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pEgr1-TRAIL重组质粒联合电离辐射对乳腺癌MCF-7细胞死亡受体通路相关基因和蛋白表达的影响
目的:将Egr1-TRAIL重组质粒转染人乳腺癌MCF-7细胞且加X线照射,探讨MCF-7细胞中死亡受体通路相关基因和蛋白表达的变化.方法:将MCF-7细胞分为对照组、空质粒组、pEgr1-TRAIL质粒组、4.0Gy X射线组、空质粒+4.0 Gy X射线组和pEgr1-TRAIL+ 4.0 Gy X射线组.Real-time PCR法检测各组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6 mRNA表达水平;Western blotting法检测各组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6蛋白相对表达水平.结果:经4.0Gy X射线照射后4h,与对照组比较,各组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和easpase-6 mRNA表达水平升高(P＜0.01),8h达高值,之后开始降低,到24 h恢复到照射前水平;各组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6 mRNA表达由高到低的顺序为pEgr1-TRAIL+4.0Gy X射线组＞空质粒+4.0 Gy X射线组＞pEgr1-TRAIL质粒组＞空质粒组＞4.0 Gy X射线组＞对照组,其中pEgr1-TRAIL+4.0 Gy X射线组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6 mRNA表达水平明显高于其他各组(P＜0.01).MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6蛋白在照射后6h开始表达,12h达高峰,48 h后细胞中DR4、caspase-9和caspase-6蛋白表达水平仍高于6h时蛋白表达水平.与对照组比较,其他各组MCF-7细胞中蛋白相对表达水平由高到低的顺序为pEgr1-TRAIL+ 4.0 Gy X射线组＞空质粒+4.0 Gy X射线组＞4.0Gy X射线组＞pEgr1-TRAIL质粒组＞空质粒组＞对照组,其中pEgr1-TRAIL+4.0 Gy X射线组MCF-7细胞中蛋白相对表达水平明显高于其他各组.结论:pEgr1-TRAIL重组质粒联合放疗对MCF-7细胞具有杀伤和诱导凋亡的作用,其效果优于单纯质粒或单纯照射.
关键词： pEgr1-TRAIL重组质粒 电离辐射 MCF-7细胞 死亡受体通路 -
雷丸蛋白pPeOp诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡机制研究
目的 探究雷丸蛋白pPeOp诱导人胃癌细胞SGC-7901的凋亡机制.方法 采用CCK-8法和流式细胞术检测不同浓度的pPeOp(30、60、90 mg·L-1)对人胃癌细胞SGC-7901的活性抑制和凋亡诱导作用;qRT-PCR和Western blot检测死亡受体通路和线粒体通路TNF-R1、Fas/FasL、Bcl-2、caspase-3、caspase-8的mRNA和蛋白表达情况.结果 CCK-8结果显示,与Control组相比,阴性对照聚乙烯吡咯烷酮(PVP)组细胞存活率差异无显著性;阳性对照5-氟尿嘧啶(5-Fu)组细胞存活率为(53.71±7.34)%,存活率明显下降(P<0.05);30、60、90 mg·L-1的 pPeOp组细胞存活率分别为(80.95±6.25)%、(53.48±5.70)%、(44.61±6.50)%,存活率降低且与浓度呈负相关(r=0.984,P=0.016).流式细胞术结果显示,PVP组与Control组相比差异无显著性,5-Fu组细胞凋亡率为(39.30±3.34)%(P<0.05),30、60、90 mg·L-1 pPeOp组细胞凋亡率分别为(10.90±1.25)%、(28.80±2.70)%、(32.00±3.50)%,差异存在显著性(P<0.05).TNF-R1、Fas/FasL、caspase-3及caspase-8的mRNA和蛋白表达水平均上调,差异存在显著性(P<0.05);Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平下调,差异存在显著性(P<0.05).结论 pPeOp能明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖并诱导其凋亡,死亡受体通路和线粒体通路与pPeOp诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡有关.
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线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分诱导KG1a细胞凋亡中的作用
目的 研究线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分(naja naja actra venom component,NNAVC)诱导KG1a 细胞凋亡过程中的作用.方法 以人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞为研究对象,采用Annexin V-FITC/PI荧光染色法进行凋亡细胞的形态学观察,流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的活性,ELISA法检测胞质内细胞色素C的表达水平,流式细胞仪分析TRAIL死亡受体(DR4、DR5)和诱骗受体(DcR1、DcR2)的改变.结果 NNAVC作用后,荧光显微镜下可见明显的凋亡细胞,细胞凋亡率随药物作用浓度的增加而升高;Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3蛋白被激活,胞质内细胞色素C的表达明显增加;流式细胞仪检测结果显示,NNAVC具有降低死亡受体DR4和诱骗受体DcR1的表达率,而提高DR5和DcR2的表达水平的作用.结论 线粒体凋亡通路和死亡受体通路均参与NNAVC诱导KG1a细胞凋亡的过程,这可能是NNAVC发挥抗白血病作用的机制之一.
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黄芪总苷诱导NB4凋亡过程中死亡受体通路分子变化
目的 探讨黄芪总苷(AST)诱导人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡过程中死亡受体通路的各分子变化,以说明AST是否依赖死亡受体通路参与NB4细胞凋亡发生.方法 不同浓度AST(200、300、400 μg/ml)处理NB4细胞48 h后,RT-PCR法检测IKKβ、IκBα、NF-κBp65及Fas的mRNA表达变化,比色法检测caspase-8的相对活性.结果 不同浓度的AST能够引起IκBα mRNA表达上调、NF-κBp65 mRNA表达下调,caspase-8活性的升高,而IKKβ及Fas的mRNA表达无明显变化.结论 AST诱导NB4细胞凋亡,可能与死亡受体通路上IκBα mRNA表达上调、NF-κBp65 mRNA表达下调,caspase-8活性升高有关.
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死亡受体通路在曲霉菌素诱导肝星状细胞凋亡中的作用
目的 验证曲霉菌素诱导肝星状细胞HSC-T6凋亡的作用,探讨死亡受体通路在该过程中的意义.方法 将HSC-T6细胞分为曲霉菌素干预组和空白对照组,用流式细胞术检测HSC-T6的凋亡,免疫组化SABC法检测Fas蛋白的表达,分光光度法检测caspase-8的活性.结果 流式细胞术显示,曲霉菌素浓度分别为0.4、0.8、1.2、1.6 mmol/L,作用于干预组HSC-T6细胞1 h后,HSC凋亡指数与对照组相比显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05),且随着曲霉菌素浓度增加,凋亡率也相应增高;曲霉菌素以低有效浓度0.4 mmol/L干预,Fas的表达及caspase-8活性与空白对照组比较均显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 曲霉菌素诱导HSC-T6细胞凋亡具有剂量依赖性,死亡受体通路在该过程中有重要意义.
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过氧化氢通过线粒体通路和死亡受体通路诱导心肌细胞凋亡
为探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡的分子机制,采用0.5 mmol/L过氧化氢作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞.末端标记发现过氧化氢明显诱导心肌细胞凋亡;Caspase活性定量检测及Western-blot发现Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9同时被激活;而Western-blot及间接免疫荧光发现细胞色素C从线粒体释放入胞浆.以上结果提示,氧化应激通过同时激活线粒体通路与死亡受体通路导致心肌细胞凋亡,从而为临床防治与细胞凋亡相关的心血管疾病提供了新的信息.
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热休克蛋白抑制过氧化氢所致C2C12细胞凋亡的机制
目的:探讨热休克蛋白抑制活性氧所致C2C12细胞凋亡的分子机制.方法:采用热休克对体外培养的C2C12细胞进行预处理,以诱导热休克蛋白的表达;Hoechst33258染色观察过氧化氢(H2O2)所致的C2C12细胞凋亡;凋亡蛋白酶活性检测试剂盒和Western-blotting检测凋亡蛋白酶-3,8,9的活性;细胞组分分离后Western-blotting检测细胞色素C的释放.结果:热休克预处理导致C2C12细胞热休克蛋白70,αB-晶状体蛋白表达明显增加,同时显著抑制过氧化氢所致细胞色素C从线粒体释放,抑制凋亡蛋白酶-3,8,9活化及随后的C2C12细胞凋亡.结论:热休克蛋白通过干预线粒体信号通路与死亡受体通路的活化抑制过氧化氢导致的C2C12细胞凋亡,从而为临床防治心血管疾病提供了新的信息.
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凋亡与自噬分子机制在肿瘤方面的研究进展
肿瘤细胞的增殖和消耗是受程序性细胞死亡(PCD)途径来调控的.PCD 包括凋亡和自噬.两者在形态学方面存在显著不同, 但也存在着复杂的联系.1 肿瘤中凋亡相关核心信号通路细胞凋亡存在两个核心途径:外在通路和内在通路.外在通路(也称死亡受体通路)是触发Fas 死亡受体.主要依赖于Fas 配体(Fas-L)和Fas 的结合为起始.Fas-Fas-L 复合物与死亡域含蛋白质(FADD)及procaspase-8 聚合为死亡诱导信号复合物(DISC).
