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基于报告基因的PPRE转录调节模型的建立及应用
目的:建立基于报告基因的靶向PPRE的转录调节模型,并观察不同浓度的PPAR特异性配体对上述模型的影响.方法:PCR扩增获得乙酰辅酶A氧化酶(ACO)启动子上包含PPRE的片段,构建重组报告质粒pGL3-PPRE,将此质粒单独或与PPARα或γ的真核表达质粒(pSG5-PPARα、pSG5-PPARγ)共转染到HEK293细胞中,通过测定荧光素酶(Luc)活力来分析非诺贝特对PPARα激活的作用以及吡格列酮和15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对PPARγ途径的影响.结果:在pGL3-PPRE和pSG5-PPARα共转染的HEK293细胞中,荧光素酶的表达受非诺贝特的诱导,并呈现一定的剂量依赖关系;在共转染pGL3-PPRE和pSG5-PPARγ的HEK293细胞中,荧光素酶的表达则受吡格列酮、15d-PGJ2的诱导,也呈现一定的剂量依赖关系.结论:在HEK293细胞中建立了基于报告基因的PPRE转录调节模型,用此模型可以进行PPARα或γ配体的筛选.
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15-脱氧前列腺素J2体外诱导肝癌细胞失巢凋亡的研究
目的 研究15-脱氧前列腺素J2(15-d-PGJ2)体外诱导人肝癌细胞系BEL-7402细胞失巢凋亡的特性,并探讨其机制.方法 在纤连蛋白(Fn)或多聚2-羟乙基甲基丙烯酸脂(poly-HEMA)包被的培养板中,应用光学显微镜观察不同因素处理后的细胞生长状态和形态学变化;应用DNA片段分析和流式细胞术观察细胞的凋亡变化;应用Western印迹技术观察细胞焦点黏着斑激酶(FAK)和磷酸化FAK(p-FAK)蛋白质的表达;应用小RNA干扰技术来沉默FAK基因.结果 在Fn包被的培养板中贴壁生长的BEL-7402细胞经15-d-PGJ2处理24 h或48 h后,细胞变圆,脱离细胞外基质呈悬浮状态改变,而且这种改变呈时间和剂量依赖性关系;其中以浓度为20 μmol/L的15-d-PGJ2为显著,24 h和48 h时间点细胞的黏附比率分别为(66.0±3.6)%和(35.0±5.0)%,与肝癌细胞对照相比差异有统计学意义(P《0.05).经流式细胞术和DNA片段分析后发现肝癌细胞发生了失巢凋亡;Western印迹显示p-FAK蛋白下降,而FAK蛋白质表达水平未发生改变.结论 15-d-PGJ2在体外能够诱导BEL-7402细胞失巢凋亡,这一过程与细胞FAK磷酸化水平降低有关.
关键词： 肝肿瘤 脱噬作用 15-脱氧前列腺素J2 失巢凋亡 -
15-脱氧前列腺素J2对脂肪肝大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6表达的影响
目的 观察15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)表达的影响.方法 普通饲料喂养的雄性Wistar大鼠作为正常对照组8只；高脂饲料喂养雄性Wistar大鼠建造NAFLD模型16只,将建模成功的大鼠随机分为模型对照组8只和实验组8只.模型对照组大鼠腹腔注射生理盐水2ml· kg-1·d-1；实验组大鼠腹腔注射15d-PGJ210 μg·kg-·d-1.干预2周后处死各组大鼠,检测各组肝组织匀浆总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量,苏木精-伊红(HE)染色光镜下观察各组大鼠肝组织的病理改变,免疫组织化学法检测各组大鼠肝组织PPAR-γ、TNF-α和IL-6的表达.结果 模型对照组肝组织总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平明显高于正常对照组,TC(1.27±0.26)mmol/g vs (0.74±0.18) mmol/g、TG(1.56±0.27) mmol/g vs (1.13±0.39) mmol/g(P＜0.01)；实验组肝组织TC、TG水平明显低于模型对照组,TC(1.01±0.22) mmol/g vs (1.27±0.26) mmol/g、TG(1.15±0.20) mmol/g vs(1.56±0.27) mmol/g(P＜0.05).光镜下未见正常对照组肝组织病理形态学异常；模型对照组可见大量肝细胞脂肪变性及肝组织多处点状坏死；实验组大鼠肝细胞脂肪变性及点状坏死较模型对照组减轻；正常对照组肝组织PPAR-γ普遍表达而TNF-α和IL-6几乎不表达；实验组肝组织PPAR-γ表达强于模型对照组,而TNF-α和IL-6表达低于模型对照组.结论 15d-PGJ2可以缓解NAFLD大鼠肝细胞脂肪变性和坏死、降低肝组织TC和TG水平,这种效果可能是通过增加肝脏PPARγ和减少TNF-α、IL-6的表达来实现的.
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15-脱氧前列腺素J2对非酒精性脂肪肝大鼠影响的研究
目的 研究15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的治疗作用.方法 高脂饲料喂养Wistar大鼠12周制备NAFLD大鼠模型,再将其随机分为HI组(15d-PGJ2高剂量干预组)、LI组(15d-PGJ2低剂量干预组)、MC组(模型对照组);将普通饲料喂养大鼠作为NC组(正常对照组).干预2周后检测肝组织匀浆中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC),血清丙氨酸转氨酶(ALT)、TG、TC及血糖(GLU)的含量,观察各组大鼠的肝组织病理学变化.结果 高脂饮食可引起大鼠肝脏脂肪变性.HI组所有检测指标及LI组肝内TC水平均高于NC组;LI组和NC组所有检测指标及HI组ALT、TC、TG水平均低于MC组;HI组ALT、TG、GLU水平均高于LI组,差异有统计学意义(P<0.05).HI组、LI组肝组织脂肪变性程度较MC组改善更明显.结论 15d-PGJ2可有效改善NAFLD大鼠的肝脏病变.
关键词： 15-脱氧前列腺素J2 过氧化物酶体激活受体 非酒精性脂肪肝 大鼠 -
前列腺素代谢产物15d-PGJ2抑制LPS活化的巨噬细胞IL-1β和NO生成
过氧化物酶体增殖物激活的受体-γ(PPAR-γ)是由配体激活的转录因子受体超家族成员,在脂肪细胞分化、脂质代谢及糖稳态方面发挥重要的生物学调节作用.
关键词： 15-脱氧前列腺素J2 巨噬细胞 IL-1β NO -
PPARγ的配体15d-PGJ2对人类胃癌细胞生长的影响
目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor γ,PPARγ)的配体15-脱氧前列腺素J 2(15-deoxy-△12,14-prostaglandin J2,15d-PGJ2)对人类胃癌MGC803细胞生长的影响及其机制.方法:RT-PCR检测PPARγ和survivin mRNA,Western blot检测PPARγ、survivin、S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)和p27蛋白;MTT法及流式细胞术检测细胞增殖、凋亡及细胞周期分布;Hoechst 33342染色观察细胞凋亡的形态学变化.结果:PPARγ mRNA和蛋白在MGC803细胞均表达.15d-PGJ 2作用MGC803细胞24 h后,5、10、20、30、40μmol/L组的增殖抑制率和凋亡率均高于0μmol/L组(P ＜0.001),且随浓度的增加而升高.30μmol/L组的MGC803细胞增殖抑制率和凋亡率,随时间的延长而升高.G0/G1期细胞比例,30 μmol/L组明显高于0μmol/L组(P＜0.001);S和G2/M期细胞比例,30μmol/L组均明显低于0μmol/L组(分别为P ＜0.001,P ＜0.01).随15d-PGJ2作用MGC803细胞浓度的增加,survivin mRNA和蛋白及Skp 2蛋白的表达均降低,p27蛋白表达升高.结论:15d-PGJ2抑制人胃癌MGC803细胞的增殖、诱导其凋亡并将其阻滞在G0/G1期,survivin和Skp2表达下调及p27表达上调在这个过程中起重要作用,提示15d-PGJ2可能对治疗胃癌有效.
关键词： 胃肿瘤 过氧化物酶体增殖物激活受体 15-脱氧前列腺素J2 细胞凋亡 细胞周期 -
15-脱氧前列腺J2对糖尿病脑缺血再灌注损伤大鼠脑梗死体积及核转录因子-κb的影响
目的 观察15-脱氧前列腺J2(15d-PGJ2)对糖尿病脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积及核转录因子-κb(NF-κb)的影响.方法 将80只成年SD大鼠随机分为假手术组、正常血糖组、糖尿病组及15d-PGJ2干预组,每组20只.采用链脲佐菌素诱导糖尿病,应用改良的Zea-Longa法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.15d-PGJ2干预组在成功制备糖尿病大鼠模型后,给予15d-PGJ2 200 μg/kg·d腹腔注射21 d后制作大脑中动脉缺血再灌注模型.再灌注后3 h腹腔注射15d-PGJ2 400 μg/kg,以后给予15d-PGJ2 200 μg/kg·d腹腔注射,连续6 d.分别于再灌注24 h及7 d对各组大鼠进行神经功能评价,TTC染色计算脑梗死体积,常规HE染色观察组织形态变化;采用ELISA法检测NF-κb水平.
关键词： 15-脱氧前列腺素J2 核转录因子-κB 脑缺血 再灌注 糖尿病 -
15d-PGJ2抑制LPS对巨噬细胞的毒性作用
目的探讨15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)作用下脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对巨噬细胞毒性作用的影响.方法体外培养Wistar大鼠腹腔巨噬细胞,加入LPS(终浓度为10 μg/ml)的同时加入终浓度为2μg/ml的15d-PGJ2,用MTT法检测巨噬细胞活力;用硝酸还原酶法测一氧化氮(NO)的浓度.结果巨噬细胞经LPS(10μg/ml)处理后,于24 h开始MTT值明显下降,与对照组、15d-PGJ2组相比,差异有显著性(P＜0.05),LPS+15d-PGJ2组与其他3组相比,MTT值在48 h后表现出显著性差异(P＜0.05),LPS组NO在前24 h内释放明显增多,高于对照组、15 d-PGJ2组和LPS+15d-PGJ2组(P＜0.05),24h后NO释放减少.LPS+15d-PGJ2组NO的释放在24h后均高于对照组和15d-PGJ2组,差异有显著性(P＜0.05).结论15d-PGJ2能部分拮抗10μg/ml LPS对巨噬细胞的毒性作用,可能与NO的产生有关.提示15d-PGJ2可作为维持巨噬细胞活性药物,以防止内毒素诱导的免疫损伤.
关键词： 15-脱氧前列腺素J2 脂多糖 巨噬细胞 -
PPARγ配体对人肺癌细胞95-D增殖的影响及机制探讨
目的 观察过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)的合成配体曲格列酮(TGZ)和天然配体15-脱氧前列腺素J2(15-PGJ2)对肺癌95-D细胞增殖活性及凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将对数生长期的95-D细胞分为TGZ组、15-PGJ2组、对照组,分别加入500 μl的TGZ溶液、15-PGJ2溶液、DMSO混合溶液培养;采用MTT法检测95-D细胞的增殖能力,采用流式细胞仪检测95-D细胞凋亡率和细胞周期变化,采用免疫细胞化学法检测95-D细胞中的PPARγ.结果 与对照组比较,TGZ、15-PGJ2组95-D细胞增殖抑制率显著增加(P均＜0.01),且存在时相性;95-D细胞凋亡率增加,S期细胞比例升高,G1期细胞比例降低;95-D细胞中PPARγ表达水平增加.结论 PPARγ配体TGZ、15-PGJ2可抑制95-D细胞增殖,诱导其凋亡;该作用与PPARγ表达增加有关.
关键词： 过氧化物酶体增殖体激活受体γ 曲格列酮 15-脱氧前列腺素J2 肺肿瘤 细胞周期 细胞凋亡 -
PPARγ激动剂15d-PGJ2对大鼠肝缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂15d-PGJ2对大鼠肝脏缺血再灌注损伤中细胞凋亡的作用及可能的机制.方法 建立70%的大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,40只SD大鼠随机均分为4组:假手术组(SO组)、缺血再灌注损伤组(IK组)、15-脱氧前列腺素J2预处理组(15 d-PGJ2组),15d-PGJ2+GW9662预处理组(15 d-PGJ2+GW9662组).再灌注后,取静脉血栓测肝血清酶(ALT、AST)水平,取肝脏组织TUNEL法检测缺血肝脏细胞凋亡指数(apoptotic index,AI),免疫组化检测Bcl-2、Bax、Caspase-3表达.结果 与SO组相比,其他3组血清ALT和AST水平、肝脏细胞AI、Bax、Bcl-2及Caspase-3均升高(P＜0.05).与IR组相比,15d-PGJ2组血清ALT和AST水平、肝脏细胞AI、Bax及Caspase-3表达降低,Bcl-2表达升高(P＜0.05);而15d-PGJ2+GW9662组与缺血再灌注组相比差异无显著性(P＞0.05).与15d-PGJ2组相比,15d-PGJ2+GW9662组血清ALT和AST水平、肝脏细胞AI、Bax及Caspase-3表达增加,Bcl-2表达减少(P＜0.05).结论 PPARγ激动剂15d-PGJ2对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能是通过PPAR γ激活上调Bcl-2、下调Bax的表达和抑制Caspase-3活性实现的.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 15-脱氧前列腺素J2 再灌注损伤 凋亡 -
PPARγ激动剂15d-PGJ2在大鼠肝脏缺血-再灌注损伤中的保护作用及机理
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)在大鼠肝脏缺血-再灌注损伤中的保护作用及机理.方法 建立70%的大鼠肝脏缺血一再灌注损伤模型,40只SD大鼠随机均分为4组:假手术组、缺血一再灌注损伤组(缺血-再灌注组)、15d-PGJ2预处理组(15d-PGJ2组)及15d-PGJ2＋GW9662预处理组(15d－PGJ2+GW9662组).再灌注后,取静脉血检测肝血清酶(ALT、AST)水平,取肝脏组织检测髓过氧化物酶(MPO)活性、NF-κB活性、TNF-α含量和ICAM-1表达.结果 与假手术组相比,其余3组血清ALT和AST水平、肝脏组织MPO和NF-κB活性、TNF-α含量和ICAM-1表达均增加(P＜0.05).与缺血-再灌注组相比,15d-PGJ2组血清ALT和AST水平、肝脏组织MPO和NF-κB活性、TNF-α含量和ICAM-1表达均明显降低(P＜0.05);而15d－PGJ2＋GW9662组与缺血-再灌注组相比有差异但无统计学意义(P＞0.05).与15d-PGJ2组相比,15d-PGJ2+GW9662组血清ALT和AST水平、肝脏组织MPO和NF-κB活性、TNF-α含量和ICAM-1表达明显增加(P＜0.05).结论 PPARy激动剂15d-PGJ2对肝脏缺血-再灌注损伤有保护作用,其机理可能是通过PPAR7途径抑制NF-κB活性,减少TNF-α和ICAM-1炎症介质的释放实现的.
