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低剂量辐射增强大剂量辐射对人胶质瘤的抑瘤作用
目的 探讨低剂量辐射及低剂量联合大剂量辐射对人胶质瘤生长的影响.方法 以胶质瘤细胞株U251及荷人胶质瘤裸鼠移植瘤为研究对象,分别给予低剂量辐射和低剂量联合大剂量辐射,采用细胞计数、噻唑蓝(MTT)、流式细胞术等方法检测对细胞增殖的影响,通过汁算抑瘤率来观察低剂量辐射联合大剂量辐射对移植瘤生长的影响.结果 低剂量辐射后U251细胞计数、MTT及流式细胞术检测结果与假照组相比差异无统计学意义;大剂量辐射组及低剂量联合大剂量辐射组细胞增殖明显受抑,凋亡增多,细胞周期G2期阻滞,两组间差异无统计学意义;低剂量辐射联合大剂量辐射组与单独大剂量辐射组均对裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,但联合照射组抑瘤作用更强;联合照射组与单纯大剂量辐射组相比,血液系统损伤有所减轻.低剂量辐射组与假照组相比肿瘤生长差异无统计学意义.结论 低剂量辐射对人胶质瘤细胞无直接的抑制作用、兴奋效应.不诱导对大剂量辐射适应性反应,但能够在对正常造血系统产生保护作用的基础上,增强大剂量辐射对荷瘤裸鼠移植瘤的抑瘤作用,这种协同抗肿瘤作用在去除细胞免疫影响后仍然存在.
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siRNA沉默COX-2基因对胶质瘤细胞放射敏感性的影响
目的 利用小分子RNA(small interfering RNA,siRNA)技术体外沉默人胶质瘤细胞COX-2基因表达,探讨其对放射敏感性的影响,以期为胶质瘤的治疗提供新的思路和方法.方法 体外培养胶质瘤U251细胞,使用siRNA技术构建U251细胞COX-2基因沉默模型,Western blot检测转染后细胞COX-2蛋白表达情况,筛出适序列.将实验分为对照组与转染组,分别予以2、4、6、8 Gy四个剂量组予以X线照射,实验重复3次,使用MTT法检测辐射后细胞增殖抑制情况,平板克隆形成实验检测细胞存活分数(SF)并通过单击多靶拟合曲线计算增敏比(SER),流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 转染组COX-2蛋白表达情况较对照组均下降,其中以siRNA600序列降低为明显,差异具有统计学意义(P＜0.05),后续实验均以siRNA600序列进行转染.辐射后转染组的细胞增殖抑制率为(84.87±3.50)％、(63.62±0.35)％、(55.05±4.87)％、(36.85±3.00)％,较对照组增殖抑制作用明显增强,并随放射剂量增加而增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).辐射后的转染组SF低于对照组,且转染组D0为4.110,Dq为1.387,均低于对照组,对照组D0为6.908,Dq为2.772,放射增敏比SER为1.680,差异有统计学意义(P＜0.05).辐射后的转染组细胞凋亡率为(3.63±0.45)％、(6.08±0.87)％、(47.97±2.13)％、(59.56±3.07)％均高于对照组,且在6 Gy、8 Gy照射后升高更为明显.结论 siRNA技术沉默人胶质瘤U251细胞COX-2基因表达可以提高细胞的放射敏感性,增加了放射后细胞的凋亡率及增殖抑制作用,降低了克隆形成率.
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鹿茸多肽对人胶质瘤细胞生长抑制率及细胞周期的影响
目的 观察鹿茸多肽对人胶质瘤细胞生长抑制率及细胞周期的影响,探讨鹿茸多肽抑制肿瘤细胞的增殖及调节细胞周期作用的机制.方法 在体外传代的培养人胶质瘤细胞(U251)细胞株中加入不同浓度(50、100、200、400、800μg/mL)的鹿茸多肽,诱导培养48 h,镜下观察细胞的形态学变化,MTT法检测鹿茸多肽对肿瘤细胞增殖情况,计算抑制率;流式细胞术(FCM)分析鹿茸多肽,诱导培养肿瘤细胞48 h后,细胞周期变化情况.结果 形态学观察表明,与对照组相比,随着药物剂量的增加,实验组细胞密度逐渐降低,细胞间隙逐渐增宽,细胞体积逐渐缩小,细胞内颗粒逐渐增多.MTT法检测结果表明,鹿茸多肽对肿瘤细胞的增殖抑制作用明显,细胞生长抑制率随着剂量增加抑制率逐渐增加,呈现出良好的剂量依赖性.FCM检测表明,肿瘤细胞G0/G1期与S期所占百分比逐渐减少,G2/M期阻滞.48 h均出现凋亡峰,及凋亡细胞群.结论 鹿茸多肽对体外培养的人胶质瘤细胞的增殖有抑制作用,并具有量效关系.可使肿瘤细胞阻滞在细胞周期的G2/M期,继而引起的细胞周期阻滞和诱导其凋亡.
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胶质瘤细胞来源外泌体的提取与鉴定
目的 提取和鉴定人脑胶质瘤细胞来源外泌体,为后续开展人脑胶质瘤外泌体研究提供必要的材料和稳定的方法.方法 使用超速离心法分离人脑胶质瘤细胞培养上清液中的外泌体;通过透射电镜观察其大小及形态特征,马尔文粒度分析仪分析其直径大小,免疫印迹实验检测其表面特异性标志物CD9及CD63的表达.结果 从人脑胶质瘤U251细胞培养上清液中分离出囊泡状物质,透射电镜下可见茶托样、均质、具有膜样结构的微小囊泡,直径约30~150 nm;马尔文粒度分析显示囊泡大小为50~150 nm;免疫印迹实验检测到其表达外泌体特异性标记蛋白CD9及CD63.结论 利用超速离心法成功分离并鉴定了人脑胶质瘤细胞来源的外泌体,提取的外泌体可用于后续实验;并研究出稳定的外泌体分离与鉴定的方法.
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人参皂甙Rh2对人胶质瘤细胞内钙离子浓度的影响
目的 观察人参皂甙Rh2对人胶质瘤细胞内钙离子浓度的影响.方法 实验分为对照组和人参皂甙Rh2组,对照组应用常规培养基培养人胶质瘤细胞株U87MG,人参皂甙Rh2组在常规培养基中人参皂甙Rh2的浓度为20μg/mL,利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测各组培养的人胶质瘤细胞内钙离子浓度,再利用Western blot技术检测人胶质瘤细胞Cav1.2蛋白的表达,后利用膜片钳技术检测人胶质瘤细胞L型电压依赖型钙离子通道的功能.结果 人参皂甙Rh2处理U87MG细胞后,细胞内钙离子浓度是对照组的2.5倍(P<0.05);人参皂甙Rh2培养后胶质瘤细胞Cav1.2蛋白表达量是对照组的1.5倍(P<0.05),且L型电压依赖性钙离子通道功能增强.结论 人参皂甙Rh2可通过增加胶质瘤细胞Cav1.2表达和L型电压依赖性钙离子通道的功能促进细胞内游离钙离子浓度的增加,从而诱导人胶质瘤细胞的凋亡.
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DMSA@γ-Fe2O3纳米磁流体联合卡氮芥在交变磁场下对人胶质瘤细胞U251的影响
目的 研究在一定强度交变磁场下DMSA@γ-Fe2O3纳米磁流体热疗联合化疗药物卡氮芥对人胶质瘤细胞U251的影响.方法 对Fe2O3纳米材料进行体外升温实验,以期找到热疗(43℃)所需的佳浓度.MTT法评价Fe2O3纳米材料对人胶质瘤细胞U251的毒性作用,并确定卡氮芥对该细胞的工作浓度.将人胶质瘤细胞U251分为对照组、磁纳米热疗组、化疗组、磁纳米热疗联合化疗组(简称热化疗组),对照组更换培养液后继续培养,磁纳米热疗组加入适当浓度的Fe2O3浸提液置于磁场下43℃热疗2h,化疗组加入工作浓度的卡氮芥后继续培养24h,热化疗组加入上述浓度的卡氮芥后置于于磁场下43℃热疗2h,采用流式细胞仪观察各组细胞的凋亡情况.结果 Fe2O3纳米材料升温效应良好,当Fe2O3浓度≥8g·L-1时,温度可达43℃以上.Fe2O3纳米材料对U251细胞毒性为0～1级,均属对细胞无毒性范畴.以24h 时IC10～IC25的药物浓度作为实验的工作浓度,确定卡氮芥的工作浓度为0.02g·L-1;43℃单独热疗和单独化疗均对胶质瘤细胞有抑制和杀伤作用(P<0.05),而在此温度下磁纳米热疗与药物联合抑制作用均明显强于单独热疗和单独化疗(P<0.05);流式细胞仪结果显示,对照组、磁纳米热疗组、化疗组、热化疗组细胞凋亡率分别为2.58%、13.75%、17.60%和35.27%.结论 交变磁场作用下,磁纳米热疗(43℃)可以明显增强化疗药物卡氮芥对人胶质瘤细胞U251的抑制作用.
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鬼臼毒素聚合物胶团对人胶质瘤细胞的抑制作用
目的 合成鬼臼毒素聚合物胶团,评价其对人胶质瘤细胞的增殖抑制作用.方法 制备鬼臼毒素聚合物胶团,考察其理化性质,通过肿瘤细胞摄取实验,噻唑蓝(MTT)法检测其对U87细胞的增殖抑制作用.结果 鬼臼毒素聚合物胶团比游离药物鬼臼毒素对人胶质瘤细胞有更大的增殖抑制作用,显著增加肿瘤细胞内的药物浓度.结论 鬼臼毒素聚合物胶团对人脑胶质瘤细胞增殖有明显的抑制作用.
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Bcl-2反义寡核苷酸对环已亚胺诱导U251细胞凋亡的影响
目的 探讨Bcl-2反义寡核苷酸对环已亚胺(CHX)诱导胶质瘤细胞U251凋亡的影响.方法 在光镜下观察Bcl-2反义寡核苷酸、CHX及二者联合应用对U251凋亡的形态学改变;应用MTT法检测各组U251细胞的抑制率;通过DNA电泳检测CHX诱导U251细胞凋亡的情况.结果 Bcl-2反义寡核苷酸可明显促进CHX诱导的U251凋亡,对照组、SODN组与CHX组、AODN组、SODN+CHX组及AODN+CHX组的细胞抑制率相比P均＜0.01,AODN组、SODN+CHX组和AODN+CHX组的细胞抑制率相比P均＜0.01;Bcl-2反义寡核苷酸可促进细胞凋亡,呈现出特征性的DNA梯状带. 结论 Bcl-2反义寡核苷酸和CHX均可诱导胶质瘤细胞U251发生凋亡,且Bcl-2反义寡核苷酸可明显促进CHX诱导的胶质瘤细胞U251凋亡,提高胶质瘤细胞对CHX的敏感性.
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Survivin反义寡核苷酸增强U251人胶质瘤细胞对顺铂的敏感性研究
目的 研究Survivin反义寡核苷酸对U251人胶质瘤细胞顺铂治疗敏感性的影响.方法 脂质体介导Survivin反义寡核苷酸转染U251人胶质瘤细胞,Western blot法检测内源性Survivin表达水平的变化,MTT法检测顺铂对细胞生长情况的影响,流式细胞仪(FCM)观察顺铂诱导各组U251细胞的凋亡.结果 反义Survivin脂质体复合物能有效下调Survivin表达水平,并且能抑制U251细胞的生长,提高U251细胞对顺铂的敏感性.流式细胞仪检测凋亡率明显提高.结论 Survivin反义寡核苷酸能增强顺铂诱导的U251细胞凋亡,Survivin反义寡核苷酸和顺铂联合用药对U251细胞生存具有协同抑制效应,可改善治疗效果.
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吉非替尼衍生物对体外间变形星形细胞瘤增殖的影响
目的:采用吉非替尼衍生物体外干预胶质瘤细胞,为临床治疗探索一种新的药物.方法:(1)以15种吉非替尼衍生物(LPY-号)、 吉非替尼及替莫唑胺干预原代胶质瘤细胞,每种以0、10、15、20、25、30μmol/L 6种浓度干预后行MTT测药物抑制率,筛选作用明显的衍生物;(2)计算药物IC50,选择IC50较低的衍生物与吉非替尼、替莫唑胺以10、20、30μmol/L干预细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡;选择凋亡明显的衍生物和吉非替尼处理细胞,用western-blot检测磷酸化的表皮生长因子受体(p-EGFR)含量的表达.结果:(1)MTT:LPY-5、9、11号能有效地抑制细胞的生长,其他衍生物筛除.(2)IC50:LPY-9号的IC50低于5号,两者均低于吉非替尼及替莫唑胺;LPY-11号筛除.(2)流式细胞术:LPY-5、9号的细胞凋亡率均高于吉非替尼和替莫唑胺,9号明显高于5号.(4)western-blot:LPY-9号和吉非替尼干预肿瘤细胞后p-EGFR的表达量均低于阴性对照组,且9号更明显;所有结果的差异都具有统计学意义.结论:LPY-9号在体外对胶质瘤细胞有明显抑制作用,其可能是通过抑制ERFR介导的信号传导通路和诱导细胞凋亡来实现的.
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热休克蛋白70在人胶质瘤耐药过程中的作用
目的 应用热休克人胶质瘤细胞的方法,观察热休克蛋白70(HSP 70)在人胶质瘤细胞耐药过程中的作用.方法 经43 ℃热处理2 h的人胶质瘤细胞,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化技术检测HSP 70 mRNA及蛋白的表达情况;应用hoechst 33258荧光染色的方法观察化疗药物阿霉素(adriamycin,ADM)作用后,不同处理组人胶质瘤细胞的凋亡情况.结果 HSP 70免疫组化,HS+ADM组阳性率为(61.5±18.3)%,与HS组(61.0±14.1)%比较没有统计学意义,但显著高于对照组(8.50±4.09)%(P＜0.05),RT-PCR结果与免疫组织化学一致;ADM组凋亡细胞比率为(52.7±19.1)%,显著高于对照组(6.5±3.6)%(P＜0.05),HS+ADM组(25.0±10.7)%高于对照组但显著低于ADM组(P＜0.05),HS组(7.2±3.6)%与对照组没有明显差异(P＞0.05).结论 热休克的方法可以诱导人胶质瘤细胞HSP 70的表达;HSP 70可能是引起人胶质瘤细胞耐受ADM的机制之一.
