首页 > 文献资料
-
MLN4924与5-氟尿嘧啶协同杀伤人结肠癌HCT116细胞的研究
目的 探讨MLN4924与5-氟尿嘧啶(5-FU)单用及联用对人结肠癌HCT116细胞活力的影响及其发挥作用的可能途径.方法 细胞活力实验检测两药单用及联用对HCT116细胞活力的影响;应用中效原理计算两药联合应用的联合指数,判断药物联用的效果;将HCT116细胞分为对照组、MLN4924组、5-FU组及联用组,药物作用后,流式AnnexinⅤ-FITC/PI双标法检测各组细胞凋亡情况;蛋白质印迹实验检测各组细胞Cleaved PARP、Cleaved caspase3的表达水平.结果 随着MLN4924和5-FU浓度的增加,HCT116细胞活力逐渐降低;MLN4924与5-FU联用时,抑制效果明显强于单药作用(P<0.001),各联合用药组的联合指数均<1,提示两药联用起协同效果;与对照组相比,单用及联用均可显著促进HCT116细胞的凋亡(P<0.001),且联用效果显著优于单用(P<0.01);与流式AnnexinⅤ-FITC/PI双标法检测细胞凋亡的结果相一致,联用组Cleaved PARP、Cleaved caspase3蛋白表达较对照组及单用组明显升高.结论 MLN4924与5-FU通过促进细胞凋亡而发挥协同抑制人结肠癌HCT116细胞活力的作用.
-
神经前体细胞表达下调因子8类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察神经前体细胞表达下调因子8(NEDD8)类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 MLN4924 0.25 ～4.0 iμmol·L-1与U937细胞、THP-1细胞、Mo7e细胞和RAW264.7细胞作用24 h,采用MTT法检测细胞存活.MLN4924 0.25～8.0 μmol·L-1与RAW264.7细胞作用24 h,用Western蛋白质印迹法检测NEDD8类泛素化修饰的主要底物cullin蛋白表达水平.MLN4924 0.5 μmol·L-1作用于RAW264.7细胞24 h,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率.结果 MLN4924 0.25～4.0 μmol· L-1作用24 h对RAW264.7细胞、U937细胞、THP-1细胞和Mo7e细胞增殖具有抑制作用,IC50分别为0.52,3.11,2.89和0.76 μmol· L-1;对正常小鼠骨髓巨噬细胞增殖无明显影响.MLN4924 0.25～8.0 μmol· L-1作用24 h,NEDD8类泛素化修饰的cullin蛋白表达减少(P＜0.01),表明RAW264.7细胞NEDD8修饰逐渐减少.MLN4924 0.5,1.0和2.0 μmol· L-1作用于RAW264.7细胞24 h,G0/G1期细胞百分率由正常对照组的(61.3±1.3)％分别升高到(64.5±1.5)％(P＜0.05),(69.5±2.3)％(P＜0.01)和(72.8±1.7)％(P＜0.01),细胞凋亡率由正常对照组的(1.5±0.3)％分别升高到(2.3±0.5)％,(4.3±0.9)％(P＜0.05)和(7.5±0.8)％(P＜0.01).结论 MLN4924能够明显抑制单核巨噬细胞白血病细胞增殖,并诱导其细胞周期阻滞和细胞凋亡.
-
MLN4924促进人肺腺癌细胞株A549凋亡的机制研究
目的:观察MLN4924对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,探讨MLN4924促进凋亡的作用机制.方法:不同浓度的MLN4924作用细胞不同时间后,采用CCK-8检测细胞增殖抑制率；Hoeehst33342荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期；Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、NF-κB p65及CDT1相对表达量.结果:MLN4924能够明显抑制A549细胞的增殖,并且具有浓度和时间依赖性.流式细胞仪检测结果显示药物作用后,细胞被阻滞在S期.Western blot结果显示药物作用后细胞内Caspase-3、CDT1蛋白的表达量增加,而NF-κB p65的表达量减少.结论:MLN4924能够明显抑制A549细胞增殖、促进细胞凋亡,其相关机制为MLN4924可阻滞细胞于S期,增加Caspase-3蛋白表达,抑制NF-κB通路的激活.
-
MLN4924抗肿瘤作用机制
MLN4924可通过诱导肿瘤细胞凋亡、衰老、细胞自噬抑制肿瘤细胞的增殖、浸润、转移,其可抑制肿瘤血管生成并能增强肿瘤对放疗、化疗的敏感性,发挥良好的抗肿瘤效应.
-
MLN4924对人肝癌细胞HepG2侵袭和迁移的影响及其机制
目的 观察选择性NEDD8活化酶(NAE)抑制剂MLN4924对人肝癌细胞HepG2侵袭和迁移的影响,探讨其相关机制.方法 将肝癌细胞株HepG2、Hep3B、SMMC-7721分别分为对照组与MLN4924干预组.细胞毒性/增殖检测试剂盒(CCK-8)方法检测细胞活性及半抑制浓度(IC50)值,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,细胞划痕和Transwell实验检测MLN4924对细胞侵袭和迁移的影响,Western blot法检测上皮-间充质转化(EMT)中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达变化.结果 CCK-8方法发现3种肝癌细胞均受到抑制,其中HepG2对MLN4924敏感,ICso值为3.34 μmol/L.流式细胞仪测得MLN4924能够明显促进肝癌细胞HepG2凋亡,细胞划痕实验和Transwell实验证实MLN4924能够明显抑制肝癌细胞HepG2侵袭和迁移,并且具有剂量依赖性(P=0.001).此外,用0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L的MLN4924处理24h后E-cadherin相对蛋白表达量分别为0.313 ±0.005、0.594 ±0.016、0.431 ±0.002、0.780±0.019、1.000±0.015,Vimentin相对蛋白表达量分别为1.000 ±0.012、1.158±0.035、1.087±0.076、0.635±0.028、0.351±0.010.结论 MLN4924可抑制肝癌细胞HepG2的增殖,促进其凋亡,并通过EMT抑制了肝癌细胞HepG2的侵袭和迁移.
-
SCF E3泛素化连接酶的研究进展
Skpl-Cullins-F-box蛋白复合物(SCF复合物)E3泛素化连接酶是大的泛素化连接酶家族成员,该蛋白复合体可以促进多种蛋白通过泛素化降解,对细胞周期、DNA复制等多种生物过程具有重要的调节作用.SCF E3泛素化连接酶在人类肿瘤中的异常激活可以诱导细胞无限制的增殖和基因组的不稳定,因此,E3泛素化连接酶复合物成员可以作为抗肿瘤治疗的靶点.本文主要介绍SCF E3泛素化连接酶作为抗癌药物的靶点和新型肿瘤抑制剂MLN4924的抗肿瘤作用.
关键词： SCF E3泛素化连接酶 抗癌药物 MLN4924
