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大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为肝细胞
目的 研究HGF、aFGF及OSM诱导MSCs成为肝细胞的能力及其在分化中的作用.方法 用HGF、aFGF、OSM诱导分化MSCs后,用化学发光法、RT-PCR法及谷氨酸脱氢酶法检测细胞AFP、ALB及尿素的表达情况.结果 除对照组外其余各组细胞均有AFP表达(P<0.05);对照组及a+O组无ALB、尿素的表达,其余各组出现ALB及尿素的表达(P<0.05).结论 HGF联合aFGF、OSM及aFGF能够诱导MSCs分化为表达AFP、ALB、尿素的肝细胞;aFGF与OSM在没有HGF存在时不能诱导MSCs向较为成熟的肝细胞的分化.
关键词： 骨髓间充质干细胞 肝细胞生长因子 酸性成纤维细胞生长因子 制瘤素M 肝细胞 -
骨髓间充质干细胞向肝细胞的诱导分化
目的:探索肝细胞生长因子(HGF)、制瘤素M(OSM)在体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向肝细胞分化的能力及效果.方法:分离、培养大鼠MSCs,取第3代按以下分组诱导其向肝细胞分化:A组:低糖杜氏改良培养基(DMEM-LG)+100 mL/L胎牛血清(fetal calf,serum,FCS);B组:肝细胞生长培养基(HGM);C组:HGM+20 μg/L HGF;D组:HGM+20 μg/L OSM;E组:HGM+20 μg/LHGF+20 μg/L OSM,于不同时间点用免疫细胞化学检测甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白18(CK18)表达,高碘酸-希夫氏(PAS)染色检测糖原表达,谷氨酰胺脱氢酶法检测上清液尿素含量.结果:C,E组于诱导第7天出现AFP阳性表达,以后其阳性表达率随诱导时间延长逐渐降低,诱导第7天E组阳性表达率高于C组(χ2=6.322,P＜0.05).C组、E组分别于诱导第7、14天出现CK18阳性表达,于诱导第7天开始出现糖原阳性表达,随诱导时间延长表达率逐渐增高,同一时间点E组CK18(14 d:χ2=4.811,P＜0.05;21 d:χ2=6.902,P＜0.01;28 d:χ2=5.771,P＜0.05)及糖原(14 d:χ2=6.902,P＜0.01;21 d:χ2=6.818,P＜0.01;28 d:χ2=6.818,P＜0.01)阳性表达率高于C组.C,E组培养上清液中尿素浓度随诱导时间延长逐渐增高,E组增长幅度比C组高.A,B,D组各时间点均未见AFP、CK18、糖原表达及尿素浓度变化.结论:MSCs具有向肝细胞分化的能力,HGF能够诱导MSC s分化肝样细胞,OSM与HGF联合使用,能促进MSCs的分化,明显提高分化率.
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鼠胚胎肝细胞在体外L-聚乳酸支架上的长期培养及其成熟化诱导
目的研究三维生物降解材料L-聚乳酸(PLLA)对胚胎肝细胞的支持作用及制瘤素M(OSM)、尼克酰胺(NA)和二甲亚砜(DMSO)在胚胎肝细胞成熟化中的作用,探讨胚胎肝细胞在肝脏组织工程中应用的可行性.方法将两步法分离获得的E 14.5-C57 BL/6 CrSlc小鼠胚胎肝细胞接种于具有三维立体多孔结构的PLLA支架后,在含有及不含有OSM、NA和DMSO的Williams' E条件培养基中进行原代长期培养,了解其增殖能力、形态及功能变化. 结果与单层培养相比,三维立体PLLA支架培养胚胎肝细胞其细胞数量与白蛋白的分泌量均明显增加;单层培养中,单独添加OSM组白蛋白分泌仅有轻微增加,但PLLA培养中OSM组的胚胎肝细胞白蛋白分泌量明显增加;无论是单层培养或PLLA培养,OSM/NA/DMSO组白蛋白分泌均明显增加. 结论三维PLLA支架是胚胎肝细胞培养的良好支持物;OSM、NA和DMSO可明显促进肝脏实质细胞在体外的成熟.
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骨髓间充质干细胞向肝细胞的体外诱导分化
目的:探索肝细胞生长因子(HGF)、酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、制瘤素M(OSM)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)为肝细胞的能力及效果.方法:采用红细胞裂解+贴壁法分离纯化大鼠骨髓MSCs,取第4代MSCs,按如下分组诱导其向肝细胞分化:①MSCs组(空白对照):不加细胞因子;②H+a组:20μg/L HGF+20μg/L aFGF;③H+O组:20μg/L HGF+20μg/LOSM;④a+O组:20μg/L aFGF+20μg/L OSM;⑤H+a+O组:20μg/L HGF+20μg/L aFGF+20μg/L OSM;⑥H+a+O(分)组:20μg/L HGF(1～9d)+20μg/L aFGF(9～18d)+20μg/L OSM(9-21d).于不同时间点采用RT-PCR检测甲胎蛋白(AFP)和细胞角蛋白18(CK18)的表达,溴甲酚绿法检测其中白蛋白(ALB)的含量,谷氨酸脱氢酶法检测其中尿素(Urea)含量.结果:除对照组外,其余各组在7～14d可见AFP mRNA的表达,21d仅a+O组表达阳性.除对照组及a+O组外,其余各组均出现CK18mRNA、ALB及Urea,在同一时间点,H+a+O组表达量高于其余各组(P<0.05).结论:HGF联合aFGF/OSM能够成功诱导MSCs分化为肝细胞;aFGF与OSM不能诱导MSCs向较为成熟的肝细胞的分化,但与HGF联合使用能明显提高分化率.
关键词： 骨髓间充质干细胞 肝细胞生长因子 酸性成纤维细胞生长因子 制瘤素M 肝细胞 -
大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为肝细胞
目的:研究HGF、aFGF及OSM诱导MSCs成为肝细胞的能力及其在分化中的作用.方法:用HGF、 aFGF、OSM诱导分化MSCs后,用化学发光法、RT-PCR法及谷氨酸脱氢酶法检测细胞AFP、ALB及尿素的表达情况.结果:除对照组外其余各组细胞均有AFP表达 (P<0.05);对照组及a+O组无ALB、尿素的表达,其余各组出现ALB及尿素的表达(P<0.05).结论:HGF联合aFGF、OSM及aFGF能够诱导MSCs分化为表达AFP、ALB、尿素的肝细胞;aFGF与OSM在没有HGF存在时不能诱导MSCs向较为成熟的肝细胞的分化.
关键词： 骨髓间充质干细胞 肝细胞生长因子 酸性成纤维细胞生长因子 制瘤素M 肝细胞
