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胚胎干细胞增殖分化相关基因
胚胎于细胞是从早期胚胎内细胞团中分离得到的,可以长久维持对称性自我更新的未分化状态,也可以分化成机体几乎所有类型的细胞.多种基因参与了胚胎干细胞增殖分化的调节.现对胚胎干细胞增殖分化相关基因进行综述.
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转录因子Nanog在小鼠原始生殖细胞的时空表达
目的 讨Nanog在小鼠原始生殖细胞发育过程中的时空表达.方法 采用免疫荧光技术定性研究Nanog在妊娠7.5～15.5d胚胎原始生殖细胞的表达;抗SSEA-1、抗Nanog双标记激光共焦扫描进一步定量分析妊娠11.5～15.5d小鼠原始生殖细胞中Nanog的表达变化. 结果尿囊、后肠及背肠系膜、生殖嵴的原始生殖细胞中均可见Nanog的阳性表达.妊娠11.5d小鼠原始生殖细胞中Nanog的表达阳性率高、荧光强度强,雌性小鼠在妊娠12.5d后Nanog表达急剧下降,雄性小鼠在妊娠13.5d后Nanog表达急剧下降. 结论 Nanog在增殖的小鼠原始生殖细胞中稳定表达,其表达下调可能与原始生殖细胞的分化启动有关.
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胚胎干细胞关键因子Nanog在人胶质瘤中的表达及意义
目的 探讨胚胎干细胞关键因子Nanog在人胶质瘤中的表达及意义.方法 通过免疫荧光双标技术,分析40例胶质瘤组织内胚胎干细胞关键因子Nanog与肿瘤干细胞相关基因Nestin、CD133及胚胎干细胞全能性相关基因Oct4的共表达情况,并通过RT-PCR、Western blotting技术分析胶质瘤组织内Nanog与脑胶质瘤恶性程度之间的关系.结果 Nanog在胶质瘤组织中的表达随着胶质瘤病理级别增高而升高,而且超过50％的Nanog阳性细胞同时表达Nestin和CD133.95％以上的Nanog阳性细胞都同时表达胚胎干细胞全能性相关基因Oct4.结论 胶质瘤组织中Nanog多表达在肿瘤干细胞中,与胶质瘤的恶性程度呈正相关,在胶质瘤的发生、发展过程中起着重要作用,为研究胶质瘤的起源及胶质瘤的诊断和预后判断提供帮助.
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大鼠急性心肌梗死后干细胞抗原-1和Nanog阳性细胞的动态变化
目的 观察大鼠急性心肌梗死后心肌干细胞在梗死病程中的动态变化.方法 成年SD大鼠50只,结扎冠状动脉前降支制备急性心肌梗死模型,在术前及术后1周、2周、3周和4周分别检测心功能指标:左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室舒张末期容积(LVEDV)和左室后壁舒张末期厚度(LVPWT).取各组大鼠新鲜心脏,石蜡切片、Masson染色,确定心肌梗死的病理变化.利用免疫组织化学技术对各组心脏切片进行免疫染色,观察干细胞抗原-1(Sca-1)、Nanog阳性心肌干细胞的动态变化.对每组切片阳性表达的细胞数进行定量分析.利用Western blotting技术观察Sca-1、Nanog的蛋白含量.结果 大鼠心功能于术后1周开始降低,自第3周稳定于较低水平;M asson染色显示心肌梗死区域瘢痕组织明显,证实模型制备成功;免疫组织化学结果显示,Sca-1、Nanog阳性心肌干细胞数量在2周时上升至高峰,随后下降.结论 Sca-1、Nanog阳性心肌干细胞在心肌梗死病理演变过程中呈先上升后下降的趋势,提示心肌干细胞在心肌损伤和修复过程中发挥了重要作用.
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多种肿瘤干细胞标志物在食管鳞癌 Eca109细胞球细胞中的表达
目的：观察肿瘤干细胞标志物P75NTR、Oct-4、Sox-2、Lin28、Nanog在食管鳞癌Eca109细胞系富集的细胞球细胞中的表达。探讨食管鳞癌的肿瘤干细胞标记物。方法采用无血清成球培养法，富集培养细胞球细胞，观察其增殖过程。培养5d获得小细胞球继续培养至14d获得又大又圆的悬浮生长的细胞球，收集第14天的细胞球，一部分用于实验，一部分予以传代。应用免疫荧光技术检测细胞球细胞中P75NTR、Oct-4、Sox-2、Lin28、Nanog的表达和定位。结果 P75NTR、Oct-4荧光定位于细胞球细胞的细胞核上，贴壁的Eca109为细胞核和细胞质表达，但是Oct-4荧光强度比P75NTR弱；Lin28在细胞球细胞上为细胞核表达，贴壁的Eca109上为细胞核和细胞质表达；Nanog和Sox-2在食管鳞癌Eca109细胞球细胞和贴壁的Eca109上均为细胞质表达。结论 P75NTR、Oct-4、Lin28核表达阳性的细胞球可能为食管癌干细胞。
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NANOG基因在急性淋巴细胞白血病细胞的表达及其慢病毒干扰载体的构建
本研究探讨NANOG基因在人急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞中的表达并构建特异性干扰NANOG表达的慢病毒载体.利用RT-PCR及Western blot技术检测MOLT-4、CCRF-HSB2、Jurkat等ALL细胞系及在我院住院治疗的15例新诊断的ALL患者骨髓细胞中NANOG的表达情况.通过构建携带NANOG特异性shRNA的慢病毒载体包装病毒颗粒,感染MOLT-4细胞后经分选获得稳定表达株,并在基因及蛋白水平检测NANOG干扰效率.结果表明,MOLT-4细胞、CCRF-HSB2细胞以及33.3％的ALL患者中可见NANOG基因mRNA的扩增产物及蛋白表达.测序表明,ALL患者及MOLT-4、CCRF-HSB2细胞主要表达NANOGP8 mRNA.构建慢病毒干扰质粒pLB-shNANOG-1、pLB-shNANOG-2及pLB-shcontrol,包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达(1.83-3.12) ×108 IU/ml.病毒感染MOLT-4细胞后经流式细胞仪分选获得GFP+细胞.实时定量PCR及Western blot证实,两种shRNA可有效下调NANOG基因及蛋白的表达.结论:MOLT-4细胞、CCRF-HSB2细胞以及部分ALL患者骨髓细胞中存在NANOG的表达,其主要为NANOGP8 mRNA的转录.成功构建了特异性干扰NANOG表达的慢病毒载体,获得可稳定下调NANOG表达的MOLT-4细胞株.
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iPS细胞的生成——转录因子的决定性作用
胚胎干细胞(Embryonic Stem cells,ESCs)具有分化全能性和自我更新能力,其全能性的维持取决于多种转录因子、表观修饰因子等组成的错综复杂的网络,在这其中Oct4、Sox2、Nanog被认为是核心调控因子.
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胶质瘤细胞系U251中Nanog基因的研究
目的 Nanog作为全能性或多能性干细胞标志物,在胶质瘤细胞系中的研究甚少.本研究通过免疫组织化学来探讨Nanog基因在U251胶质瘤细胞系中的表达情况,以及全反式维甲酸(ATRA)对胶质瘤细胞系U251的诱导分化情况.方法 采用免疫组织化学染色法从蛋白质水平检测U251胶质瘤细胞系Nanog的表达情况,以及应用化疗药物全反式维甲酸( ATRA)作用前以及作用后1、2、3d Nanog蛋白的表达情况.结果 ATRA作用前免疫组化结果显示大量细胞表达Nanog蛋白,主要位于胞浆内,胞核内有少量表达,少数细胞完全不表达;ATRA作用1、2、3d后的的细胞爬片结果显示有些许细胞变圆,少量的细胞漂浮于培养基内,Nanog蛋白的表达情况同ATRA作用前相比有了减少,并且随着作用时间的延长表达愈来越少.结论 Nanog基因在胶质瘤细胞系U251中表达,诱导分化剂ATRA能够降低Nanog的表达,并且随着作用时间的延 长表达越来越少.
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USP22和Nanog在结肠癌组织中的表达及临床意义
目的:研究USP22和Nanog在结肠癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系.方法:采用免疫组织化学法检测USP22和Nanog在80例结肠癌组织,35例结肠腺瘤组织及40例癌旁正常结肠组织中的表达.结果:USP22在结肠癌中的阳性表达率明显高于结肠腺瘤和正常结直肠黏膜组织(P＜0.05),但结肠腺瘤和癌旁正常组织的阳性表达率差异无统计学意义(P＞0.05),Nanog在癌旁正常组织,结肠腺瘤和结肠腺癌中的阳性表达率差异均有统计学意义(P＜0.05).USP22和Nanog的表达与Dukes分期,组织学分级,淋巴结转移以及浸润深度均有关(P＜0.05); USP22和Nanog 在结肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.509,P＜0.01).结论:USP22和Nanog的表达与结肠癌的发生发展有关,二者在结肠癌的细胞增殖、浸润和转移中有协同作用.他们有望成为结肠癌的早期诊断指标和治疗靶点.
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干细胞标志物Nanog、Oct-4、SOX-2表达与结肠癌术后复发转移关系
目的:探讨结肠癌患者肿瘤组织中Nano g、Oct-4、SOX-2表达情况及其对远处转移的预测作用,方法:采用免疫组织化学方法检测经手术切除的80例结肠癌术后标本中Nanog、Oct-4、SOX-2表达情况,并且对三种指标的表达同肿瘤分化程度、分期和术后复发转移关系进行分析.结果:8 0例患者有3 5例出现复发转移,SOX-2、Oct-4、Nanog在转移组患者中表达率分别为48.57%(17/35)、51.43%(18/35)、60%(21/35),在非转移组中表达率分别为17.78%(8/45)、13.33%(6/45)、26.67%(12/45).差异有统计学意义.原发灶分化程度仅同Nanog表达差异有统计学意义(P=0.00l).但是三指标表达同T分期和N分期没有明显联系.三者均为表达阳性其转移率明显高于均为阴性转移率,生存分析显示不同表达状态其远处转移出现时间差异有统计学意义(P=0.0001).结论:组织中Nanog、Oct-4、SOX-2表达同结肠癌术后复发转移发生相关,联合检测有助于评估肿瘤转移情况.
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沉默NANOG基因表达对侧群表型肝癌干细胞化疗耐药的影响
目的 观察沉默NANOG基因对侧群表型肝癌干细胞化疗耐药的影响,初步探讨提高肝癌化疗效果的新方法.方法 基于侧群(SP)细胞分选法,采用流式细胞术从肝癌细胞Hep3B中分选SP细胞和非侧群(NSP)细胞,通过特异性靶向NANOG基因的siRNA沉默SP细胞中NANOG基因表达,MTT法检测SP细胞对化疗药物阿霉素(DOX)的敏感性,实时荧光定量PCR(real-time PCR)和免疫印迹(Western blotting)检测NANOG和耐药相关基因ABCB1的表达.结果 (1)肝癌细胞Hep3B中分选的SP细胞比例为(13.3±1.8)%.(2)MTT法结果显示DOX处理后SP细胞存活率为(65.3±5.4)%,NSP细胞存活率为(41.2±4.7)%;SP细胞对DOX的耐药性高于NSP细胞(P<0.05).(3)NANOG和ABCB1 mRNA在SP细胞中的表达水平分别是NSP细胞的4.5、4.0倍;NANOG和ABCB1蛋白在SP细胞中表达水平分别是NSP细胞的4.2、3.6倍,差异均有统计学意义(P<0.05).(4)RNAi沉默NANOG表达后,siNANOG组SP细胞NANOG、ABCB1的mRNA和蛋白表达水平均较Mock组和siNC组明显下降(P<0.05),SP细胞对阿霉素DOX的耐药性显著降低(P<0.05).结论 NANOG基因在维持SP表型肝癌干细胞耐药性起重要作用,沉默NANOG表达后SP细胞耐药性受到抑制,可能与ABCB1表达下调有关.
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Nanog、Sox2、TFF3在肠型胃癌中的表达及其与肠型胃癌预后关系的研究
目的 探讨Nanog、Sox2、TFF3在肠型胃癌中的表达及其与肠型胃癌预后的关系.方法 回顾性分析60例肠型胃癌患者的临床资料,应用免疫组化法检测Nanog、Sox2、TFF3在肠型胃癌患者中的表达情况,分析其表达情况与患者临床病理特征及预后的关系.结果60例肠型胃癌患者中,Nanog高表达者38例(63.3%)、TFF3高表达者33例(55.0%),Sox2低表达者35例(58.3%).单因素分析结果显示,Nanog、TFF3、Sox2的表达情况与肠型胃癌患者的肿瘤浸润深度、淋巴结转移情况及TNM分期有关(P﹤0.05),与肠型胃癌患者的年龄、性别、肿瘤部位无关(P﹥0.05).多因素分析结果显示,Nanog、Sox2、TFF3的表达情况与肠型胃癌患者的无病生存期和总生存期有关,同时具有Nanog高表达、TFF3高表达、Sox2低表达的肠型胃癌患者预后差.结论Nanog、Sox2、TFF3可成为评价肠型胃癌患者预后的生物标志物,联合检测更利于判断肠型胃癌患者的预后.
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宫颈癌组织Nanog和Oct4的表达及临床意义
目的:探讨宫颈癌组织胚胎特异性基因Nanog和Oct4的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学检测30例宫颈鳞状细胞癌、20例CINⅢ和10例正常官颈组织中Nanog和Oct4的表达,并结合患者的临床病理资料进行统计学分析评估两者的相关性.结果:宫颈癌组织Nanog和Oct4的阳性表达率均为93.3％(28/30),CINⅢ和正常宫颈组织相比,差异均有统计学意义,P＜0.001.宫颈癌组织Nanog和Oct4的高表达与肿瘤的分化程度密切相关,P＜0.05.宫颈癌组Nanog和Oct4表达呈正相关,rs=0.531 7,P=0.002 5.结论:宫颈癌组织中Nanog和Oct4均有高表达,Nanog和Oct4的联合检测可作为肿瘤的一个敏感性、特异性的标志和治疗靶点.
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中晚期肺癌患者Nanog表达与GP方案化疗效果的关系
目的 探讨中晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)非小细胞肺癌(NSCLC)患者Nanog基因和蛋白的表达与GP方案化疗的疗效关系,并分析对生存期的影响.方法 选择使用GP方案化疗的晚期NSCLC患者62例,对使用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫组织化学两种方法均检测出Nanog阳性表达的肺癌患者进行GP方案治疗的效果进行对比,并对生存期的影响进行统计分析.结果 62例中晚期NSCLC中,Nanog基因和蛋白表达呈阳性30例(48.4％),Nanog阳性表达患者的有效率与未表达的患者比较差异有统计学意义(x2=10.872,P＜0.01).完全缓解(CR)组的Nanog阳性表达明显低于部分缓解(PR)组和进展(PD)组,32例有效(CR+PR)患者中Nanog呈阳性表达9例(28.1％),阴性表达23例(71.9％).而未显效的32例中Nanog呈阳性表达21例(70.0％),阴性表达9例(30.0％).生存分析显示,Nanog阳性表达的患者5年生存期短于Nanog阴性表达的患者.结论 Nanog表达增强可能导致NSCLC患者对GP方案化疗不敏感并导致5年生存期缩短,检测Nanog的表达可为临床制定NSCLC的个体化治疗方案提供依据,并对预测肿瘤的预后提供参考.
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视黄醇在白血病抑制因子维持小鼠胚胎干细胞未分化状态中的协同作用
目的 研究视黄醇在白血病抑制因子(LIF)维持小鼠胚胎干细胞(mESC)多潜能性中的协同作用.方法 实验分为两组,在相同LIF浓度(100U/ml)的mESC常规培养基础上,实验组添加视黄醇,对照组则不添加视黄醇.培养14d后,观察两组碱性磷酸酶(ALP)染色情况及mEN2的形态变化,通过RT-PCR及Westem blot检测Oct4和Nanog的mRNA及蛋白表达情况.结果 两组mESC常规培养14d后,实验组78%mESC处于未分化状态,细胞集落形态维持较好,ALP染色强阳性;而对照组中仅有35%mESC处于未分化状态,ALP染色弱阳性;实验组未分化细胞数量(7.02±0.34)明显高于对照组(4.28±0.37,P＜20.05).RT-PCR及Western blot结果显示:实验组Nanog及Oct4的mRNA表达(分别为204.95±11.24,160.69±11.52)均高于对照组(分别为122.89±9.25,88.21±4.69,P＜0.05);实验组Nanog及Oct4的蛋白表达(分别为238.14±14.72、187.16±9.02)均明显高于对照组(分别为205.04±10.03,132.41±15.78,P＜20.05).结论 在中等浓度LIF因子作用时添加视黄醇对维持mESC多潜能性有明显作用.
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人Sox2和Nanog基因的克隆及其对胎肺成纤维细胞分化的影响
目的 克隆人Sox2、Nanog基因编码序列,构建pSG5-Sox2及pSG5-Nanog真核表达重组质粒,转染胎肺间质成纤维细胞,观察Sox2、Nanog基因表达并鉴定其功能.方法 应用RT-PCR方法分别从4～6周龄流产胎儿脑组织和膀胱癌细胞中扩增出Sox2及Nanog基因编码全序列,将其连接至pSG5表达载体.经测序比对后,将重组质粒pSG5-Sox2及pSG5- Nanog转染胎肺成纤维细胞,采用免疫细胞化学法检测Sox2及Nanog基因表达情况,倒置显微镜观察转染前后细胞的形态学变化.结果 人Sox2基因和Nanog基因编码序列全长957bp和934bp,重组质粒pSG5-Sox2、pSG5-Nanog测序成功,BLAST比对成功,转染胎肺成纤维细胞后,免疫细胞化学检测到Sox2、Nanog阳性表达.转染后胎肺成纤维细胞形态学先呈现干细胞样变化,进而分化为上皮样细胞,CK(广谱)染色阳性,并有向神经细胞分化的趋势,巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶染色阳性.结论 克隆了人Sox2、Nanog基因,成功转染胎肺成纤维细胞并检测到基因阳性表达,胎肺间质成纤维细胞呈干细胞样生长并有向上皮及神经样细胞分化的趋势,为进一步研究Sox2和Nanog基因功能及重编程细胞分化奠定了基础.
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Nanog的生物功能研究进展
Nanog是近年来在胚胎干细胞(ES细胞)内发现的一个重要转录因子,该因子对维持ES细胞的自我更新及全能性起着关键作用.本文简要综述了Nanog对细胞增殖的作用及其机制.
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小鼠胚胎干细胞自我更新的机制
小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES细胞)来源于早期胚胎囊胚期的内细胞团(inner cell mass, ICM),它具有向小鼠胚胎3个胚层细胞分化的能力,它的另一个特点就是维持未分化的状态即自我更新的能力.小鼠ES细胞自我更新依赖于白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)、血清或骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins, BMPs)等等.除了外源性的信号通路外,内源性的转录因子对于维持小鼠ES细胞自我更新也十分重要.
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诱导性多能干细胞相关基因Oct4、Sox2、Nanog的研究进展
诱导性多能干细胞(iPSCs)是将转录因子转入已分化的体细胞中,使其重编程而得到的类似胚胎干细胞(ESCs)的一种细胞类型.iPSCs细胞在形态、基因和蛋白表达、表观遗传修饰状态、细胞倍增能力、类胚体和畸形瘤生成能力、分化能力等方面都与ESCs相似.iPSCs细胞假说一经提出,使得相关基因(如Oct4、Sox2、Nanog等)再次成为基础研究和基因治疗的重要选择.
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上皮性卵巢癌组织中CD44、Nanog的表达及临床意义
目的 探讨上皮性卵巢癌组织中CD44、转录因子Nanog的表达水平及其临床意义.方法收集2012年1～12月于徐州医科大学附属医院行手术治疗的80例上皮性卵巢癌患者的卵巢组织标本为病例组,并于同期随机选取60例良性卵巢肿瘤患者卵等组织标本为对照组.采用免疫组织化学法检测各组标本中CD44、Nanog的表达水平.结果病例组CD44、Nanog阳性表达率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).肿瘤直径≥3 cm、肿瘤低分化、浸润深度T3+T4期、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移的上皮性卵巢癌患者组织中CD44、Nanog阳性表达率高于肿瘤直径<3 cm、中高分化、浸润深度T1+T2期、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移患者,差异均有统计学意义(P<0.05).Spearman秩相关分析显示病例组患者组织中CD44与Nanog表达呈正相关(rs=0.592,P<0.05).CD44阳性表达者5年生存率低于CD44阴性者,Nanog阳性表达者5年生存率低于Nanog阴性者,差异有统计学意义(P<0.05).结论CD44、Nanog表达上调参与了上皮性卵巢癌的发生、发展过程,早期检测可作为临床辅助诊断上皮性卵巢癌、评估病情严重程度及预测预后的重要标志物.
