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三七根总苷对电压依赖性钙离子和钾离子通道的作用
目的：探讨三七根总皂苷（RPNS）对电压依赖性钙离子和钾离子通道的作用。方法采用双电极电压钳检测RPNS 0.01，0.06，0.1，0.6，1及4 g·L-1对表达在爪蟾卵母细胞的Cav1.2的作用；检测RPNS 1 g·L-1对Cav2.1，Cav2.2，Cav3.1，KCNH2，KCNQ1，KCNQ1/KCNE1及大电导钙激活钾通道（BK）的作用。结果双电极电压钳实验表明，RPNS对Cav1.2的抑制作用有明显的浓度效应关系，其EC50为0.048 g·L-1。与细胞对照组相比，RPNS 1 g·L-1对Cav1.2，Cav2.2和Cav3.1有明显的抑制作用，对其峰值电流的抑制率分别为（57.1±8.6）%，（17.2±0.7）%和（50.2±7.7）%（P<0.01）；对BK通道有明显的激活作用，对其峰值电流激活率为（37.9±2.7）%（P<0.01）；对Cav2.1，KCNH2，KCNQ1和KCNQ1/KCNE1通道无明显作用。结论RPNS明显抑制Cav1.2和Cav3.1，激活BK通道，但对Cav2.1，Cav2.2，KCNH2，KCNQ1及KCNQ1/KCNE1无明显作用。
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雷米普利对舒张性心力衰竭大鼠心房肌L型钙通道的影响
目的：观察雷米普利对舒张性心力衰竭(DHF)大鼠模型心房肌细胞L型钙通道的影响。方法腹主动脉缩窄术建立DHF大鼠模型，随机分为DHF组及雷米普利大、中、小剂量组，另设对照组。全细胞膜片钳检测心房肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)；RT-PCR检测L型钙通道上Cav1.2 mRNA的表达；Western blot检测钙调控相关蛋白LTCC的表达。结果与对照组比较，DHF组大鼠心房肌细胞ICa-L电流密度峰值、Cav1.2 mRNA表达及钙调蛋白LTCC的表达明显降低(P<0.05)；与DHF组比较，雷米普利组心房肌细胞ICa-L电流密度峰值明显增加、Cav1.2 mRNA及钙调控蛋白LTCC的表达增加(P<0.05)，且剂量越大增加越明显。结论雷米普利能上调舒张性心力衰竭大鼠心房肌ICa-L电流密度峰值，增加Cav1.2 mRNA及钙调控蛋白LTCC的表达，对DHF大鼠有治疗作用，其机制与调控心房肌细胞L型钙通道的功能有关。
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大鼠骨髓间充质干细胞在心肌缺血微环境中Cav1.2的表达
目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在心肌缺血微环境中向心肌细胞分化过程中Cav1.2的分化表达. 方法 采用左冠状动脉前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)结扎术建立大鼠急性心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型(n=52),并行心电图检查.将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记MSCs,贴壁培养,用心外膜下注射法将GFP标记的MSCs移植到心肌梗死周边区域;移植后7d开胸取心脏组织,HE染色观心肌梗死区域病理变化.将移植后3,5,7d的大鼠分为3d组、5d组、7d组,每组10只动物,免疫荧光染色观察各组移植的MSCs上Cav1.2蛋白的表达;激光捕获显微切割技术分离各组心肌组织中GFP标记的MSCs群,应用real-time PCR测定各组心肌组织中Cav1.2及未移植大鼠MSCs mRNA的相对表达量;移植后9d,对移植区域行TUNEL凋亡染色. 结果 免疫荧光染色观察3d组、5d组、7d组心肌组织中移植的MSCs均不表达Cav1.2;real-time PCR测定显示,3d组、5d组、7d组中Cav1.2相对表达量与未移植的MSCs相比均无明显变化(P＞0.05),移植后9d未观察到MSCs的表达,TUNEL凋亡染色显示移植的MSCs发生了凋亡. 结论 在大鼠心肌缺血微环境中移植的MSCs不表达Cav1.2且不能长期存活.
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Genistein通过影响Ca2+/CaM/Cav1.2/CaMKⅡ信号通路抑制Aβ25-35诱导的海马神经元损伤
目的 探讨植物雌激素染料木素(Genistein,GST)对Aβ25-35引起海马神经元钙超载损伤的抑制作用及其机制.方法 本实验分为以下4组:正常对照组,A β 25-35组,Aβ25-35+Genistein组(Aβ25-35+GST组),Aβ25-35+ 17β-雌二醇组(Aβ25-35+E2组),通过MTT比色法测定细胞活性,选取Genistein的适浓度.采用Aβ25-35处理建立海马神经元损伤模型.利用Tuj1染色观察神经元生长状态,激光共聚焦扫描观察Genistein对[Ca2+]i的影响,通过Western blot技术检测CaM、Cav1.2、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白表达的变化.结果 0.3 μg/mlGenistein能明显抑制Aβ25-35引起细胞活性降低及[Ca2+]i增加,并能对抗Aβ25--5引起的CaM,Cav1.2蛋白水平增加及p-CaMKⅡ减少.结论 Genistein具有拮抗Aβ25-35所致海马神经元钙超载损伤的作用,其作用机制可能与Ca2 +/CaM/Cav1.2/CaMKⅡ信号通路有关,为Genistein进一步应用于临床治疗神经退变性疾病提供理论依据.
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人参皂甙Rh2对人胶质瘤细胞内钙离子浓度的影响
目的 观察人参皂甙Rh2对人胶质瘤细胞内钙离子浓度的影响.方法 实验分为对照组和人参皂甙Rh2组,对照组应用常规培养基培养人胶质瘤细胞株U87MG,人参皂甙Rh2组在常规培养基中人参皂甙Rh2的浓度为20μg/mL,利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测各组培养的人胶质瘤细胞内钙离子浓度,再利用Western blot技术检测人胶质瘤细胞Cav1.2蛋白的表达,后利用膜片钳技术检测人胶质瘤细胞L型电压依赖型钙离子通道的功能.结果 人参皂甙Rh2处理U87MG细胞后,细胞内钙离子浓度是对照组的2.5倍(P<0.05);人参皂甙Rh2培养后胶质瘤细胞Cav1.2蛋白表达量是对照组的1.5倍(P<0.05),且L型电压依赖性钙离子通道功能增强.结论 人参皂甙Rh2可通过增加胶质瘤细胞Cav1.2表达和L型电压依赖性钙离子通道的功能促进细胞内游离钙离子浓度的增加,从而诱导人胶质瘤细胞的凋亡.
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热休克蛋白70上调对兔快速心房起搏心肌Cav1.2,α1c的影响
目的 观察热应激诱导心肌热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)表达上调对兔快速心房起搏心肌Cav1.2,α1c的影响.方法 24只新西兰大白兔随机分为热应激起搏组、起搏组和假手术组,每组各8只.热应激起搏组先给予热应激,再以600次/min行右心房起搏6h,起搏组以600次/min行右心房起搏6h,假手术组仅植入电极不起搏.采用反转录-PCR检测各组心肌HSP70 mRNA、Cav1.2,α1c mRNA表达水平,采用免疫组织化学法检测各组心肌HSP70和Cav1.2,α1c蛋白表达水平.结果 热应激起搏组左心房、右心房、左心耳、右心耳HSP70 mRNA(1.37±0.26、1.35±0.30、1.28±0.21、1.31±0.24)和HSP70蛋白(69.75±3.45、69.00±2.93、68.63±3.23、68.75±2.82)表达水平较起搏组(HSP70 mRNA为0.63±0.08、0.64±0.06、0.61±0.09、0.62±0.07,HSP70蛋白为39.75±2.82、37.00±3.85、39.00±3.89、38.38±2.92)和假手术组(HSP70 mRNA为0.59±0.10、0.54±0.09、0.57±0.10、0.54±0.13,HSP70蛋白为39.00±3.21、38.38±3.74、37.75±3.28、39.00±4.00)明显增高(P＜0.01),起搏组与假手术组比较差异无统计学意义(P＞0.05);起搏组左心房、右心房、左心耳、右心耳Cav1.2,α1c mRNA(0.51±0.15、0.50±0.09、0.53±0.09、0.53±0.10)和Cav1.2,α1c蛋白(21.88±2.36、21.75±2.49、21.50±2.45、21.38±2.33)表达水平较热应激起搏组(Cav1.2,α1c mRNA为0.66±0.06、0.68±0.05、0.68±0.05、0.64±0.38,Cav1.2,α1c蛋白为26.00±2.73、25.25±1.83、25.13±2.03、25.38±2.00)和假手术组(Cav1.2,α1e mRNA为0.64±0.10、0.66±0.10、0.67±0.04、0.63±0.03,Cav1.2,α1c蛋白为26.75±3.37、26.63±1.85、26.50±3.07、26.13±3.91)明显降低(P＜0.01),热应激起搏组与假手术组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 心肌HSP70表达上调后可抑制快速心房起搏心肌Cav1.2,α1c的重构.
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CaV1.2和ERGmRNA在犬左上肺静脉肌袖和左房的表达
目的 研究犬肺静脉肌袖(PVs)CaV1.2和ERG的mRNA水平,初步探讨其表达与PVs独特离子流特点的关系.方法 8只健康犬左上PVs和左房游离壁心肌组织,用逆转录聚合酶链反应法分析CaV1.2和ERG的mRNA在不同部位的表达差别.结果 PVs内CaV1.2的mRNA水平较左房降低(1.16±0.07 vs 1.32±0.05,P＜0.05),而ERG的mRNA水平较左房有显著的升高(0.87±0.08 vs 0.55±0.09,P＜0.05).结论 PVs心肌细胞和左房心肌细胞的CaV1.2和ERG的mRNA表达有差异,此可能导致其离子流特点的不同.
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金匮肾气丸对耳聋豚鼠Cav1.2、TNF-α表达的影响
目的:探讨金匮肾气丸对庆大霉素造成药物性耳聋豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞钙离子(Ca2+)通道蛋白表达的影响.方法:将35只豚鼠随机分为5组,正常对照组,模型组,金匮肾气丸高、中、低剂量组.除正常对照组外,各组豚鼠每天腹腔注射庆大霉素100mg/kg,连续21天,造成药物性耳聋模型.金匮肾气丸高、中、低3个剂量组,分别按20.3g/ (kg·d)、13.5g/(kg·d)、6.08g/ (kg·d)灌胃给药.正常对照组自由饮水和进食,实验结束后,处死所有豚鼠,采血分离血清,取耳蜗组织.观察指标:Cav1.2免疫组化检测;肿瘤坏死因子(TNF-α)测定.结果:①各剂量组、模型组与正常对照组比较,TNF-α表达增加(P＜ 0.05,P＜0.01).各剂量组与模型组比较,TNF-α表达有所减少,差异有显著性或非常显著性意义(P＜0.05,P＜0.01).②模型组与正常对照组比较,Cav1.2表达显著减少,差异有非常显著性意义(P＜0.01).高、中剂量组Cav1.2表达与模型组比较明显增加,差异有显著性或非常显著性意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:金匮肾气丸可以降低TNF-α表达,从而降低庆大霉素的毒性,对损伤进行了对抗性的防治;可以使Cav1.2表达增加,从而影响Ca2+运行,以改善听觉的产生.
关键词： 金匮肾气丸 耳聋 豚鼠 Cav1.2 肿瘤坏死因子-α(TNF-α) -
蓝光对人视网膜色素上皮细胞内钙离子浓度的影响及机制研究
目的:观察蓝光对人视网膜色素上皮细胞内钙离子浓度的影响并初步探讨其可能机制.方法:利用35 W白色冷光灯加用蓝色滤光片建立蓝光损伤体外培养的RPE细胞模型,蓝光控制波长范围在470～520 nm,光照强度在2000 lux左右,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测RPE细胞内游离钙离子浓度,利用Western blot技术和膜片钳技术分别检测RPE细胞Cav1.2蛋白的表达和L型电压依赖性钙离子通道的功能.结果:与对照组相比,照射组的RPE细胞内游离钙离子浓度增加;照射后RPE细胞Cav1.2蛋白表达增加,且L型电压依赖性钙离子通道功能增强.结论:蓝光可通过增加RPE细胞Cav1.2蛋白表达和L型电压依赖性钙离子通道的功能促进细胞内游离钙离子浓度的增加,从而引起RPE细胞的损伤,L型电压依赖性钙离子通道有望成为治疗年龄相关性黄斑变性等视网膜变性疾病的新靶点.
