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神经前体细胞表达下调因子8类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察神经前体细胞表达下调因子8(NEDD8)类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 MLN4924 0.25 ～4.0 iμmol·L-1与U937细胞、THP-1细胞、Mo7e细胞和RAW264.7细胞作用24 h,采用MTT法检测细胞存活.MLN4924 0.25～8.0 μmol·L-1与RAW264.7细胞作用24 h,用Western蛋白质印迹法检测NEDD8类泛素化修饰的主要底物cullin蛋白表达水平.MLN4924 0.5 μmol·L-1作用于RAW264.7细胞24 h,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率.结果 MLN4924 0.25～4.0 μmol· L-1作用24 h对RAW264.7细胞、U937细胞、THP-1细胞和Mo7e细胞增殖具有抑制作用,IC50分别为0.52,3.11,2.89和0.76 μmol· L-1;对正常小鼠骨髓巨噬细胞增殖无明显影响.MLN4924 0.25～8.0 μmol· L-1作用24 h,NEDD8类泛素化修饰的cullin蛋白表达减少(P＜0.01),表明RAW264.7细胞NEDD8修饰逐渐减少.MLN4924 0.5,1.0和2.0 μmol· L-1作用于RAW264.7细胞24 h,G0/G1期细胞百分率由正常对照组的(61.3±1.3)％分别升高到(64.5±1.5)％(P＜0.05),(69.5±2.3)％(P＜0.01)和(72.8±1.7)％(P＜0.01),细胞凋亡率由正常对照组的(1.5±0.3)％分别升高到(2.3±0.5)％,(4.3±0.9)％(P＜0.05)和(7.5±0.8)％(P＜0.01).结论 MLN4924能够明显抑制单核巨噬细胞白血病细胞增殖,并诱导其细胞周期阻滞和细胞凋亡.
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抑制神经前体细胞表达下调因子8对前列腺癌细胞生物学行为及其雄激素受体表达的影响
目的 慢病毒介导短发卡RNA(shRNA)靶向抑制前列腺癌细胞株LnCaP、VCaP 细胞的抑制神经前体细胞表达下调因子8(NEDD8)的表达,观察其对雄激素受体(AR)、前列腺特异性抗原(PSA)的表达以及细胞生物学行为的影响.方法 构建NEDD8短发夹RNA(NEDD8-shRNA)稳定转染的LnCaP、VCaP 细胞株.实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及Western blot法检测NEDD8、AR及PSA mRNA及蛋白表达.细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、TranswellTM 实验检测细胞侵袭能力.结果 NEDD8-shRNA慢病毒转染后,LnCaP、VCaP 细胞NEDD8 mRNA表达量分别是空白对照组的(0.11±0.03)、(0.16±0.04)倍,AR mRNA表达量分别为(0.52±0.04)、(0.42±0.05)倍,PSA mRNA的表达量分别为(0.49±0.04)、(0.59±0.06)倍.慢病毒转染后,LnCaP、VCaP 细胞NEDD8蛋白相对表达量分别为(11.26±2.65)%、(6.26±2.04)%,AR蛋白相对表达量分别为(30.36±4.35)%、(15.36±3.37)%,PSA蛋白相对表达量分别为(13.37±2.70)%、(11.36±2.67)%.与对照组比较,NEDD8、AR、PSA mRNA及蛋白表达均显著下降(P=0.000).慢病毒转染后,与对照组比较,LnCaP、VCaP 细胞增殖显著抑制;转染后 LnCaP、VCaP细胞株凋亡率分别为(15.08±1.23)%、(20.37±1.76)%,与对照组比较显著增加(P=0.001、0.000);穿膜细胞数显著减少(P=0.000、0.004),分别为(55.5±12.5)、(60.8±11.3) 个.结论 NEDD8可能在转录水平参与了对AR表达调控,通过抑制NEDD8基因能有效抑制LnCaP、VCaP中AR表达及细胞的增殖、侵袭能力,诱导细胞凋亡.
关键词： 前列腺癌 神经前体细胞表达下调因子8 雄激素受体 RNA干扰
