孕烷X受体对细胞色素P450 3A调控机制的研究进展

细胞色素P450 3A(CYP3A)是参与临床药物代谢的主要CYP同工酶之一.孕烷X受体(PXR)属于核受体超家族(NR)的NR1Ⅰ亚家族.该受体作为药物代谢的关键转录调控因子,参与CYP3A的诱导表达.药物可通过多种途径激活PXR受体调控cyp3a基因的表达,其中包括PXR与其他核受体、转录因子及细胞信号转导通路间的相互作用等多种途径.目前,基于PXR的筛选方法已广泛应用于早期新药研发.

PXR受体调控的CYP3A诱导及其在药物代谢中的重要意义

机体每日都要接触大量外源性化合物(xenobiotics),包括环境、饮食、药物中的各种成分,其中亲脂性化合物如果不能被及时代谢为极性化合物,就会在肝脏蓄积并影响机体正常生理功能,产生毒性甚至致癌.细胞色素P450(CYPs)属于血红素蛋白基因超家族,编码一系列代谢酶系统,参与各类不同结构亲脂性化合物的生物转化,增强代谢物水溶性,利于排出体外,从而降低外源物对机体靶器官的毒性效应.在CYP超家族中,CYP3A亚型与药物代谢密切相关.药物对CYP3A的诱导表达可加速合用药物的代谢,导致药物间的相互作用(drug-drug interaction),因此阐明CYP3A基因诱导表达的机制有助于研发出更安全有效的药物.近年来一系列研究发现,孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)作为关键的转录调控因子参与CYP3A基因诱导表达,从而在分子水平上阐明了PXR减少外源性物质在体内蓄积的原因,同时也揭示了一种药物相互作用模式的分子机制.从配体激活的核受体转录因子延伸到药物代谢酶系统,目前该领域已受到药物研发和药物安全性评价的广泛关注.

长期灌胃给予五酯片对大鼠P4503A基因及蛋白表达和活性的影响

本文考察长期灌胃给予五酯片对大鼠CYP3A基因、蛋白表达及活性的影响.雄性Sprague-Dawley大鼠随机分组后,连续灌胃给予五酯片(0.25 g·kg-1)或相应体积的蒸馏水14天.第15天,灌胃给予CYP3A经典探针药——咪达唑仑(2 mg·kg-1),评价五酯片对大鼠体内CYP3A活性的影响;或直接将大鼠断头取其肝脏及小肠,提取RNA及蛋白,考察五酯片对大鼠肝脏及肠道CYP3A基因及蛋白表达的影响.结果表明,长期灌胃给予五酯片使大鼠肝脏Cyp3a1及Cyp3a9 mRNA表达分别升高54.6％及188.3％ (P＜ 0.05);使大鼠肠道Cyp3a9mRNA表达升高48.2％ (P＜ 0.05);使大鼠肝脏CYP3A蛋白的表达升高43.2％;使咪达唑仑的AUC分别升高29.9％(未合用五酯片组,WZ pretreatment group)、154.2％(合用五酯片组,WZ coadministered group).因此,长期灌胃给予五酯片对CYP3A基因、蛋白表达及活性存在双向调控作用,五酯片诱导CYP3A mRNA及蛋白表达,却可抑制CYP3A的蛋白活性.

CYP3A探针底物咪达唑仑在大鼠体内的非线性药动学过程及剂量优化

孕烷X受体的研究进展及其在药物代谢中的作用

孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)是机体对有毒物质适应性防卫机制的一个重要组成部分,PXR被大量的外源性和内源性化学物质激活,这些物质包括类固醇、抗生素、抗真菌的物质和胆汁酸等.PXR配体结合区域三维结构显示它具有一个特殊球形配体结合腔,这种结构允许PXR与广泛的疏水性化学物质结合.PXR与9-顺式维甲酸受体(9-cis retinoic aid receptor,RXR)以异型二聚体的形式与细胞色素氧化酶P450 3A家族和其他参与药物代谢的Ⅱ相药物代谢酶以及药物转运蛋白的DNA响应元件结合,通过外源物刺激诱导多个基因的表达.分析PXR的结构与功能对药物设计和筛选具有重要的应用价值.

以咪哒唑仑为探针药测定大鼠肠CYP3A活性及其孵育条件优化

目的 测定大鼠肠微粒体中细胞色素P4503A(CYP3A)的活性,并对其体外孵育条件进行优化.方法 采用1'-羟基咪哒唑仑的生成量表示肠中CYP3A的活性,反相高效液相色谱法测定肠微粒体中1'-羟基咪哒唑仑的浓度,用单因素实验法对其体外孵育条件进行优化,用线性Lineweaver-Burk双倒数作图法研究肠CYP3A酶促动力学.结果 1'-羟基咪哒唑仑在9.10～910.00 ng·mL-1内线性关系良好;体外优化的孵育条件为10 μmol·L-1咪哒唑仑、4μg肠微粒体、孵育20 min;肠CYP3A酶促动力学参数Km为7.61 μmol·L-1,Vmax为1.26 nmol·min-1·mg-1.结论 HPLC操作简便、灵敏、快速,适用于肠微粒体中1'-羟基咪哒唑仑的浓度测定,肠CYP3A孵育条件及其酶促动力学研究为研究经CYP3A代谢的药物相互作用及其他物质对CYP3A酶的影响提供理论依据.

RP-HPLC同时测定William's E培养基中地塞米松、睾酮和6β羟基睾酮的含量

目的 建立同时测定William's E培养基中地塞米松、睾酮和6β羟基睾酮含量的RP-HPLC检测方法,并用该方法研究地塞米松对大鼠原代肝细胞CYP3A的诱导作用.方法 采用Agilent 1100 HPLC系统,Phenomenex色谱柱,以乙腈和磷酸溶液组成的流动相梯度洗脱分离,以酮康唑为内标,流速1.00 mL·min-1,检测波长245 nm,柱温20℃.结果 地塞米松、睾酮和6β羟基睾酮分别在53～19 291,161～29 318和58～21 091 μg·L-1内呈线性关系;它们的日间和日内精密度均低于15%;地塞米松、睾酮和6β羟基睾酮的小定量限分别为53.00,161.00和58.00 μg·L-1.结论 该方法简便、准确、可靠,可用于地塞米松作用于大鼠原代肝细胞体系后,地塞米松、CYP3A底物睾酮及其代谢产物6β羟基睾酮在William's E培养基中的浓度测定.

基于细胞色素P450 3A和P-糖蛋白调节交叠性评述药物相互作用及相关机制

目的 系统的梳理和综述基于细胞色素P450 3A和P-糖蛋白的调节交叠性引发的药物相互作用及机制的相关研究,为此方面的深入研究工作提供参考.方法 以国内外研究文献为基础,对资料进行分析、归纳和总结.结果与结论 细胞色素P450 3A是一类重要的药物代谢酶亚族；P-糖蛋白是ATP结合盒类外排转运载体超家族的重要成员.发现细胞色素P450 3A和P-糖蛋白二者调控具有交叠性是近年来药物代谢动力学领域较有突破性的研究成果,核受体调控途径可能是产生调节交叠性的重要原因之一. 因此,诠释细胞色素P450 3A和P-糖蛋白调节交叠性的分子机制对新药研发、药物靶标寻找和临床合理用药具有十分重要的意义.

巴马香猪、人和大鼠洛伐他汀体外代谢的比较

目的 体外研究巴马香猪、人和大鼠肝微粒体中洛伐他汀代谢的酶动力学差异,并用人体肝微粒体细胞色素P450 3A(CYP3A)酶特异性抑制剂酮康唑(KCZ)进行抑制,观察抑制活性反应的差异,评估巴马香猪作为人体CYP3A酶代谢药物研究实验动物模型的可行性.方法 制备巴马香猪、人和大鼠的肝微粒体,构建肝微粒体与洛伐他汀的反应体系以及抑制剂抑制反应体系,利用RP-HPLC测定洛伐他汀代谢的变化,并对其相应活性值进行比较.结果 巴马香猪肝微粒体代谢洛伐他汀的酶动力学变化比大鼠更为与人体相似.人体CYP3A特异性抑制剂均可以显著抑制三者的代谢,但是巴马香猪代谢速率下降程度与人体接近. 结论 巴马香猪与大鼠相比,更适用于作为人CYP3A酶代谢的相关药物研究的良好动物模型.

9种常用含丹参中成药对人肝微粒体CYP3A的体外抑制作用

目的 评价9种临床常用含丹参中成药对人肝微粒体CYP3A活性的抑制作用.方法 利用人肝微粒体,以睾酮及咪达唑仑作为评价CYP3A活性的体外探针,以高效液相串联质谱仪测定代谢产物1-羟基咪达唑仑与6β-羟基睾酮生成量,评价9种常用含丹参中成药对CYP3A酶的抑制,计算IC50值.结果 丹参酮胶囊对人肝微粒体CYP3A酶活性具有抑制作用,以咪达唑仑为探针的IC50为7.4 μg/mL,以睾酮为探针IC50为32.5 μg/mL;其余8种含丹参中成药对人肝微粒体CYP3A活性无抑制作用.结论 丹参酮胶囊可显著抑制CYP3A酶活性.

P450 3A亚型的测定

细胞色素P450 3A是人体代谢许多内源性化合物、外源性底物及其前致癌物的一类重要的肝脏药物氧化代谢酶.一个理想的表型测定方法应该是安全、快速、对同一个体的重复性好、预测药物的处置准确.由于表型测定更能反映患者个体间的差异,影响因素较多,临床的重要性更大,通过CYP3A表型的测定,以推动个体化给药在我国的发展.

罗格列酮对大鼠肝细胞色素P450 3A活性的影响

[目的] 探讨罗格列酮对细胞色素P450 3A活性的影响.[方法] 在正常大鼠肝细胞微粒体中加入浓度为0, 0.1, 0.25, 0.5, 1.0 mmol/L罗格列酮,以红霉素为底物,测定细胞色素P450 3A活性.[结果]加入不同浓度罗格列酮的大鼠肝微粒体中细胞色素P450 3A活性无显著性差异.[结论]罗格列酮对大鼠的肝细胞色素P450 3A活性无明显影响.

柑橘类果汁对大鼠细胞色素P450 3A的抑制与果汁中呋喃香豆素组成的相关性

目的:呋喃香豆素类(补骨脂素类)是导致葡萄柚汁与药物相互作用的重要成分.本研究拟调查该类化合物在其它柑橘类果汁中的存在,并比较这些果汁对细胞色素P450(CYP)3A活性的抑制强度.方法:用梯度高压液相色谱法测定柑橘类的鲜榨果汁中6种呋喃香豆素化合物的组成与含量.以雄性Sprague-Dawley大鼠肝微粒体的睾酮6β-羟化活性测试每种果汁对CYP3A的抑制作用.结果:与葡萄柚汁比较,Jaffa sweetie果汁中呋喃香豆素的组成与含量基本相同,对CYP3A的抑制强度也相当;日本红柚、溪蜜柚和金柚的果汁中呋喃香豆素组成相似但含量较低,对CYP3A的抑制强度也较弱;常山胡柚、甜橙与宽皮橘果汁中呋喃香豆素种类少且含量极低,且多数对CYP3A无抑制作用.结论:根据呋喃香豆素组成可以预测柑橘类果汁因为抑制CYP3A引起的药物相互作用;琯溪蜜柚及近缘品种的果汁可能导致类似于葡萄柚汁的药物相互作用,有必要在临床上加以验证.

细胞色素P450 3A 选择性探针药物的评价

理想的细胞色素P450 3A(CYP3A)探针药物有助于检测CYP3A活性,辅助临床合理用药.本文对CYP3A选择性探针药物进行比较和综合分析,评价各种CYP3A选择性探针药物的特点,阐明对临床合理用药的指导意义.在已筛选的CYP3A选择性探针药物中,咪哒唑仑是一较理想的探药.

孕烷X受体对CYP3A基因表达的调控作用及其在药物代谢中的意义

细胞色素P450 3A(cytochrome P4503As,CYP3As)在药物代谢过程中起重要作用,外源性化学物对肝脏CYP3A基因表达有明显的诱导作用.孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)是新发现的孤儿核受体(系统名:NR1I2).PXR与另一重要核受体RXR结合形成二聚体结合于CYP3A基因顺式反应元件,参与对CYP3A基因表达的调控作用.大量临床处方药物通过激活PXR而诱导CYP3A基因表达,构成了临床药物间相互作用的分子基础.

温州地区180名10周岁儿童细胞色素P450 3A酶活性分布

目的:调查温州地区180名10周岁儿童细胞色素P450 3A酶活性(cytochrome P450 3A activity,CA)的分布情况及正常值范围.方法:采用HPLC梯度洗脱法测定尿液中氢化可的松和6β-羟基氢化可的松浓度,以6β-羟基氢化可的松与氢化可的松的浓度之比来表示CYP3A酶的活性.结果:180名10周岁儿童CA分布不呈正态分布,变异系数为2.96,变异系数的标准误为0.13,偏度系数＞l.受检者CYP3A酶的平均活性为4.8±1.9,其中男孩为4.4±1.6,女孩为5.1±1.9.温州地区10周岁儿童CYP3A酶的活性无性别差别,正常范围值是0.85～21.52.结论:通过对180名10周岁儿童CYP3A酶活性的测定,推断出该年龄正常值范围,可为制定儿童个体化给药方案提供科学依据.