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培养兔自体角膜缘干细胞移植的实验研究
目的观察以羊膜为载体的兔角膜缘干细胞膜片移植治疗兔角膜缘干细胞缺损的效果.方法制造兔角膜缘干细胞缺损的动物模型,以右眼为实验眼,从兔左眼取角膜缘组织,将兔角膜缘干细胞消化下来,接种于铺有羊膜的无菌六孔培养板中,待细胞形成多层角膜上皮细胞后,对兔角膜缘干细胞缺损动物模型行角膜缘干细胞羊膜移植术,并对治疗后的角膜进行裂隙灯及病理学检查.结果临床和组织病理学染色证实:体外培养的兔角膜缘干细胞可在羊膜上继续增生、分化为多层角膜上皮细胞;角膜缘干细胞移植术后兔角膜缘轻度充血、角膜上皮完整、基质细胞浸润减轻、新生血管减少或消失.结论应用角膜缘干细胞羊膜移植术可恢复其角膜上皮结构的完整性,减少角膜新生血管的形成,维持角膜缘的细胞屏障功能.
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翼状胬肉切除联合带角膜缘干细胞的自体结膜移植术患者围术期角膜缘部上皮厚度的变化规律
目的 探究翼状胬肉切除联合带角膜干细胞的自体结膜移植术患者围术期角膜缘部上皮厚度变化规律.方法 选取行翼状胬肉切除联合带角膜缘干细胞的自体结膜移植术患者30例(30只眼)为观察组和健康体检者30例(30只眼)为对照组,对比两组研究对象的一般资料、对照组和观察组手术后不同时间点的鼻侧角膜缘上皮厚度、观察组手术后不同时间点的角膜荧光染色缺损面积.结果 观察组患者术后1、2、3、5、7天的鼻侧角膜缘内1mm的上皮厚度较对照组薄(P＜0.05),观察组患者术后1、2、3、5天鼻侧角膜缘内2mm的上皮厚度较对照组薄(P＜0.05),术后7天的鼻侧角膜缘上皮厚度和对照组之间的差异无统计学意义(P＞0.05);观察组术后1天的角膜荧光染色缺损面积为(39.29±22.68) mm2,术后2、3、5、7天的角膜荧光染色缺损面积均较前一时间点的角膜荧光染色缺损面积缩小(P＜0.05).结论 翼状胬肉切除联合带角膜缘干细胞的自体结膜移植术后角膜上皮缺损的愈合由缺损的周围向中央愈合,而其角膜缘部上皮的厚度则由角膜中央向周围逐渐恢复正常.
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罕见眼内异物(隐形眼镜片)一例
患者男,22岁.2008年10月20日患者主诉:右眼被铁钉击中40分钟.眼科检查:右眼视力0.1,混合性充血(++),6:00位见23mm长的纵形角膜缘穿孔伤口,前房积血,瞳孔变形,角膜伤口见虹膜嵌顿,未见异物,内眼结构均窥不清,指测眼压T1;左眼矫正视力1.0,检查未见异常.急诊X线眼眶正侧位片示:右眼眶内未见明显异物.急诊收人院,诊断:右眼角膜穿孔伤,并急诊在局麻下行右眼角膜修补术.
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角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉疗效观察
目的 观察自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉的效果.方法 对52例(75只眼)翼状胬肉患者行显微镜下翼状胬肉切除并做角膜缘干细胞移植,术后随访观察12～24个月.结果 术后复发2只眼,复发率2.67%.结论 翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉的效果是肯定的,是一种理想的手术方法.
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培养的角膜缘上皮细胞增殖能力的动态研究
目的探讨组织块培养角膜缘上皮细胞在不同时间以及第2、3代培养的角膜缘上皮细胞早期(6～8 d)的增殖能力.方法应用组织块培养法培养角膜缘上皮细胞,在d8、12、16、20、24用流式细胞仪检测其细胞周期,同时对组织块培养16 d的角膜缘上皮细胞进行传代,用同样方法检测第2、3代细胞出现汇合时(6～8 d)的细胞周期.结果组织块培养角膜缘上皮细胞增殖指数(Proliferative Index,PI)在高水平上呈下降趋势(分别为31.2%、20.1%、17.6%、15.6%、13.4%);2、3代培养细胞早期的增殖指数较高(分别为30.3%、26%).结论组织块培养的角膜缘上皮细胞增殖能力在8～24 d内在高水平上呈下降趋势,第2、3代培养的细胞在培养早期的增殖能力也较高,均适于进行细胞培养移植.
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自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉疗效观察
目的:观察自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉的临床疗效.方法:在显微镜下采用胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植治疗初发性和复发性翼状胬肉270例(286眼),术后随访6～42个月.结果:259眼痊愈,27眼复发,其中原发性翼状胬肉复发率9.0%,复发性翼状胬肉复发率11.4%.结论:联合自体角膜缘干细胞移植简单易行,复发率低,是治疗翼状胬肉行之有效的方法.
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角膜缘干细胞自体移植联用羊膜治疗复发性翼状胬肉
目的:观察自体角膜缘干细胞移植联合羊膜移植治疗复发性翼状胬肉的临床疗效.方法:自体角膜缘干细胞移植联合羊膜移植治疗复发性翼状努肉30例,术后随访1年,观察胬肉复发及手术并发症情况.结果:无复发及睑球粘连等并发症发生.结论:自体角膜缘干细胞移植联合羊膜移植治疗复发性翼状胬肉是安全有效的治疗方法.
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自体角膜缘干细胞移植治疗角膜缘功能衰竭症远期疗效观察
目的观察自体角膜缘干细胞移植治疗角膜缘功能衰竭症的远期疗效.方法 163例190眼初发性翼状胬内、外伤性角膜缘板层缺损及角膜缘碱烧伤患者随机分为A、B组.A组为自体角膜缘干细胞移植组(干细胞治疗组)82例97眼,其中60眼翼状胬肉行翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植术,外伤性角膜板层损伤22眼,角膜缘碱烧伤15眼行自体角膜干细胞移植术.B组为传统单纯翼状胬肉切除,外伤性角膜缘板层损伤、碱烧伤行结膜瓣移植术(对照组)81例93眼,其中翼状胬肉60眼行单纯翼状胬肉切除,外伤性角膜缘板层缺损19眼,碱烧伤14眼行结膜瓣移植术.术后随诊观察角膜缘新生血管、角膜透明度、翼状胬肉复发率.结果 A组术后角膜缘新生血管、角膜白斑、翼状胬肉复发率明显低于B组.A、B两组各项指标比较有统计学差异(P＜0.01).结论自体角膜缘干细胞移植治疗角膜缘功能衰竭症是一种有效的治疗方法.
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角膜干细胞移植治疗翼状胬肉的疗效观察
我院自1997年10月至2000年6月,采用显微镜下进行同侧角膜缘带结膜瓣移植治疗胬肉37例,术后随访6～24个月,取得满意疗效.现报告如下.
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角膜缘干细胞移植术与丝裂霉素C对翼状胬肉术后复发的影响
目的 比较分析在翼状胬肉切除术中联合应用角膜缘干细胞移植术与丝裂霉素C的术后复发率.方法 81例(97眼)翼状胬肉切除术中随机分为两组,A组行翼状胬肉切除术联合角膜缘干细胞移植术,B组采用翼状胬肉切除术联合丝裂霉素C.两组均随访1～2年,比较分析两组术后复发率.结果 两组翼状胬肉切除术后复发率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在翼状胬肉切除术中应用角膜缘干细胞移植与应用丝裂霉素C均可有效降低翼状胬肉切除术后的复发率.
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角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉102例报告
翼状胬肉是常见的眼表疾病,可影响眼部美观,长入角膜遮盖瞳孔时会造成视力下降.翼状胬肉药物治疗往往效果不佳,目前的治疗仍以手术为主,手术切除翼状胬肉复发率较高.
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角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉20例
翼状胬肉是眼科常见病、多发病,手术是其主要的治疗方法.原始单纯的手术切除复发率很高,笔者自2000～2003年在本院采用角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉20例,随诊2～3年,疗效满意,现报告如下.
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P63标记角膜缘干细胞的可行性研究
目的探讨p63蛋白(P63)作为角膜缘干细胞阳性标记物的可行性和意义,为研究和鉴定角膜缘干细胞存活、增殖和分化情况提供依据.方法取正常新西兰兔角膜全层标本5份(包括角膜缘和结膜),同时取角膜缘干细胞移植后3个月上皮生长良好的角膜全层标本和角膜失代偿标本各5份.免疫组织化学SP三步法检测P63在不同组标本供体干细胞的表达情况.结果P63在角膜缘干细胞核内呈高表达,而短暂扩充细胞虽然也具备一定的增殖和分化能力,但是P63表达较少.角膜中央和结膜呈阴性表达.结论P63可以特异性地标记角膜缘干细胞,对角膜缘干细胞的研究和鉴定及其在眼表重建的应用具有一定的价值.
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角膜缘干细胞移植在翼状胬肉切除术中的应用
翼状胬肉是常见的眼球表面疾病,其常规切除术复发率高.为减少其术后复发率,笔者采用胬肉组织切除联合同侧眼带结膜瓣角膜缘干细胞移植术,对原发性和复发性翼状胬肉患者23例27眼进行治疗,收到了良好的效果.
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角膜缘干细胞移植联合术后丝裂霉素C治疗复发性翼状胬肉
翼状胬肉是眼科常见病,中医称为"胬肉攀睛",单纯手术切除后易复发,复发率高达30%～69%[1].复发性翼状胬肉不仅生长速度快,充血明显,而且常常因为前次手术产生瘢痕粘连,增加了再次手术难度,更易复发.本科自2001年1月以来,对23例(23眼)复发性翼状胬肉行自体角膜缘干细胞移植联合术后丝裂霉素C使用,取得较为满意的临床效果,报告如下.
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自体角膜缘移植或联合羊膜移植治疗翼状胬肉
对18例初发、复发和假性翼状胬肉采用显微切除及自体角膜缘移植或联合羊膜移植术进行治疗.结果所有病人角膜上皮稳定,供区创面正常愈合,羊膜植片无排斥反应,术后无复发现象.
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人角膜缘干细胞初步建系研究
目的:探讨建立人角膜缘干细胞系,为组织工程研究提供足够的细胞储备.方法:取健康人角膜缘深部色素区组织块,经消化后,在含有RPMI-1640、20%胎牛血清的培养瓶和以羊膜细胞外基质为培养载体的培养皿中分别进行体外培养,并对连续传代的细胞行光镜、扫描电镜观察,比较细胞形态的变化并进行细胞计数与冻存处理.结果:人角膜缘干细胞具有人上皮细胞培养的特性,在培养液中传33代后,细胞仍然保持旺盛的分化、增殖能力,并且更适宜在羊膜细胞外基质上生长;目前我们冻存细胞的复苏率为82.2%.结论:将人角膜缘干细胞经体外培养33代并逐代冻存后初步建立了人角膜缘干细胞系.
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不同来源人角膜缘干细胞的体外培养研究
目的探讨胎儿和成人角膜缘干细胞的体外培养方法并观察其生物学特性.方法应用消化培养法对胎儿和成人角膜缘上皮组织分别进行体外培养,观察记录培养细胞的生长特性并计算其克隆形成率(colony-forming efficiency, CFE).对胎儿和成人角膜缘组织及培养细胞采用一系列单克隆抗体进行免疫酶细胞化学染色检测;并用扫描电镜观察原代细胞的表面状况.结果胎儿角膜缘干细胞原代培养时生长旺盛,8～10 d达到生长高峰,CFE为(26.18±4.75)%,传代时保持高增殖速率;成人角膜缘干细胞原代培养时生长不及胎儿细胞旺盛,6～8 d达到生长高峰,CFE为(15.45±3.88)%,随着传代次数增加其增殖能力明显下降;两种细胞原代培养时CFE值差异有显著性(t＝6.78, P＜0.001).免疫酶细胞化学染色见培养前胎儿角膜缘组织基底层有多量AE5阴性、AE1和PCNA阳性细胞,并见较多HLA-DR阳性细胞;胎儿原代培养细胞绝大部分AE5和HLA-DR染色阴性,AE1和PCNA阳性;传代培养至第3代时AE5阴性细胞仍占大部分;成人角膜缘组织及培养细胞染色结果则见上述干细胞特征细胞数量比例较低,而HLA-DR染色结果相似.扫描电镜观察胎儿原代细胞以球形或短圆柱形为主,表面多突起和微绒毛,成人原代细胞形态相似,但直径较大.结论采用消化培养法可成功培养出具有高增殖力等干细胞特性的胎儿角膜缘干细胞,其抗原性较培养前明显降低,且其生物学特性显著优于成人角膜缘干细胞,是一种新的优越的角膜缘干细胞来源,将在临床眼表重建中展现广阔的应用前景.
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深低温保存兔角膜缘干细胞的体外培养
目的探寻深低温保存兔角膜缘干细胞的体外培养方法.方法将2 mm宽的兔角巩膜组织通过程序降温仪降温后置于-196 ℃液氮中深低温保存.1年后复温,应用消化培养法分别对冻存及新鲜的兔角膜缘干细胞进行体外培养,观察并记录细胞生长情况,HE染色观察培养细胞的形态特征.结果经过深低温保存的兔角膜缘干细胞可以在体外被成功培养并传代,其在原代培养48h后开始贴壁生长,5 d后生长较旺盛,但可见部分破裂和死亡细胞,约12 d基本形成单层;传代培养时次日贴壁,7 d形成单层.新鲜兔角膜缘干细胞原代培养时细胞形态相似,但破碎死亡细胞少见,且于7 d左右即基本形成单层,传代时两者无明显差别.结论深低温保存的角膜缘干细胞能被成功地进行体外培养,培养后细胞具有与培养的新鲜角膜缘干细胞基本相似的特性,为深低温保存的角膜缘干细胞培养后移植治疗临床眼表疾病提供了实验依据,并为眼库技术的发挥开辟了新的应用途径.
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角膜缘干细胞标记物的研究进展
角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs)是角膜上皮再生和修复的源泉,在眼表重建中起着极为重要的作用.当前,对LSCs的研究已深入至分子水平,在其发育生物学特性和特异性分子标记物寻找上有了新的进展.为促进LSCs基础研究的进一步开展,本文就其分子标记物的研究现状及面临的问题作一综述.
