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氯化两面针碱对斑马鱼胚胎毒性的研究
目的 采用斑马鱼胚胎发育技术方法研究氯化两面针碱(Nitidine Chloride,NC)对斑马鱼胚胎的毒性效应.方法 将4 hpf发育正常的胚胎分别置于一系列含有不同浓度NC的胚胎培养液中进行培养,测定不同发育时间点斑马鱼胚胎发育的畸形率、死亡率、LD50和ED50.结果 随着药物浓度的增加,斑马鱼胚胎的死亡率、畸形率增加；随胚胎在含有药物的培养液中培养时间的增加,死亡率、畸形率增加.结论 NC的浓度与斑马鱼胚胎发育毒性存在明显的剂量-效应关系；NC作用时间长短与斑马鱼胚胎发育毒性亦存在明显的相关效应.
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氯化两面针碱对斑马鱼胚胎SOD和MDA的影响
目的 研究不同浓度的氯化两面针碱对斑马鱼胚胎中的SOD活性及MDA含量的影响.方法 用正常发育后6 h(6 hpf)的胚胎进行不同浓度(0.5、1、2和3 mg/L)的氯化两面针碱药物处理72 h.药物处理完毕后,测定胚胎72 h的SOD活力及MDA含量.结果 SOD在0.5 mg/L组中活力明显高于对照组(P＜0.01)；随着药物浓度的增加,SOD活力与对照组相比,明显下降(P＜0.01).MDA含量在1、2和3 mg/L实验组中,随着药物浓度的增加而显著增加；0.5 mg/L组中,MDA含量与对照组接近.结论 不同浓度的氯化两方针碱对斑马鱼机体中的SOD活力及MDA含量产生不同的影响,从而对胚胎产生保护或损伤作用.
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氯化两面针碱对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780 Taxol细胞耐药性的逆转作用
目的:研究氯化两而针碱(nitidine chloride,NC)对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780 Taxol细胞耐药性的逆转作用及机制.方法:氯化两面针碱干预A2780 Taxol后,应用MTT比色法检测多柔比星(adriamycin,ADM),依托泊苷(etoposide,VP-16),羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)对A2780Taxol细胞的抑制率;实时荧光定量PCR检测不同给药组对多药耐药基因(MDR1 mRNA)表达的影响;HE染色法观察肿瘤细胞结构的改变;TUNEL法分析其对细胞凋亡的影响.结果:耐药细胞A2780 Taxol对ADM,VP-16,HCPT的耐药倍数分别为1.87,1.07,3.25;经氯化两面针碱干预后,降低了A2780Taxol细胞对抗肿瘤药ADM,VP-16,HCPT的IC50值,可下降A2780 Taxol细胞的多药耐药(MlDR1)基因的表达,HE染色可见NC给药组改变了A2780 Taxol细胞的形态结构,TUNEL染色凋亡细胞明显增多,凋亡指数为(58.03±1.46)％.结论:氯化两面针碱能有效逆转A2780 Taxol多药耐药性,具有良好的抗肿瘤药物多药耐药逆转作用.
关键词： 氯化两面针碱 多药耐药性 A2780 Taxol细胞 逆转录 -
RP-HPLC法测定飞龙掌血中氯化两面针碱的含量
目的:建立RP-HPLC法测定飞龙掌血中氯化两面针碱的含量的方法.方法:采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水-0.2%磷酸二氢钠(30:40:30),检测波长328 nm,流速为1.0 mL·min-1.结果:氯化两面针碱的线性范围为0.03～0.48μg,r=0.9999.平均加样回收率为99.33%,RSD=3.30%.结论:该法简便、准确、重现性好,可用于飞龙掌血的质量控制.
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氯化两面针碱和羟基喜树碱对斑马鱼胚胎发育的影响
目的:研究氯化两面针碱和羟基喜树碱对斑马鱼发育的影响.方法:氯化两面针碱(NC)分成5.00,3.15,2.00,1.58,1.12 mg·L-1等5个含药剂量组,各组的DMSO终浓度为0.01％,并设含0.01％ DMSO的孵化液组及对照组(纯孵化液组).羟基喜树碱(HCPr)分为16.00,10.00,6.50,4.00,2.50 mg·L-15个含药剂量组,各组的DMSO终浓度为0.01％.并设对照组(纯孵化液组)及含0.01％ DMSO的孵化液组.在显微镜下将正常发育6 h(6 hpf)和48 h(48 hpf)的斑马鱼胚胎,随机分入以上各组中,每个实验组20颗胚胎.观察药物处理至72 hpf时,胚胎的死亡和畸形情况.结果:氯化两面针碱的6 hpf实验组中,半数致死浓度(LC50)为1.66 mg· L-1,半数致畸效应浓度(EC50)为1.33 mg·L-1;48 hpf实验组中,LC50为2.51 mg·L-1,EC50为2.02 mg·L-1.羟基喜树碱的6 hpf实验组中,LC50为4.21 mg·L-1,EC50为3.29 mg·L-1；48 hpf实验组中,LC50为7.70 mg·L-1,EC50为6.18 mg·L-1.斑马鱼胚胎的死亡率和畸形率随着氯化两面针碱和羟基喜树碱药物浓度的降低和给药时间的推迟而显著降低(P＜0.01).结论:6 hpf胚胎对氯化两面针碱和羟基喜树碱的药物敏感性均大于48 hpf;氯化两面针碱对斑马鱼胚胎的发育毒性大于羟基喜树碱.
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UPLC-DAD法研究栽培两面针不同生长期不同部位有效成分的动态累积
目的:研究栽培两面针有效成分在不同生长期及不同药用部位的动态累积规律,以期为两面针合理用药及人工优质栽培提供理论依据.方法:采用UPLC-DAD法,测定栽培两面针药材不同生长期、不同药用部位(根、茎、枝)中氯化两面针碱含量变化.结果:两面针根、茎、枝不同部位中均含有氯化两面针碱,但含量差异较大,依次为根＞茎＞枝条；不同部位、不同生长期两面针药材中氯化两面针碱含量呈规律变化,出现两个较明显的高峰及一个低谷,即5,10 ～ 11月含量较高,6月含量低.结论:两面针不同生长期,不同部位有效成分累积分布不同,根据其含量变化规律,建议两面针佳采收期在栽培第3年的10 ～ 11月,药用部位为根部.两面针全株植物均具有一定的药用价值.
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氯化两面针碱肠吸收研究
目的 评价两面针提取物在大鼠小肠内的吸收情况.方法 采用HPLC法测定体循环液中氯化两面针碱的含量,用UV法测定体循环液中酚红的量,用来校正小肠中水的吸收量,以准确计算药物的吸收量.结果 大鼠小肠对氯化两面针碱的吸收与药物浓度无关.结论 氯化两面针碱在体肠吸收是被动扩散.
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氯化两面针碱在兔体内的药代动力学研究
目的:建立高效液相色谱法测定兔血浆中的氯化两面针碱,并研究静脉注射氯化两面针碱在兔体内的药代动力学特点.方法:12只家兔随机分为2组,分别iv氯化两面针碱4,6 mg·kg~(-1),以氯霉素为内标,离子对试剂萃取技术对血浆样品进行预处理,高效液相色谱法测定血浆药物浓度,用3p97药代动力学软件进行房室模型拟合并计算药代动力学参数.结果:氯化两面针碱在0.03～2.04 mg·L~(-1)范围内线性关系良好,低、中、高3种不同质量浓度的方法回收率>95%,日内、日间精密度RSD均<6%.家兔静脉注射氯化两面针碱后,药时曲线符合二室模型,主要药代动力学参数在4,6 mg·kg~(-1) 2个剂量组中的T_(1/2α)分别为(5.46±0.89),(4.76±0.33)min;T_(1/2β)分别为(263.33±16.34),(274.71±16.52)min,AUC分别为(46.56±1.80),(69.19±2.30)μg·min~(-1)·mL~(-1).结论:首次建立了氯化两面针碱血药浓度的高效液相色谱法,方法简便、快速,结果准确、可靠;并首次阐明了氯化两面针碱在兔体内的药代动力学特点,在此剂量范围内氯化两面针碱的消除为线性动力学.
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氯化两面针碱减轻糖尿病肾病模型大鼠的肾脏损伤
目的 观察氯化两面针碱对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用,并探讨其可能作用机制.方法 将大鼠随机分为对照组、糖尿病肾病模型组(DN)、氯化两面针碱(NC)20和40 mg/kg干预组.在建模成功后灌胃氯化两面针碱,1次/d,一共给药7周.试剂盒检测血清中的胰岛素与胰高血糖素;过碘酸希夫(PAS)染色法观察肾脏组织病理形态学;原位末端标记法检测肾小球细胞凋亡;免疫印迹法检测肾组织中磷酸化Smad2与Smad3表达水平、TGF-β1与Smad7蛋白表达水平.结果 DN组大鼠的胰岛素含量低于对照组(P<0.05),胰高血糖素含量高于对照组(P<0.05);给予氯化两面针碱干预后,大鼠血清中的胰岛素含量增加,胰高血糖素含量下降;低剂量组肾脏的PAS染色呈弱阳性,可见弥漫性肾小球硬化,药物高剂量组无基底膜增厚及肾小管病变;肾组织中磷酸化Smad2与Smad3表达降低(P<0.05),TGF-β1与Smad7蛋白表达降低(P<0.05).结论 氯化两面针碱对糖尿病肾病大鼠肾脏具有一定程度的保护作用,其可能是通过抑制TGF-β/Smad信号通路发挥作用.
关键词： 氯化两面针碱 糖尿病肾病 肾脏 TGF-β/Smad信号通路 -
氯化两面针碱对胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响及初步机制
目的 探讨氯化两面针碱对胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响,并研究其可能的初步机制.方法 MTT法检测不同浓度氯化两面针碱(0、5、10、20和40 μmol/L)对胃癌细胞株SGC7901存活率的影响;Hoechst染色观察SGC7901细胞的形态学;Annexin V-FITC/PI双染法检测SGC7901细胞的凋亡;JC-1单标法检测细胞内线粒体膜电位变化;免疫印迹法检测caspase-3剪切体、caspase-9剪切体和PARP剪切体与其各自未激活体的蛋白表达变化.结果 SGC7901的存活率随着氯化两面针碱浓度的增加而逐渐下降,并与时间呈正相关;Hoechst染色与Annexin V-FITC/PI双染法结果分别显示氯化两面针碱干预后SGC7901细胞的凋亡特征更显著,细胞凋亡率明显增多;经过氯化两面针碱处理后,SGC7901细胞线粒体膜电位显著下降,caspase-3剪切体、caspase-9剪切体和PARP剪切体蛋白表达水平显著上升,其未激活体蛋白表达明显下降.结论 氯化两面针碱呈浓度依赖性抑制SGC7901细胞的存活率,增加细胞凋亡率,可能是通过激活内源性线粒体通路有关.
关键词： 氯化两面针碱 胃癌细胞株SGC7901 凋亡 线粒体 -
氯化两面针碱对肝癌细胞SMMC-7721 POLD1基因甲基化及细胞增殖影响研究
目的 探讨氯化两面针碱(nitidine chloride,NC)对肝癌SMMC-7721细胞POLD1基因甲基化及细胞增殖的影响.方法 不同剂量的NC(0.5、1.0和2.0 mg/mL)作用于人肝癌SMMC-7721细胞48 h后,采用焦磷酸技术、RT-PCR和CCK8方法分别测定不同剂量的NC对SMMC-7721细胞中POLD1基因甲基化率,mRNA表达及细胞增殖抑制率的影响.结果 不同剂量的NC处理肝癌细胞SMMC-7721 48 h后,实验组POLD1基因的甲基化水平整体上升,对照组与实验组甲基化率分别为4.26士0.49、4.14±0.75、4.90±0.64和5.67±0.77.采用方差分析,组间两两比较,1.0、2.0 mg/mL实验组与对照组相比较,甲基化率有明显的上升,差异有统计学意义,P值分别为0.041、0.001;0.5 mg/mL实验组与对照组相比差异无统计学意义,P＞0.05.实验组间两两比较,差异有统计学意义,P值＜0.05.对照组和实验组的POLD1基因mRNA相对表达量分别为1.02±0.81、0.83±0.19、0.44±0.09和0.49±0.23,呈下降趋势.秩和检验分析,组间表达差异明显;1.0、2.0 mg/mL实验组与对照组相比,差异有统计学意义,P＜0.001;0.5 mg/mL实验组与对照组相比差异无统计学意义,P＞0.05.实验组间两两比较,差异有统计学意义,P＜0.05.随着NC浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐增大,分别为21.1％、35.2％和92.1％,呈明显的剂量依赖性.结论 NC可能通过调节SMMC-7721细胞POLD1基因的甲基化水平,增强其启动子的甲基化,抑制POLD1基因表达,从而降低DNA聚合酶δ活性,达到抑制肝癌增殖的作用.
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单面针茎中氯化两面针碱和橙皮苷含量测定
目的 利用HPLC测定单面针茎中氯化两面针碱和橙皮苷的含量.方法 采用Agilent Zorbax SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),分别以0.02 mol/ml磷酸二氢钾:乙腈(74:26)、甲醇:水(40:60)为流动相,流速均为1.0 ml/min,柱温均为30℃,检测波长分别为328 nm和283 nm.结果 氯化两面针碱,橙皮苷分别在0.072～0.36μg和0.1472～0.736 μg范围内线性关系良好；平均回收率(n=5)分别为100.56％、100.86％.结论 该方法为单面针药材的质量控制提供实验依据,该方法具有简便、快速、准确、重现性好的特点.
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氯化两面针碱在体外对肝细胞L-02和肾细胞293增殖的影响
目的:观察氯化两面针碱在体外对人胃癌细胞7901、人鼻咽癌细胞cne1-1、人肾癌细胞ketr-3、人肝癌细胞BEL 7404的增殖抑制作用和对人胚肝细胞L.02和人胚肾细胞293的增殖影响.方法:采用MTT法检测不同浓度氯化两面针碱对4种肿瘤细胞和入胚肝细胞L.02及人胚肾细胞293增殖的影响,比较其IC_(50)值;采用紫外分光光度法测定氯化两面针碱作用后肝、肾细胞培养上清液中SOD,MDA,LDH值的变化.结果:氯化两面针碱在体外对肿瘤细胞具有较强的增殖抑制作用,同时对人胚肝细胞L.02和人胚肾细胞293有-定的增殖抑制作用.结论:氯化两面针碱能抑制多种肿瘤细胞的增殖,对肿瘤细胞有明显细胞毒性作用,同时可抑制人胚肝细胞L.02和人胚肾细胞293的增殖,对人体肝、肾细胞有-定的毒性.
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氯化两面针碱体外和体内的抗肿瘤作用
目的 观察氯化两面针碱(NC)的抗肿瘤作用.方法 采用MTT法观察NC体外对肿瘤细胞存活的影响.移植性S180肉瘤模型小鼠,ip给予NC,每天1次,共10 d,测瘤重,计算抑瘤率,并在电镜下观察移植瘤细胞的超微结构.腹水型H22肝癌模型小鼠,sc给予NC,每天1次,共10 d,观察小鼠的存活时间,计算生命延长率.结果 体外给予NC 0.625, 1.25, 2.5, 5.0和10.0 mg·L-1可浓度依赖性地降低人鼻咽癌细胞CNE1、人肺癌细胞SPC-A-1和人乳腺癌细胞MDA-MB-231等9种肿瘤细胞的存活率,作用48 h平均IC50为(3.33±0.28)mg·L-1.体内给予NC 2.5, 5.0和10.0 mg·kg-1对小鼠S180肉瘤的抑瘤率分别为 1.95%, 27.3%和42.9%,对腹水型H22肝癌小鼠的生命延长率分别为35.7%, 71.4%和85.7%.电镜下可见NC 10.0 mg·kg-1组S180移植瘤细胞核染色质浓缩并边缘化,核碎裂,胞浆空泡化明显.结论 NC体内外应用均具有明显的抗肿瘤作用.
关键词： 氯化两面针碱 抗肿瘤药 异种移植模型抗肿瘤试验 -
高效液相色谱法同时测定飞龙掌血中橙皮苷等4种化学成分的含量
目的 建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定飞龙掌血药材中橙皮苷、氯化两面针碱,白屈菜红碱,毛两面针素的含量.方法 采用优化色谱条件;色谱柱:Diamonsil-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.75％冰醋酸(B);梯度洗脱;检测波长:290 nm;流速:1.0 mL· min-1;紫外检测器检测;分别测出其峰面积,采用外标法定量;柱温:30℃.结果 飞龙掌血中橙皮苷、氯化两面针碱、白屈菜红碱、毛两面针素的线性范围分别为0.487 4～2.437 2μg(r=0.999 7),0.030 30 ～0.151 5μg(r =0.999 2),0.062 34 ～0.311 7μg(r=0.999 3),0.024 92 ～0.124 6μg(r =0.999 9);平均加样回收率(n=6)分别为100.76％(RSD 2.75％)、97.98％(RSD 1.25％)、100.07％(RSD 3.24％)、100.10％(RSD 3.83％).结论 该方法简便、快速、准确,重现性好,回收率高,可用于飞龙掌血药材中4种主要化学成分含量的测定,其结果可为其质量控制、合理用药及进一步研究开发提供参考.
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高效液相色谱法同时测定毛两面针药材中5种化学成分含量
目的 建立RP-HPLC同时测定17批毛两面针中木兰花碱、橙皮苷、氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱及毛两面针素的含量.方法 以两次不同浓度甲醇溶剂超声法提取药材；采用HPLC优化色谱条件；色谱柱:Diamonsil-C18柱(4.6 m×250mm,5μm)；流动相:乙腈(A)-0.2％磷酸加0.2％三乙胺水溶液(B),梯度洗脱;检测波长:273、283、328nm；流速:1.0 mL·min -1；DAD检测器检测；针对不同组分,选择其大吸收波长下的峰面积,采用外标法定量；柱温:30℃.结果 毛两面针中木兰花碱、橙皮苷、氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱、毛两面针素的线性范围分别为0.095 7 ～1.339 1μg(r=0.999 5),0.318 9 ～2.126 0 μg(r=0.999 8),0.039 7 ～0.264 8 μg(r =0.999 5),0.100 4 ～1.004 0 μg (r=0.999 9),0.108 0 ～2.160 0μg(r=0.999 9)；平均加样回收率(n=6)分别为100.2％ (RSD 1.5％)、99.8％ (RSD 2.4％)、97.1％(RSD 2.O％)、98.8％( RSD 2.2％)、101.6％ (RSD 2.6％).结论 该方法简便、快速、准确,重现性好,回收率高,可用于毛两面针药材中5种主要化学成分含量的测定,其结果可为其质量控制、合理用药及进一步研究开发提供参考.
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RP-HPLC法测定复方两面针含片中氯化两面针碱的含量
目的 建立反相高效液相色谱法测定复方两面针含片中氯化两面针碱的含量.方法 色谱柱为Shimadzu Class-VP-ODS C18色谱柱,流动相为乙腈-水-三乙胺-磷酸(21:79:1:1),流速为1.0mL·min-1,检测波长为271nm.结果 氯化两面针碱对照品在0.020～0.180μg·mL-1之间呈良好的线性关系,r=0.9996,氯化两面针碱的平均回收率为97.70%,RSD=0.61%(n=9).结论 本法操作简单、灵敏度高、结果准确、稳定性和重复性好,可用于复方两面针含片中氯化两面针碱的质量控制.
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HPLC法测定不同生长期两面针药材中氯化两面针碱
两面针是<中国药典>2005年版收载的常用中药,也是广西大宗主产优势中药材之一,其植物来源为芸香科植物两面针Zanthoxylum nitidum (Roxb.)DC.的干燥根.由于两面针具有良好的行气止痛、活血化瘀、祛风通络作用,故为常用药物,广泛应用于中医处方、中成药及精细化工产品中,两面针药材及其相关产品所属产业已经成为振兴广西经济的特色产业之一.为了更好地合理利用两面针药用资源,本实验对不同月份生长期两面针药材中有效成分氯化两面针碱的量进行考察,探讨两面针中氯化两面针碱成分的变化规律,以便对两面针药材的质量进行综合的评价.
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星点设计-响应面法优选龙钻通痹方总生物碱大孔树脂纯化工艺
目的 优选龙钻通痹方(LTR)总生物碱的佳纯化工艺.方法 采用5种型号的大孔树脂对LTR总生物碱进行吸附与解吸,以总生物碱的吸附量、吸附率和解吸率为指标,筛选出较佳大孔树脂;然后通过单因素考察和星点设计-效应面法优选LTR总生物碱的佳纯化工艺参数.结果 HPD100树脂纯化龙钻总生物碱的佳工艺条件为pH值1.7的生药质量浓度0.17 g/mL,以1mL/min体积流量上样,9倍柱体积80％乙醇以1mL/min洗脱.在该条件下,LTR总生物碱提取物中总生物碱的质量分数达到了22.23％,产品得率为173.27 mg/g.结论 HPD100型大孔树脂能较好地用于分离纯化LTR总生物碱,为进一步的药效学研究提供依据.
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HPLC 法测定飞龙掌血中氯化两面针碱的含量
目的:建立飞龙掌血中氯化两面针碱的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Phenomenex Gemini C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-1%三乙胺(磷酸调PH值3)(28:72),检测波长为273nm,流速为1.0ml·ml-1.结果:氯化两面针碱的线性范围为0.04～4.30μg(r=0.9998);浓度范围内进样量与峰面积线性关系良好.平均回收率为99.88%,RSD=1.10%(n=9).结论:所建方法简单、快速、准确,可用于飞龙掌血的质量控制.
