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Sulfone通过转录因子Elk1调节人结肠癌细胞XAF1表达的研究
背景:Sulfone是一个高效的结肠肿瘤化学预防制剂,具有抗肿瘤功能,但其具体作用机制尚未完全明确.目的:探讨Sulfone在转录水平调节X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)表达的作用机制.方法:以Sulfone干预人结肠癌细胞株HCT116,以蛋白质印迹法检测磷酸化ERK1/2(pERK1/2)、XAF1和ERK1/2表达；构建稳定转染pLuc-291质粒以及pLuc-291-18T、pLuc-291-70T、pLuc-291-IRFm质粒的HCT116细胞(分别为转录因子Elk1、c-ETS、IRF结合序列点突变),以荧光素酶报告基因检测Sulfone对XAF1启动子转录活性的调节作用；以染色质免疫沉淀法检测Elk1-XAF1的DNA结合活性；以实时定量PCR检测Elk1 siRNA对XAF1 mRNA表达的影响.结果:Sulfone可显著抑制pERK1/2表达,显著上调XAF1表达.XAF1启动子Elk1结合序列点突变能显著增加Sulfone诱导的XAF1启动子转录活性,而c-ETS和IRF结合序列点突变对Sulone诱导的XAF1启动子转录活性无明显影响.XAF1启动子区域存在Elk1的特异性结合序列.以Elk1 siRNA抑制Elk1表达能显著增高XAF1mRNA表达.结论:Sulfone通过抑制ERK1/2信号通路下游转录因子Elk1活性,在转录水平上调人结肠癌细胞XAF1表达.
关键词： X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1 转录因子 结肠肿瘤 Sulfone -
Sulfone通过抑制ERK途径上调XAF1表达诱导结肠癌细胞凋亡
目的:探讨化学预防药物Sulfone是否通过转录调节XAF1的表达诱导结肠癌细胞凋亡.方法:采用Hoechst 33258染色法检测人结肠癌细胞株HCT116(p53野生型)和SW480 (p53突变型)经Sulfone处理后的细胞凋亡率.运用Western印迹法检测上述细胞经Sulfone处理前后XAF1、磷酸化ERK1/2 (p-ERK1/2)和ERK1/2总蛋白质的表达量变化.通过双重荧光素酶报告基因检测Sulfone对XAF1启动子转录活性的调节作用.结果:Sulfone能诱导HCT116和SW480细胞凋亡,其效应随剂量的增加和时程的延长而更明显.Sulfone能有效抑制上述两种细胞中ERK1/2蛋白的磷酸化(抑制率分别为74％和57％,P＜0.05),但上调XAF1蛋白的表达(2.2倍和3.1倍,P＜0.05).经Sulfone处理后,XAF1启动子的转录活性在HCT116和SW480细胞分别提高了3.3倍(P＜0.01)和2.6倍(P＜0.05).结论:Sulfone通过抑制ERK途径,在转录水平显著上调XAF1的表达进而诱导细胞凋亡,且这种作用的强弱与肿瘤细胞的p53分型有关.
关键词： 结肠癌 Sulfone X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1 凋亡
