗组相对比.进行小肠PP结计数;并运用流式细胞仪检测PP结中T细胞亚群含量;ABC染色法,并运用图像分析空肠中细胞因子(TNF-α和TGF-β)的表达.结果:各组间在小肠PP结数量及其中的T淋巴细胞亚群无显著差异.模型组大鼠的空肠中TGF-β的表达较正常组降低,四君子汤高剂量组空肠内TGF-β表达较脾虚组显著升高,但与正常组亦有显著差异(P＜0.05).阳性药物和自然恢复组的TGF-β含量较脾虚组无显著差异,显著降低于正常组(P＜0.05).模型组大鼠的空肠中TNF-α的表达较正常组显著升高(P＜0.05),而四君子汤低剂量组、高剂量组、阿托品组及自然恢复组的TNF-α表达均较脾虚组显著降低(P＜0.05).结论:四君子汤可以通过增加空肠内TGF-β表达,降低TNF-α表达,对利血平脾虚大鼠黏膜免疫功能有一定的调节作用,对PP结数量及其中的T淋巴细胞亚群无显著影响.
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实验性脾虚痹证的黏膜免疫学机制研究
目的:从黏膜免疫及炎症相关细胞因子的角度探讨脾虚痹证的发病机理.方法:选用Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎(CIA)作为痹证模型;复合大黄泻下加饥饱失常造成实验动物脾虚;以酶联免疫吸附法测定小鼠血清中肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6、干扰素-γ、白细胞介素-10等细胞因子含量,以免疫组织化学方法测定小肠组织中CD4、CD8、分泌型IgA含量,并对肠道集合淋巴结(PEYER'S PATCH,PP结)计数.结果:脾虚组、脾虚痹证组肠道PP结数量明显减少,CIA组变化不明显.CIA组及脾虚痹证组血清中TNF-α、IL-6含量显著升高,CIA组及脾虚痹证组血清中IFN-γ含量显著升高;与空白对照组比较,CIA组、脾虚痹证组CD4、CD8阳性细胞均明显减少,而以脾虚痹证组CD8阳性细胞减少更为明显;正常组、CIA组SIgA阳性细胞较多,脾虚组、脾虚痹证组则明显减少.结论:脾虚时可能是通过下调机体黏膜免疫功能,相对上调全身免疫应答而加重CIA发病.
关键词： 脾虚痹证 Ⅱ型胶原诱导性关节性 类风湿性关节炎 黏膜免疫 -
雷公藤多甙对大鼠胶原免疫性关节炎黏膜免疫的影响
目的:观察雷公藤多甙对于大鼠胶原免疫性关节炎黏膜免疫的影响.方法:Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂免疫大鼠,以雷公藤多甙治疗,观察大鼠黏膜免疫各项指标.结果:雷公藤多甙可以改善CIA大鼠病理改变,降低肠道PP结中CD4/CD8比值,对脾中T细胞亚群有调节作用,并可降低关节中致炎细胞因子的表达.结论:雷公藤多甙对CIA模型大鼠有抗炎和免疫抑制的作用.
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人参皂甙Rg3对荷瘤及环磷酰胺化疗小鼠肠集合淋巴结及上皮内淋巴细胞亚群的影响
化疗在肿瘤治疗中占有重要地位,但较强的毒副作用使化疗的应用及疗效受到限制.黏膜损伤(mucosal injure, MI)是癌症常规治疗中常见的毒副反应[1].
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雷公藤多苷对大鼠佐剂性关节炎黏膜免疫的影响
目的观察雷公藤多苷对大鼠佐剂性关节炎(AA)黏膜免疫的影响.方法完全弗氏佐剂免疫大鼠,以雷公藤多苷治疗,观察大鼠黏膜免疫各项指标.结果雷公藤多苷可以改善从大鼠病理改变,并调节从大鼠的黏膜免疫功能.结论雷公藤多苷对从模型大鼠有抗炎和免疫抑制作用.
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银翘散对呼吸道黏膜免疫功能低下合并甲型流感病毒感染模型小鼠的影响
目的 观察银翘散对呼吸道黏膜免疫功能低下合并流感病毒感染模型小鼠的影响,并探讨其作用机制.方法 复制寒冷刺激致小鼠上呼吸道黏膜免疫功能低下模型,采用甲型流感病毒鼠肺适应株 A/PR/8/34 (H1N1)通过鼻腔接种方式感染模型小鼠,将小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药(利巴韦林)组及银翘散组,各给药组给予相应药物灌胃,观察各组小鼠死亡率、生命延长率、平均存活时间及肺指数.结果 与模型组比较,阳性药组、银翘散组小鼠死亡率明显降低(P<0.05,P<0.01),存活时间延长;阳性药组、银翘散组小鼠肺指数明显降低(P<0.05,P<0.01),肺指数抑制率分别为35.5%、24.6%.结论 银翘散通过上调模型小鼠上呼吸道局部黏膜免疫功能,达到防治上呼吸道感染的作用.
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瘢痕灸对荷瘤及化疗小鼠肠道淋巴结及固有层淋巴细胞亚群的影响
目的 观察瘢痕灸对肿瘤化疗肠道黏膜损伤的治疗作用及其对黏膜免疫中肠道集合淋巴结(PP结)及固有层中淋巴细胞(LPL)亚群的影响.方法 运用给小鼠原位接种C-26结肠癌并重复灌胃环磷酰胺,建立肿瘤化疗肠道黏膜损伤的模型,瘢痕灸处理17 d,观察瘢痕灸对瘤重、抑瘤率及PP结面积的影响,分离肠PP结内的淋巴细胞,用免疫荧光染色及流式细胞仪分析黏膜免疫各部位T淋巴细胞亚群的变化.结果环磷酰胺组瘤重显著降低,抑瘤率约为37.59%;环磷酰胺加灸组瘤重与环磷酰胺组比较无统计学意义.荷瘤及环磷酰胺都可显著降低PP结面积,明显增加PP结内CD3+和CD8+细胞百分比,降低LPL中CD4+细胞百分比.而瘢痕灸可明显减轻环磷酰胺对PP结面积的影响(P＜0.01).瘢痕灸还能使荷瘤和环磷酰胺作用下显著减少LPL中的CD4+细胞百分比显著增加(P＜0.05),但对LPL中的CD8+细胞百分比及PP结中的CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群无明显影响.结论 荷瘤及环磷酰胺可明显抑制肠道黏膜免疫功能,而瘢痕灸能减轻荷瘤及环磷酰胺对PP结及LPL中某些T细胞亚群的影响,改善黏膜免疫抑制状态.
