转基因烟草表达东亚钳蝎抗神经兴奋肽Ⅱ的研究
摘要： 研究将东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch)抗神经兴奋肽Ⅱ(ANEPⅡ)基因序列定向克隆到植物表达载体pBI121中,构建了植物表达载体pBI-ANEPⅡ.采用三亲交配法和液氮冻融法将重组质粒pBI-ANEPⅡ导入农杆菌中,获得了工程菌pBI-ANEPⅡ/LBA4404.通过农杆菌介导的叶圆盘法转化烟草叶片外植体,在含卡那霉素的培养基上进行转化体的筛选,获得了转基因烟草.通过PCR检测、RT-PCR和Western blotting鉴定,检测结果表明ANEPⅡ蛋白在转基因烟草植株中得到表达.
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珍珠提取液抑制过氧化氢诱导人皮肤成纤维细胞凋亡的研究
建立了过氧化氢(H2O2)诱导人皮肤成纤维细胞损伤及凋亡模型,并初步研究了珍珠提取液抑制过氧化氢诱导人皮肤成纤维细胞凋亡.利用过氧化氢诱导人皮肤成纤维细胞凋亡,实验分为5组,即对照、模型、阳性对照[维生素C(5.68 mmol/L)]和珍珠提取液原、低浓度组.采用cck8、Hoechst33258染色等方法检测过氧化氢诱导细胞后以及加入珍珠提取液后细胞形态以及细胞凋亡的状况;酶化学法测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量.与模型组相比,珍珠提取液原、低浓度组成纤维细胞的凋亡率显著降低,SOD水平显著升高,MDA含量显著降低(P＜0.01或P＜0.05).珍珠提取液可在一定程度上抑制过氧化氢介导的人皮肤成纤维细胞的损伤以及凋亡.
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连续流层析在单抗亲和层析中的应用
亲和层析作为单克隆抗体分离纯化的关键步骤,其工艺设计对生产效率和成本具有重要影响.对比批次层析和连续流层析两种工艺模式,以期提高亲和层析填料的使用效率,降低生产成本.采用GE公司(A)KTA PCC设备,对比考察两款亲和层析介质在批次层析及连续流层析两种生产模式下产品的关键质量属性,如聚合物、降解物、电荷异构体、工艺杂质残留等,以及关键工艺属性,如回收率、生产效率、填料量等.连续流层析工艺稳定,纯化回收率与批次层析接近.此外,尽管多根层析柱串联上样,洗脱中间体产品关键质量属性无明显差异,但生产效率明显提高,填料用量显著减少.与批次层析工艺相比,连续流层析可显著减少亲和填料的用量,减少缓冲液的消耗,显著提高生产效率,降低生产成本.
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子宫上皮细胞稳定性FH检测在宫颈癌及癌前病变筛查中的临床研究
评估子宫上皮细胞稳定性FH检测(简称FH检测)在宫颈癌、癌前病变及宫颈病变(包括宫颈癌及癌前病变)筛查中的临床价值.使用FH检测、宫颈液基细胞学检查(TCT)及人乳头状瘤病毒(HPV)检测3种检查方法进行宫颈癌、癌前病变及宫颈病变的筛查.对3种检查任一项或一项以上呈阳性的患者,进行阴道镜下宫颈活检术及病理检查.以病理结果为金标准,比较FH、TCT、HPV检测宫颈癌、癌前病变及宫颈病变的敏感度、特异度.TCT和FH检测宫颈癌、宫颈癌前病变及宫颈病变的敏感度差异无统计学意义(P值分别为0.303,0.492,0.672);HPV和FH检测宫颈癌的敏感度差异无统计学意义(P =0.649),检测宫颈癌前病变及宫颈病变方面,HPV的敏感度显著大于FH检测(P均＜0.01);FH检测宫颈癌、宫颈癌前病变、宫颈病变的特异度大于TCT、HPV(P均＜0.01).FH检测具有较好的检测敏感度、特异性,操作简便,可快速得到检测结果,成本低,可用于经济不甚发达地区及基层医院、诊所宫颈癌及宫颈癌前病变的筛查.
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弹性超声联合BRAF v600e基因检测对甲状腺恶性肿瘤术前诊断价值分析
为了探讨甲状腺弹性超声联合BRAF v600e基因检测对甲状腺恶性肿瘤术前诊断价值分析,采用回顾性研究,将术后病理诊断结果作为基本依据,用卡方检验比较弹性超声,BRAF v600e基因检测以及联合应用对甲状腺恶性肿瘤术前诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、诊断符合率、漏诊率.共纳入手术确诊病例161例,其中恶性结节共139例,良性结节22例.恶性结节中甲状腺乳头状癌128例,滤泡性癌11例,术前甲状腺细针穿刺细胞病理学检测(Fine needle aspirationcytology,FNAC)准确率为79.5％.结果显示弹性超声、基因检测、联合应用对甲状腺恶性结节术前诊断的敏感性分别为87.76％,85.61％,92.8％;特异性分别为63.63％,90.9％,54.54％;诊断符合率分别为84.47％,86.33％,87.57％,其中弹性超声的灵敏性(87.76％)虽高于基因检测的灵敏性(85.61％),但差异无统计学意义(P ＞0.596),而基因检测的特异性(90.90％)显著高于弹性超声的特异性(63.63％)(P＜0.05),诊断符合率比较基因检测(86.33％)高于超声(84.47％),但无统计学差异(P＞0.5).联合诊断的漏诊率(7.19％)显著低于基因检测(14.38％)(P＜0.01),联合诊断的误诊率(4.5％)显著低于弹性超声(36.37％)(P＜0.01).BRAF v600e基因检测对甲状腺恶性肿瘤特异性高,联合弹性超声检查,可进一步提高术前检出率,降低漏诊率,为临床提供参考.
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重组人溶菌酶滴眼液无菌检测方法学研究
实验旨在建立重组人溶菌酶滴眼液的无菌检测方法,并对该方法进行方法学验证,用于重组人溶菌酶滴眼液的质量控制.检测重组人溶菌酶滴眼液的抑菌活性,后依据《中华人民共和国药典》2015版四部通则1101无菌检查法,进行培养基灵敏度和薄膜过滤法方法适用性验证,检测重组人溶菌酶滴眼液是否符合无菌要求.经验证,重组人溶菌酶滴眼液对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌均有不同程度的抑菌作用,培养基的灵敏度符合要求,薄膜过滤法可用于重组人溶菌酶滴眼液的无菌检测,连续3批的重组人溶菌酶滴眼液无菌检查结果均符合规定.该方法可用于重组人溶菌酶滴眼液的无菌检测.
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抗缪勒氏管激素量子点荧光免疫检测试剂的性能评价
抗缪勒氏管激素(AMH)是由卵巢窦前卵泡和小窦卵泡的颗粒细胞所分泌的一种糖蛋白,对于卵泡发育具有重要的调节作用,其血清水平直接受发育中窦卵泡的数量的影响,因此能够直接反映卵巢储备功能.对抗缪勒氏管激素(Anti-Muellerian hormone,AMH)量子点荧光免疫法床旁快速检测试剂进行性能评价,判断其是否可以满足临床需求,并评估该试剂是否可以准确检测女性的卵巢功能.基于量子点荧光免疫层析技术制备AMH全血检测试剂盒,建立AMH全血检测体系,评估该检测试剂的日间和日内精密度、定量限和线性范围,验证了该试剂与Beck-man化学发光法AMH检测试剂的量值一致性以及该试剂诊断卵巢相关疾病的准确性.该试剂盒日内和日间精密度均小于15％;定量限＜0.1 ng/mL,线性范围为0.11～16.1 ng/mL.该试剂与Beckman化学发光法AMH检测试剂的相关系数为0.96.对表面健康人群、卵巢早衰(Premature ovarian failure,POF)患者和多囊卵巢综合征(Polycysticovary syndrome,PCOS)患者的血清AMH浓度的结果表明该方法诊断卵巢早衰的准确度为100％,诊断PCOS的特异性和灵敏度分别为91.1和95.2％.AMH量子点荧光免疫法床旁快速检测试剂具有良好的性能,且能够准确评估患者卵巢功能,对于不孕患者的病因筛查、快速诊断及医生制定治疗方案的指导具有重要价值.
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分段控制溶氧提高裂殖壶菌生产DHA效率
为提高裂殖壶菌发酵生产DHA的水平,研究发酵溶氧水平对菌体生长,油脂含量及组成和DHA积累的影响,在摇瓶水平上,通过控制装液量和转速的相对定性的方法研究相对溶氧对裂殖壶菌发酵培养的影响,在此基础上,发酵罐中利用搅拌和通气控制溶氧对裂殖壶菌代谢进行调控.结果表明,在摇瓶发酵中,装液量为50 mL/250 mL时裂殖壶菌油脂含量、DHA产量及生物量均为较佳水准,分别为15.77,7.70,39.50 g/L.当溶氧水平太高或者太低的时候,对DHA的积累都会产生不利影响.转速为200 r/min时裂殖壶菌油脂含量、DHA产量及生物量为高,分别为15.68,7.49,38.66 g/L.在发酵罐发酵水平上考察相对低溶氧和相对高溶氧对裂殖壶菌发酵的影响,发现随着搅拌转速的提高,油脂积累量、DHA产量和菌体生物量均得到很大提高,但过高的转速(600 r/min)剪切力较大,不利于细胞积累.通过实验发现过高或过低的溶氧水平对DHA的积累会产生不利的影响,这与摇瓶培养裂殖壶菌所得结果相符,而分段控氧策略利于菌体生长和油脂积累,下一步将继续优化分段调控策略,对裂殖壶菌的工业化发酵生产DHA奠定理论与实践基础.
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临床药师干预利妥昔单抗治疗淋巴瘤致间质性肺病1例并文献复习
为了提高对利妥昔单抗导致肺损伤的认识,对1例淋巴瘤患者接受利妥昔单抗化疗后致间质性肺病的临床资料进行分析.接受了含利妥昔单抗方案的化疗,患者出现咳嗽咳痰、胸闷气喘,低氧血症,胸部CT表现为斑片磨玻璃影,通过糖皮质激素治疗临床症状明显改善.复习文献,利妥昔单抗导致间质性肺病的发生率近年有增加趋势.随着利妥昔单抗的广泛应用,其导致的肺损伤已非罕见.患者在病程中突发的肺部病变应注意排外药物因素,越早使用糖皮质激素治疗是决定预后的关键.
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多肽Cbf-14的体外抗菌活性研究
多肽CbG-14是由14个氨基酸组成的抗菌肽,该课题研究了其对临床常见的G+和G-细菌的抑菌活性.通过琼脂平板稀释法和微量肉汤稀释法测定了多肽Cb-14对临床常见菌株的低抑菌浓度(MIC)和低杀菌浓度(MBC);通过改变接种量,培养基pH,研究不同条件对多肽Cbf-14抑菌活性的影响.体外抗菌活性实验结果表明,多肽Cbf-14对多种临床常见敏感和耐药细菌均有良好的抑菌活性,对部分耐药菌株的MIC为16 μg/mL,且能在4～8h内快速杀灭细菌,同时pH稳定性好;通过耐受诱导试验研究多肽Cbf-14是否容易诱导细菌耐药.结果表明,不同细菌在亚抑菌浓度的Cbf-14中连续诱导10代后,MIC值基本保持不变,说明Cbf-14不容易诱导细菌耐药;研究结果提示其可以作为临床抗耐药细菌感染的候选药物.
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RGD修饰的白蛋白-多柔比星纳米粒子的制备及抗肿瘤活性研究
合成精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环状三肽(RGD)修饰的白蛋白-多柔比星纳米粒子(RGD-HSA-DOX),初步评价其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及体内生物分布.以组织蛋白酶B反应性肽段GFLG连接HSA和DOX,经RGD修饰后由白蛋白自组装形成载药纳米粒子,动态光散射和透射电镜检测粒径;在MCF-7细胞中,荧光光谱测定体外释放,CCK-8试剂盒检测细胞毒性,流式检测细胞摄取和凋亡,并通过荷瘤小鼠模型初步观察其体内生物分布.实验结果显示,RGD-HSA-DOX组装形成粒径120 nm左右的纳米粒子,具有良好的稳定性、木瓜蛋白酶响应性,易被细胞摄取,可抑制MCF7细胞增殖和诱导细胞凋亡,对肿瘤组织的靶向性优于多柔比星.RGD-HSA-DOX纳米粒子可作为潜在的化疗药物用于乳腺癌等肿瘤的治疗.
