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FMR1基因CGG重复序列多态性与不明原因早期自然流产的相关性研究
目的 探讨脆性X智力障碍基因1(FMR1)基因CGG重复序列与不明原因早期自然流产发病机制的相关性.方法 收集2015年5月1日至2018年4月1日在北京妇产医院计划生育科就诊的难免流产或需行清宫操作的2000例患者为自然流产组;同期在北京妇产医院产科就诊的1480例顺利分娩女性为对照组.两组患者均于孕早期或孕中期抽取外周血,提取基因组DNA,应用FMR1基因Amplide X检测技术进行FMR1基因CGG重复序列数检测.比较两组CGG重复序列情况并加以分析. 结果 (1)所有对象的FMR1基因检测未检出全突变病例;自然流产组中CGG重复大频率等位基因n=30(32.95％),其后依次是29(31.15％)、36(15.60％)、31(5.85％);对照组CGG重复大频率等位基因为n=30(33.24％),其后依次为29(25.47％)、36(14.73％)、31(8.38％).自然流产组及对照组CGG重复位点均数比较无显著性差异[(29.33±5.19) vs.(28.73±6.37)](P＞0.05).(2)自然流产组FMR1基因中间型携带率为1∶ 222,对照组1∶247,组间比较无显著性差异(P＞0.05).自然流产组的脆性X综合征前突变携带频率(1∶400)显著高于对照组(1∶740)(P＜0.05). 结论 FMR1基因CGG重复序列前突变与不明原因早期自然流产可能存在相关性.
关键词： FMR1基因 脆性X综合征 CGG重复序列多态性 自然流产 -
FMR1基因CGG重复序列频度与反复生育失败或卵巢早衰妇女的相关性研究
目的 通过FMR1基因的CGG重复序列的检测探究中国大陆妇女反复生育失败和卵巢早衰的原因.方法 本次全国多中心的横断面研究根据异常生育病史和卵巢功能将入选妇女分为3组:A组(不明原因反复生育失败妇女)、B组(卵巢早衰患者)、C组(家族中有自闭症及不明原因智力低下儿出生史的妇女).测定FMR1基因CGG-重复序列.结果 本研究共入组2 334例患者,其中A组2 216例,B组70例,C组48例.常见的CGG重复次数是30(718例,占33.8％)和29(669例,占28.7％).共发现16例前突变和15例灰区,无全突变.前突变的总发生率为1∶ 146,分别是A组为1∶ 369(6/2 216)、B组为1∶ 35(2/70)、C组为1∶6(8/48).结论 反复生育失败和卵巢早衰妇女的FMR1基因前突变携带者发生风险较高,对这些人群进行FMR1基因筛查,可以帮助医生从基因的角度为她们提供更好的生育咨询.
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脆性X染色体综合征的生殖遗传研究进展
脆性X染色体综合征(FXS)为多数精神发育迟滞和孤独症患者所共有,同时也与人类生殖密切相关.减数分裂期X染色体长臂脆性X智力低下-1(FMR1)基因全突变可导致智力低下和孤独症,而前突变可导致震颤、共济失调、青春期后巨睾症和卵巢早衰(POF).FMR1突变基因具有扩展CGG核苷酸序列和超甲基化[1,2].超甲基化区域FMR1基因复制很少,故相关基因产物不足是导致FXS发生的重要原因[3].有研究显示检测FMR1基因重复区CGG重复数和5’端CpG岛是否甲基化可快速筛查和诊断FXS[4].FMR1基因全突变发病率男性为1/4 000,女性为1/8 000[5];前突变在女性中发病率为1/130～1/260,在男性中发病率为1/250 ～1/810[6].地区、种族、环境背景不同,发病率会有所差异.Cronister等[7]的研究显示前突变在中国人中较少见,与之相比,其在中东地区特别是以色列较为常见.为具有家族特征的前突变和全突变携带者提供孕前遗传优生咨询,通过制定系统的有效生殖策略提高出生人口素质.
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一种脆性X综合征新检测方法的应用及探讨
目的 建立一种更快捷、准确、简便的检测脆性X综合征的方法.方法 用传统的基因组酶切-PCR法与TP-PCR法同时对26例可疑患儿进行基因检测.结果 基因组酶切PCR法共检测4例男性患者,其余均未见异常;TP-PCR法不仅检测出4例男性患者,且检测出1例女性携带者.结论 TP-PCR法是一种准确、快速、简便和相对价廉的方法,可以快速筛查脆性X综合征的基因诊断方法.
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Fmr1基因在大鼠快速眼动睡眠剥夺后脑皮质、海马和丘脑区的表达
目的：探讨快速眼动（ REM）睡眠剥夺过程中Fmr1基因在大鼠皮质、海马和丘脑区的表达及变化。方法采用改良多平台水环境法（ MMPM ）制作大鼠睡眠剥夺模型，采用免疫组织化学法及RT-PCR方法检测Fmr1基因的表达变化。结果在皮质和丘脑中，与CC组和TC组相比，SD1d和SD2d组的Fmr1基因表达无明显变化，SD3d组开始增高（P＜0.05），SD5d、SD7d组和SD9d组显著增高（P＜0.01）；在海马中，与CC组和TC组相比，SD1d和SD2d组的Fmr1基因表达无明显变化，SD3d组开始降低（P＜0.05），SD5d、SD7d组和SD9d组显著降低（P＜0.01）。结论Fmr1基因在大鼠睡眠剥夺第3天开始表达发生变化，在皮质和丘脑中表达增高，在海马中表达降低。
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雌性Fmr1基因敲除小鼠生殖功能的初步研究
目的 初步研究敲除Fmr1基因对动物生殖功能的影响.方法 6～8周龄雌性Fmr1基因敲除小鼠24只,分为对照组、春季超排组和冬季超排组,每组8只,进行超排,用放射免疫分析法测定超排前后血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、促黄体生成素(LH)和促卵泡生成素(FSH)含量,以及不同季节的超排卵数,并进行统计学处理和分析.结果 超排后小鼠血清中P和LH含量明显增加[(24.43±13.33)比(1.60±0.46);(173.86±112.09)比(0.36±0.23),P＜0.01].与冬季(11.44±5.93)比较,春季(37.25±13.91)的超排卵数明显增加(P＜0.01).结论 雌性Fmr1基因敲除小鼠的生殖系统功能没有明显异常.与正常小鼠一样,Frm 1基因敲除小鼠机体内P和LH的分泌随动物的生理发育时期而变化.其超排效果随季节而有显著不同.
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基于荧光聚合酶链反应的脆性X综合征产前筛查技术的建立
目的 建立针对脆性X综合征FMR1基因CGG重复数的快速产前检测技术方法,用于基于人群的筛查.方法 采用荧光PCR法对356名孕妇进行产前FMR1基因CGG重复数检测.结果 本方法可检测CGG重复数小于130的携带者,共275例(77.25％)毛细管电泳结果显示为2组峰,提示为杂合型基因型,可明确诊断.81例(22.75％)仅见到一组峰,提示可能为纯合子,也可能为CGG重复数高于130的携带者.结论 基于荧光PCR的检测技术,临床上可实现近80％孕妇FMR1基因CGG重复数精确、快速的初筛,剩余病例的明确诊断尚需其他技术辅助.
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FMR1基因突变与卵巢储备功能相关性的研究进展
脆性X智力低下(fragile X mental retardation 1,FMR1)基因又称家族性智力低下基因,位于染色体Xq27.3;1991年由Verkerk等[1]成功分离、克隆,并发现当FMR1基因5’端非翻译区(CGG)n重复序列异常扩增时,其蛋白产物——FMRP(主要在大脑和睾丸组织中表达)显著减少,揭示了脆性X综合征发生的分子机理.目前,国际上普遍认为,正常( CGG)n重复次数集中在29～30次之间,45 ～ 54次之间定义为中间带(intermediate),55 ～ 199次之间定义为前突变(premutation),＞200次为全突变(full mutation).FMR1基因全突变携带者中,80％的男性和30％的女性会发生脆性X综合征[2].
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FMR1基因与卵巢早衰的相关性
卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)是女性不孕的常见原因之一,其病因及发病机制尚未完全明确.近年来对脆性X智力低下1基因(fragile X mental retardation gene 1,FMR1)的研究发现,FMR1基因与POF之间存在相关性.本文将详细阐述FMR1基因出现突变如何增加POF的发病风险,并对其可能存在的作用机制进行综述分析.
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F M R1 基因缺失对生殖功能的影响的小鼠实验研究
目的:研究和讨论 FM R1基因缺失对小鼠生殖功能的临床影响情况. 方法 :随机抽选实验室提供的 FM R1 基因敲除雄鼠20 只作为观察组 ,同时抽选同期的野生 FVB雄鼠20只作为对照组.将它们分别同30只野生 FVB雌鼠进行合笼 ,并对两组雄鼠的生殖功能情况以及雌鼠生育情况进行统计学比较和分析.结果 :两组雄鼠在各项精子指标、血清性激素水平以及平均产仔数等方面的对比差异性不大 ,比较均不存在统计学意义(P>0 .05).但观察组的雌鼠受孕率以及雄性生育率明显低于对照组 ,两组对比的差异性显著 ,均具有统计学意义(P< 0 .05). 结论 :FMR1 基因缺失会显著降低雄鼠的生育率 ,但对精子指标、性激素水平等的影响不大.
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脆性X综合征的分子生物学研究进展
脆性X综合征是常见的遗传性智力低下性疾病,它是正常FMR1基因5'端非翻译区(CGG)n大量扩增的结果.脆性X综合征的患者(CGG)n三核苷酸串联重复序列扩增和异常甲基化,引起FMR1基因失活,导致FMR1蛋白(FMRP)的缺失引起智力低下.FMRP是一种联系核和细胞质之间的RNA结合蛋白.这种蛋白与蛋白质转运,及多聚核糖体和内质网的功能有关.本文综述了(CGG)n扩增的分子机制研究和FMRP生物学功能研究的进展.这些研究不仅对探索人类疾病中三核苷酸重复扩增的分子基础有帮助,并且对认识人类认知和智力方面也能提供依据.
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应用FMR1基因检测脆性X综合征
脆性X智力低下综合征(fra X)是发病率仅次于先天愚型的常见的遗传性智力低下疾病[1].Fra X的遗传方式是X连锁遗传,占X连锁遗传性智力低下的40%[2].Fra X综合征在群体中,男性患病率为1/1 250,女性患病率为1/2 000,平均人群患病率为1/850.Fra X女性中的携带者频率为1/700.我国年出生婴儿2 000万,计算起来我国每年将出生fra X患儿2.3万,Fra X携带者1.4万,这将严重影响我国人口素质.本文应用Southern杂交的方法对智力低下患儿和有智力低下阳性家族史的孕妇进行FMR-1基因检测,这将对防止fra X的患儿出生,提高我国人口素质有很重要的意义.
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用不提取核酸PCR扩增孕妇血浆中胎儿游离DNA的SRY和FMR1基因
目的 建立一种不提取核酸的孕妇血浆中胎儿游离DNA的检测方法.方法 构建不提取核酸PCR法,用巢式PCR扩增Y染色体上的SRY基因序列和X染色体上的FMR1基因序列,检测44例孕妇血浆中游离DNA.根据随访判断结果的准确性.结果 44例孕妇经随访确认24例有男性胎儿,20例有女性胎儿.24例孕男性胎儿的孕妇血浆标本中有21例扩增出SRY基因和FMR1基因,敏感性为87.5％ (21/24)；20例孕女性胎儿的孕妇血浆标本中有17例扩增出FMR1基因,敏感性为85.0％ (17/20).结论 建立的不提取核酸PCR法具有快速、简便等优点,可用于性连锁遗传病的产前诊断.
关键词： 胎儿游离DNA SRY基因 FMR1基因 不提取核酸聚合酶链反应 -
光信号对Fmr1 KO小鼠睡眠-觉醒的调控作用
目的 探讨光授时信号对脆性 X 智力低下基因型(Fmr1 KO)小鼠睡眠-觉醒的影响.方法 采用小鼠脑立体定位技术埋置脑电和肌电电极,记录和分析在不同光照条件下Fmr1 KO小鼠和野生型(WT)小鼠的睡眠-觉醒节律的变化.结果 Fmr1 KO 小鼠和 WT 小鼠在正常光照(12 h:12 h明暗,即8:00 am开灯,8:00 pm关灯)条件下的觉醒和睡眠均呈现一致的昼夜节律现象,且二者之间差异无统计学意义;与正常光照的同样时间段相比较,9:00 am～11:00 am关灯期间,Fmr1 KO小鼠和WT小鼠的觉醒量均显著增加(P＜0.05),且在9:00 am～10:00 am变化极显著(P＜0.01),但Fmr1 KO小鼠觉醒的增加量明显低于WT小鼠(P＜0.05);与正常光照的同样时间段相比较,9:00 am ～11:00 am关灯期间,Fmr1 KO小鼠和 WT小鼠的慢波睡眠(SWS) -觉醒(W)、W-SWS和SWS-快波睡眠( FWS)时相转换量都显著增加(P＜0.05),其中在9:00 am～10:00 am极显著增加(P＜0.01).结论 相比于WT小鼠,Fmr1 KO小鼠的睡眠-觉醒受光信号改变的影响有所减弱.
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脆性X相关的震颤/共济失调综合征
脆性X相关的震颤/共济失调综合征是一种累及多系统的神经功能障碍性疾病.它对广大临床医生是一个全新的概念,对脆性X相关的震颤/共济失调综合征的有关知识的认识,能够对该综合征作出正确的诊断.下面就对脆性X相关的震颤/共济失调综合征的分子基础、基因检测、临床表现、特征性的影像学及病理学表现等方面的一些研究进行了综述.
关键词： 脆性X相关的震颤/共济失调综合征 FMR1基因 -
Fmr1小鼠的跳台实验和海马哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的关系
目的 观察Fmr1基因敲除(KO)小鼠跳台实验行为及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的变化,探讨mTOR与KO小鼠学习记忆能力的关系.方法 利用PCR技术鉴定20只4周龄FVB近交系KO及20只野生型(WT)小鼠,随机分为行为学前WT组、行为学后WT组、行为学前KO组和行为学后KO组.通过避暗实验测试行为学WT及KO组小鼠的学习记忆能力,Western blot检测各组海马区p-mTOR及mTOR表达的变化.结果 跳台实验第1天KO鼠的潜伏期较WT鼠短,错误次数较WT鼠多.跳台实验第2天KO鼠的潜伏期较WT鼠短,错误次数较WT鼠多.Western blot检测显示:KO鼠空白组mTOR表达较WT鼠空白组增高(P＜0.05);KO鼠空白组P-mTOR与WT鼠空白组相比表达增高(P＜0.05).结论 Fmrp对mTOR信号通路具有负性调节作用;Fmr1基因敲除小鼠学习记忆能力障碍与mTOR信号通路受损有关.
关键词： FMR1基因 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 海马 学习记忆 跳台实验 -
基于三引物荧光PCR-毛细管电泳法的FMR1基因突变检测技术建立及其在自闭症辅助诊断中的应用
目的 对自闭症患者FMR1基因5'非编码区CGG重复序列及重复数进行检测,探索检测脆性X综合征的新方法. 方法 应用三引物荧光PCR-毛细管电泳法(Qseq100TM全自动核酸分析系统检测)对111例自闭症患者进行筛查,检测其FMR1基因5'非编码区CGG序列,计算CGG重复数,并与ABI 3500Dx基因分析仪毛细管电泳测序法进行结果比较验证. 结果 111例临床检测为自闭症的样本中,有2例为FMR1前突变携带者,一例为中间型.与3500Dx毛细管电泳测序结果一致. 结论 三引物荧光PCR-毛细管电泳法能够用来检测FMR1基因5'非编码区CGG重复序列,在脆性X综合征发病机制及大规模携带者筛查方面都具有一定的应用价值.
关键词： 自闭症 FMR1基因 脆性X综合征 三引物荧光PCR-毛细管电泳 -
华南地区不明原因智力低下患者FMR1和FMR2基因突变分析
目的 探讨华南地区不明原因智力低下患者中脆性X智力低下基因FMR1和FMR2基因突变情况.方法 选择自2009年10月至2014年4月就诊于广州医科大学附属第二医院、长沙市第三医院神经发育或癫痫门诊、广州市海珠区特殊学校的华南地区不明原因智力低下的72例患者(男65例、女7例),采用PCR对FMR1基因5'非翻译区(5'-UTR)的(CGG)n和FMR2基因(CCG)n突变进行筛查;对未能扩出目的片段或女性可疑个体进一步行Southern blotting及毛细管电泳测序扫描分析证实是否具有全突变;对FMR1基因(CGG)n及FMR2基因(CCG)n两者都正常的患者再进一步对FMR1基因外显子及3'-UTR区段采用常规PCR方法扩增测序筛查突变,后将FMR1基因全突变频率与亚欧美不同国家和地区情况进行统计分析.结果 72例患者中共筛查到8个有意义临床家系:6个全突变家系(先证者为1女5男),全突变家系中共明确诊断FMR1基因全突变患者12例(包括2例嵌合体患者)、2例前突变母亲;另有1对FMR1基因片段缺失母子和1对过渡区母子.FMR1基因全突变及缺失突变占智力低下患者的9.7％(7/72);男性智力低下患者中FMR1基因突变比例为9.2％(6/65);和发达国家或地区相比,FMR1基因突变率差异有统计学意义(P＜0.05).在研究对象中没有发现FMR1基因变异外显子及3'UTR区域变异及FMR2基因全突变.结论 相对于发达国家或地区,华南地区智力低下人群中FMR1的突变率较高;对不明原因智力低下家系(家族史)的筛查,可以提高脆性X综合征诊断的阳性率;FMR1基因外显子突变、3'UTR区域变异及FMR2基因全突变不是智力低下患者的常见原因.
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Fmr1基因敲除对小鼠生长发育的影响
目的:Fmr1基因敲除对小鼠生长发育的影响.方法:挑选10周龄FVB小鼠和Fmr1基因敲除小鼠各20只(雌、雄各半),采取1∶1同居,全同胞兄妹近交繁殖,测定子代生长发育指标,进行统计分析.结果:Fmr1基因敲除小鼠体质量与体长分别为:0 d,(1.25.4±0.21)g,(38.99±1.74)mm;21 d,(8.17±2.26)g,(122.81±11.42)mm;60 d,(22.93±2.93)g,(180.19±7.46)mm;FVB小鼠体质量与体长分别为:0 d,(1.33±0.23)g,(40.53±3.05)mm;21 d,(7.75±1.56)g,(118.73±7.85)mm;60 d,(21.11±1.99)g,(176.43±5.73)mm.两个品系的小鼠体质量与体长的增长差异无统计学意义(P>0.05).结论:Fmr1基因敲除不影响小鼠正常的生长发育.
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突触素在FMR1基因敲除小鼠脑组织中的表达
目的:了解FMR1基因敲除小鼠脑组织中突触素Ⅰ(SYN)表达的改变,以探讨脆性X综合征的发病机制.方法:将40只小鼠按基因型及年龄组的不同分为:1周龄基因敲除型组(KO6W组)、1周龄野生型组(WT1W组)、6周龄基因敲除型组(KO1W组)、6周龄野生型组(WT6W组)4组,每组10只.取小鼠脑组织用免疫组织化学法检测SYN的分布和表达.用图象分析仪采集各脑区的平均光密度值(MOD),分析不同基因型及不同年龄组SYN在各脑区MOD值的差异.结果:按基因型分析,KO型小鼠大脑皮质SYN的表达均较WT型小鼠显著降低(P<0.01);但在苔藓纤维层,新生KO小鼠SYN的表达较其WT型显著增高(P<0.01).按年龄组分析,KO6W组小鼠中的SYN在各脑区的表达较KO6W高(P<0.05),在大脑皮质及苔藓纤维层(P<0.01)处比在CA1区(P<0.05)更明显;WT1W组SYN的表达在皮质及CA1区高于WT6W组(P<0.01),但在苔藓纤维层却比WT1W组低(P<0.01).结论:FMR1基因敲除小鼠大脑皮质突触数量减少而新生期海马苔藓纤维层突触数量异常增多,可能与患者智能低下、神经兴备性增高有关.
