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妊娠肝内胆汁淤积症对胎鼠应激反应能力的影响及其意义的初步探讨
目的 了解妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)是否给胎鼠的应激反应能力带来影响,以及这种影响在ICP导致围产期并发症的病理生理学变化中所起的作用.方法 通过给孕15 d大鼠连续5 d皮下注射乙炔雌二醇(2.5 mg/kg·d)的方法建立ICP模型,测定催产素作用下孕鼠和胎鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮和硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)的浓度变化.结果 催产素对母鼠和胎鼠的ACTH水平没有影响.在催产素作用下,ICP组母鼠和胎鼠皮质酮水平均显著低于对照组(489.16 μg/L±103.70 μg/L与1132.21±208.48 μg/L,P＜0.01;191.92±18.86 μg/L与334.59±27.62 μg/L,P0.01),而母鼠和胎鼠DHEAS水平均显著高于对照组(7.30±2.74 μg/L与1.63±0.30 μg/L,P＜0.05;1.21±0.37 μg/L与0.23±0.06 μg/L,P＜0.01).病理检查发现,ICP组母鼠的肾上腺组织内皮质细胞弥漫性增生,增生多累及束状带和网状带,增生区内大片出血.胎鼠肾上腺皮质细胞也可见轻度增生.结论 在ICP大鼠动物模型中,发现胎鼠肾上腺功能受损,应激反应能力与正常胎鼠相比有下降.
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胎盘转运大鼠模型的改进及在丙泊酚研究中的应用
目的 研究丙泊酚在妊娠大鼠的胎盘转运(TPT)情况.方法 6只成功受孕的Sprague-Dawley大鼠.在妊娠第20天经母鼠尾静脉注射10 mg/kg丙泊酚,注射后15和120 min,采用内眦静脉取血法采集母鼠全血(母鼠组),断头取血法采集胎鼠全血(胎鼠组),测定pH值、动脉血二氧化碳分压(paCO2)、动脉血氧分压(paO2)和动脉血氧饱和度(SaO2);在丙泊酚注射后3～150 min时间段内,采用高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定母鼠和胎鼠的丙泊酚血药浓度.结果 注射丙泊酚后15 min时,母鼠组的paO2显著高于同组基础值(P＜0.05),而胎鼠组不同时间点的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).母鼠组的丙泊酚血药浓度在给药后3 min达峰值,以后逐步下降(趋势P＜0.01);胎鼠组的丙泊酚血药浓度在给药后15 min达峰值,以后逐步下降(趋势P＜0.01).胎鼠组在给药后3、5 min时的丙泊酚血药浓度显著低于母鼠组同时间点(P值均＜0.05),其余时间点间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 本研究简化了TPT模型的全血采集方法,缩短了给药后的采样间隔时间,操作方法切实可行,成功率高,能够满足对丙泊酚等体内快速代谢的麻醉药物TPT研究的需要.首次实现了妊娠大鼠中丙泊酚的TPT血药浓度测定,为在小动物中研究麻醉药物TPT情况提供了方法学依据.
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移植胎鼠间充质干细胞的抗衰老作用
本文旨在研究BALB/c小鼠胎鼠源干细胞同种异体移植的抗衰老作用.采用无菌剖宫产取胎鼠,密度梯度离心法分离干细胞,贴壁培养法纯化扩增间充质干细胞,连续3次尾静脉注射P1代细胞植入15月龄雌性BALB/c小鼠体内.超声检查小鼠心脏,检查血清总超氧化物歧化酶活力、丙二醛含量、谷胱甘肽过氧化物酶活力,各器官做解剖学检查以及组织学衰老程度比较、评分.结果显示,Y染色体原位杂交实验检测到移植后干细胞长期存活,移植后移植组小鼠存活日期明显长于对照组,移植3个月后评价心功能的各指标,心脏质量指数、脾脏质量指数,心脏、肾脏、肺脏、皮肤、结肠等器官组织学衰老程度评分结果以及血液生化指标,皆优于对照组(均P<0.05).以上结果提示,移植小鼠胎鼠源干细胞能有效地延缓小鼠衰老进程.
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胎鼠子宫内电穿孔检测胎鼠脑生物学形态指标
该课题对胚胎期12.5、13.5、14.5d的C57/BL6孕鼠胎鼠以不同的电压参数进行子宫内电穿孔，分析比较不同电压对不同胚胎期胎鼠的存活率，从而总结出适应胚胎期12.5、13.5、14.5d胎鼠的优电转电压参数。结果显示，胚胎早期，电转所需要的电压相对小一些，同样胚胎早期的胎鼠的存活率低一些。在E14.5胎鼠脑室单侧电穿孔电转带有PCDF-EGFP质粒。该质粒表达绿色荧光蛋白（GFP）。进一步分析了电转后不同天数转染细胞的迁移程度，结果显示，在电转后2d，转染阳性的细胞主要分布在脑室和中间带，而在转染后3d，转染阳性细胞在脑室、中间带及皮层均有分布。继而对电转后的皮层厚度进行了分析，结果显示，电转皮层的厚度与未进行电转的皮层没有明显区别。该结果为子宫内电转在皮层发育中的应用提供了技术支持，并表明子宫内电转可以应用在皮层发育研究中。
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盐酸戊乙奎醚通过 NF-κB 信号通路对胎鼠脑缺血-再灌注损伤的影响
目的：研究盐酸戊乙奎醚对宫内窘迫致胎鼠脑缺血-再灌注(IR)损伤的保护作用。方法足月胎鼠80只,体重4.52~4.81 g,采用随机数字表法分为四组：假手术组(S 组)、盐酸戊乙奎醚对照组(S+P 组)、IR 组和盐酸戊乙奎醚治疗组(IR+P 组),每组20只。采用钳夹孕鼠两侧子宫角血管的方法建立宫内窘迫模型,IR+P 组孕鼠建模前30 min 肌注盐酸戊乙奎醚2 mg/kg,S 组在假手术前予孕鼠肌注等量生理盐水,S+P 组在假手术前予孕鼠肌注等量盐酸戊乙奎醚。再灌注12 h 后,剖宫取出胎鼠并断头处死,行外周血血气分析；采用 TTC 染色法观察胎鼠脑梗死体积并计算脑梗死体积百分比；采用 HE 染色观察胎鼠脑组织病理改变；采用 ELISA 法检测脑组织中 TNF-α及IL-6的浓度；采用 RT-PCR 法检测脑组织中 NF-κB mRNA 表达；采用 Western blot 法检测胎鼠脑组织中 NF-κB p65蛋白表达。结果 IR 组和 IR+P 组 pH 和 PaO 2明显低于 S 组和 S+P 组,IR+P组 pH 和 PaO 2明显高于 IR 组(P <0.05)。IR 组和 IR+P 组 PaCO 2、Lac、脑梗死体积及梗死体积百分比、TNF-α及 IL-6浓度、NF-κB mRNA 表达水平、NF-κB p65蛋白水平均明显高于 S 组和 S+P 组(P <0.05),IR+P 组上述各指标均明显低于 IR 组(P <0.05)。IR+P 组脑组织病理学损伤明显轻于 IR 组。结论盐酸戊乙奎醚预处理可减轻宫内窘迫致胎鼠脑缺血-再灌注损伤,其作用机制可能与抑制脑组织 NF-κB 信号通路活性有关。
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邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对小鼠胎鼠睾丸及睾丸引带的影响
目的:研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对小鼠胎鼠睾丸与睾丸引带形态结构及功能的影响,探讨隐睾发生的可能机制. 方法:30只健康KM孕鼠随机均分为3组:空白对照组、玉米油对照组、DEHP组.DEHP组以剂量500 mg/(kg·d)的DEHP灌胃作用于怀孕12～19 d(GD12～GD19)的KM母鼠,观察DEHP对每胎胎鼠数、雌雄性胎鼠比例、雄性胎鼠体重、睾丸重量、睾丸引带形态结构、位置、睾丸到膀胱颈之间的相对距离(TBD)、颅侧悬韧带残留情况、引带内雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)、肌动蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平的影响. 结果:DEHP对每胎胎鼠数、雌雄性胎鼠比例、雄性胎鼠体重无明显影响;DEHP可影响胎鼠睾丸重量及TBD;DEHP组睾丸均有一定程度的下降不全,睾丸引带形态结构无明显差异;光镜下见DEHP组睾丸生精小管、支持细胞存在明显的发育障碍,睾丸Leydig细胞明显增生;DEHP组睾丸引带AR阳性表达率降低(P＜0.01). 结论:DEHP可通过抗雄激素效应导致睾丸引带功能障碍,使睾丸下降发生异常而诱导小鼠隐睾;同时造成睾丸Ser-toli细胞、睾丸Leydig细胞和生精细胞的发育障碍和功能改变.
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胎鼠皮肤无瘢痕愈合培养液优化及皮肤细胞增殖活跃区研究
目的 优化昆明远交系(KM)胎鼠皮肤无瘢痕愈合模型的培养液,定位并分析皮肤创伤愈合中细胞增殖活跃区.方法 取60只胎龄15d小鼠背部皮片180块,用无菌微创器在皮片上统一造创,随机等分到6组培养液中培养3d,包括高糖改良Eagle培养基(DMEM)组、DMEM+ 5％胎牛血清(FBS)组、DMEM+ 10％ FBS组、低糖Eagle培养基(MEM)组、MEM+ 5％ FBS组、MEM+ 10％ FBS组.HE染色后观察各组皮肤创口愈合情况,筛选适培养条件.在适培养条件下采用EdU细胞标记物定位皮肤创口愈合处细胞增殖活跃区,并用免疫荧光检测其中AP-1蛋白表达.结果 胎鼠微创皮片培养3d后,DMEM组、DMEM+ 5％ FBS组、DMEM+ 10％ FBS组、MEM组、MEM+ 5％ FBS组、MEM+ 10％ FBS组皮片愈合率分别为0、3.33％、6.67％、3.33％、46.67％、26.67％,6组皮片愈合率差异有统计学意义(x2=41.39,P＜ 0.05).两两比较显示,MEM+ 5％ FBS组皮片愈合率显著高于除MEM+10％ FBS组外的其他4组(均P＜0.01).logistic回归分析显示,MEM(OR=11.717,95％ CI 3.274～41.934,P＜0.001)及FBS浓度(5％ FBS:OR=24.625,95％CI3.027 ～ 200.299,P=0.003;10％ FBS:OR=13.449,95％ CI 1.618～111.813,P=0.016)均是促进胎鼠微创皮片愈合的因素.在MEM+ 5％FBS培养条件下,真皮和表皮愈合形态好,且创面处表皮无增厚现象.EdU细胞增殖标记分析显示,胎鼠皮肤的真皮乳头层和表皮基底层是创面愈合过程中两个主要的细胞增殖活跃区,同时AP-1蛋白在这两个细胞增殖活跃区也有大量表达.结论 MEM+ 5％ FBS为体外培养胎鼠皮肤创伤愈合的适培养液.胎鼠皮肤的真皮乳头层和表皮基底层是皮肤创伤愈合中两个主要的细胞增殖活跃区,在创面愈合过程中起到重要作用.
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胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞生长状况及ABCA3表达变化的初步研究
目的:观察原代培养胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡ alveolar epithelial cell,AECⅡ)的生长状况及AECⅡ特异性蛋白ATP结合盒转运蛋白A3 (ATP binding cassette transporter A3,ABCA3)的表达变化,为有关新生儿肺发育及肺部疾病的研究奠定一定基础.方法:采用胰酶联合胶原酶消化肺组织,差速离心及差速贴壁法纯化细胞；电子显微镜鉴定AECⅡ细胞;倒置相差显微镜观察不同时间点细胞生长状态;MTT法绘制细胞生长曲线；免疫荧光技术观察ABCA3动态表达变化.结果:电镜下观察到AECⅡ特征性板层小体,大小及数量不等,胞膜外缘分布有刺状微绒毛；MTT法测得铺板后第24、36、48、72、96、120 h的吸光度值分别为0.177±0.009,0.193±0.011,0.212±0.019,0.253±0.019,0.243±0.012,0.192±0.011.光学显微镜下细胞形态逐渐拉长,变扁平,细胞内颗粒逐渐减少.免疫荧光示ABCA3表达逐渐下降.结论:原代培养的胎鼠AECⅡ在培养早期生长状况佳,ABCA3表达丰富,故在早期(即培养72 h以内)进行肺发育疾病相关机制的研究较为理想.
关键词： 胎鼠 肺泡Ⅱ型上皮细胞 原代培养 细胞增殖 ATP结合盒转运蛋白A3 -
乌司他丁对宫内窘迫致胎鼠急性肺损伤的影响
目的:探讨乌司他丁对宫内窘迫致胎鼠急性肺损伤的影响,以期为临床上治疗宫内窘迫致新生儿呼吸窘迫综合征提供新的治疗方案.方法:健康孕20 d的SD大鼠16只,采用随机数字表法分为4组,每只孕大鼠取5只活胎鼠(n=20),分为对照组(C组)、乌司他丁对照组(S组)、宫内窘迫组(A组)、乌司他丁治疗组(U组).C组与S组为假手术组,A组和U组建立宫内窘迫模型,S组和U组在手术前30 min经孕大鼠股静脉注射乌司他丁50 000 U/kg.取胎鼠收集外周血行血气分析,测定胎鼠肺湿/干质量比值(W/D),HE染色观察胎鼠肺组织病理改变;Western blot方法测定肺组织NF-κB p65蛋白表达水平;ELISA方法测定肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α及白细胞介素(interleukin,IL)-6含量.结果:C组与S组胎鼠血气分析、W/D值、肺组织形态、NF-κB p65蛋白表达水平、TNF-α及IL-6含量差异均无统计学意义(P＞0.05);与C组相比,A组CO2分压(PCO2)、乳酸(Lac)含量明显增高,pH、氧分压(PO2)降低,W/D值增大,NF-κB p65蛋白表达水平增高,TNF-α及IL-6含量增多(P＜0.05),肺组织明显水肿充血;与A组相比,U组PCO2、Lac含量明显降低,pH、PO2增高,W/D值、NF-κB p65蛋白表达水平、TNF-α及IL-6含量降低(P＜ 0.05),肺组织水肿充血情况明显好转.结论:乌司他丁可降低胎鼠肺组织中NF-κB的细胞信号转导,减少TNF-α和IL-6等炎症因子的合成,抑制炎症反应,提高胎鼠血氧分压,减轻宫内窘迫造成的胎鼠急性肺损伤.
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宫内窘迫胎鼠脑组织葡萄糖调节蛋白78及胱冬酶9,12表达的改变
目的:探讨内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白(GRP)78及凋亡因子胱冬酶(caspase)-9,12在宫内窘迫致胎鼠脑缺血损伤中的作用.方法:制备胎鼠宫内窘迫模型,随机分为正常组(10只胎鼠)、假手术组(50只胎鼠)、缺血再灌注组(50只胎鼠).胎鼠脑组织行TUNEL染色,分析神经元凋亡情况;免疫组化法检测海马回CA1区GRP78及caspase-9,12蛋白的表达.结果:①宫内窘迫缺血再灌注可导致胎鼠脑神经元凋亡,且凋亡数量随再灌注时间延长而增加.②正常组及假手术组仅有GRP78,caspase-9,12蛋白微弱表达;缺血再灌注组GRP78于再灌注3h达峰值,之后逐渐下降;caspase-12于再灌注3h内表达量急剧上升,至12h达高峰;caspase-9则于血流恢复3h之后表达迅速增强,至12h达峰值.结论:宫内窘迫致胎鼠缺血缺氧性脑损伤可能与GRP78表达升高启动内质网自稳调节系统有关;内质网caspase-12凋亡通路的启动可能是脑缺血损伤的又一机制.
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妊娠期肝内胆汁淤积症对胎鼠生长发育影响的实验研究
目的:了解大鼠肝内胆汁淤积症对胎鼠生长发育的影响. 方法:给妊娠第16天的大鼠分别于颈后皮下注射苯甲酸雌二醇(5 mg/kg)和尾静脉注射游离胆酸(2.4 mg/kg),连续5天,制造两种妊娠期肝内胆汁淤积症模型,将该孕鼠于妊娠第21天在麻醉状态下剖腹,取胎鼠血、羊水、胎肝、胎盘. 结果:雌激素组晚期死亡胚明显增高(15.66%),21日龄胎鼠体重明显降低,胎血总胆酸(TBA)明显升高.胆酸组羊水中的TBA明显高于对照组,胎鼠体重与对照组差异不明显.病理学显示,两模型组胎盘水肿明显,绒毛变性坏死,并有大量中性粒细胞渗出. 结论:雌激素组可引起胎儿的高胆酸血症;胆酸组羊水中的TBA高于对照组,胎盘水肿、坏死明显,提示胆酸可影响胎盘功能.
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原儿茶酸防护百草枯致胎鼠中脑细胞损伤实验研究
目的：观察原儿茶酸（PCA）对百草枯（PQ）所致胎鼠中脑神经细胞损伤的保护作用。方法取胚胎大鼠进行中脑神经细胞分离培养，随机分为空白对照组、阳性对照组、PQ组及PCA高、低浓度组（100滋mol/L和50滋mol/L），分别给予神经生长因子（NGF）、PQ和PCA进行配组干预，接种第6天除空白对照组，另四组均加入PQ终浓度为800滋mol/L。接种第7天观察细胞生长状况。四唑盐（MTT）比色法检测神经细胞活性，抗酪氨酸羟化酶（TH）免疫荧光染色法测定多巴胺（DA）能神经元数量；TH免疫荧光染色比较各组阳性神经元数目及细胞核、轴突的变化情况。结果与空白对照组、阳性对照组、PCA组比较，PQ组细胞核固缩、破裂，细胞凋亡率升高；PCA高、低浓度预处理后，细胞存活率增加（P<0.05），细胞轴突损伤减少，细胞凋亡率降低，且具有量-效关系。结论 PCA对PQ诱导的中脑神经细胞凋亡具有抑制作用，该作用有浓度依赖性，提示PCA对胎鼠中脑神经细胞及DA能神经元有一定的保护作用。
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产前糖皮质激素应用对胎鼠脑发育的影响
目的:探讨产前应用不同剂量糖皮质激素(antenatal corticorsteriod theray,ACT)对胎鼠脑发育的影响.方法:对怀孕第17天的SD大鼠每天肌注地塞米松0.8 mg/kg,肌注1次的为1剂组、肌注3次的为3剂组和肌注4次的为4剂组,没有使用地塞米松的为对照组.对各组孕鼠所生的胎鼠,分别于生后第1、第7和第14天测量体重、全脑重量、脑细胞凋亡情况并与对照组作比较.结果:实验组胎鼠的体重、全脑重量较对照组明显下降,尤以4剂组明显;脑细胞凋亡数3剂组、4剂组与对照组在第1天有差别,第7天和第14天差别减弱.结论:ACT对胎鼠的体重、全脑重量、脑细胞凋亡等产生不良影响,剂量越大副作用越明显.
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中医药对脑缺血后内源性和体外培养胎鼠神经干细胞增殖分化的影响
神经干细胞(neural stem cells,NSCs)是一类兼分裂潜能和自我更新能力的母细胞,可以通过不对等的分裂方式,产生神经组织的各种细胞.传统认为,神经损伤后就不可再生,由于损伤而丧失的功能也难以恢复.Reynodls等人通过研究,首次成功证明了神经干细胞的存在,神经干细胞的概念也随之诞生.
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人巨细胞病毒先天性感染胎鼠大脑皮质钙调素基因mRNA表达的研究
目的研究先天性人巨细胞病毒(HCMV)感染致脑损害后钙调素(calmodulin,CaM)基因mRNA表达的改变,以探讨先天性HCMV感染所致脑损害的机制.方法选用10周龄Balb/c小鼠,雌雄小鼠腹腔内分别注射1.0ml、0.5ml、0.25ml HCMV后合笼交配以建立先天性HCMV中枢神经系统(CNS)感染小鼠模型,对照鼠腹腔注射1.0ml RPMI 1640液.剖腹取21天胎龄小鼠大脑皮质,以自行设计的CaM cDNA编码区的一对引物与一条CaM特异性探针,分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测CaM mRNA相对含量、用原位杂交检测大脑皮质细胞内相应mRNA的表达及定位.结果母鼠腹腔内接种HCMV量为1.0ml与0.5ml的临产胎鼠大脑皮质分离出相应病毒,病理学检查等确认发现了侵袭性脑膜脑炎性病理改变,证实HCMV可经小鼠宫内传播至胎鼠CNS.1.0ml组与0.5ml组胎鼠RT-PCR产物浓度明显高于0.25ml组及对照组,而1.0ml组与0.5ml组间亦有明显差异.电泳结果显示对照组与0.25ml组胎鼠未见阳性条带,而1.0ml组胎鼠特异性条带信号强于0.5ml胎鼠,仅略低于同组母鼠.原位杂交显示CaM mRNA不但出现在1.0ml组胎鼠大脑皮质大神经元胞核及胞浆内,在中小神经元及胶质细胞的胞核及胞浆亦有高密度表达,阳性细胞的突起中亦有弱信号存在.结论提示先天性感染HCMV胎鼠大脑皮质内CaM mRNA表达量明显增加,且神经元及胶质细胞均有表达,并与感染剂量有依赖关系.提示CaM mRNA表达增高可能直接参与了HCMV先天性感染脑损害的过程.
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模拟人类巨细胞病毒(HCMV)先天性中枢神经系统感染小鼠模型的建立
目的寻找适合的研究HCMV先天性CNS感染是过程的动物模型.方法将人巨细胞病毒(HCMV)接种至6～8周龄Balb/c雌雄小鼠腹腔后,交配.待雌鼠临产时剖腹取出胎鼠脑双侧大脑皮层,进行病毒分离,病理学检测及用地高辛标记的HCMV寡核苷酸探针对大脑皮层细胞压印片进行原位分子杂交检测.结果病理学结果证实,鼠脑为侵袭性脑膜脑炎性病理改变,并在神经细胞内发现病毒特征性的大的核内嗜碱性包涵体;原位杂交结果显示,病毒核酸存在于受染神经细胞及神经胶质细胞核内及胞浆内;在鼠脑组织上清液中分离出HCMV.且感染雌鼠所生子鼠死胎率及出生后一周内病死率明显高于正常对照组(P＜0.∞5).证明该病毒能侵袭Balb/c小鼠,并通过胎盘感染其子代的中枢神经系统(CNS).结论这种模拟人类HCMV先天性CNS感染的小鼠模型的建立所显示的许多相似的感染和病理过程,为进一步研究HCMV先天性CNS感染的病理过程和疫苗的应用提供了可能.
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父源性十溴联苯醚暴露下调雄性子鼠睾酮水平和精子数
目的 观察父源性( F0 代雄性小鼠)十溴联苯醚(PBDE-209)暴露对胎鼠(F1 代)体格发育状况及出生后70 (PND70)天F1 代雄性子鼠脏器系数、睾酮水平、精子数和睾丸组织形态的影响. 方法 4周龄雄性小鼠,按小鼠每日体重进行灌胃染毒,随机分为玉米油组( 0 mg/kg )、低剂量组(100 mg/kg)、中剂量组(300 mg/kg)和高剂量组(500 mg/kg) ,连续染毒6周. 染毒结束前1 d与健康雌鼠1: 2合笼,观察F1 代胎鼠体格发育和PND70天F1 代雄性子鼠脏器系数、睾酮水平、精子数和睾丸组织形态变化. 结果 高剂量组F1 代胎鼠体重、体长和肛殖距(肛门到生殖器距离)降低(P<0. 05),雌雄比增加(P<0. 05);与玉米油组比较,高剂量组PND70天雄性子鼠睾丸系数、附睾系数、肝脏系数、肾脏系数、附睾尾精子数和血清睾酮水平明显降低(P <0. 05);雄性仔鼠HE染色显示中、高剂量组精子数目减少,间质间隙明显增宽,基底室出现空腔,支持细胞和间质细胞数减少等. 结论 F0 代雄性小鼠暴露PBDE-209 可能会影响F1 代子鼠体格发育,还可能会使PND70天雄性子鼠的精子数、睾酮水平降低,以及睾丸形态结构发生改变.
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妊娠母鼠静脉注射葡萄球菌肠毒素B对胎鼠胸腺发育的影响
目的:观察妊娠母鼠静脉注射葡萄球菌肠毒素B(SEB)对胎鼠胸腺发育的影响.方法:将孕鼠随机分为实验组及对照组,每组12只;实验组和对照组孕鼠在妊娠第16天分别尾静脉注射SEB 15 μg和等体积的生理盐水;于妊娠21天打开母鼠腹腔取出胎鼠,称量胎盘、胎鼠及其胸腺的湿重和干重;胎鼠胸腺细胞以抗CD4-APC及抗CD8-PE双标染色后用流式细胞仪检测T淋巴细胞各亚群.结果:妊娠母鼠静脉注射SEB后可明显减少胎鼠胸腺的湿重和干重(P<0.01),减少CD4-CD8+、CD4+CD8+ T细胞(P<0.01和P<0.05),但明显增加CD4+CD8- T细胞(P<0.01);胎鼠和胎盘的干、湿重与对照组差异均无统计学意义(P>0.05).结论:SEB可明显影响胎鼠胸腺的发育.
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三磷酸腺苷二钠氯化镁对宫内窘迫胎鼠脑保护作用的研究
目的 研究三磷酸腺苷二钠氯化镁对宫内窘迫胎鼠脑组织自由基的影响和病理组织学变化,探讨三磷酸腺苷二钠氯化镁对宫内窘迫胎鼠脑组织的保护作用.方法 成年雌性Sprague-Dawley大鼠15只,孕鼠随机分为 Sham组、I/R组和T/M组三组,每组各5只.于妊娠第19天以3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉,通过无损伤动脉钳钳夹双侧子宫、卵巢血管20 min建立缺血缺氧宫内窘迫模型.T/M组缺血前30 min,45 mg· kg-1三磷酸腺苷二钠氯化镁腹腔注射,Sham组和I/R组于相同时间给予同等体积的0.9%氯化钠注射液.Sham组只进行开关腹手术,不钳夹子宫卵巢动脉.各组孕鼠缺氧20 min后拆除动脉夹以恢复血供,并逐层关腹.各组均于手术后24 h取标本.计算胎鼠死亡率.每组随机抽取10只胎鼠取脑组织制备标本,检测组织丙二醛水平;行HE染色高倍镜下观察胎鼠脑组织病理改变.结果 胎鼠死亡率:I/R组胎鼠死亡率明显高于Sham组(P<0.05);T/M治疗组胎鼠死亡率较I/R组显著降低(P<0.05).MDA含量:与Sham组比较,I/R组胎鼠脑组织MDA含量显著增高(P<0.05),但T/M组胎鼠脑组织MDA活性显著降低(P<0.05).结论 三磷酸腺苷二钠氯化镁能够减轻对宫内窘迫胎鼠脑组织细胞损伤,对缺血缺氧脑细胞有保护作用.
关键词： 三磷酸腺苷二钠氯化镁 胎鼠 缺血缺氧性脑损伤 宫内窘迫 丙二醛 -
胎鼠、新生大鼠原代海马神经元培养及鉴定
目的:建立胎鼠、新生鼠海马神经元体外培养方法.方法:分别取胎鼠、新生鼠海马,消化后种植,用含有2%B27的neurobasal培养液培养,第3天加入5 μmol·L-1的阿糖胞苷,换液后继续培养,以获得纯度较高的海马神经元.培养第3、7天观察细胞生长及突起情况,用neurofilament抗体以免疫荧光方法鉴定神经元细胞.结果:海马神经元种植24 h后贴壁,7天时神经元突起相互连接成网络.经neurofilament染色,培养细胞阳性率高,新生鼠原代培养海马神经元阳性率达(89±3.4)%,胎鼠海马神经元阳性率达(98±1.5)%.结论: 本方法培养出的胎鼠、新生大鼠海马神经元纯度较高,可作为海马神经元模型用于进一步研究.
