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Ezrin在人脑星形细胞瘤中的表达及意义
目的 探讨Ezrin在人脑星形细胞瘤中的表达及意义.方法 免疫组化法检测107例星形细胞瘤和10例正常脑组织中Ezrin的表达,结合临床随访资料分析其表达与预后的相关性.结果 Ezrin的表达在2组之间的差异有统计学意义(P＜0.05).星形细胞瘤中Ezrin阳性表达率为89.7%,其表达与肿瘤恶性程度呈正相关(r=0.551,P＜0.01),临床资料分析发现Ezrin的表达与肿瘤细胞分化、瘤周水肿程度有关(P＜0.05).Ezrin强阳性表达组和弱阳性+阴性表达组的术后无瘤生存时间之间差异具有统计学意义(X~2=29.85,P=0.000).结论 Ezrin的表达与星形细胞瘤的恶性程度相关,过表达对肿瘤发展起重要作用.
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胃癌组织芯片中Ezrin蛋白的表达及意义
目的 探讨细胞骨架蛋白Ezrin在胃癌组织芯片中的表达及临床意义.方法 利用组织芯片技术和免疫组化Envision法检测Ezrin蛋白在385例胃癌(包括114例淋巴结未转移的胃癌和271例淋巴结转移的胃癌)及40例距肿瘤7 cm的正常胃组织中Ezrin蛋白的表达情况.所有患者均经外科手术治疗,病理诊断明确,术前未经放、化疗.结果 Ezrin蛋白在胃癌中的阳性率为64.9％(250/385),而在正常胃黏膜组织中的阳性表达率为5.0％ (2/40),P＜0.05;在淋巴结未转移者中的阳性率为16.6％ (64/114),在淋巴结转移者中的阳性率为48.3％(186/271),P＜0.05.Ezrin蛋白在淋巴结转移性胃癌中的高表达高于非转移性胃癌[40.0％(154/385)比14.8％(57/385),P＜0.05];与胃癌仅侵犯至肌层者相比,胃癌侵犯至浆膜及浆膜外者Ezrin蛋白呈高表达[44.4％(171/385)比9.4％(36/385),P＜0.05].结论 胃癌组织中Ezrin蛋白的阳性表达明显高于正常胃组织,并与胃癌的浸润及转移相关.
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转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用
目的:明确转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用.方法:将转录因子表达载体CMV-Sp1和CMV-Sp3分别转染食管癌EC109细胞,采用定量RT-PCR和Western blot技术检测过表达转录因子Sp1和Sp3对ezrin mRNA和蛋白表达的影响;将ezrin基因启动子驱动的报告基因表达载体与内参照质粒pRL-TK和转录因子表达载体共转染EC109细胞,采用双荧光素酶报告基因分析系统检测转录因子Sp1和Sp3对ezrin基因启动子的激活作用以及这种激活作用是否依赖于ezrin基因的Sp1结合位点-75/-69.结果:过表达转录因子Sp1和Sp3显著提高EC109细胞ezrin mRNA和蛋白表达水平以及启动子活性.Sp1和Sp3增强ezrin基因启动子活性的作用位点不同,只有Sp1通过-75/-69位点调控ezrin基因启动子活性.结论:转录因子Sp1和Sp3可调控EC109细胞ezrin基因的表达.
关键词： Ezrin基因 食管癌细胞 转录因子 双荧光素酶报告基因分析系统 -
Ezrin基因敲低及过表达对脑胶质瘤细胞U87迁移的影响
目的 分析Ezrin基因敲低及过表达对脑胶质瘤细胞U87迁移的影响,以探讨脑胶质瘤浸润性生长的机理.方法 从U87细胞中扩增Ezrin基因CDS区片段,克隆至表达载体pEGFP-C1中,构建Ezrin基因表达质粒pEGFP-C1/Ezrin.将pEGFP-C1/Ezrin、Ezrin基因shRNA质粒shRNA-Ezrin-2和pEGFP-C1以脂质体LipofectimineTM 2000介导分别转染U87细胞,Western blot分析转染细胞中Ezrin蛋白的表达；划痕试验检测转染细胞的迁移情况.结果 克隆的Ezrin基因与GenBank中登录的Homo sapiens ezrin (EZR),transcript variant 1,mRNA序列同源性达99％；该基因编码的氨基酸序列与ezrin[ Homo sapiens] (Sequence ID:reflNP_003370.21,Length:586)的一致性为99％,在第S66P、K258R、P265L和K577R位发生变异,读码框正确.pEGFP-C1/Ezrin转染的U87细胞中Ezrin蛋白的相对表达量(1.17)高于shRNA-Ezrin-2转染组(0.47)和pEGFP-C1转染组(0.82).划痕试验显示,shRNA-Ezrin-2转染组有少量细胞迁移至划痕处,pEGFP-C1/Ezrin转染组细胞几乎占满划痕处.结论 Ezrin基因敲低可阻止U87细胞迁移,其过表达可促进细胞迁移,表明U87细胞浸润性生长与Ezrin基因的表达有关.
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Ezrin及L1CAM在结肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系
目的 检测结肠癌组织中Ezrin及L1细胞黏附因子(L1CAM)表达,探讨其与临床病理特征的关系及两者的相关性.方法 选取67例手术切除的结肠癌组织,以及对应的癌旁正常结肠组织,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)及实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织中Ezrin、L1CAM蛋白及mRNA的表达,观察其与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤直径、浸润深度、分化程度、淋巴结转移及TNM分期等临床病理参数的关系,并检验Ezrin与L1CAM的相关性.结果 结肠癌组织中Ezrin、L1CAM蛋白及mRNA表达高于正常结肠组织(P<0.001);结肠癌组织中Ezrin及L1CAM蛋白的阳性表达与肿瘤浸润深度、远处转移、淋巴结转移、血管浸润、TNM分期及肿瘤分化程度具有相关性(P均<0.05).结肠癌组织中Ezrin与L1CAM蛋白的表达量呈正相关(r=0.864,95％CI:0.5796～0.8184,P<0.0001).结论 Ezrin及L1CAM在结肠癌组织中表达升高,与结肠癌侵袭及转移的恶性临床病理特征相关,且两者具有相关性.
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ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达及其意义
目的: 研究ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达情况及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响.方法: 应用RT-PCR与Western blotting 检测ezrin和merlin基因在胰腺导管上皮细胞及胰腺癌细胞中的mRNA 和蛋白表达水平;利用脂质体分别将ezrin和merlin基因转染入SW1990细胞株中,应用MTT实验、流式细胞术、迁移实验和细胞黏附实验观察转染基因对细胞增殖、迁移和黏附能力,细胞周期及凋亡的影响.结果: ezrin和merlin基因在8株细胞中均有不同程度的表达,其表达水平与胰腺癌细胞的分化程度无关.与对照组相比,转染ezrin和merlin基因的SW1990细胞增殖速度缓慢(P<0.01);细胞周期表现为G1 期细胞增多,S期细胞减少(均P<0.05);细胞与基质的黏附能力明显下降(P<0.01);且转染merlin的SW1990细胞其迁移能力亦有明显降低(P<0.05),而转染ezrin的SW1990细胞其迁移能力无明显统计学意义的改变(P>0.05).结论: ezrin和merlin蛋白在胰腺癌细胞增殖、进展过程中可能发挥着负性调节作用.
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siRNA干扰ERK1/2表达对食管癌细胞ezrin基因的转录调控作用
目的 检测siRNA干扰细胞外信号调节激酶ERK1/2基因表达对ezrin基因的转录调控作用,探讨食管癌细胞ezrin基因的表达调控机制.方法 采用定量RT-PCR技术,检测转染ERK1/2 siRNA对食管癌EC109细胞ERK1/2和ezrin基因mRNA表达水平的影响;采用双荧光素酶报告基因分析系统.检测siRNA干扰ERK1/2表达对EC109细胞ezrin基因启动子活性的影响.结果 在食管癌EC109细胞中,转染ERK1/2 siRNA,降低ERK1/2和ezrin基因的mRNA表达水平以及ezrin基因启动子活性.结论 ERK1/2对食管癌细胞ezrin基因的转录具有调控作用.
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HeLa细胞ezrin基因基本启动子区转录调控元件的鉴定
目的 鉴定HeLa细胞中调控ezrin基因基本启动子活性的顺式作用元件,探讨ezrin基因在HeLa细胞的表达调控机制.方法 采用碱基定点突变实验和双荧光素酶报告基因分析系统,检测在HeLa细胞中Sp1结合位点(-75/-69,相对于转录起始位点)和AP-1结合位点(-64/-58)对人ezrin基因基本启动子活性的影响;采用电泳迁移率变动分析法(EMSA)实验,检测ezrin基因基本启动子区序列与HeLa细胞核蛋白提取物的特异性结合活性.结果 在HeLa细胞中,单独删除和置换Sp1结合位点或AP-1结合住点,ezrin基因基本启动子活性降低50%左右;同时置换Sp1结合住点和AP-1结合住点,启动子活性几乎完全丧失.ezrin基因基本启动子序列能够与HeLa细胞核蛋白提取物相结合.结论 HeLa细胞中,Sp1结合位点和AP-1结合位点为ezrin基因基本启动子区的重要转录调控元件,有可能存在某种转录因子与之结合,激活ezrin基因转录.
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ezrin基因在几种癌细胞中的表达及其5'侧翼区序列转录活性的鉴定
目的 检测ezrin基因在几种癌细胞中的表达及其5'侧翼区序列的转录活力,探讨ezrin基因在癌细胞的表达调控机制.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测ezrin基因在食管癌细胞EC109、EC171、EC8712、SHEEC,胃癌细胞N87、BGC823,肺癌细胞A549、95D,肝癌细胞HepG2,白血病细胞K562和宫颈癌细胞HeLa中的mRNA和蛋白表达水平;采用PCR法构建以ezrin基因翻译起始位点上游-1444/+134序列为启动子的真核细胞表达质粒pGLB-hE(-1444/+134);采用双荧光素酶报告基因分析系统检测-1444/+134序列在EC109、Hela、A549和BGC823细胞中的转录活力.结果 ezrin基因在食管癌等几种癌细胞中均有高表达,其5'侧翼区-1444/+134序列具有较强的转录活力.结论 ezrin基因5'侧翼区序列的转录活性可能对ezrin基因的几种癌细胞中的高表达起重要作用.
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白花丹素对骨肉瘤MG-63细胞迁移的影响及其作用机制
目的 观察白花丹素对骨肉瘤细胞迁移的抑制作用并初步探讨其可能的机制.方法 以2.5 μmol/L、5μmol/L和10 μmol/L浓度白花丹素分别作用于骨肉瘤MG-63细胞,以含0.1％ DMSO完全培养基为对照组.作用24 h后,Transwell法观察骨肉瘤MG-63细胞迁移能力,Real-time PCR检测骨肉瘤MG-63细胞中Ezrin基因mRNA表达情况,Westem blot检测Ezrin蛋白和p-Ezrin的表达情况.结果 Transwell结果显示,作用24h后,各实验组下层小室细胞数明显减少,2.5 μmol/L组、5μmol/L组和10 μmol/L组的细胞迁移率分别为(69.9±4.5)％、(39.3±3.5)％和(26.2±4.1)％,呈浓度依赖性(P＜0.05);Real-time PCR结果显示,骨肉瘤MG-63细胞中Ezrin mRNA表达水平明显下降,呈浓度依赖性(P＜0.05).Western blot结果显示,Ezrin蛋白和p-Ezrin的表达量明显降低,呈浓度依赖性(P＜0.05).结论 白花丹素能够抑制骨肉瘤MG-63细胞迁移,其作用机制可能与抑制骨肉瘤MG-63细胞中Ezrin的表达及活化有关.
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鼻咽癌细胞中ezrin基因启动子上游序列转录调控特性的研究
目的:研究鼻咽癌细胞中ezrin基因启动子上游序列的转录调控特性.方法:构建一系列携带ezrin基因-1541/- 706序列的报告基因表达载体,ezrin基因- 1541/-706序列以正向和反向分别连接至不含启动子的报告基因上游、ezrin启动子上游、SV40启动子上游、ezrin启动子或SV40启动子控制的报告基因下游,将质粒转染CNE2细胞,检测荧光素酶活性.结果:CNE2细胞中,当-1541/-706序列正向位于报告基因上游时表现出启动子活性,其转录激活作用约为ezrin启动子的50％；反向连接时无启动子活性.而且,当- 1541/-706序列正向位于ezrin启动子或SV40启动子上游时,显著提高荧光素酶表达；当反向位于启动子下游、正向或反向位于启动子控制的报告基因下游时,转录增强作用消失.结论:CNE2细胞中ezrin基因启动子上游序列具有转录激活和转录增强作用,这种作用具有DNA序列位置和方向依赖性.
关键词： 鼻咽癌 Ezrin基因 双荧光素酶报告基因分析系统 转录调控 -
胃癌组织ezrin表达的意义
目的:研究ezrin基因与胃癌发生发展的关系.方法:采用原位杂交和免疫组化法,检测60例胃癌和15例正常及40例不典型增生胃黏膜中ezrin mRNA及蛋白的表达.结果:在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中ezrin mRNA及蛋白阳性表达率呈递减趋势.组间差异性均有统计学意义(P＜0.001);ezrin mRNA和蛋白表达在不同浸润深度、肿瘤大小和有无淋巴结转移组内表达率的差异性有统计学意义(P＜0.05),而在年龄、性别和脉管侵犯组内差异无统计学意义(P＞0.05).Ezrin mRNA和蛋白表达呈正相关(rs=0.990,P＜0.01).结论:Ezrin表达降低与胃癌的发生、发展及浸润转移有密切关系.
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食管癌细胞ezrin基因启动子TPA反应性的研究
背景与目的:研究食管癌细胞eznn基因启动子的TPA反应性以及TPA诱导ezrin基因转录的MAPK信号转导途径. 材料与方法:应用转录因子数据库分析预测ezrin基因-87/+134序列的潜在转录因子结合位点和TPA反应元件;采用双荧光素酶报告基因分析系统,检测ezrin基因-87/+134序列的启动子活性和TPA反应性,TPA反应元件结合蛋白Spl和AP-1对ezrin基因的转录激活作用,以及MAPK抑制剂对TPA诱导激活的ezrin基因转录的抑制作用.结果:ezrin基因-87/+134序列存在潜在TPA反应元件,具有启动子活性;5 ng/ml 11PA显著增强ezrin/n基因启动子活性[P<0.01);Sp1和AP-1对ezrin基因具有转录激活作用;MEK1/2特异性抑制剂U0126和PD98059降低TPA诱导的ezrin基因转录激活作用. 结论:食管癌细胞中,ezrin基因启动子具有TPA反应性;TPA可能通过MEK/ERK1/2磷酸化Sp1/AP-1途径调控ezrin基因转录.
关键词： TPA反应性 Ezrin基因 食管癌细胞 启动子活性 双荧光素酶报告基因分析系统
