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肝细胞靶向甘草次酸表面修饰脂质体的制备
目的: 研制靶向于肝细胞的甘草次酸表面修饰脂质体.方法: 化学合成3-琥珀酸-30-硬脂醇甘草次酸酯(Suc-GAOSt)作为导向分子,采用乙醇注入法制备甘草次酸表面修饰脂质体(LP-SM-GA).结果: Suc-GAOSt确能掺入脂质膜中,掺入比例高可达总脂质的9%.结论: LP-SM-GA制备成功,可作为肝细胞主动靶向给药的潜在途径.
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健脾解毒复方中药对裸鼠肝癌模型PTEN/ERK1的影响
目的:探讨肝癌裸鼠不同肝组织PTEN/ERK1的表达及健脾解毒复方中药对其的影响.方法:采用人肝细胞癌细胞株Bel-7402间接原位移植,造雄性肝癌裸鼠模型90只,造模24 h后随机分9组,即不同浓度复方中药A~G组,FT207化疗组,生理盐水组,10只裸鼠不造模作为正常对照组,给药每天1次,8周后处死裸鼠,免疫组化二步法检测肝组织、癌旁组织和癌组织PT]EN/ERKI的表达情况.结果:荷瘤裸鼠肝脏PFEN蛋白表达强度正常肝组织>癌旁组织>癌组织.中药组B,D,E组眦N在正常肝组织的表达高于生理盐水组、化疗组、正常照组,(P<0.05).中药组D组PTEN在癌旁组织的表达高于生理盐水组,(P<0.05),中药组在癌组织中PTEN的表达高于生理盐水组和化疗组,(P<0.05).荷瘤裸鼠肝脏ERK1蛋白表达强度癌组织>癌旁组织>肝组织,癌旁组织ERK1表达强度化疗组高于中药组和生理盐水组,癌组织ERK1表达强度生理盐水组和化疗组均高于中药C,D,E,G,F组.在癌组织中,PTEN和ERKl的表达呈负相关,(P<0.01).结论:在肝癌的发生发展过程中PTEN的缺失或突变可能导致了ERK1的过度活化,健脾解毒复方中药可能对PTEN/ERK1有良性调节作用.
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降脂宁水提取剂对高脂血症大鼠肝细胞基因表达的影响
目的:研究降脂宁水煎剂对高脂血症大鼠肝脏LDLR基因表达的影响.方法:雄性Wistar大鼠,高脂饲料喂养造成高脂血症模型,降脂宁水煎剂(200%)1.4 gkg-1灌胃给药,每天1次,连续15 d.取其肝组织采用斑点探针杂交法检测LDLR mRNA,以LDLR mRNA与β-actin mRNA比值表示LDLR基因表达水平.结果:各组动物肝LDLR基因表达水平依次为正常组(100±19)%,高脂血症组(39±14)%,两组比较有明显差异(P<0.05),降脂宁组(108±8)%,与高脂血症组比较,差异非常显著(P<0.01).结论:高脂饲喂大鼠可显著抑制其肝脏LDLR基因的表达,而降脂宁水煎剂可显著上调高脂血症大鼠肝脏的LDLR基因表达水平.这一结果提示降脂宁对于预防和治疗心脑血管疾病可能有重要的研究和开发价值.
关键词: 降脂宁 肝细胞 低密度脂蛋白受体基因 -
疏肝健脾方药含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞炎症损伤及TLR4/p38MAPK信号通路影响的研究
目的:研究疏肝健脾方药含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下大鼠肝细胞炎症反应及TLR4(Toll样受体-4)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路的影响.方法:体外培养并鉴定SD大鼠肝细胞,制备疏肝健脾方药含药血清,对肝细胞进行疏肝健脾方药、p38MAPK抑制剂等药物干预,酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的表达,Western blot检测TLR4,p38MAPK,p-p38MAPK蛋白的表达.结果:可提取大鼠疏肝健脾方药含药或空白血清约2~3 mL,大鼠获得纯化后肝细胞1.5×108~2.0×108个,Typan blue染色测定细胞活力均在95%以上,免疫荧光法鉴定确定提取的为肝细胞.肝细胞培养上清的检测:LPS组较空白血清组IL-6,TNF-α水平均有显著升高(P<0.01).与LPS组比较,药物干预组IL-6,TNF-α表达水平呈显著降低(P<0.01).肝细胞的蛋白检测:与空白血清组比较,LPS组的p38MAPK,p-p38MAPK,TLR4蛋白表达均有显著升高(P<0.01);与LPS组比较,SB239063能显著下调p38 MAPK的蛋白表达水平(P<0.01),疏肝健脾组亦有下调,但无显著差异;疏肝健脾组,SB239063组的p-p38MAPK的蛋白表达水平均下调显著(P<0.01);TLR4蛋白表达水平以疏肝健脾组下调具有显著性差异(P<0.01),SB239063组下调无显著统计学差异.结论:疏肝健脾方药可能通过TLR4/p38MAPK信号通路调控大鼠肝细胞炎症损伤,含药血清可能是其重要的作用途径之一.
关键词: 疏肝健脾方药 肝细胞 炎症损伤 TLR4/p38MAPK信号通路 血清药理学 -
何首乌不同分离部位对人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞的杀伤作用
目的:考察何首乌不同分离部位对入正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞的杀伤作用,寻找能明显杀伤肝癌细胞但对正常肝细胞生长影响较小的分离部位,并初步探讨其对2种细胞不同作用的机制.方法:何首乌70%乙醇提取物经AB-8型大孔树脂吸附,依次用水、50%乙醇和95%乙醇洗脱得到何首乌乙醇提取物的水洗脱部位(RW)、50%乙醇洗脱部位(R50)和95%乙醇洗脱部位(R95);体外培养人正常肝L02细胞及肝癌HepG2细胞,用含何首乌各分离部位的细胞培养液与细胞共同孵育一定时间后,MTT检测及倒置镜下观察约物对L02及HepG2细胞生长的影响,筛选具有区别杀伤作用的部位,考察其剂量和时间作用效应.进一步通过Giemsa染色观察药物作用后细胞核的变化,流式细胞术检测L02细胞周期和凋亡情况.结果:MTT和倒置镜下镜检结果均表明,R50对L02细胞和HepG2细胞具有明显的区别杀伤作用.Giemsa染色和流式细胞术结果表明,R50诱导2种细胞凋亡的程度不同:试验的各个时相下HepG2中凋亡细胞的比例均明显高于L02细胞(HepG2细胞中凋亡细胞的比例在24,48,72 h分别为83.62%,60.52%,74.49%,L02细胞中凋亡细胞的比例则分别为31.02%,20.57%,25.32%,2种细胞阴性对照组中凋亡细胞的比例在各个时相均小于5%),但对2种细胞的细胞周期没有明显影响.结论:何首乌提取物的R50部位对人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞具有明显的区别杀伤作用,区别杀伤作用的本质是药物诱导2种细胞凋亡的程度不同.
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小檗碱对高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝病大鼠肝细胞脂质沉积的干预作用
目的 探讨小檗碱对高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠脂质代谢紊乱及肝细胞脂质沉积的影响.方法 SPF级雄性SD大鼠45只,适应性喂养1周后,随机分为正常组、模型组、小檗碱组,每组各15只.除正常组给予维持期饲料外,其余两组均采用高脂饮食喂养复制大鼠NAFLD模型,在施以造模因素的同时,小檗碱组灌胃盐酸小檗碱进行干预,8周后行HE、油红O染色进行模型鉴定,分离肝细胞,Typan blue染色和FCM对肝细胞分别进行活性和纯度鉴定;全自动生化分析仪检测血清及肝组织脂质情况;实时定量PCR法检测肝细胞肝X受体(liver X receptor,LXR)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)表达水平;Western blot法检测肝细胞LXRα、FAS蛋白表达水平.结果 高脂饮食诱导成功建立NAFLD实验动物模型,每只大鼠获得纯化后的肝细胞(6.O~7.5) ×108个/肝,经Typan blue染色的细胞活力均在95%以上,FCM检测纯度均在90%以上;与正常组比较,模型组肝细胞LXRα、FAS mRNA及蛋白的表达水平均显著升高(P <0 01);与模型组比较,小檗碱组LXRα、FAS mRNA及蛋白表达水平明显下调(P<0.01).结论 LXRα/FAS通路是NAFLD脂质平衡代谢紊乱重要的信号通路,小檗碱通过调控肝细胞LXRα/FAS通路使NAFLD大鼠肝细胞脂质沉积恢复,可能是小檗碱抗NAFLD的重要机制之一.
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肝细胞向胆管上皮细胞转分化在继发性胆汁淤积性大鼠肝纤维化形成中的作用及黄芪汤组分的干预效应
目的 探讨肝细胞向胆管上皮细胞转分化在继发性胆汁淤积性大鼠肝纤维化形成中的作用及黄芪汤组分抑制肝纤维化的效应机制.方法 75只SD雄性大鼠,采用胆总管结扎(bile duct ligation,BDL)制备继发性胆汁淤积性肝纤维化模型,假手术组(Sham)仅作胆总管分离,不作胆总管结扎.大鼠BDL术后1周随机分为对照组(M)与干预组(Y组,经灌胃给予黄芪汤组分4周),Sham组于术后1周末随机抽取5只大鼠处死取材,M组分别于术后1、2、3、4周末随机抽取5只大鼠做动态观察,余下各组大鼠均于术后第5周末处死取材.观测肝脏组织学及羟脯氨酸(Hyp)含量;激光共聚焦显微镜观察肝组织胆管上皮细胞标志物角蛋白-7(cK7)与肝细胞特异性抗原(Hep Par)共定位,Western blot检测CK7、Hep Par的蛋白表达,IPP软件分析肝组织天狼猩红胶原染色.结果 随着造模时间推移,M组大鼠肝组织肝细胞Hep Par阳性细胞逐渐减少(Sham>M1周>M2周>M3周>M4周>M5周),胆管上皮细胞(CK7阳性细胞)及纤维化程度、Hyp含量、CK7蛋白表达均逐渐增加(Sham
关键词: 继发性胆汁淤积性肝纤维化 肝细胞 胆管上皮细胞 转分化 黄芪汤 -
酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞及肝细胞凋亡和清肝活血方调控机制研究
目的 观察酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞(HSC)、肝细胞凋亡及清肝活血方对不同细胞凋亡的影响.方法 将大鼠分为空白组,模型组,清肝活血低、中、高剂量组,易善复组.清肝活血方低剂量组[4.75 g/(kg·d)]、中剂量组[14.25 g/(kg·d)]、高剂量组[28.5 g/(kg·d)]及易善复组[66.5 mg/(kg·d)],分别予相应药物灌胃,空白组和模型组以等量生理盐水代替,给药2周.比色法检测血清ALT、AST、γ-GT,HE、Masson染色观察肝脏炎症和纤维化程度.TUNEL法检测肝细胞凋亡,TUNELa-SMA双标记法检测HSC凋亡.结果 清肝活血方能降低大鼠血清ALT、AST、γ-GT水平,减轻炎症及纤维化程度(P<0.05);诱导活化的HSC凋亡,减少肝细胞凋亡(P<0.05).结论 清肝活血方能有效减轻大鼠肝纤维化程度,并减少酒精引起的肝细胞凋亡,诱导活化的HSC凋亡.
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脉心康胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠肝细胞内Ca2+及线粒体膜电位的影响
目的观察脉心康胶囊对载脂蛋白E基因敲除[ApoE(-/-)]小鼠肝细胞内Ca2+浓度及线粒体膜电位的影响.方法采用胶原酶消化法分离ApoE(-/-)小鼠肝细胞,体外原代培养8天后,加入10%含药大鼠血清的培养液,48 h后以Flou-3和Jc-1为探针,应用激光共聚焦显微镜测量肝细胞内Ca2+浓度和线粒体膜电位.结果脉心康可明显降低ApoE(-/-)小鼠肝细胞内Ca2+浓度,与生理盐水及洛代他汀组比较差异有显著性(P<0.01);同时,脉心康可明显提高ApoE(-/-)小鼠肝细胞线粒体膜电位(P<0.01),脉心康的这两种作用无明显的剂量效应关系.结论脉心康可降低ApoE(-/-)小鼠肝细胞内Ca2+浓度,提高线粒体膜电位,从而调节脂代谢、对抗高脂血症及动脉粥样硬化的发生和发展.
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生大黄对慢性重型肝炎患者内毒素及肿瘤坏死因子的影响
各种原因导致的肝细胞严重受损常伴有肠源性内毒素血症,内毒素(LPS)刺激单核巨噬细胞使其产生肿瘤坏死因子(TNF-α),进一步介导肝细胞的损害.我们应用生大黄治疗慢性重型肝炎患者,观察LPS及TNF-α的变化,现报告如下.资料与方法1 临床资料慢性重型肝炎患者46例,早期30例,晚期16例.符合1995年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案诊断标准[中华传染病杂志1995;13(1)∶241],排除淤胆型肝炎、自身免疫性肝炎、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症等患者.13例慢性重型肝炎病例有肝组织病理检查依据.随机分成两组.治疗组26例中男21例,女5例;年龄24~60岁,平均(37.46±10.25)岁;病程3~8年,平均(3.97±3.66)年;合并肝硬化8例;血清总胆红素平均(376.6±123.8)μmol/L;凝血酶原时间平均(30.54±9.76)s.对照组20例中男17例,女3例;年龄25~62岁,平均(36.37±11.02)岁;病程1~9年,平均(4.11±3.35)年;合并肝硬化5例;血清总胆红素平均(350.5±109.4)μmol/L;凝血酶原时间平均(29.85±8.31)s.两组患者临床资料具有可比性.
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脂肪肝——不容忽视的疾病
脂肪性肝病(FLD)是一类以肝细胞脂肪变为主要特征的疾病.当前我国酒精性脂肪肝(ALD)患病率(4.5%~15%)居高不下,而非酒精性脂肪肝(NAFLD)患病率不断升高(达14%~24%),并且有5%~10%的患者在5~10年内发展成为肝硬化.构成新世纪肝病领域的新挑战.
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加强脂肪肝的中医药治疗研究
脂肪性肝病(fatty liver disease,FLD)简称脂肪肝,是一种病变主体在肝小叶,以肝细胞弥漫性大泡性脂肪变为主的临床病理综合征.目前认为FLD由遗传-环境-代谢应激相关因素所致,通常分酒精性和非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)两大类.
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非酒精性脂肪性肝病
非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)是一种病变主体在肝小叶以肝细胞脂肪变性和脂肪贮积为病理特征但无过量饮酒史的临床病理综合征.NAFLD表现不同程度的肝脏病变,从没有任何炎症的单纯脂肪肝至显著纤维化甚至肝硬化的严重炎症反应,主要包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝硬化3种类型.
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健脾活血中药联合谷胱甘肽防治肝癌化疗栓塞术后肝功能损害34例
肝癌化疗栓塞术(TACE)治疗肝癌的近期疗效显著,被认为是非手术疗法中的首选.在我国,肝癌患者85.4%合并肝硬化,致使肝功能受损,且反复多次TACE也会损害患者的肝功能,造成恶性循环.我们于1999年8月~2002年7月,对64例资料完整的肝癌患者于TACE前后分别采用健脾活血中药联合谷胱甘肽治疗与肝泰乐加肌苷护肝治疗作对照研究,旨在探讨健脾活血中药联合谷胱甘肽在TACE治疗中对肝细胞的保护作用.
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自拟疏肝化浊汤治疗非酒精性脂肪肝68例
非酒精性脂肪性肝病是指除外酒精和其他明确原因造成肝损害因素所致的以肝细胞脂肪变为主要特征的临床病理综合征.疏肝化浊汤是笔者根据多年临床经验总结出来的治疗非酒精性脂肪肝的经验方,临床效果满意,现报道如下.
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如何辨治肝原性凝血功能障碍?
答:出血是肝脏疾病(肝病)常见的症状.出血的发生率及其严重程度与肝细胞的损害及其功能的异常有关,尤其是与肝脏的合成和分解代谢水平有关.
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如何在慢性乙型肝炎治疗中运用补法?
答:慢性乙型肝炎(乙肝)病程较长,邪毒久羁,戕伐正气,常致多脏虚损,正气不足,出现邪盛正虚的复杂局势.此时,正虚不能抵御病毒复制,又难以清除乙肝病毒和免疫复合物(邪气),致使乙肝病毒在肝细胞内滋长,肝细胞不断遭到破坏;病邪羁留日久,痰瘀互凝肝络;病情的反复迁延,又进一步损伤正气.据<内经>"虚则补之",通过补法的运用,能增强机体免疫功能,并能有效地清除乙肝病毒及免疫复合物,中断对肝脏的免疫损伤,则有利于乙肝的康复.
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慢性乙型肝炎患者治疗前后血清甲状腺激素的变化
慢性乙型肝炎(慢乙肝)发病机理复杂,常受机体免疫等各方面因素影响,血清甲状腺激素可反映肝细胞严重受损、肝功能明显改变的程度,现报道如下.
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前S1抗原检测在乙肝转归的初步应用
乙型肝炎是由乙肝病毒(HBV)所致的一种以肝脏损害为主的全身性急性或持续性传染病.在我国人群中,HBV感染率一直较高,超过了10%.HBV的表面抗原包括前S1蛋白(pre-S1)、前S2蛋白(pre-S2)和S蛋白,其中pre-S1抗原是HBV与肝细胞膜上特异性受体相结合的主要蛋白成分,在HBV感染肝细胞和机体免疫应答的过程中起着重要作用[1].
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血清甲胎蛋白对多电极射频治疗肝癌近期疗效的监测
血清甲胎蛋白(AFP)检测在肝细胞癌诊断及判断疗效中具有十分重要的意义.我院自1999年6月至2000年3月首先采用由意大利科学家Rossi发明的多电极射频治疗肝癌,并对其中31例AFP阳性者以AFP值监测多极射频治疗肝癌近期疗效,现将初步结果报道如下.