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毛囊不同发育阶段表皮干细胞NK-1受体表达特征的实验研究
目的:通过观察不同阶段表皮干细胞表面感觉神经肽SP的受体NK1的表达特征与鼠毛囊发育间的相关性,研究表皮干细胞分化发育为毛囊时感觉神经肽的作用,为研究通过神经调控诱导表皮干细胞向毛囊分化奠定基础.方法:实验取胎龄12.5～13.5d胎鼠、1～2d新生鼠、成鼠三组皮肤标本,以β1整合素及K19双标阳性表达定位表皮干细胞,免疫组化方法定性、半定量分析NK1受体表达.结果:不同发育阶段鼠表皮干细胞表面均有NK1受体表达,其阳性表达率与ESC双标阳性表达率无明显差异;胎鼠及新生鼠NK1受体表达率同成鼠之间存在明显差异,提示鼠毛囊发生期前ESC的NK1受体表达明显高于毛囊静止期.结论:感觉神经肽在由ESC分化发育为毛囊过程中具有重要启动及调控作用.
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胎鼠生长迟缓大鼠血管内皮生长因子的表达及应用硫酸镁治疗的机理
血管内皮生长因子(VEGF)也称血管渗透因子,是一种重要的血管生成因子,主要由血管内皮细胞产生,在刺激新血管发生与生长及在维持血管壁的完整性和通透性方面均具有重要意义.VEGF在滋养细胞增殖与侵入,以及胎盘的发生发展过程中有重要作用.我们采用免疫组化技术检测VEGF在胎鼠生长迟缓大鼠组织中的表达情况.旨在探讨VEGF在胎鼠生长迟缓发病机制中的作用以及应用硫酸镁治疗的作用机理.
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被动吸烟致宫内生长受限胎鼠脑组织细胞凋亡相关基因的表达
孕鼠被动吸烟可致胎鼠宫内生长受限并影响其脑的发育[1].我们应用快速竞争性逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测被动吸烟致宫内生长受限胎鼠脑细胞凋亡相关基因Bax mRNA及bcl-2 mRNA的相对表达量,从而探讨细胞凋亡在宫内生长受限胎鼠发病中的作用.
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胎鼠缺血缺氧性脑损伤时一氧化氮合酶与线粒体介导的神经细胞凋亡的关系及其抑制剂的保护作用
目的 探讨一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)与线粒体介导凋亡过程中能量代谢、细胞色素C和天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的相互关系及其抑制剂的保护作用.方法 ①建立胎鼠宫内窘迫模型.②分为5组:对照组、急性缺血组、治疗1组、缺血再灌注组、治疗2组.③检测脑组织中caspase-3的表达、细胞色素C的胞浆释放量;检测胎鼠脑组织神经型一氧化氮合酶(nNOS)mRNA表达量[以吸光度(A)值表示],诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、线粒体细胞色素氧化酶活性.分析不同时段细胞色素氧化酶活性、细胞色素C胞浆释放量及caspase-3阳性细胞数的变化趋势.结果 ①急性缺血组在5 min,15 min两个时间点nNOS A值明显高于治疗1组,差异有显著意义(P＜0.05),且两组nNOS A值均明显高于对照组.②缺血再灌注组各时间点iNOS活性明显高于治疗2组(P＜0.05),且两组iNOS活性明显高于对照组(P＜0.05).③急性缺血组缺血5 min,15 min线粒体细胞色素氧化酶活性均高于对照组(P＜0.05).治疗1组缺血30 min线粒体细胞色素氧化酶活性虽高于急性缺血组,但仍低于对照组(P＜0.05).缺血再灌注组和治疗2组各时间点的细胞色素氧化酶活性均低于对照组,而治疗2组的均高于缺血再灌注组(P＜0.05).④在5min,15min两个时间点,急性缺血组及治疗1组的细胞色素C胞浆释放量和caspase-3免疫阳性细胞计数与对照组比较,差异无显著性.缺血30 min时,治疗1组胞浆中细胞色素C含量及caspase-3免疫阳性细胞计数较急性缺血组虽明显降低,但仍高于对照组(P＜0.05).缺血再灌注组和治疗2组胞浆细胞色素C含量及caspase-3免疫阳性细胞计数均高于对照组.治疗2组各时间点的胞浆细胞色素C含量与caspase-3免疫阳性细胞计数低于缺血再灌注组(P＜0.05).结论 ①nNOS和iNOS介导了宫内窘迫不同阶段的胎鼠脑神经细胞细胞色素氧化酶活性的损害、细胞色素C的胞浆释放及caspase-3表达的增加.②左旋硝基精氨酸(L-NNA)在一定时间内对胎鼠脑急性缺血期线粒体能量代谢障碍和神经细胞凋亡有预防作用.而氨基胍(AG)对胎鼠脑缺血再灌注期的线粒体能量代谢障碍和神经细胞凋亡有良好的保护作用.
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一氧化氮和一氧化氮合酶在宫内窒息胎鼠肝损伤中的作用及意义
一氧化氮(nitric oxide, NO)作为一种重要的细胞内信使,具有多种生理功能.一氧化氮合酶 (nitric oxide synthase, NOS ) 是合成 NO 的唯一限速酶.肝组织中存在内皮型(endothelial NOS, eNOS)和诱导型(inducible NOS,iNOS),其诱导产生的NO参与生理和病理变化.但在宫内窒息胎鼠肝脏缺血缺氧再灌注损伤过程中是否存在相应变化,尚未见报道.
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宫内急性缺血缺氧后胎鼠肾脏细胞间黏附分子1表达的研究
新生儿窒息是新生儿死亡和伤残的主要病因之一.Perlman等[1]报道,窒息新生儿70%合并不同程度的脏器损伤,其中肾损伤的发生率高,可见肾损伤在新生儿窒息的防治中应加重视.本研究通过胎鼠急性缺血缺氧及再灌注模型,利用免疫组织化学技术动态观察细胞间黏附分子1(ICAM-1)在肾组织的表达变化,旨在探索ICAM-1在窒息后肾损伤炎症反应发生中的作用.
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L-精氨酸治疗胎鼠宫内发育迟缓及对孕鼠血浆一氧化氮和内皮素的影响
胎儿宫内发育迟缓(IUGR)是围产期胎儿发病与死亡的主要危险因素之一.本实验通过孕鼠被动吸烟建立起胎儿宫内发育迟缓模型,并用一氧化氮合成前体物质L-精氨酸治疗,观察其对胎仔生长发育的影响及血管活性物质一氧化氮(NO)、内皮素(ET)的改变,从而为探讨IUGR的发病机理及治疗前景提供依据.
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胎鼠宫内不同程度缺血缺氧后脑组织Bcl-2及Bax基因表达的研究
新生儿期缺氧缺血性脑损伤与凋亡的关系受到关注,而Bcl-2基因家族与凋亡的关系是研究凋亡机制的热点,但宫内缺血缺氧后该基因家族的变化报道较少.
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缺血缺氧对胎鼠肾脏前列腺素代谢的影响
前列腺素(prostaglandins,PGs)是生物体内重要的活性物质,在肾组织含量丰富.它在肾血流的调节,肾小管水盐代谢及肾脏发育等方面都发挥着重要作用.我们利用胎鼠宫内缺血缺氧再灌注模型,应用放免法检测胎鼠肾组织PGI2,TXA2及PGE2含量的动态变化,探索PGs在缺血性胎肾损伤中的作用.
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锌对妊娠大鼠汞暴露后胎鼠脑损伤的保护作用
锌足人体必需的微量元素之一，母体可通过金属硫蛋白的转运、离子扩散等方式将锌转运给胎儿[1]。研究已证实锌不但为胚胎发育所必需，且在胚胎发育中可能有更重要的作用。汞是生命非必需元素，国内外研究证实汞可以通过胎盘屏障，对发育中胎儿产生毒性作用，其靶器官主要足脑[2]。目前对汞中毒的治疗没有理想方法，尤其是孕期汞中毒的治疗。汞毒性的发生机制足复杂多方面的，其中促进细胞凋亡、抑制抗过氧化物酶体系的活性，导致膜脂和膜蛋白损伤是主要机制。本研究拟通过建立动物模型，探讨孕期补锌对染汞孕鼠胎鼠脑损害的保护作用及其作用机制。
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高氧、维甲酸对胎鼠肺角化细胞生长因子及其受体表达的影响
目的探讨高氧、维甲酸(RA)对胎鼠肺成纤维细胞(LFs)和肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)角化细胞生长因子(KGF)及其受体(KGFR)表达的影响.方法原代培养胎鼠肺LFs及AEC Ⅱ,待生长至亚汇合状态时,随机分为:空气组,空气+RA组,高氧组,高氧+RA组.于培养2、6、12、24、48(AECⅡ)和72 h(LFs)时,采用半定量RT-PCR方法检测KGF和KGFR的mRNA表达.结果与空气组比较,高氧2 h时,胎鼠LFs KGF mRNA表达即明显下降,6 h时达极点,以后下降趋势逐渐减弱,至48 h后已无显著性差异;高氧2、6、12和24 h时,其下降幅度分别为3.0、5.2、2.3和2.1倍(P＜0.05、0.01、0.01和0.05).RA可上调高氧状态下胎鼠LFs KGF mRNA表达,与高氧组比较,高氧+RA组在2、6、12和24 h时KGF mRNA表达分别是高氧组的2.4、3.4、1.7和1.8倍(P＜0.05、0.01、0.01和0.05).高氧对胎鼠AEC Ⅱ KGFR mRNA表达影响较小,与空气组比较,仅在高氧12 h和24 h时其表达量分别是空气组的2.3和1.3倍(P＜0.05);RA对AEC H KGFR mRNA表达没有影响.结论促进KGF的表达是RA发挥高氧肺损伤保护作用的重要机制之一.
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高氧、维甲酸对胎鼠肺角化细胞生长因子及其受体表达的影响
目的探讨高氧、维甲酸(RA)对胎鼠肺成纤维细胞(LFs)和肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)角化细胞生长因子(KGF)及其受体(KGFR)表达的影响.方法原代培养胎鼠肺LFs及AEC Ⅱ,待生长至亚汇合状态时,随机分为:空气组,空气+RA组,高氧组,高氧+RA组.于培养2、6、12、24、48(AECⅡ)和72 h(LFs)时,采用半定量RT-PCR方法检测KGF和KGFR的mRNA表达.结果与空气组比较,高氧2 h时,胎鼠LFs KGF mRNA表达即明显下降,6 h时达极点,以后下降趋势逐渐减弱,至48 h后已无显著性差异;高氧2、6、12和24 h时,其下降幅度分别为3.0、5.2、2.3和2.1倍(P＜0.05、0.01、0.01和0.05).RA可上调高氧状态下胎鼠LFs KGF mRNA表达,与高氧组比较,高氧+RA组在2、6、12和24 h时KGF mRNA表达分别是高氧组的2.4、3.4、1.7和1.8倍(P＜0.05、0.01、0.01和0.05).高氧对胎鼠AEC Ⅱ KGFR mRNA表达影响较小,与空气组比较,仅在高氧12 h和24 h时其表达量分别是空气组的2.3和1.3倍(P＜0.05);RA对AEC H KGFR mRNA表达没有影响.结论促进KGF的表达是RA发挥高氧肺损伤保护作用的重要机制之一.
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叶酸缺乏孕鼠子代脑组织DNA甲基化水平的变化
目的:探讨叶酸缺乏对胎鼠宫内脑发育的影响,研究叶酸缺乏孕鼠子代脑组织基因组DNA甲基化水平的改变,为叶酸缺乏造成脑发育障碍提供分子和细胞水平的依据.方法:雌性SD大鼠实验组30只、对照组20只,分别饲以不合叶酸和含2mg叶酸/kg的纯合饲料,两周后与雄鼠交配,于怀孕第20天对孕鼠剖腹取胎.对模型进行评价并观察叶酸缺乏对胎鼠发育的影响,高效液相色谱法检测胎鼠脑组织基因组DNA甲基化水平.对孕鼠妊娠晚期末血清叶酸、胎鼠血清叶酸及胎鼠脑组织DNA甲基化水平作相关分析.结果:1.实验组孕鼠交配前及妊娠晚期末血清叶酸均明显低于对照组,外周血出现多分叶核粒细胞.实验组胎鼠血清叶酸也明显低于对照组,出现巨幼红细胞,RBC和Hb均低于对照组,且伴有宫内生长限制.2.实验组胎鼠脑组织基因组DNA甲基化水平低于对照组,这种改变与孕鼠及胎鼠本身的血清叶酸浓度呈正相关.结论:1.交配前两周开始限食叶酸直至妊娠期结束,所建立的叶酸缺乏孕鼠动物模型处于叶酸缺乏第三阶段,其胎鼠宫内生长受限制,红细胞出现巨幼变,但没有产生神经管闭合的异常.这是较理想的妊娠中晚期叶酸缺乏的大鼠动物模型.2.母体叶酸缺乏时胎鼠的脑组织基因组DNA甲基化水平降低,这种改变与孕鼠及胎鼠本身的血清叶酸浓度呈正相关,可能是母体叶酸缺乏时胎鼠脑发育障碍的机制之一.3.受孕前后增补叶酸宜延长至妊娠结束,以减少不良妊娠结局的危险.
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叶酸缺乏孕鼠子代血细胞形态学改变及脑额区皮层超微结构表现
探讨叶酸缺乏对胎鼠宫内脑发育的影响、研究叶酸缺乏孕鼠子代胎鼠脑组织超微结构的改变及为叶酸缺乏造成脑发育障碍提供细胞水平的依据,及采用雌性SD大鼠实验组30只、对照组20只,分别饲以不含叶酸和含2 mg叶酸/kg的纯合饲料,两周后与雄鼠交配,于怀孕第20天对孕鼠剖腹取胎,对模型进行评价并观察叶酸缺乏对胎鼠发育的影响,应用透射电镜观察胎鼠额区皮层超微结构的改变.结果显示:1.实验组孕鼠交配前及妊娠晚期末血清叶酸均明显低于对照组,外周血出现多分叶核粒细胞.实验组胎鼠血清叶酸也明显低于对照组,出现巨幼红细胞,RBC和HB均低于对照组,且伴有宫内生长限制.2.实验组胎鼠额区皮层超微结构观察示:神经元出现核切迹、局灶性核周腔扩张、异染色质减少、胞质内细胞器肿胀、核糖体减少;某些胶质细胞亦见类似改变;神经毡膜性结构不完整.结论:1.交配前两周开始限食叶酸直至妊娠期结束,所建立的叶酸缺乏孕鼠动物模型处于叶酸缺乏第三阶段,其胎鼠宫内生长限制,红细胞出现巨幼变,但没有产生神经管闭合的异常.这是较理想的妊娠中晚期叶酸缺乏的孕鼠动物模型.2.母体叶酸缺乏能造成胎鼠皮层脑组织超微结构的改变,可能导致神经元功能的紊乱和丧失,以致防碍脑结构和脑功能的正常发育.3.受孕前后增补叶酸宜延长至妊娠结束,以减少不良妊娠结局的危险.
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宫内急性缺血缺氧后胎鼠肾脏表皮生长因子及其受体表达变化的研究
研究证实,外源性表皮生长因子(EGF)对防治缺血缺氧性肾损伤有重要作用.同时,对胚胎肾发育的研究表明,转化生长因子-α(TGF-α)对肾脏的发育和成熟起主要促进作用[1].EGF和TGF-α共同作用于一个受体--表皮生长因子受体(EGFR).研究肾组织EGF和TGF-α及其受体EGFR在宫内窘迫时的动态变化,无疑对指导临床应用EGF防治围生期缺血缺氧性肾损伤具有重要的指导意义.
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获得适龄小鼠胎鼠的方法
小鼠是小的哺乳动物,繁殖力强,寿命短、世代交替快[1],便于育种并在遗传、生理等方面和人类相似,病理学研究所得模式成果可运用在人类身上,因此小鼠已成为使用多的实验动物.胚胎发生基因的调控、胚胎神经的发生等实验都需小鼠胎鼠作为实验动物模型,小鼠内耳在不同胎龄具有特殊的发育特性,耳科研究中对胎鼠的胎龄要求十分严格,如在敲基因动物听囊发育的研究中,在与正常动物做比较时,取材时间不准将直接影响实验结果的可靠性.目前的实验动物中心一般不提供时间准确的孕鼠,因此给实验研究带来了诸多难题[2].
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bcl-2在腭裂胎鼠中间嵴上皮细胞的表达及意义
目的 研究地塞米松诱导的腭裂模型中腭突中间嵴上皮细胞(MEE)的变化及bcl-2基因表达,探讨MEE细胞凋亡与腭裂的关系.方法 孕鼠随机分为实验组和对照组.实验组在11.5孕期日腹腔注射地塞米松,对照组注射等量生理盐水.分别于12.5、13.5、14.5、15.5、16.5孕期日(GD)处死,胎头石蜡包埋,切片,行HE和免疫组化染色.结果 MEE细胞的形态变化:实验组和对照组12.5、13.5GD MEE细胞均为复层上皮,基底层细胞为立方形,表层覆以扁平细胞.对照组14.5GD MEE细胞在中线融合消失,实验组14.5～16.5GD MEE细胞继续生长变为多层,形成腭裂.免疫组化显示:12.5,13.5 GD实验组和对照组MEE细胞的bcl-2表达无明显差别;实验组14.5GD MEE细胞 bcl-2阳性信号明显强于对照组;15.5、16.5GD的阳性信号继续增强,而对照组MEE细胞消失.结论 地塞米松可以通过影响bcl-2基因的表达,抑制MEE细胞凋亡,终导致腭裂.
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雌激素受体及胆汁酸代谢相关基因在胆汁淤积孕鼠胎鼠肝脏中的表达
目的 探讨雌激素受体(estrogen receptor,ERα)与胆汁酸代谢相关基因胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)、胆固醇27α羟化酶(cholesterol 27-hydroxylase,CYP27A1)、胆固醇12α羟化酶(cholesterol 12α-hydroxylase,CYP8B1)mRNA在妊娠期肝内胆汁淤积孕鼠胎鼠肝脏中的表达及其意义.方法 将60只清洁级SD孕鼠自孕第13天均分为2组:对照组孕鼠皮下注射精制植物油2.0 mL*kg-1*d-1;研究组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇1.25 mg*kg-1*d-1.2组孕鼠分别于妊娠第13、17、21天断尾采母鼠血2 mL检测血清生物化学指标,于妊娠第21天处死.抽取母鼠、胎鼠血并提取母鼠、胎鼠肝脏组织.应用酶联免疫吸附试验检测2组孕鼠以及胎鼠血清中胆酸浓度;应用实时定量PCR技术检测各组胎鼠肝脏ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1的mRNA表达量.结果 ①胆酸指标比较:在妊娠第17天时对照组、研究组母鼠胆汁酸浓度分别为(24.6±1.3)μmol/L、(58.7±3.2)μmol/L,研究组母鼠胆汁酸浓度明显高于对照组(t=2.462,P<0.05);在妊娠第21天时对照组、研究组母鼠胆汁酸浓度分别为(26.5±3.1)μmol/L、(66.4±2.7)μmol/L,研究组母鼠胆汁酸浓度与妊娠第17天时研究组以及对照组相比(F=5.43,P<0.05),差异有统计学意义.②胎鼠肝脏CYP7A1 mRNA、CYP27A1 mRNA、CYP8B1 mRNA表达:研究组中CYP7A1 mRNA(1.25±0.01)、CYP27A1 mRNA(2.05±0.03)、CYP8B1 mRNA明显高于对照组(0.35±0.02、0.75±0.03、0.85±0.02),P值均<0.05,差异有统计学意义.③胎鼠肝脏雌激素受体的表达:研究组中ERα mRNA(0.75±0.02)明显高于对照组ERα mRNA(0.45±0.01).结论 妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)孕鼠胎鼠肝细胞ER、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1的表达升高,胆汁酸的合成与代谢调节机制存在障碍,可能是导致ICP胎儿围生期死亡发生的原因之一.
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鹿茸对孕鼠和胎鼠的影响
目的 本实验旨在探究鹿茸对孕鼠和胎鼠的影响.方法昆明小鼠随机分组,A组:♀48只,♂ 24只以♂∶♀=1∶2的比例合笼,孕第5天～第14天连续对雌鼠经口灌胃给3 mg·kg-1d-1、6 mg·kg-1d-1和12 mg·kg-1d-1剂量的鹿茸；B组:♀96只,♂ 48只,雄鼠连续给鹿茸(剂量同A组雌鼠)60d后,以♂∶♀=1∶2的比例合笼,从受孕率、孕鼠体重、死胎率、吸收胎率、胎盘重、子宫和胎鼠重以及胎鼠的外观、内脏和骨骼等方面进行检查.结果A组:在第18天时,高剂量组体质量、死胎率、吸收胎率、胎鼠外观、内脏和骨骼畸形率与对照组比较,具有统计学意义(P＜0.05)；随剂量的升高,胎盘重、子宫和胎鼠重有所降低,但没有统计学意义.B组:中剂量组与对照组之间比较,受孕率显著增加,具有统计学意义(P＜0.05)；随着剂量的增加各组死胎率、吸收胎率、胎盘重、子宫和胎鼠重无显著差异(P＞0.05)；各给药组与对照组比较,对胎鼠畸形没有造成影响.结论在本实验剂量范围内,高剂量组鹿茸在雌鼠妊娠期间可导致孕鼠体质量下降,死胎率、吸收胎率增加；胎鼠外观、内脏和骨骼畸形增加；中剂量鹿茸在交配前对雄鼠灌胃可提高受孕率,对胎鼠不造成畸形.
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观察副肿瘤神经综合征患者抗神经抗体(抗Yo抗体)对培养胎鼠神经细胞的影响
目的 观察副肿瘤神经综合征(paraneoplastic neurological syndrome,PNS)患者血清抗神经抗体(抗Yo抗体)对培养胎鼠神经细胞的影响,探讨其免疫学的发病机制.方法 实验组PNS患者抗Yo抗体阳性血清IgG、对照组血清IgG,添加到由胎儿鼠脑分离出的培养神经细胞,观察细胞形态变化及细胞凋亡的有无.对照组血清IgG为①AB型健康人标准血清;②无神经损害症状的抗Yo抗体阴性癌症患者血清.结果 添加抗Yo抗体阳性IgG的培养神经细胞互相融合,出现粗而长的突起相连的形态变化;未发现凋亡的神经细胞;细胞的边缘被细胞黏附因子N-Cadherin染色.结论 PNS患者血清抗Yo抗体直接作用于胎鼠神经细胞,未发现神经细胞的凋亡,而发现了神经细胞黏附因子的表达,由此推论PNS免疫学发病机制,可能不是抗体与抗原直接作用的结果,而是在血清中存在着抗体以外的某种物质参与了免疫反应.
