首页 > 文献资料
-
MSK1和RSK2介导的组蛋白磷酸化对人结直肠癌细胞恶性表型的影响
背景:ERK-MAPK信号通路与消化系肿瘤的发生、发展密切相关.前期研究发现抑制ERK-MAPK信号转导可能通过抑制其下游效应分子MSK1、RSK2活性而降低组蛋白H3磷酸化水平,进而下调原癌蛋白c-fos表达,抑制人结直肠癌细胞增殖.目的:探讨MSK1、RSK2与组蛋白磷酸化对人结直肠癌细胞肿瘤相关基因表达和恶性表型的影响.方法:以不同浓度ERK-MAPK阻断剂U0126干预人结肠癌细胞株HCT116和SW1116,或以RNA干扰技术靶向沉默细胞中的MSK1、RSK2表达,分别采用CCK-8实验、流式细胞分析和蛋白质印迹法检测经不同处理的肿瘤细胞的增殖情况、细胞周期分布以及MSK1、RSK2磷酸化位点、组蛋白H3磷酸化水平和MSK1、RSK2、c-fos蛋白表达.结果:U0126能阻断人结直肠癌细胞MSK1(Thr581)、RSK2 (Ser386)的磷酸化活化,转染MSK1 siRNA或RSK2 siRNA能特异性抑制MSK1、RSK2表达,导致组蛋白H3 (Ser10)磷酸化水平降低,c-fos蛋白表达下调,肿瘤细胞发生G0/G1期阻滞,细胞增殖显著受抑(P均＜0.05).结论:阻断ERK-MAPK信号转导可能通过抑制MSK1(Thr581)、RSK2(Ser386)磷酸化活化及其介导的组蛋白H3磷酸化而下调肿瘤相关基因如c-fos表达,从而抑制人结直肠癌细胞的恶性表型.
-
siRNA沉默Rsk2基因表达抑制人牙周膜细胞的增殖及成骨分化
目的:研究核糖体S6激酶2(ribosomal S6 kinase,Rsk2)基因对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells, hPDLCs)增殖及成骨分化的影响及其作用机制.方法:收集牙科手术拔除的前磨牙,分离其牙周韧带并进行hPDLCs原代培养,取第4～6代细胞用于实验.采用RT-PCR和Western印迹法检测小干扰RNA(siRNA)对hPDLCs内Rsk2的沉默效率,MTT法检测Rsk2 siRNA对细胞增殖的影响,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP活性变化.p38MAPK信号通路抑制剂SB203580处理转染后的hPDLCs,Western印迹法检测Rsk2 siRNA对MAPK信号通路p38蛋白磷酸化的影响.RT-PCR和Western印迹法检测成骨分化标志分子Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor-2,Runx2)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)和成骨蛋白BMP2的表达情况,采用SPSS18.0R软件包对数据进行统计学分析.结果:hPDLCs转染Rsk2 siRNA后,Rsk2表达下调,差异显著(P＜0.05).Rsk2 siRNA显著降低p38蛋白磷酸化(P＜0.05),抑制hPDLCs增殖(P＜0.05),降低ALP活性(P＜0.01),成骨分化标志分子Runx2、OCN和BMP2的表达降低,差异具有显著性.SB203580处理Rsk2 siRNA转染后的hPDLCs发现,细胞增殖、ALP活性、Runx2、OCN和BMP2的表达较Rsk2 siRNA转染组相比,均有显著差异.结论:Rsk2 siRNA通过p38MAPK信号通路抑制hPDLCs增殖和成骨分化.
-
RSK2基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响
目的:探讨P90核糖体S6激酶2(ribosomal S6 kinase 2, RSK2)基因对肝癌细胞SMMC-7721的增殖与凋亡的影响.方法:将肝癌细胞随机分为5组,即对照组、pcDNA3.1(+)空质粒组、pcDNA3.1(+)/RSK2组、siRNA-阴性对照组、siRNA-RSK2组.对照组不转染,其余4组分别转染pcDNA3.1(+)空质粒、pcDNA3.1(+)/RSK2、siRNA-阴性对照、siRNA-RSK2.转染48 h后,荧光定量PCR(RT-PCR)、免疫印迹法检测RSK2 mRNA和蛋白表达;CCK8实验检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期.结果:RT-PCR和免疫印迹结果显示,pcDNA3.1(+)/RSK2组RSK2 mRNA和蛋白表达量明显高于其他4组(P<0.01);siRNA-RSK2组表达量明显低于其他4组(P<0.01).CCK8检测结果表明,RSK2基因过表达促进SMMC-7721细胞增殖(P<0.01).流式细胞术结果显示,RSK2基因沉默阻断细胞周期在G1期(P<0.01),细胞总增殖能力下降(P<0.01);siRNA-RSK2组细胞凋亡率明显高于其他4组(均P<0.01),而pcDNA3.1(+)/RSK2组细胞凋亡率与对照组比较无明显差别(P>0.05).结论:RSK2过表达可促进SMMC-7721细胞增殖,但对凋亡无影响;RSK2沉默抑制细胞增殖能力,促进细胞凋亡.
