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反相高效液相色谱法测定大鼠血浆柴胡皂苷b2
目的 建立大鼠血浆柴胡皂苷b2检测的高效液相色谱方法.方法 色谱柱为Agilent TC-C18色谱柱(150 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2％三氟乙酸一水(40∶ 20∶ 40),流速为1.0 mL·min-,柱温为30℃,检测波长为254nm.以伏立康唑为内标,血浆在碱性条件下经乙酸乙酯萃取后检测.结果 柴胡皂苷b2浓度在0.05～6.00mg· L-1内线性关系良好(r=0.999 7),定量下限为0.05 mg·L-.低中高3个浓度(0.1,1.0,4.0 mg· L-1)的质控样品日内RSD分别为5.20％,4.80％和2.84％,日间RSD分别为6.39％,5.13％和2.47％；相对回收率分别为(97.17±7.22)％,(103.87±4.28)％和(101.75±1.54)％.结论 该方法简便、快速、准确、重复性好,适用于大鼠血浆柴胡皂苷b2浓度的测定及其药代动力学研究.
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柴胡皂苷b2通过抑制线粒体凋亡通路减轻过氧化氢诱导的L-02细胞损伤
目的 探讨柴胡皂苷b2(SS-b2)对过氧化氢(H2O2)诱导的L-02细胞损伤的保护作用及其可能的作用机制.方法 将L-02细胞分为正常对照组、模型组(H2O2100μmol·L-1孵育12 h)和SS-b2组(SS-b212.5,25,50和100 mg·L-1孵育24 h后,再加入H2O2继续孵育12 h).MTT法检测L-02细胞存活率;罗丹明123染色检测L-02细胞线粒体膜电位变化;Hoechst33258荧光染色法和流式细胞术检测L-02细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测线粒体凋亡通路蛋白Bcl-2、Bax、细胞色素c(Cyt-c)、胱天蛋白酶9和3表达水平.结果 与正常对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01);细胞线粒体膜电位水平降低(P<0.01)且细胞凋亡率显著增加(P<0.01);Bax(P<0.01)、Cyt-c(P<0.01)、胱天蛋白酶9(P<0.05)和3(P<0.05)蛋白表达水平显著升高,而Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01).与模型组相比,SS-b2各浓度组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01),且呈浓度依赖性(r=0.9804,P<0.05);线粒体膜电位水平升高(P<0.01);Hoechst染色和流式细胞检测结果均显示,细胞凋亡率明显降低(P<0.05,P<0.01);Bax、Cyt-c、胱天蛋白酶9和3蛋白水平显著下调(P<0.01),且Bcl-2蛋白水平上调(P<0.01).结论 SS-b2可减轻H2O2诱导的L-02细胞损伤,其机制与抑制线粒体凋亡有关.
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HPLC法同时测定逍遥丸中5个化学成分的含量
目的:建立高效液相色谱法在三个波长下同时测定逍遥丸中芍药苷、甘草苷、柴胡皂苷b2、白术内酯Ⅱ及阿魏酸五个成分的方法.方法:采用C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.2％磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长分别为230 nm(芍药苷、甘草苷和柴胡皂苷b2),278 nm(白术内酯Ⅱ),325 nm(阿魏酸).结果:芍药苷、甘草苷、柴胡皂苷b2、白术内酯Ⅱ及阿魏酸分别在1.21 ～ 18.15 μg、0.18 ～2.19 μg、0.38 ～2.34 μg、0.102 ～0.612 4μg及0.022 ～0.437 μg之间呈良好的线性关系.平均回收率分别为98.1％、100.1％、99.3％、102.2％、102.3％,RSD％分别为1.9％、3.3％、3.2％、1.4％及2.4％(n=6).结论:不同剂型之间以及同一剂型不同企业间分析物含量差异显著,提示除原药材质量可能直接导致含量差异外,不同剂型的工艺对化学成分也有直接的影响.所建立的方法能适用于逍遥丸所有剂型,方法重现性好,可为有效控制逍遥丸质量提供依据.
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加味逍遥片的薄层色谱研究
目的：建立鉴别加味逍遥片中8种有效成分的薄层色谱方法。方法：以柴胡皂苷b2、藁本内酯、芍药苷、白术内酯Ⅲ、栀子苷、甘草苷、6-姜辣素和丹皮酚为指标性成分，分别对加味逍遥提取物和加味逍遥片进行薄层色谱鉴别。结果：薄层色谱法可鉴别出柴胡皂苷b2、藁本内酯、芍药苷、白术内酯Ⅲ、栀子苷、甘草苷、6-姜辣素和丹皮酚。结论：该方法操作简便、准确可靠，克服了原方法的不足，可用于加味逍遥片的质量控制。
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胃能方有效组分中3种成分在大鼠体内血药浓度测定
目的 建立大鼠血浆中胃能方有效组分中柚皮苷、新橙皮苷和柴胡皂苷b2的HPLC血药浓度测定方法.方法 血浆样品用甲醇沉淀蛋白,高效液相色谱法(HPLC)测定血药浓度.色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸水,流速:1 mL/min,检测波长:280 nm和254 nm.结果 各成分的低检测浓度在0.067~0.272 mg/L,平均回收率均在85%以上,日内日间精密度及稳定性的RSD均小于10%.结论 该方法简便、准确,可用于胃能方有效组分中柚皮苷等3种成分的血药浓度定量分析.
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四逆散不同配伍对柴胡皂苷a、b2及柴胡总皂苷煎出量的影响
目的 研究四逆散不同药味组合与柴胡中皂苷类成分煎出量之间的关系.方法 采用RPHPLC法测定四逆散不同配伍中柴胡皂苷a、b2的煎出量;比色法测定总柴胡皂苷的煎出量.结果 枳实中的成分可提高柴胡皂苷类成分的煎出量.结论 四逆散不同药味配伍对柴胡皂苷类成分的煎出影响较大.
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柴胡口服液HPLC指纹图谱及柴胡皂苷b2的含量检测分析
目的：根据柴胡口服液HPLC指纹图谱及柴胡皂苷b2的含量，提供评价质量的方法。方法根据HPLC方法对5批柴胡口服液进行测定，并根据中药色谱指纹图谱相似度评价系统，建立柴胡口服液标准指纹图谱，并测定每批制剂柴胡皂苷b2的含量以及制剂的相似度。结果5批柴胡口服液的HPLC指纹图谱共有5个峰，相似度＞0.945，柴胡皂苷b2在0.0395~0.7935μg显示存在良好的线性关系。结论柴胡口服液制剂与标准指纹图谱对比评价质，操作方便，可有效用于评价柴胡口服液的质量。
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柴胡皂苷B2（Saikosaponin B2）对四氯化碳损伤HepG2细胞的保护作用
目的：初步探讨柴胡皂苷B2（SSB2）对CCl4肝细胞损伤的保护作用。方法用CCl4诱肝HepG2细胞损伤，设立正常对照组、CCl4损伤组和不同浓度SSB2保护组；利用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力以及流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的方法，观察SSB2对CCl4诱导的肝细胞损伤的保护作用。结果 MTT检测显示SSB2保护组细胞活性明显高于损伤组，以SSB2浓度为100μg/mL保护组细胞活性高；流式细胞仪测定细胞凋亡率显示SSB2保护组（终浓度为100μg/mL）凋亡率明显低于CC14损伤组，细胞周期各期细胞分布比例无明显变化。结论 SSB2对CCl4诱导的HepG2细胞损伤具有保护作用。
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贵州苗药吉祥草中皂苷类化学成分研究
目的 研究贵州苗药吉祥草Reineckia carnea中的皂苷类成分.方法 用95％乙醇提取,萃取后利用常规硅胶柱、大孔树脂、ODS C18、Sephadex LH-20及Pre-HPLC等进行分离纯化,通过理化性质、HR-ESI-MS和核磁波谱进行结构鉴定.结果 从吉祥草的正丁醇部位分离得到10个皂苷类化合物,分别鉴定为(1β,3β,16β,22S)-cholest-5-ene-1,3,16,22-tetrol-l,16-di-(β-D-glucopyranoside)(1)、(1β,3β,16β,22S)-cholest-5-ene-1,3,16,22-tetrol 1-[O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside]-16-(β-D-glucopyranoside) (2)、(20S,22R)-spirost-25(27)-en-1β,3β,4β,5β-tetraol-5-O-β-D-glucopyranoside (3)、kitigenin 5-O-β-D-glucopyranoside(4)、蜘蛛抱蛋苷A(5)、(17,20-S-trans)-5β-pregn-16-en-1β,3β-diol-20-one-1-O-β-D-xylopyranosyl-(1→2)-[α-L-rhamnop yranosyl]-3-O-α-L-rhamnop yranosi de (6)、薯蓣皂苷元-3-O-β-L-吡喃葡萄糖苷(7)、麦冬皂苷T(8)、prosaikogeninD(9)、柴胡皂苷b2 (10)结论 化合物3、5、8～10均为首次从吉祥草中分离得到,为进一步阐明和开发吉祥草中皂苷类成分提供了一定的参考.
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柴胡皂苷 B2对人神经母细胞瘤细胞过氧化氢损伤模型的作用
目的：探究柴胡皂苷B2对人神经母细胞瘤细胞（SH －SY5Y）过氧化氢损伤后的作用。方法采用体外细胞培养的方法，建立 SH －SY5Y神经细胞 H2 O2损伤模型。分别将含体积分数0.05、0．10、0．20柴胡皂苷B2（10－4 mol／L）的小牛血清按10％的比例加入SH －SY5Y细胞中，然后采用140μmol／L的H2 O2进行处理，平行设立10％小牛血清组和空白血清未经H2 O2处理组作为模型组和空白组。观察各组细胞形态，同时测定细胞存活率，检测柴胡皂苷B2作用下SH －SY5Y神经细胞的生存状态。结果同模型组比较，1×10－6 mol／L和2×10－6 mol／L的柴胡皂苷B2均能显著减轻 H2 O2造成的S H －SY5Y神经细胞的过氧损伤，明显提高细胞的存活率。结论柴胡皂苷B2对过氧化氢诱导损伤的人神经母细胞瘤细胞具有明显的保护作用。
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HPLC-CAD法测定不同产地柴胡药材中柴胡皂苷
目的 建立HPLC-CAD法测定不同产地柴胡中柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷d的含有量.方法 柴胡甲醇提取液的分析采用Waters C18柱(4.6 mm×150mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温20℃;CAD检测器.结果 3种柴胡皂苷分别在0.088～8.8 μg(r=0.999 1)、0.044～4.4 μg (r=0.999 0)、0.088 ～8.8 μg(r=0.998 5)范围内线性关系良好,平均加样回收率99.04％～100.42％.结论 该方法操作简便,结果准确,重复性好,可用于柴胡药材的质量评价.
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10种中药制剂中柴胡的定量测定
目的 对10种中药制剂(柴胡口服液、柴黄颗粒、小儿热速清口服液、感冒止咳颗粒、小柴胡颗粒、气滞胃痛颗粒、正柴胡饮胶囊、逍遥丸、护肝片、加味逍遥丸)中的柴胡进行定量测定.方法 以柴胡皂苷b1、b2为指标,5％氨水-甲醇为提取溶剂,通过固相萃取技术净化.再通过HPLC法分析,条件为Phenomenex Gemini-NX C18 110A色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇-0.2％二乙胺(70∶30);体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长254 nm.结果 10种中药制剂(共27批样品)中均可检测到柴胡皂苷b2,阴性无干扰,但只有部分制剂能测定柴胡皂苷b1的含有量.结论 应建立测定柴胡皂苷b1、b2含有量的方法以用于控制中药制剂中柴胡的质量.
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一测多评法同时测定消癥微丸中4种柴胡皂苷
目的 建立一测多评法同时测定消癥微丸(柴胡、香附、大黄等)中4种柴胡皂苷的含有量.方法 该药物5％氨水-甲醇提取液的分析采用Waters Xbridge C1s色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-水为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长210、254 nm.以柴胡皂苷a为内标,计算柴胡皂苷b1、b2c的相对校正因子,再测定其含有量.结果 4种柴胡皂苷在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率98.08％ ～102.94％,RSD 0.85％～1.82％,一测多评法所得结果与外标法接近.结论 该方法简单、精确、可行,可用于消癥微丸的质量控制.
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柴胡醋制前后柴胡皂苷a、b2、c、d的LC-MS/MS法测定及比较
采用 LC-MS/MS 法对醋制前后柴胡中的Ⅰ型柴胡皂苷a、c、d与Ⅱ型柴胡皂苷b2进行含量测定,色谱柱为KinetexTMC18(50 mm×4.6 mm,2.6 μm),流动相为水-乙腈-甲醇三元梯度洗脱；检测系统为电喷雾离子源(ESI)-三重四级杆质谱仪,ESI负离子模式检测,待测成分与内标均采用负离子加合物作为选择性反应监测(SRM)的前体离子,以[M+HCOO]-/[M-H]-作为SRM检测离子对.方法学验证结果显示,所建立的方法灵敏度高、专属性好,可作为柴胡生品及醋炙品的质量控制方法.含量测定结果表明,醋制过程引发了由Ⅰ型柴胡皂苷向Ⅱ型的转化,醋制后柴胡皂苷b2的含量明显增加,对柴胡醋炙品的质量控制应同时考虑对Ⅰ、Ⅱ型柴胡皂苷柴胡皂苷进行测定.
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薄层扫描法测定小儿解热宁口服液中柴胡皂苷b2的含量
目的:建立小儿解热宁口服液的含量测定方法.方法:采用薄层扫描法对小儿解热宁口服液中柴胡皂苷b2进行定量.结果:柴胡皂苷b2在0.6～2.8 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系,平均回收率为97.09%,RSD=1.24%(n=5).结论:本法简便、快速、准确,可作为小儿解热宁口服液质量控制的方法.
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柴胡皂苷b2降解产物结构研究
目的 研究柴胡皂苷b2降解产物的结构.方法 采用各种分离技术和光谱技术对柴胡皂苷b2降解产物的结构进行分离和结构鉴定.结果 柴胡皂苷b2在保存过程中形成的降解产物的结构为Saikogenin D.结论 为进一步研究其降解的过程动力学过程,进而更好地保存柴胡皂苷b2奠定基础.
关键词： 柴胡皂苷b2 Saikogenin D 降解产物 -
HPLC-ELSD法同时测定四逆散不同配伍中柴胡皂苷a、b2、c的含量
目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法同时测定四逆散不同配伍中柴胡皂苷a,b2,c的含量.方法:采用Hypersil BDS C18 色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱;流速:1.0 ml · min-1,ELSD检测器,漂移管温度:100℃,气体:空气,气体流速:2.0 L · min-1,柱温:室温.结果:柴胡皂苷a,b2,c分别在7.74~129.00,7.86~131.00,5.12~85.30 μg的范围内线性关系良好(r分别为0.999 2,0.999 2,0.999 3);平均回收率分别为98.6%,99.3%,100.7%,RSD分别为2.5%,1.8%,2.7%(n=6).结论:白芍中的成分可降低柴胡皂苷a、c的煎出量;枳实中的成分可提高柴胡皂苷a、b2、c的煎出量;与单味柴胡药材相比,配伍组合中柴胡皂苷b2的含量均显著增加.
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HPLC法测定小柴胡颗粒中柴胡皂苷b2的含量
目的：建立小柴胡颗粒中柴胡皂苷b2含量的测定方法。方法采用HPLC法， phenomenex R Luna色谱柱，以乙腈-0.2%二乙胺（35∶65）为流动相，流速为1.0 mL·min-1，柱温30℃，检测波长254 nm。结果柴胡皂苷b2线性范围0.3632~3.6320μg， R2=1.00；平均加样回收率为102.2%， RSD为2.5%。结论该方法准确、稳定，重现性好，可用于小柴胡颗粒的质量控制。
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HPLC-MS/MS法测定柴葛解肌汤中柴胡皂苷a、b2的含量
目的 建立测定柴葛解肌汤中Ⅰ型柴胡皂苷a与Ⅱ型柴胡皂苷b2的HPLC-MS/MS方法.方法 采用Hypersil GOLD aQ色谱柱(150 mm×2.1 mm,3μm),乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相,流速为300 μL· min-1,柱温:25℃,以液相色谱分离、电喷雾离子化串联进行检测.结果 柴胡皂苷a、b2分别在44.8～672 ng·mL-1、47.2～708 ng· mL-1线性关系良好(r=0.9992、r=0.9993),平均回收率分别为98.53％和99.47％,RSD分别为2.01％和2.08％(n=6).结论 该方法快速简便、准确、灵敏度高,可用于柴葛解肌汤中柴胡皂苷a、b2的含量测定.
关键词： 柴葛解肌汤 柴胡皂苷A 柴胡皂苷b2 HPLC-MS/MS -
气滞胃痛颗粒中柴胡的质量控制方法研究
目的 建立气滞胃痛颗粒中柴胡的质量控制方法.方法 采用薄层色谱法对气滞胃痛颗粒中柴胡主要成分进行鉴别,并采用高效液相色谱法对其进行验证.结果 薄层色谱中,气滞胃痛颗粒供试品在与柴胡皂苷b2色谱相应位置显相同颜色荧光斑点,与柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d荧光斑点处未显示.高效液相色谱中,供试品呈现与柴胡皂苷b2保留时间相同的色谱峰,未呈现柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d保留时间相同的色谱峰.结论 柴胡皂苷b2可作为表征气滞胃痛颗粒中柴胡的质量控制指标.
