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NOD1炎症复合体分子在幽门螺杆菌感染小鼠模型中的表达
目的 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染小鼠动物模型,观察NOD1炎症复合体分子在小鼠胃组织的表达情况.方法 将6～8周龄C57BL/6小鼠随机分为感染组、对照组和治疗组.其中感染组和对照组分别以Hp和磷酸盐缓冲液(PBS)灌胃.每48h灌胃1次,共5次.4周后,培养法鉴定Hp感染是否成功.同时设立治疗组,采用奥美拉唑三联疗法灌胃治疗1周,4周处死.RT-PCR检测小鼠胃组织中NOD1 mRNA的表达情况,ELISA检测小鼠血清中IL-18和IL-33的含量.结果 阴性对照组NOD1 mRNA呈低度表达,经Hp感染后,胃黏膜中NOD1 mRNA水平明显增高,血清IL-18和IL-33水平也明显高于对照组.经奥美拉唑治疗后,与Hp感染组相比,NOD1 mRNA水平有所降低.结论 Hp感染后小鼠胃组织中NOD1炎症复合体分子表达升高,增高的NOD1可能通过诱导胃黏膜产生IL-18和IL-33而清除病原体.
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Nod1受体激活对腹膜间皮细胞自噬相关蛋白表达的影响
目的 探讨Nod1受体激活对腹膜间皮细胞自噬的影响.方法 Nod1受体激动剂iE-DAP作用大鼠原代培养腹膜间皮细胞0、1、2h,Western blot检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1的表达.结果 随刺激时间延长,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达比值增加,Beclin-1蛋白表达亦增加.结论 Nod1受体激活可诱导腹膜间皮细胞自噬的发生,这有可能发挥清除细胞内细菌感染的作用.
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NOD1和NOD2介导的信号通路研究进展
NOD样受体是一类新型胞浆内的固有免疫模式识别受体,在自身免疫调节中起重要作用,一旦被激活,这些分子触发细胞内信号通路,导致激活转录反应,终在一个炎性基因子集上表达.在本文中,我们将专注于NOD1 和NOD2在识别和响应细胞内的病原体(包括革兰氏阳性和革兰氏阴性菌)的作用,以及它们在非肽聚糖含有病原体(例如病毒和原生动物寄生虫)的信号应答.
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幽门螺杆菌激活小鼠胃组织中NOD1／NF-κB信号通路并诱导IFN-β和IP-10分泌
目的：构建幽门螺杆菌( Helicobacter pylori，Hp）感染C57BL／6小鼠动物模型，检测NOD1／NF-κB信号通路在小鼠胃组织的激活情况，研究其在Hp感染引起的炎症反应中的作用。方法：6～8周龄C57 BL／6小鼠随机分为对照组和不同浓度Hp感染组。每48 h分别以PBS和Hp灌胃1次，共5次。并以不同时间点处死小鼠，HE染色法鉴定感染小鼠胃组织炎症程度的变化；RT-PCR检测小鼠胃组织中NOD1、RIP2的表达情况；ELISA检测血清中β干扰素( IFN-β）和趋化因子10( IP-10）的浓度；Western blot检测胃组织中p65的核转位情况。结果：与对照组相比，Hp感染后胃组织腺体减少、萎缩，肌层间质有炎症细胞浸润；血清中IP-10和IFN-β含量均有一定程度的增高，16周达到高峰；胃组织中NOD1 mRNA表达水平以及细胞核中p65含量在24～120 h时间段均显著高于对照组( P＜0.05），48 h后达到峰值，随后下降；RIP2 mRNA 48 h达到高峰，72 h后开始下降，但120 h时表达量又会升高。结论：Hp感染能激活NOD1／NF-κB信号通路，并能诱导IFN-β和IP-10的产生。
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NOD1、NOD2:两个重要的天然免疫胞内识别受体
机体对微生物入侵的免疫炎症应答过程中模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)是启动机体天然免疫应答机制的关键,主要在获得性免疫系统被活化之前发挥抗感染作用.NOD1和NOD2这两个蛋白分子作为一种新的胞内识别受体参与了细胞凋亡和核因子NF-κB的活化,并与一些炎症性疾病密切相关,在天然免疫中发挥了重要的作用.
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NOD1在舌鳞状细胞癌组织中的表达及意义
目的：探索 NOD1在舌鳞状细胞癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学、RT -qPCR 检测舌鳞状细胞癌组织和正常舌黏膜对照组中 NOD1的表达，并分析其临床意义。应用 SPSS13．0软件包，对各组 mRNA 的表达进行 t 检验。结果NOD1蛋白表达于细胞质，舌鳞状细胞癌组织中 NOD1蛋白表达率为60．0％（15／25），显著低于正常舌黏膜对照组表达率80．0％（20／25，P ＜0．05）。舌鳞状细胞癌组织 NOD1 mRNA 表达量为正常舌黏膜对照组（0．437±0．103）倍（P ＜0．05）。结论舌鳞状细胞癌组织中 NOD1 mRNA 和蛋白表达显著低于正常舌黏膜对照组，但需要在更大样本中验证这一结果，并开展功能学研究以揭示其潜在的生物学机制。
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Nods 样模式识别受体在变应性鼻炎大鼠模型中的表达及意义
目的：变应性鼻炎（allergic rhinitis， AR）是一种发病广泛、病因复杂的鼻腔过敏性疾病，其发病机制尚未完全阐明，文中通过检测AR大鼠鼻黏膜中核苷酸结合寡聚化结构域（ Nods）样模式识别受体家族Nod1、Nod2、Nalp3的表达，探讨Nods样模式识别受体与AR发病机制的关系。方法以24只SD大鼠为实验对象，随机数字表法分为空白组、AR组，每组12只，空白组不造模，AR组用卵白蛋白及氢氧化铝隔日腹腔注射8次基础致敏后，用5％卵白蛋白等渗盐水溶液分别滴双侧鼻腔7 d攻击致敏，致敏完成后记录2组大鼠鼻部症状评分及处死大鼠。采用Western blot、免疫组化检测AR大鼠鼻黏膜中Nod1、Nod2、Nalp3蛋白表达；RT-PCR检测AR大鼠鼻黏膜中Nod1mRNA、Nod2mRNA、Nalp3mRNA的表达。结果 AR组抓鼻、喷嚏、流涕等鼻部症状明显，累计评分较空白组明显升高[（5．50±0．52分） vs （0．33±0．49）分，P＜0．01]。 AR组大鼠鼻黏膜中Nod1、Nod2、Nalp3模式识别受体蛋白的表达量（388311±107338、129717±44752、87576±8120）均高于空白组（161795±29965、39311±30038、22521±9283），差异有统计学意义（P＜0．01）。 AR大鼠鼻黏膜中Nod1、Nod2、Nalp3模式识别受体表达（43628671±22761920、73075091±19372454、50660853±18910473）较空白组（10140174±5939168、15228454±7391542、13253427±7192921）明显升高（P＜0．01）。 AR大鼠鼻黏膜中Nod1mRNA、Nod2mRNA、Nalp3mRNA表达（4．7235±0．9526、5．5731±1．0019、5．3947±1．1689）较空白组（1．0007±0．0472、1．0001±0．0185、1．0139±0．2126）明显升高（P＜0．01）。结论Nods模式识别受体在AR大鼠模型中均有表达，提示Nod1、Nod2、Nalp3可能参与AR的发病。
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NOD1表达与胃幽门螺旋杆菌感染的关系
目的 探讨NOD1表达与胃幽门螺旋杆菌感染的关系.方法 选择60例慢性胃炎患者,经胃黏膜幽门螺旋杆菌染色和13C呼气试验确定幽门螺旋杆菌阳性和阴性各30例.检测并比较两组患者胃黏膜NOD1表达阳性率.结果 60例患者中检出NOD1表达阳性22例.其中幽门螺旋杆菌阳性组NOD1表达阳性率为56.67％,明显高于幽门螺旋杆菌阴性组的16.67％(P＜0.05).结论 NOD1表达与胃黏膜幽门螺旋杆菌感染密切相关.
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NOD1基因型与幽门螺杆菌感染相关慢性胃炎的关系分析
目的 通过基因测序的方法 检测慢性胃炎患者的NOD1基因型,分析NOD1基因多态性与幽门螺杆菌(Hp)感染相关慢性胃炎发生的关系.方法 选取慢性胃炎患者77例,根据Hp感染情况分为Hp阳性组(36例)、Hp阴性组(41例).于患者行胃镜检查时留取胃黏膜组织,病理学检查有无伴肠上皮化生(简称肠化生);同时抽取外周血3ml,采用PCR法进行NOD1基因扩增并测序.观察NOD1基因扩增产物及基因型检测结果;比较两组患者NOD1基因型分布情况及两组中不同NOD1基因型患者胃黏膜肠化生情况.结果 NOD1基因包括GG、GA、AA 3种基因型,共检出GG型33例,GA型37例,AA型7例.两组患者NOD1基因型分布情况比较差异有统计学意义(P＜0.05);与Hp阴性组比较,Hp阳性组患者NOD1基因GG型比例降低,GA型比例升高,AA型差异不大.Hp阳性组、Hp阴性组中不同NOD 1基因型患者胃黏膜肠化生情况差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 NOD1基因多态性影响人体对Hp的易感性,但与Hp感染相关慢性胃炎患者胃黏膜肠化生的发生无明显关系.
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吴茱萸碱抑制NOD1通路诱导肝癌HepG2和SMMC-7721细胞凋亡
目的 探讨吴茱萸碱诱导肝癌HepG2和SMMC-7721细胞凋亡的机制.方法 以肝癌HepG2和SMMC-7721细胞为研究对象,CCK-8法检测吴茱萸碱对细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色法在显微镜下观察细胞凋亡现象的改变;定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NOD1在正常肝细胞HL-7702与肝癌细胞中的表达;Western blot检测NOD1、NF-κB p65、p-p65,以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53的表达.结果 CCK-8结果显示,给予吴茱萸碱(0、0.25、0.5、1、2、4μmol·L-1)12、24、48 h后,HepG2和SMMC-7721细胞抑制率明显增高,并且呈剂量和时间依赖性;Hoechst33258染色结果显示,经吴茱萸碱诱导后,HepG2和SMMC-7721细胞出现核固缩、核边集等形态学改变;qRT-PCR结果显示,与正常肝细胞HL-7702相比,NOD1在肝癌细胞中的表达明显较高;Western blot结果显示,吴茱萸碱可下调NOD1、p-p65和Bcl-2蛋白水平,上调Bax、p53蛋白表达水平,对p65表达水平无影响.结论 吴茱萸碱通过下调NOD1,抑制NF-κB的活性,激活p53信号通路,改变Bcl-2/Bax的比值,诱导肝癌HepG2和SMMC-7721细胞的凋亡.
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NOD1和NOD2:介导天然免疫的两种胞浆蛋白
NOD1和NOD2是新发现的一类参与天然免疫的胞浆蛋白质家族--核苷酸结合寡聚域样受体(the nucleotide binding oligomerization domain-like receptor, NLRs)中的两个重要蛋白受体,它们通过识别外源病原菌的模式抗原分子而激活NF-κB等核转录因子,启动相关细胞因子的基因表达,释放炎性因子和抗菌肽等, 其介导的信号通路在宿主抵御病原体感染的天然免疫中发挥着重要作用.
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乌司他丁对脓毒症急性肾损伤大鼠肾脏NOD1受体和血IL-18水平的影响
目的 探讨乌司他丁对腹主动脉阻断联合腹腔注射脂多糖内毒素(LPS)构建严重脓毒症大鼠肾脏NOD1受体表达和血IL-18水平的影响.方法 48只Wistar大鼠随机分为假手术组(SHAM组)、腹主动脉阻断联合腹腔注射LPS组(AAC+ LPS组)、腹主动脉阻断联合腹腔注射LPS乌司他丁干预组(AAC+ LPS+U组)、腹主动脉阻断腹腔LPS生理盐水对照组(AAC+ LPS+ NS组).大鼠于术后或干预后8h处死,收集血和大鼠肾脏,检测血中Cr、BUN水平,ELISA方法检测血中IL-18浓度,免疫组化方法检测肾脏NOD1蛋白的表达,RT-PCR方法检测肾脏NOD1 mRNA的表达.结果 NOD1受体mRNA和蛋白的表达,血中IL-18和Cr、BUN水平在AAC +LPS组和AAC+LPS +NS组强,AAC+ LPS+U组较前两组下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 乌司他丁可能通过抑制肾脏NOD1受体的表达,抑制血中IL-18的分泌从而在脓毒症时发挥抗炎和肾脏保护作用.
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NOD1与NOD2在变应性鼻炎中的表达及糖皮质激素对其的调节
目的:探讨NOD1与NOD2在变应性鼻炎(AR)患者鼻黏膜中的表达及糖皮质激素对其的调控作用.方法:收集13例AR患者下鼻甲黏膜及19例单纯鼻中隔偏曲患者下鼻甲黏膜(对照组),采用免疫组织化学方法和实时定量RT PCR方法检测下鼻甲黏膜样本中NOD1、NOD2的表达.另外收集5例单纯鼻中隔偏曲患者下鼻甲黏膜及5例AR患者下鼻甲黏膜,采用体外组织块培养方法,观察糖皮质激素对NOD1和NOD2表达的调节作用.结果:NOD1和NOD2 mRNA及蛋白在AR组中的表达较对照组明显增高(P＜0.05),免疫组织化学显示NOD1与NOD2在上皮层和黏膜固有层都有表达.组织培养结果表明,用糖皮质激素刺激后,AR患者鼻黏膜中NOD1和NOD2的表达显著下降(P＜0.05).结论:NOD1和NOD2作为先天性模式识别受体可能参与了AR的发病过程；糖皮质激素可能通过抑制NOD1和NOD2的表达而达到治疗AR的作用.
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吸烟对口腔黏膜上皮细胞NOD1信号通路关键分子表达水平的影响
目的：探讨吸烟与口腔黏膜上皮细胞NOD1信号通路关键分子表达水平的关系。方法：采用商业化可购的直接烟暴露装置，构建体外Leuk－1细胞吸烟模型，将其分为吸烟组（分别吸入香烟烟雾5、10、20、40、60 min）和对照组（吸入含5％CO2空气10 min），应用间接免疫荧光法检测体外吸烟对口腔黏膜上皮细胞NOD1通路内关键蛋白的表达。结果：随着体外吸烟时间的延长，NOD1蛋白表达水平逐渐下降，Caspase12和RIP2蛋白表达水平逐渐上升。NF－κB的蛋白表达水平逐渐上升之后明显下降。结论：吸烟可使口腔黏膜细胞NOD1信号通路相关蛋白表达发生改变，进而影响口腔黏膜固有免疫。
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NOD1,NOD2和NLRP3炎症小体与牙髓炎
模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)识别病原相关分子模式(pathogen associated molecule patterns,PAMP)激活固有免疫系统,是抵抗病原微生物入侵的第一道防线.核苷酸结合寡聚化结构域蛋白(nucleotide-binding oligomerization domains,NODs)和NOD样受体蛋白3(NODlike protein 3,NLRP3)属胞质内PRRs家族.NOD1和NOD2激活NF-κB,MAPK,JNK,p38和ERK信号通路,促进TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8和IL-12等多种炎性因子的转录表达.NLRP3炎症小体激活caspase-1,并促进IL-18和IL-1β表达.牙髓位于低顺应性根管系统中,牙髓环境环境与机体其他组织不同.目前的研究表明NOD1,NOD2和NLRP3炎症小体与牙髓固有免疫及牙髓炎的发生、发展有关.
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NOD1/RIP2信号通路对巨噬细胞炎性活化的作用
目的 以人单核细胞株THP-1为基础,探讨NOD1/受体相互作用蛋白2(RIP2)信号通路对巨噬细胞炎性活化及表型的影响.方法 用160 nmoL/L的佛波酯(PMA)将THP-1单核细胞诱导分化成巨噬细胞,分别用10、25和50 mg/L浓度的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激THP-1源性巨噬细胞24h,以空白组为对照组.应用RT-PCR法检测NOD1和RIP2的mRNA表达情况;应用Western blot法检测NOD1和RIP2的蛋白表达情况;应用ELISA法检测细胞培养液中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的分泌;应用流式细胞学检测巨噬细胞表面抗原CD16、CD68表达.结果 ox-LDL能以剂量依赖的方式激活THP-1源性巨噬细胞中NOD1/RIP2信号通路,随着ox-LDL刺激浓度的增加,NOD1、RIP2的mRNA和蛋白表达水平升高(P＜0.05).NOD1/RIP2信号通路激活后能使细胞培养物上清液中炎症因子MIF和MCP-1的表达增加,随着ox-LDL刺激浓度的增加,MCP-1和MIF的分泌增多(P＜0.05).NOD1/RIP2信号通路激活后能改变巨噬细胞表面抗原CD16、CD68的表达,随着ox-LDL刺激浓度的变化,巨噬细胞表面抗原CD16/CD68的平均荧光强度发生变化,其中50 mg/L组能显著下调CD16/CD68的表达(P＜0.01).结论 巨噬细胞中NOD1/RIP2信号通路能被ox-LDL以剂量依赖的方式激活,NOD1/RIP2信号通路激活后能导致巨噬细胞的炎性活化及其表型变化,这可能是其参与动脉粥样硬化形成和发展过程的主要机制.
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早孕母胎界面固有模式识别受体NOD1/NOD2的表达
[目的]明确早期妊娠母胎界面中固有模式识别受体NOD1/NOD2的表达情况.[方法]分别用免疫组织化学法及Real-Time PCR法检测12例早孕期绒毛及蜕膜组织中NOD1/NOD2表达.[结果]免疫组织化学结果显示绒毛组织中NOD1/NOD2主要定位于绒毛滋养细胞胞质中,蜕膜组织也检测到NOD1/NOD2分子的表达.在mRNA水平上,绒毛组织中NOD1/NOD2的表达量高于蜕膜基质细胞(DSC),分别为P=0.03和P=0.009；DSC中NOD1的表达量高于NOD2,P=0.029,差异具有显著性.绒毛组织中NOD2的表达高于NOD1,差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]NOD1/NOD2在早孕期母胎界面中绒毛组织有表达,可能参与胚泡的着床.
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烟曲霉菌感染小鼠肺组织中NOD1信号通路的激活
目的 研究天然免疫NOD1信号通路在烟曲霉菌感染小鼠肺组织中是否得以激活.方法 小鼠分为正常对照组和感染组,感染组小鼠经鼻滴人烟曲霉菌孢子24 h、48 h、72 h后分别处死,碾碎肺组织平板培养以检测其肺组织烟曲霉菌负荷,观察肺组织病理学改变,RT-PCR检测NOD1及RIP2 mRNA表达量、Western Blot检测胞核NF-κBp65和胞浆TNF-α在小鼠肺组织中的含量.结果 ①感染组小鼠肺组织48 h时Af负荷达高且可见严重的充血和出血,有大量的炎症细胞浸润,72 h时Af负荷迅速下降且未见菌丝形成,仅见轻微的充血、出血和炎症反应;正常组烟曲霉菌培养阴性且肺组织结构正常;②RT-PCR及Western Blot结果显示:感染组小鼠肺组织各时相点NOD1 mRNA、RIP2 mRNA、NF-κBp65和TNF-α的表达量均明显高于正常对照组(P<0.05),前三者均在48 h表达高,TNF-α在72 h表达高(P<0.05).结论 NOD1信号通路在烟曲霉菌感染的小鼠肺组织中得以活化,其介导的天然免疫对抗烟曲霉菌感染和保护小鼠肺组织起了一定的作用.
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Bcl-2和NOD1基因多态性与青海回族胃癌易感相关性
目的 探讨Bcl-2(-938C＞A)和NOD1 (796G＞ A)的基因多态性与青海回族胃癌易感性关系.方法 采集62例青海回族患者胃癌组织和51例正常胃粘膜组织DNA,应用PCR-RFLP技术方法,分析青海回族胃癌患者Bcl-2(-938C＞A)三种基因型CC、AC、AA和NOD1 (796G＞ A)三种基因型GG、GA、AA多态性特点.结果 Bcl-2(-938C ＞A)CC、CA、AA基因型在对照组中分别是29.4％、25.0％和11.0％,而在胃癌组中分别是48.4％、41.9％和9.7％.CC基因型和CA+ AA基因型在对照组和胃癌组中相比具有差异(P=0.04).NOD1 (796G＞ A)基因型GG、GA、AA在对照组中分别是37.3％、45.1％和17.6％,而在胃癌组中分别是32.3％、45.2％和22.3％,各基因型在对照组及胃癌组中相比没有明显差异(P＞0.05).结论 Bcl-2(-938C ＞A)基因型CC与青海回族胃癌易感性相关,而NOD1 (796G＞ A)基因多态性与青海回族胃癌易感性无关.
