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益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠丝裂原和应激激活蛋白酶1表达的影响
目的：通过分析丝裂原和应激激活蛋白激酶1（MSK1）在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）中的表达情况探讨中药复方益肾达络饮保护小鼠损伤脑组织的机制。方法利用蛋白印迹技术，检测小鼠脑组织中MSK1、CREB 的含量。结果脑组织中MSK1表达显示，正常组和中药组、激素组、抑制剂组均有显著性差异（均P＜0.01）；模型组和抑制剂组有显著性差异（均P＜0.01）；中药组和激素组、抑制剂组有显著性差异（ P＜0.01）；中药组和模型组、中药加激素组有差异（均P＜0.05）。 CREB表达显示：中药组CREB的表达与其余各组相比均显著升高（P＜0.01）；中药组、中药加激素组和激素组的CREB水平依次降低。结论复方益肾达络饮治疗EAE与MSK1升高有关，p38MAPK信号通路下游因子 MSK1表达与其底物CREB表达呈相同态势。
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MSK1和RSK2介导的组蛋白磷酸化对人结直肠癌细胞恶性表型的影响
背景:ERK-MAPK信号通路与消化系肿瘤的发生、发展密切相关.前期研究发现抑制ERK-MAPK信号转导可能通过抑制其下游效应分子MSK1、RSK2活性而降低组蛋白H3磷酸化水平,进而下调原癌蛋白c-fos表达,抑制人结直肠癌细胞增殖.目的:探讨MSK1、RSK2与组蛋白磷酸化对人结直肠癌细胞肿瘤相关基因表达和恶性表型的影响.方法:以不同浓度ERK-MAPK阻断剂U0126干预人结肠癌细胞株HCT116和SW1116,或以RNA干扰技术靶向沉默细胞中的MSK1、RSK2表达,分别采用CCK-8实验、流式细胞分析和蛋白质印迹法检测经不同处理的肿瘤细胞的增殖情况、细胞周期分布以及MSK1、RSK2磷酸化位点、组蛋白H3磷酸化水平和MSK1、RSK2、c-fos蛋白表达.结果:U0126能阻断人结直肠癌细胞MSK1(Thr581)、RSK2 (Ser386)的磷酸化活化,转染MSK1 siRNA或RSK2 siRNA能特异性抑制MSK1、RSK2表达,导致组蛋白H3 (Ser10)磷酸化水平降低,c-fos蛋白表达下调,肿瘤细胞发生G0/G1期阻滞,细胞增殖显著受抑(P均＜0.05).结论:阻断ERK-MAPK信号转导可能通过抑制MSK1(Thr581)、RSK2(Ser386)磷酸化活化及其介导的组蛋白H3磷酸化而下调肿瘤相关基因如c-fos表达,从而抑制人结直肠癌细胞的恶性表型.
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IL-33通过ERK1/2信号通路促进哮喘模型小鼠气道重塑
目的 探讨白细胞介素(IL-33)诱导支气管哮喘气道重塑的机制.方法 雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、卵清蛋白(OVA)组和IL-33中和抗体联合OVA组.HE染色观察小鼠气道重塑,免疫组织化学染色及Western blot法观察IL-33、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、1型胶原蛋白(Col1)的表达,Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)及丝裂原和应激激活的蛋白激酶1(MSK1)的磷酸化水平;培养HLF-1人成纤维细胞,分别给予人重组IL-33(rIL-33)、ERK1/2的抑制剂U0126联合rIL-33、MSK1的抑制剂H89联合rIL-33处理;实时荧光定量PCR及Western blot法检测α-SMA与Col1的mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光细胞化学技术观察ERK1/2及MSK1的磷酸化.结果 OVA组小鼠发生气道重塑,IL-33、α-SMA、Col1表达增加,ERK1/2及MSK1磷酸化增强;IL-33中和抗体预处理可显著降低OVA诱导的小鼠气道重塑及IL-33、α-SMA、Col1表达以及ERK1/2及MSK1的磷酸化.U0126或H89可抑制rIL-33引起的HLF-1细胞中ERK1/2及MSK1磷酸化增强及α-SMA与Col1表达增加.结论 IL-33通过ERK1/2-MSK1信号通路促进哮喘模型小鼠气道重塑.
