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硼对猪卵泡颗粒细胞形态、增殖和凋亡的影响
目的 研究硼对体外分离培养猪卵泡颗粒细胞形态、增殖和凋亡的影响.方法 在F-12完全培养基中培养猪原代卵泡颗粒细胞,细胞进入对数生长期后,用0 ～ 100 mmol/L硼分组处理,HE染色观察颗粒细胞形态变化,MTT法测定颗粒细胞增殖和毒性的影响,流式细胞技术检测颗粒细胞凋亡.结果 添加0.01、0.1和0.5mmol/L硼可显著促进卵泡颗粒细胞的增殖,添加50和100 mmol/L硼时细胞数目急剧减少,死亡细胞数目大量增加,早期和晚期凋亡细胞比率均明显增加.结论 添加低于2.0 mmol/L硼可促进猪卵泡颗粒细胞增殖并抑制其凋亡,高于2.0 mmol/L硼则加速猪卵泡颗粒细胞凋亡,细胞死亡数增多.
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细胞凋亡途径探讨二仙汤治疗大鼠卵巢早衰实验研究
目的:通过卵泡颗粒细胞的凋亡途径探讨二仙汤对化疗性损伤卵巢早衰的影响.方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组和二仙汤组,腹腔注射顺铂建立化疗性损伤大鼠卵巢早衰动物模型.造模后连续4周各组灌胃给予相应药物治疗.观察大鼠一般情况;测定血清中E2、FSH、LH和Pro含量;观察卵巢组织形态;TUNEL法分析卵泡颗粒细胞的凋亡;免疫组化检测BAX、Bcl-2和VEGF蛋白的表达情况.结果:模型组体质量下降,动情周期紊乱,治疗后体质量增加,动情周期恢复.与正常组比较,模型组E2、LH下降, FSH水平升高,Pro含量各组比较无显著差异.TUNEL检测模型组较正常组阳性表达增多,二仙汤组较模型组阳性表达减少.模型组较正常组BAX表达明显升高,Bcl-2下降,二仙汤治疗后与模型组比较BAX表达量下降,Bcl-2表达升高;VEGF蛋白在模型组中表达明显低于正常组,二仙汤组较模型组表达增多,阳性组表达略有恢复.结论:顺铂可致卵泡颗粒细胞凋亡,造成卵巢功能过早衰退;二仙汤通过调节血清中各激素含量,改变凋亡细胞相关蛋白的表达量来降低顺铂对卵巢的损害,促进卵泡发育,改善并增强卵巢功能.
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IL-6可增强猪卵巢颗粒细胞雄激素受体的表达
目的 研究白细胞介素6(IL-6)对卵泡颗粒细胞雄激素受体(AR)表达的影响,探讨IL-6在多囊卵巢综合征(PCOS)发病机制中的作用.方法 在体外培养的猪卵泡颗粒细胞培养液中分别加入10、100和1 000 ng/L的IL-6,采用实时荧光定量PCR和Western blot法观察IL-6对卵巢颗粒细胞AR mRNA和蛋白的表达.结果 IL-6可上调卵巢颗粒细胞AR mRNA和蛋白的表达.结论 IL-6增强雄激素的活性,可能参与了慢性亚临床炎症引发的PCOS.
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血清抗苗勒管激素方法学比较及女性正常参考区间建立
抗苗勒管激素（ anti－Müllerian hormone ， AMH ）是近10年来在生殖健康领域受关注的激素指标，它是由2个相对分子质量72000的二聚体单体组成，通过二硫键连接的同源二聚体糖蛋白，属于转化生长因子－β（ TGF－β）超家族成员，女性AMH的合成来源于卵泡发育早期阶段的卵泡颗粒细胞，是卵泡成熟调控的至关重要的激素［1］。 AMH可以反映卵巢窦状卵泡和窦前卵泡的数量（卵巢储备），评估卵巢功能。测定血清AMH水平在评价性腺功能状态和相关疾病中有着重要意义。虽然常规激素检测项目（促卵泡激素、促黄体生成激素、雌二醇等）在临床上已广泛应用，但这些激素均随月经周期变化而变化，而AMH在不同生理周期中表达稳定，因此检测更为方便，在临床上的应用前景更为广泛。
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多囊卵巢综合征相关基因的差异表达研究
目的:研究多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者相关基因的差异表达.方法:应用人类全基因组基因芯片U133A,以体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization embryo transfer,IVF-ET)的多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者和对照者取卵后所剩的卵泡颗粒细胞为研究对象,检测5例PCOS患者和5例对照者颗粒细胞中相关差异表达的基因.结果:与对照组比较,共筛查出与PCOS明显相关的差异表达基因46个,其中25个基因表达增加(上调),21个表达减少(下调).这些差异表达基因具有多种生物学功能,如脂类代谢调节、细胞间的信号传导和免疫炎症反应,反映了PCOS患者临床症状的多样性.结论:应用基因芯片技术,可筛查出新的PCOS遗传相关候选基因.
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经皮补充雌二醇在辅助生殖领域的运用前景(上)
雌激素是女性一生都离不开的物质,持续性的低浓度对性征发育和机体各个组织器官的生理功能和内环境稳定是必需的.而生育期高水平、周期性变化及和垂体促性腺激素的正负反馈形成的排卵和规律月经周期赋予女性生育能力.什么是雌激素?女性身体内有几种雌激素?它们有什么不同?本文将就此问题进行深入探究.雌激素的定义雌激素主要来源于卵泡内膜细胞和卵泡颗粒细胞.在卵泡发育过程中,先经LH刺激卵泡内膜分泌睾酮,再经颗粒细胞在FSH刺激下转化为雌二醇(E2),即“双细胞双促性素作用模式”.
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女性围绝经期健康大讲堂(之四)
雌激素补充疗法的过去、现在及未来(上)雌激素主要来源于卵泡内膜细胞和卵泡颗粒细胞.在卵泡发育过程中,先经促黄体生成激素(LH)刺激卵泡内膜分泌睾酮,再经颗粒细胞在卵泡刺激素(FSH)刺激下转化为雌二醇,即"双细胞双促性素作用模式".
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女性围绝经期健康大讲堂(之十六)
雌激素在人体中的作用解析(下)雌激素概念解密雌激素对女性和男性这么重要,我们有必要弄清什么是雌激素,身体内有几种雌激素,哪一种才是身体需要的和发挥正向功能的.从生理学对雌激素的表述得知:雌激素主要来源于卵泡内膜细胞和卵泡颗粒细胞.在卵泡发育过程中,先经LH刺激卵泡内膜分泌睾酮,再经颗粒细胞在FSH刺激下转化为雌二醇,即"双细胞双促性素作用模式".此外肾上腺皮质、胎盘和雄性动物睾丸也有分泌.这里雌激素的定义是雌二醇,是生育期女性起作用的雌激素,更年期女性急剧减少和缺乏的雌激素也是雌二醇(0 ～ 10pg/ml),为什么女性几十年来补充的雌激素不是缺乏的雌二醇,而是孕马雌酮(倍美力,也叫结合雌激素)呢?
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不同培养时间对鸡卵泡颗粒细胞孕酮、雌激素分泌水平及FSHR、LHR基因表达的影响
目的:研究培养不同时间鸡卵泡颗粒细胞孕酮和雌激素的分泌水平,促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)的基因表达水平,推断体外培养时间对颗粒细胞激素分泌及相关受体基因表达的影响.方法:通过细胞体外培养的方法,分别于0h、24h、48 h、72 h、96h收集鸡卵泡颗粒细胞上清液,采用ELISA法测定细胞上清液内的孕酮及雌激素分泌水平,并采用荧光定量PCR技术检测颗粒细胞内FSHR和LHR基因表达情况.结果:在培养初期0h～48h孕酮和雌激素分泌量显著降低(P＜0.05),随着培养时间增加到72 h两种激素的分泌量又开始增加,并达到培养初期水平,培养至96h细胞内孕酮和雌激素分泌量再次降低;颗粒细胞FSHR和LHR mRNA的表达水平则随着培养时间的增加而降低(P＜0.05).结论:体外培养的卵泡颗粒细胞内孕酮和雌激素的分泌量随体外培养时间的延长呈先降低后升高的趋势,可能与体外培养细胞的生长状态相关,从整体上看随着培养时间的延长,细胞内孕酮和雌激素的分泌量均降低,可能与两种促性腺激素受体FSHR和LHR基因表达量下降相关.
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海兰褐鸡卵泡颗粒细胞微管去稳蛋白2过表达对Ras-MAPK信号通路的影响
目的 探讨微管去稳蛋白2(stathmin-2-like protein,STMN2)过表达对海兰褐鸡卵泡颗粒细胞中Ras-MAPK(mitogen-activated protein kinase)信号通路的影响.方法 将STMN2腺病毒过表达载体以MOI为350 pfu/cell转染原代培养的蛋鸡卵泡颗粒细胞模型,设培养液组和腺病毒空载体组为对照组,转染48 h后,收集细胞总RNA和总蛋白,荧光定量PCR法检测各组细胞STMN2 mRNA水平及STMN2过表达对颗粒细胞分泌的细胞外调节蛋白激酶1(extracellular regulated protein kinases1,erk1)、erk2、大鼠肉瘤蛋白(rat sarcoma,ras)和转录激活因子ETS样蛋白1(ets-like protein l,elk-1)的影响,Western blot法检测各组STMN2蛋白水平及STMN2过表达对颗粒细胞分泌的erk 1、erk2、磷酸化erk1(p-erk1)、p-erk2 、ras和elk-1的影响.结果 与培养液组和腺病毒空载体组比较,STMN2过表达载体组STMN2 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P＜0.01);除elk-1蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05)和elk-1 mRNA水平显著增加(P＜0.05)外,STMN2过表达使颗粒细胞分泌的目的基因mRNA与蛋白表达水平均极显著增加(P＜0.01).结论 STMN2可通过Ras-MAPK信号通路影响蛋鸡卵泡颗粒细胞周期.
关键词： 微管去稳蛋白2 Ras-MAPK信号通路 海兰褐鸡 卵泡颗粒细胞 过表达 -
大鼠卵泡颗粒细胞透射电镜制样的简便取材方法
近年来,在很多妇科或更年期疾病的实验研究中,实验动物大鼠卵泡中颗粒细胞的超微结构观察是一个重要指标[1～4].由于大鼠卵巢卵泡都很小,而颗粒细胞又是半游离在卵泡液中,数量更少,因此,要得到足量的颗粒细胞进行电镜制样,并及时固定,显然取材比较困难.本实验中,我们在取材方面进行了一些技术上的处理,防止了目标细胞的流失与混淆,可以获得足量的颗粒细胞,方便制样,提高固定效果,方法简便易行,现介绍如下.
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雄激素受体对多囊卵巢综合征患者生育能力的影响
目的:研究雄激素受体(androgen receptor,AR)对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者生育能力的影响.方法:选取广东医科大学附属顺德妇女儿童医院2016年8月至2018年8月收治的因不孕、PCOS行卵巢楔形切除患者卵巢病理组织26例为观察组,选择同期非PCOS患者于卵泡期行手术取得的正常卵巢组织15例为对照组.比较2组患者各级卵泡的数目,同时比较各卵泡颗粒细胞中AR的阳性率和2组患者的生育能力.结果:观察组患者的初级卵泡、次级卵泡、窦卵泡数量明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),而AR阳性率、始基卵泡与闭锁卵泡数量与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);观察组患者未曾受孕比例显著高于对照组(P<0.05),AR在窦卵泡中表达明显.结论:AR可间接降低PCOS患者的生育能力,抑制卵泡的生长发育,进而减少了患者卵巢产生成熟卵细胞的可能性.
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细胞因子检测对卵巢储备功能的评价及临床意义
一般而言,临床上难以对卵巢内存留的卵泡数和卵子质量进行直接检测,但可通过一系列与卵泡颗粒细胞生理功能有关的检查,间接反应卵巢功能及卵巢储备功能.血清抑制素B(inhibin B,INHB)和抗苗勒管激素(antiMullerian hormone,AMH)是目前常用反映卵巢功能和储备功能的细胞因子,本文主要阐述对其检测的评价及临床意义.
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白藜芦醇增加体外培养人卵泡颗粒细胞ATP的生成并促进其增殖
目的 探讨白藜芦醇(Res)对体外培养的人卵泡颗粒细胞的增殖及ATP生成的影响.方法 收集不孕症患者的卵泡液,进行卵泡颗粒细胞分离、培养,经纯化和卵泡刺激素受体(FSHR)免疫组织化学染色鉴定后体外培养.实验分为空白对照组、30μmol/L二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组、(10、20、30) μmol/L Res处理组.处理24、48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖活性、增强型ATP检测试剂盒检测10 μmol/L Res处理组和空白对照组24h后的ATP生成量.结果 分离培养的颗粒细胞特异性表达FSHR,阳性物质位于胞质中,阳性细胞90％以上.人卵泡颗粒细胞体外培养24～72 h,进入对数生长期.与对照组比较,(10、20、30) μmol/L Res处理24h均可增加入卵泡颗粒细胞增殖活性.10 μmol/L Res处理细胞的ATP生成量较对照组明显增加.结论 Res可以促进人卵泡颗粒细胞的增殖活性及ATP的生成.
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MXC对小鼠离体培养卵巢颗粒细胞凋亡的影响
目的:研究甲氧滴滴涕(MXC)对颗粒细胞凋亡的影响,探讨MXC对雌性小鼠性腺毒性的作用机制.方法:以孕马血清(PMSG)处理的雌性昆明小鼠为模型,制备颗粒细胞悬液,以不同浓度的MXC(1.25,2.50,5.00和10.00μg/mL)对其作用24,48 h后,应用TUNEL法及流式细胞术,检测MXC对离体培养颗粒细胞凋亡的影响.结果:体外培养的颗粒细胞存在自发性凋亡,对照组和MXC不同浓度实验组的颗粒细胞都有不同程度的体积变小、细胞浓缩、变圆、离壁等类似凋亡的特征.MXC 1.25μg/mL浓度组凋亡的颗粒细胞少,其余3个实验组随MXC浓度的升高,凋亡细胞也逐渐增多,MXC 10.00μg/mL浓度组的颗粒细胞凋亡数量显著高于对照组和其他各组(P<0.05).采用3'-末端原位标记法在细胞中检测到棕色深染的凋亡颗粒细胞;流式细胞术分析结果显示处于早期凋亡的细胞所占百分率明显升高(高达53.5%).结论:环境污染物高浓度MXC可抑制除血清后体外培养的颗粒细胞生长,导致颗粒细胞凋亡,它的作用是双向的并具有剂量依赖性.
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角质细胞生长因子(KGF)对人卵泡颗粒细胞内Ca2+浓度和DNA合成的影响
目的:探讨角质细胞生长因子(KGF)对人卵巢颗粒细胞内Ca2+浓度及DNA合成的影响.方法:从体外受精-胚胎移植取卵时的卵泡液中分离出颗粒细胞(N= 20),体外培养,采用3H-TdR及黏附式细胞仪检测在KGF诱导下颗粒细胞内的Ca2+浓度和DNA合成的变化.结果:加入KGF后,颗粒细胞内的Ca2+浓度和DNA合成显著增加(P<0.01).结论:KGF可以促进人卵泡颗粒细胞内Ca2+浓度升高和DNA合成增多.
关键词： 角质细胞生长因子(KGF) 卵泡颗粒细胞 DNA合成 Ca2+
