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缺血修饰蛋白作为心肌缺血早期诊断指标的临床研究
目前诊断心肌缺血常用的生化指标主要是血清碱性磷酸酶、肌钙蛋白T(cTnT)和肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白测定,但是这些指标在心肌缺血发生3~5 h才增高,因此被认为是"梗死指标".Morrow等[1]曾提出理想的心肌缺血的生化指标标准:①在心肌缺血后早期出现在血液中;②在除心肌以外的其他脏器缺血时不升高,并且随心肌缺血面积的增大而等比例地升高;③在血中形态稳定;④24 h回到基线水平;⑤容易测量和分析;⑥价格合理;⑦有较高的敏感性和特异性.新近发现的新生化指标缺血修饰蛋白(IMA)因为具备诊断心肌缺血的理想标准的各项条件,从而引起了人们的高度重视.
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受体活性修饰蛋白新功能
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表观遗传、环境与疾病
1999年,Wolffe 和 Matzke[1]首次提出了当前广为认可的表观遗传定义,它包含三个要点:DNA 序列不变,表型改变,这种改变是可遗传的。经典遗传学信息提供了各种蛋白(包括表观遗传学修饰蛋白在内)、RNA 的结构信息,而表观遗传学信息则提供何时、何处合成何种蛋白及 RNA 的指令,从而严密地控制着蛋白及 RNA 的功能。表观遗传学赋予生物灵活而又强大的适应环境的能力,与人体的发育和疾病密不可分。
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去泛素化酶在病毒感染过程中的调控作用研究进展
蛋白质的泛素化是一种广泛存在且非常重要的翻译后修饰形式,在调控细胞周期、细胞凋亡、损伤修复、机体免疫以及神经元退化等许多生物学功能方面发挥着重要作用,其过程需泛素或类泛素样蛋白(如SUMO、NEDD8、ISG15等)、泛素激活酶 E1、泛素结合酶 E2和泛素连接酶 E3共同完成[1-2]。泛素是由76个氨基酸残基组成的非常保守的小分子多肽,相对分子质量为8.5×103,在真核生物体内广泛存在[3]。泛素本身含有7个赖氨酸残基(lysine, K),分别为K6、K11、K27、K29、K33、K48和K63,其本身的赖氨酸残基也可以与泛素分子相互结合,即底物蛋白结合泛素分子,后一个泛素分子通过其羧基端的甘氨酸结合到前一个泛素的某一个赖氨酸上形成多聚泛素链。多聚泛素链与被修饰蛋白K48相连常介导靶蛋白进入蛋白酶体降解,而K63连接常活化靶蛋白或使靶蛋白循溶酶体途径降解。在这个过程中E1活化泛素分子, E2决定着形成何种泛素链,而E3则决定着底物蛋白的特异性[4-7]。
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易卒中型自发性高血压大鼠心肌组织肾上腺髓质素受体的表达上调
1993年发现肾上腺髓质素(AM)具有降压的作用还有利钠和利尿作用[1].对于AM受体,McLatchie等[2]已经报道了新的受体联合体,包括降钙素受体类似受体(CRLR),受体活性修饰蛋白(RAMP).RAMP1/CRLR联合体成为降钙素基因相关肽特异性受体;RAMP2/CRLR和RAMP3/CRLR联合体成为AM特异性受体[3].Totsune等[4]报道在充血性心力衰竭的大鼠心脏AM、RAMP2和CRLR基因表达上调.因此,AM受体联合体成分表达的上调是在不同病理状态下进行的[5].然而,在高血压导致LVH的AM受体特征还未完全清楚.
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心肌标志物的进展与应用
心肌损伤时的血中生化标志物检测异常,是急性心肌梗死(AMI)的重要诊断指标之一.随着科学研究的进展,临床实践中已陆续发现多种反映心肌损伤的标志物,包括反映心肌缺血损伤的标志物:如缺血修饰蛋白,髓过氧化物酶,CD40配体等;
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G3PD的修饰蛋白对急性肾功能衰竭大鼠丙二醛和超氧化物歧化酶的影响
目的:研究3-磷酸甘油醛脱氢酶的修饰蛋白(modifier protein,MP)对急性肾功能衰竭(acute renal failure,ARF)大鼠丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的影响.方法:利用庆大霉素致ARF的动物模型,将大鼠随机分成4组:正常对照组、阴性对照组、阳性时照组和实验组,采用硫代巴比妥酸法和羟胺法分别测定血清及肾皮质匀浆MDA和SOD,光镜、电镜观察肾组织学改变,同时测定血肌酐(Scr).结果:实验组、阳性对照组血清及肾皮质匀浆MDA明显下降,SOD明显上升,P<0.01.同时Scr下降.光镜、电镜示实验组、阳性对照组肾脏病理仅呈灶状改变.比阴性对照组减轻.结论:MP可以缓解氧自由基损伤,减轻ARF时的肾脏病理改变,改善肾功能.
关键词: 3-磷酸甘油醛脱氢酶 修饰蛋白 丙二醛 超氧化物歧化酶 急性肾功衰竭 -
提纯G3PD的修饰蛋白
目的:从猴的肾上皮细胞(Vero-E6)内提取具有促进细胞生长作用的3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PD)的修饰蛋白(modifier protein, MP)。方法:将培养液中K+的浓度降低到3.2 mmol/L,在Vero-E6细胞内将产生G3PD的修饰蛋白,用亲和层析及阴离子高效液相层析纯化而获取这种修饰蛋白。结果:蛋白的分子量大约为62 kDa,Westem及免疫吸附实验证实:随着细胞外液中K+的浓度降低,该种蛋白也相应增多,在低k溶液2 h后达大值,与G3PD的活性相平行。结论:从猴的肾上皮Vero-E6细胞分离出G3PD的修饰蛋白,有促进G3PD的活性、增进细胞生长的作用。
关键词: Vero-E6细胞 钾缺乏 修饰蛋白 3-磷酸甘油醛脱氢酶 细胞增殖 -
G3PD的修饰蛋白对急性肾功能衰竭大鼠中细胞间粘附分子的影响
目的:观察3-磷酸甘油醛脱氢酶的修饰蛋白(modifier protein,MP)对急性肾功能衰竭(acute renal failure,ARF)大鼠肾间质内细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的影响.方法:利用庆大霉素致ARF的动物模型,将大鼠随机分成3组,即正常对照组、模型组和MP组.分别测定各组血肌酐(Scr),利用光镜、电镜观察肾组织学改变,并免疫组化染色标记ICAM-1的变化.结果:MP组ICAM-1表达明显降低,与模型组相比,P<0.01.同时光镜、电镜示MP组比模型组肾脏病理明显减轻.Scr下降,P<0.01.结论:MP可以降低ICAM-1表达,减轻ARF大鼠的肾脏病理改变,改善肾功能.
关键词: 3-磷酸甘油醛脱氢酶 修饰蛋白 细胞间粘附分子-1 急性肾功能衰竭 -
血生化标志物联合检测及血小板参数在脑卒中患者中诊断价值研究
脑卒中具有高发病率、高死亡率、高致残率的特点,且发病率随着中国老年化社会的到来呈明显上升趋势[1].研究发现,脑卒中患者缺血修饰蛋白(IMA)、纤维蛋白原(Fib)等生化指标以及血小板活化因子(PAF)等的变化与疾病的发生与发展密切相关[2,3].目前认为,血小板形态的变化和纤维原蛋白水平的改变在动脉粥样硬化和脑卒中的形成中起着重要作用[4].本研究对我院收治的脑卒中患者的血生化标志物和血小板参数进行联合检测,以为脑卒中患者的预防、早期诊断、治疗提供临床依据,现将研究结果报道如下.
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3-磷酸甘油醛脱氢酶的修饰蛋白减轻急性肾小管坏死自由基损伤的研究
目的 通过分离、纯化、鉴定及蛋白质氨基酸测序3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PD)修饰蛋白(MP),观察庆大霉素诱发大鼠急性肾小管坏死(ATN)时, MP抗自由基损伤及对肾小管上皮细胞的修复作用.方法 采用Western印迹法及间接免疫荧光检测等方法对MP进行鉴定分析.纯化的MP以氨基酸自动分析仪测定氨基酸序列.将SD雄性大鼠随机分成正常对照组(腹膜内注射0.9%氯化钠溶液2mL-/d×7d+0.9%氯化钠溶液2mL/dX4d)、阴性对照组(腹膜内注射庆大霉素140mg·kg-1·d-1×7d+0.9% 钠溶液2mL/d×14d)、阳性对照组(腹膜内注射庆大霉素140mg·kg-1·d-1×7d+表皮生长因子 20μg·kg-1·d-1×14d)及实验组(腹膜内注射庆大霉素140mg·kg-1·d-1×7d+MP 250μg·kg-1·d-1×14d).应用MP观察7和14d的ATN大鼠模型血清及肾组织中脂质过氧化物(LPO)、还原型谷光苷肽(GSH).及一氧化氮(NO)水平的动态变化.通过光学显微镜、电子显微镜及免疫组织化学等形态学方法,观察MP修复ATN时大鼠肾小管上皮细胞的组织形态学及细胞间黏附因子-1(ICAM-1)表达的变化.同时测定血肌酐(SCr)水平.结果 间接免疫荧光法证实, MP位于细胞质内,且钾浓度为3.2mmol/L条件下的荧光强度明显强于钾浓度为5.4mmol/L时.MP由25个氨基酸残基组成.实验组的血清及肾皮质匀浆中LPO、NO水平均较阴性对照组明显下降(P值均<0.01), GSH明显上升(P值均<0.01).MP组肾脏病理改变比模型组明显减轻,同时SCr下降(P<0.01);实验组的ICAM-1表达较阴性对照组下调.结论 自由基积极参与ATN肾小管上皮细胞损伤, MP能够抑制ATN大鼠血清及肾组织中LPO、NO水平的升高及GSH水平的下降.MP具有抗自由基损伤及修复肾小管上皮细胞的作用.
关键词: 3-磷酸甘油醛脱氢酶 修饰蛋白 氨基酸测序 肾小管坏死 自由基 -
类风湿关节炎患者血小板修饰蛋白测定及其临床意义
血小板修饰蛋白(thrombomodulin,TM)是存在于血管内皮细胞表面的一种糖蛋白,它通过与凝血酶结合激活蛋白C参与血管内皮的凝血调节过程[1],自80年代末发现TM在某些微血管病变病人中增高,TM已被用作为血管内皮损伤的一个分子标记物[2],类风湿关节炎因炎症反应可引起关节内和关节外血管病变,引起血管内皮细胞损伤释放TM,造成血浆TM浓度升高.
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聚乙二醇化新型干扰素
干扰素临床上用于治疗慢性病毒性肝炎、各种肿瘤已有近20年的历史,其疗效和安全性得到了广泛的认同.由于干扰素是基因重组蛋白类药物,多采用注射剂型,且其半衰期很短、难以充分发挥疗效,长期治疗、频繁给药给病人也带来很大的不便和痛苦.如何延长重组蛋白在体内的存留时间,是基因药物二次开发的一个热点. 聚乙二醇(polyethylene glycol,简称PEG)是一种无毒的线型分子,因其结构特点而具有水溶性、免疫学惰性和分子大小可改变性.聚乙二醇经活化后用于修饰蛋白,在蛋白分子外形成"一保护层",以保护蛋白被降解破坏,延长其在体内的半衰期,降低免疫原性和毒性.FDA已经认可聚乙二醇可以作为载体或基质应用于药品制剂.现就聚乙二醇干扰素α-2b(PEGINTRON)的有关情况作一简述.
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恙虫病立克次体蛋白抗原及其编码基因研究进展
恙虫病立克次体(Rickettsia tsutsugamushi)是恙虫病(Scrub typhus)的病原体,专性活细胞内寄生,革兰氏阴性,恙螨是其传播媒介。在分类地位上,恙虫病立克次体原属于立克次体科立克次体属,但由于其在许多生物学和遗传特性方面不同与其他立克次体,1995年将其另立一属一东方体属(Orientia),称为恙虫病东方体(Orientiatsutsugamushi)[1]。近十多年来,新的技术方法尤其分子生物学方法不断引入恙虫病立克次体的研究,使病原学研究更加系统深入广泛。现对其蛋白抗原与其编码基因的研究综述如下。1 恙虫病立克次体的多肽组成 纯化的恙虫病立克次体裂解物或蛋白抗原或多肽经SDS-PAGE电泳,发现有30多条带[2]。其中主要的多肽为56kD,58kD,47kD,70kD。由于各实验室实验条件的不一致,使得恙虫病立克次体多肽的命名也较为混乱,同一多肽有不同的名称。例如58kD(Hanson称为63kD,Tamura称其为60kD),56kD(Hanson称为60kD),47kD(Hanson称为50kD)。恙虫病立克次体各株SDS-PAGE电泳图谱是相似的,但某些多肽的分子量有细微的差别。如Kato株56kD多肽比其他株47kD(Gilliam,Karp,Shimokoshi)的分子量大。这与Melinda F.Moree等的发现是一致的[3](见表1)。菌体蛋白的迁移还受温度,2-巯基乙醇等样品制备条件的影响[4,3]。同一多肽分子,不同制备条件下会以不同的状态存在(见表2)。由表2可见,56kD蛋白是一个热修饰蛋白,其存在状态依温度不同而异。
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循环晚期糖基化终产物的检测方法和评价
晚期糖基化终产物(AGE)是蛋白质的氨基组、脂质和脂蛋白与糖的醛基组之间的非酶性糖基化/氧化反应的终产物.反应早期生成可逆的Schiff碱,该早期产物经过结构重建,转化成较为稳定的amadori产物,而后再经过一系列化学重排和脱水反应,产生不可逆的晚期产物即AGE.正常人体内该反应进行得非常缓慢,通常只发生于某些转换率很低的蛋白质如基质蛋白.蛋白质一旦被AGE修饰,即丧失其生理功能,将通过巨噬细胞等细胞表面AGE受体而被摄取、降解、清除.因此,正常情况下AGE修饰蛋白作为一种信号参与了机体清除衰组织以及结构重建的过程.
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聚乙二醇修饰蛋白药物研究进展
迄今,利用生物技术已开发成功了70多种重要治疗药物,年销售额已超过300亿美元,生物技术药物中大多为蛋白质类药物.在临床上,蛋白质类药物既有作用位点专一、疗效明确的优点,也有多项缺点,如在胃肠道内极易被蛋白酶水解,一般仅限注射给药;血浆半衰期较短,需反复多次注射,抗原性较强,易引起过敏等不良反应[1].
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新诊2型糖尿病患者血清缺血修饰蛋白与糖化血红蛋白相关性分析
慢性高血糖的毒性作用可通过晚期糖化终产物的蓄积,毛细血管基底膜成分的改变,氧化应激反应,炎性反应等导致糖尿病性微血管病变、大血管病变的发生[1]。糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin ,HbA1 c)是国际公认的衡量血糖控制水平的重要指标,且是控制及预防糖尿病并发症的评价指标[2]。缺血修饰蛋白(ischemia modified albumin ,IM A )是近年来发现的早期诊断急性心肌缺血的指标之一[3]。研究发现与健康人相比,2型糖尿病(T2DM )患者IM A水平显著升高,且与血糖控制水平显著相关[4]。本文就新诊T2DM人群 HbA1 c与IM A的相关性及其影响因素进行研究,现报道如下。
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降钙素受体家族的受体活性修饰蛋白的研究进展
降钙素基因相关肽家族包括降钙素(calcitonin,CT)、两种降钙素基因相关肽(calcitonin-gene-related peptides CGRP)、肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)和胰淀粉样酶(amylin);它们均与相应的高亲和力受体结合而发挥作用,并且某些受体存在不同的亚型.这些受体包括降钙素受体(Calcitonin receptor,CTR)和降钙素受体样受体(calcitonin receptor-lile receptor,CRLR).1991年CTR首先被克隆出来,随后的研究发现CTR属于G蛋白耦连受体(G proteincoupled receptors,GPCRs)家族B组,与CT结合可以介导其抑制骨吸收的作用.CRLR与CTR有55%的同源性;它需要一组称作受体活性修饰蛋白(receptor activity modifying proteins,RAMPs)的Ⅰ型跨膜蛋白的协同作用,才可以介导CGRP的作用.对GPCRs的研究一直以配体-受体作用为中心,RAMPs的发现使蛋白质-蛋白质作用的研究得到了广泛重视.
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马来酰亚胺苯甲氨酯聚乙二醇修饰膜蛋白掩盖AB和RhD抗原制备通用血型红细胞
聚乙二醇(PEG)上的活性基团结合在红细胞表面掩盖血型抗原是制备通用血型红细胞的途径之一,这些PEG链有很强的水合作用,能覆盖红细胞表面的大片区域,阻断血型抗原与抗体结合.甲基氧PEG-5000(mPEG-5000)是常用的红细胞修饰剂,主要修饰蛋白上的氨基基团.在氯化氰脲酸(CnCl)催化下,mPEG-5000与红细胞膜上氨基形成共价键连接,掩盖Rh抗原和A或B抗原.