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白细胞介素-8的临床意义
白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)是近年由多家实验室发现的细胞因子; 曾有不同命名:如中性粒细胞激活蛋白(NAP-1),白细胞粘附抑制因子(LAF),T淋巴细胞趋化因子TCF).IL-8在炎症因子IL-1、TNF及脂多糖刺激下由多种细胞合成表达. 内皮细胞、T淋巴细胞、肺泡巨噬细胞、肝细胞、滑膜细胞、成纤维细胞和中性粒细胞等均可产生IL-8, 其中以血单核细胞产量为丰富.基因工程IL-8由72个氨基酸组成, 分子量为8kDa.
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α2-HSG生理功能及其临床意义
人胎球蛋白(α2-Heremans-Schmid Glycoprotein,α2-HSG)是属于胎球蛋白族的人血浆糖蛋白.主要由肝细胞合成和分泌,随后进入循环,聚集于骨骼中.在血液和脑脊液中含量都比较高,约为300-600ng/mL[1],在钙化的骨质中聚集的浓度大.α2-HSG具有重要的生物学意义:抑制胰岛素受体自身磷酸化,维持血钙浓度以及抑制转化生长因子(TGF)活性.如患有脂肪肝、肝硬化、风湿性关节炎和心血管疾病等,血浆中的α 2-HSG浓度就会发生变化.因此α2-HSG的合成代谢机理渐渐成为研究的焦点.
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产甲胎蛋白的胃癌合并血栓栓塞一例
甲胎蛋白(AFP)是单链多肽,分子量为70kD,在人体生理条件下,AFP仅在卵黄囊的内胚层细胞和胎肝、新生肝细胞中大量合成,其次在胎胃肠道粘膜上皮细胞中也有合成,出生后含量很低.胃癌产生AFP较少见,仅占全部胃癌的1%～6%[1].
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多聚人血清白蛋白受体检测及其临床意义
多聚人血清白蛋白受体(polymeried human serum albumin receptor简称PHSA-R)具有种属特异性，存在于人类乙型肝炎病毒(HBV)颗粒(又称Dane颗粒)表面，也存在于肝细胞膜上。PHSA-R具有HBV DNA长链上的前-S2基因编码。PHSA-R与多聚人血清白蛋白(PHSA)的结合是通过氢键，疏水相互作用等非特异性结合。在HBV侵入宿主肝细胞，并在肝细胞复制过程中PHSA起着桥梁作用。
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大鼠睾丸支持细胞对体外共微囊化肝细胞的双重保护作用
目的 观察大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell)对混合共微囊化肝细胞的营养支持和免疫豁免(immune privilege)的双重保护作用.方法 气流法制备含不同比例肝细胞与Sertoli细胞混合的微囊进行体外培养,测定培养上清中白蛋白、尿素的含量,结合形态学判断肝细胞的功能和活性,并选择细胞佳混合比例.CCK-8法测定Sertoli细胞对肝细胞引起的脾细胞增殖的影响.结果 与纯肝细胞微囊组相比,一定比例的Sertoli细胞可促进共微囊化肝细胞的白蛋白和尿素合成(P＜0.01),肝细胞存活时间也相应延长.其中,肝细胞和Sertoli细胞以20:1混合时即可达佳效果.在脾细胞增殖反应中,与对照组相比,微囊化肝细胞仍可引起明显的脾细胞增殖(P＜0.01),而Sertoli细胞可显著抑制这一反应.结论 Sertoli细胞与肝细胞混合共微囊化能明显改善囊内肝细胞的形态、功能与寿命,并使后者得到一定的免疫豁免保护作用.
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人胚胎肝细胞的体外培养及表型观察
目的 观察体外培养的人胚胎肝细胞的特性.方法 采用胰酶分步消化法体外分离人胚胎肝细胞,在培养的不同代数,收集培养上清液测定甲胎蛋白、白蛋白及5种特异性酶(ALT、AST、GGT、ALP、LDH)的分泌量,用免疫组化法测定细胞内细胞色素C的表达情况.观察诱导分化剂丁酸钠对该细胞的作用效果.结果 体外分离培养的肝细胞在DMEM培养基中呈单层多边形上皮样生长,常规传代可维持约5个半月(30代),在传代过程中具有分泌白蛋白及5种特异性酶的生理功能.结论 建立的人胚胎肝细胞系,保持了肝细胞的表型及分泌多种特异性酶.
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β1-肾上腺素受体自身抗体通过促进肝细胞凋亡参与小鼠肝损伤
目的 探讨β1-肾上腺素受体自身抗体(β1-AA)对小鼠肝功能的影响.方法 用杂交瘤细胞株融合的方法产生具有生物活性的β1-AA;构建β1-AA长期被动免疫小鼠模型;血清生化仪检测肝脏血清学指标变化;超声检测小鼠肝脏结构和功能的改变;Tunel染色、annexin V/PI染色和caspase 3活性检测肝细胞凋亡水平.结果 具有生物活性的β1-AA和被动免疫模型小鼠建立成功;在被动免疫过程中,免疫组小鼠肝脏谷丙转氨酶ALT(62.00±0.01 vs 37.00±0.02)和谷草转氨酶AST(290.00±0.05 vs 205.00±0.02)水平明显升高,白蛋白ALB显著下降(35.00±0.03 vs 43.00±0.05);门静脉、肝静脉流速降低;β1-AA长期存在诱导肝细胞凋亡水平增加(8.00%±0.02%vs 2.30%± 0.03%,P<0.05),β1-肾上腺素受体特异性抑制剂metoprolol可以部分逆转此效应.结论 β1-AA可以通过β1-肾上腺素受体致肝细胞凋亡,参与肝损伤的发生发展.
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人羊膜上皮细胞在大鼠受损肝组织中分化为肝细胞
目的 探讨人羊膜上皮细胞在大鼠损伤肝原位植活及向肝细胞分化.方法 用胰蛋白酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜上皮细胞(hAECs),用流式细胞术和免疫荧光染色进行表型分析和细胞鉴定.腹腔注射D-氨基半乳糖溶液建立大鼠肝损伤模型,随机分为hAECs移植组和对照组,每组20只.造模后24 h用微量注射器于肝左、中、右叶3点分别移植L-DMEM悬浮的hAECs悬液50μL(约1×106个细胞),对照组注射等量L-DMEM.于移植后48 h、1、2和4周处死各实验组5只大鼠,取肝脏制备冰冻切片,用免疫荧光双染色检查hAECs在受损肝原位的植活、分布及其向肝细胞分化的标志物表达.结果 1)FCM分析和免疫荧光染色结果显示,所分离的hAECs表达CD29、CD166及CK19,几乎不表达CD44、CD80、CD86、HLA-DR及波形蛋白；2)免疫荧光双染色结果显示,hAECs移植后1周主要定植于肝小叶且表达AFP,至2周表达CK18,至4周表达Alb.结论 hAECs在大鼠受损肝组织中能被植活且可分化为肝细胞,提示hAECs移植在临床肝病的治疗方面可能具有潜在应用价值.
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大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为肝细胞
目的 研究HGF、aFGF及OSM诱导MSCs成为肝细胞的能力及其在分化中的作用.方法 用HGF、aFGF、OSM诱导分化MSCs后,用化学发光法、RT-PCR法及谷氨酸脱氢酶法检测细胞AFP、ALB及尿素的表达情况.结果 除对照组外其余各组细胞均有AFP表达(P<0.05);对照组及a+O组无ALB、尿素的表达,其余各组出现ALB及尿素的表达(P<0.05).结论 HGF联合aFGF、OSM及aFGF能够诱导MSCs分化为表达AFP、ALB、尿素的肝细胞;aFGF与OSM在没有HGF存在时不能诱导MSCs向较为成熟的肝细胞的分化.
关键词： 骨髓间充质干细胞 肝细胞生长因子 酸性成纤维细胞生长因子 制瘤素M 肝细胞 -
体外三维培养骨髓间充质干细胞诱导分化为肝细胞及其极化特征
目的 探讨体外三维诱导培养体系下人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化及极化特征.方法 从成人骨髓中分离出骨髓间充质干细胞(BMSC),利用胶原蛋白三维培养体系进行体外诱导培养.用HE染色法观察分化肝细胞的形态及结构特征,用免疫组化法检测肝细胞特异性蛋白的表达,用免疫荧光法检测极化蛋白BSEP和SRBI的表达特征.结果 成人BMSC在体外胶原蛋白三维诱导培养体系中呈多层排列生长,形成细胞间紧密连接及管状结构.BMSC分化来源肝细胞特异性表达ALB及AFP.肝细胞极化蛋白BSEP和SRBI在肝细胞呈特征性分布.结论 BMSC在体外胶原三维培养体系中可诱导分化为肝细胞,并形成肝组织特征性的极化结构.
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双酚A增加CD1小鼠肝细胞凋亡
目的 观察在双酚A(BPA)的作用下,CD1小鼠肝细胞凋亡是否受到影响.方法 48只4周龄雄性CD1小鼠随机分成4组(12只/组),分别予以含不同浓度BPA[0、5、50和500 μg/(kg·d)]的标准饲料喂养8周后,利用HE染色、Hoechst 33258染色观察肝脏组织形态学及细胞凋亡,Western blot法检测肝脏组织中cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达,用分光光度法测定caspase-3酶活性.结果 与对照组相比,BPA各处理组肝脏组织中凋亡细胞明显增多(P＜0.01),肝脏组织促凋亡基因cleaved caspase-3与Bax蛋白表达增加(P ＜0.05);caspase-3酶活性显著增强(P＜0.01).结论 在环境内分泌干扰物BPA的作用下,CD1小鼠肝细胞凋亡增加.
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高脂饮食通过p-AMPK/mTOR信号通路下调小鼠肝细胞自噬水平
目的 探讨高脂饮食对小鼠肝细胞自噬的影响并分析其可能机制.方法 将C57BL小鼠随机分为2组,每组n=15,给予常规饮食(NC)或高脂饮食(HFD)喂养,8、12和16周后每组随机处死5只小鼠,测体质量、肝质量、内脏脂肪质量;油红(Oil-Red-O)染色测肝脂质沉积;Western blot检测肝脏自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62和自噬调控信号通路蛋白p-mTOR和p-AMPK的表达.结果 8周时,HFD组小鼠出现腹型肥胖,16周时小鼠体质量、内脏脂肪质量及肝脂滴沉积较NC组明显增加(P<0.01);HFD组8周时肝脏LC3Ⅱ表达较NC组增加(P<0.05);而12及16周肝脏LC3Ⅱ表达较NC组显著降低(P<0.05);P62表达较NC组明显增加(P<0.05).与NC组相比,HFD组各时间点肝脏p-AMPK表达均减少,而p-mTOR蛋白表达均显著增加.结论 高脂饮食初期小鼠肝细胞自噬短暂增加,但长期高脂饮食可导致肝细胞自噬水平显著下调甚至衰竭,肝细胞自噬水平下调与高脂饮食抑制肝细胞p-AMPK表达及增加p-mTOR的活性有关.
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内皮素1和血管紧张素Ⅱ对大鼠肝细胞核核苷三磷酸酶活性的影响
核被膜核苷三磷酸酶(nucleoside triphosphatase, NTPase)为通过细胞核孔复合体转运mRNA的限速酶.本实验探讨内皮素1(ET-1)和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对大鼠肝细胞核NTPase 活性的影响.体外分离的大鼠肝细胞核与ET-1 或 Ang Ⅱ单独或分别与ET-1的ETA 受体拮抗剂JKC301、 ETB 受体拮抗剂BQ788或AngⅡ的AT1 受体拮抗剂 Losartan、AT2 拮抗剂 PD123177共同孵育肝细胞核,分别测定ATP 和 GTP作底物时,肝细胞核NTPase活性.结果发现ATP 和 GTP作底物时, ET-1 (10-11～10-9 mol/L)或Ang Ⅱ (10-11～10-9 mol/L)孵育肝细胞核均浓度依赖地增强其NTPase 活性(均P＜0.01),ET-1和AngⅡ对NTPase的刺激作用可分别被JKC301(10-6mol/L)和Losartan (10-6mol/L) 阻断(P＜0.01).ET-1和 Ang Ⅱ共同孵育后,核NTPase活性与ET-1或Ang Ⅱ单独孵育相比显著增加(均P＜0.01).结果表明:ET-1和Ang Ⅱ可分别通过ETA 和 AT1 受体刺激肝细胞核NTPase活性.
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SREBP-1C、GRP-94在小鼠肝细胞脂质代谢中的作用
目的 探讨高同型半胱氨酸(Hcy)血症中肝细胞固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1C)与葡萄糖调节蛋白94(GRP-94)的表达变化,评价内质网应激蛋白对肝细胞脂质代谢的影响.方法 高蛋氨酸饮食诱导小鼠高Hcy血症,分析肝细胞内甘油三酯(TGE)、胆固醇(CHO)含量的变化,RT-PCR、Western blot分别检测内质网应激蛋白SREBP- 1 C和GRP- 94 mRNA及其蛋白表达.结果 高蛋氨酸饮食后小鼠各时点血浆Hcy及肝细胞内TGE、CHO含量均显著升高,而血浆TGE、CHO含量升高并不明显;小鼠肝细胞内质网应激蛋白SREBP- 1 C和GRP- 94 mRNA及其蛋白表达也显著升高(P＜0.05).结论 Hcy诱导的内质网应激可引起SREBP-1C、GRP-94的表达变化及内源性固醇调节通路失调.
关键词： 固醇调节元件结合蛋白1C 葡萄糖调节蛋白94 同型半胱氨酸 脂质代谢 肝细胞 -
二甲亚砜、尼克酰胺对肝细胞生长素促肝细胞增殖的影响
为探讨原代肝细胞体外增殖和分化的培养条件和机制,观察了肝细胞生长素(HPN)、二甲亚砜(DMSO)及尼克酰胺(NA)对肝细胞增殖、分化的影响.结果显示肝细胞生长素刺激离体肝细胞 3H-TdR掺入和钙动员.DMSO抑制钙动员,NA无显著影响.肝细胞原代培养证实:NA促进DNA合成,而DMSO抑制 3H-TdR掺入,但DMSO在NA协同下使肝细胞表现为一定的延迟合成活性;肝细胞cAMP水平在96h内与增殖活性呈负相关.7d条件培养后,DMSO+HPN及DMSO+NA+HPN培养组肝细胞对 3H-TdR掺入分别为NA+HPN组的3.83及3.58倍,[Ca2+]i瞬增分别为3.0及3.3倍.表明HPN具有体外刺激原代肝细胞增殖和分化的作用,加入NA可以促进肝细胞DNA合成;DMSO则抑制 3H-TdR掺入,长期表现为稳定肝细胞作用,移除DMSO后肝细胞具有较高的增殖活性.
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肥胖状态下不同组织细胞与自噬关系的研究进展
近年来越来越多的关注投向肥胖与自噬之间关系的研究,肥胖状态下机体不同组织细胞中的自噬发挥不同的作用.脂肪细胞特异性自噬基因Atg7和Atg5被敲除后脂滴积累减少,胰岛素抵抗得到改善;肝细胞中增加自噬可以提高其代谢功能:胰岛β-细胞中自噬缺陷可损伤细胞功能:适宜的自噬水平对维持骨骼肌内环境的稳态至关重要.
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用基因芯片技术研究乙醇对肝星状细胞增殖及其CYP450亚型表达的影响
乙醇可经细胞色素P450 2El(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)代谢为乙醛,并产生脂质过氧化产物,引起肝损伤,并可通过肝细胞中过量表达的CYP2E1激活肝纤维化发生的关键细胞--肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)[1].但乙醇能否直接激活HSCs及其可能的机制报道甚少.
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实验性脂肪性肝病大鼠血浆内皮素与肝病理损害的关系
脂肪性肝病(fatty liver disease, FLD)是遗传、环境、代谢相关因素所致的以肝细胞脂肪变性为主的临床病理综合征.FLD包括乙醇性脂肪性肝病(alcoholic liver disease , ALD)和非乙醇性脂肪性肝病(non- alcoholic fatty liver disease,NAFLD).其发病机制目前尚未明了.本研究旨在探讨血浆内皮素(endotheline, ET)与FLD大鼠肝脏病理损害之间的关系,以进一步研究FLD发生发展的病理机制.
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诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞样细胞分化的新方法
目的 探索诱导小鼠原始牛殖细胞向肝细胞样细胞定向分化的有效方法 .方法 分离孕13 d昆明小鼠的原始生殖细胞(PGC),体外培养扩增后,向其培养液中加入新生鼠肝组织提取液和包被有胎肝细胞的微囊共培养,利用微环境诱导法使PGC定向分化,然后免疫细胞化学法标记α-1-抗胰蛋白酶(AAT)和白蛋白(ALB).结果 在微环境的诱导作用下,可见PGC分化成卵圆形或星形肝细胞样细胞,并且分化细胞的数量随诱导时间延长而增多,培养2周时分化率可达70%以上.分化的肝细胞样细胞中,AAT和ALB均呈阳性表达.结论 应用新生小鼠肝组织提取液和包被有胎肝细胞的微囊构成的微环境,可有效诱导PGC向肝细胞方向分化.
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再次肝脏部分切除与射频消融术对复发性肝细胞癌患者预后影响的 Meta 分析
目的：分析并评价再次肝脏部分切除(RH)与射频消融术(RFA)对复发性肝细胞癌患者预后的影响。方法按照 Cochrane 系统评价手册提供的方法,计算机检索1990年1月—2014年12月 PubMed、EMbase、Medline、Cochrane Laboratory、中国学术期刊全文数据库、万方科技期刊全文数据库等数据库,根椐纳入标准纳入比较 RH 与 RFA 治疗复发性肝细胞癌后不同时期生存人数的随机对照和病例-对照研究。在对纳入研究的偏倚风险进行评价后,分别提取接受 RH 与 RFA 治疗的患者例数及治疗后1、3、5年的生存例数计算比值比(OR),进行系统回顾和 Meta 分析。采用 Q 检验和I2检验确定纳入研究的异质性,同质性好的研究(P >0.05, I2<50%)采用固定效应模型进行 Meta分析,否则认为纳入研究存在异质性,并采用随机效应模型。纳入研究足够多时,采用漏斗图分析是否存在发表偏倚。结果终纳入12篇文献,共1176例患者。定性分析显示 RH 较 RFA 能更有效地提高复发性肝细胞癌患者无病生存率。 Meta 分析评估 RH 与 RFA 的预后效果差异显示,1年、3年、5年的合成 OR 值(95%置信区间)分别为1.81(0.82,4.01)、1.26(0.78,2.01)、1.73(1.02,2.95),1年、3年预后效果差异均无统计学意义(P 值均>0.05),5年预后效果差异有统计学意义(P <0.05)。结论在对复发性肝细胞癌患者的治疗中,与 RFA 相比,RH 对提高患者无病生存率更为有利；虽然 RH 与 RFA 对改善患者早、中期预后差异无统计学意义,但从趋势上来说 RH 仍较 RFA的预后效果好,且 RH 较 RFA 能够明显改善患者晚期预后。综合来看,对于可以接受 RH 或 RFA 治疗的复发性肝细胞癌患者,RH 治疗可获得更好的预后。
